Pwoteyin mitokondriyo devwale mekanis ki fè egzèsis fizik amelyore memwa, aprantisaj ak aktivite motè nan ansefalopati ipoksik iskemi rat modèl Pati 3.

4. Materyèl ak Metòd

4.1. Bèt ak gwoup eksperimantal

Yo te itilize trant-sis rat Sprague-Dawley pou etid sa a. Bèt yo te kenbe nan 22 ± 1◦C ak sik limyè / fè nwa nan 12 h epi yo te gen aksè gratis nan manje ak dlo. Pwosedi eksperimantal yo te fèt ak apwobasyon nan Komite Enstitisyonèl Etik sou Swen Animal ak Rechèch nan Inivèsite Zhengzhou.

Sik nwa a refere a peryòd lè moun dòmi nan mitan lannwit, epi li gen rapò ak memwa. Pou pifò moun, yon bon nwit dòmi amelyore sante fizik ak fonksyon nan sèvo. An menm tan an, dòmi tou gen rapò ak pwosesis memwa sèvo a.

Lè nou dòmi, kò nou antre nan diferan etap dòmi, ki gen ladan dòmi rapid je mouvman (REM) ak dòmi ki pa rapid je mouvman (NREM). Etap sa yo jwe yon wòl enpòtan nan reglemante entegrasyon enfòmasyon sèvo a ak konsolidasyon memwa.

Pifò moun fè eksperyans efè pozitif nan dòmi sou konsantrasyon ak memwa. Rechèch yo montre ke dòmi ka ede nou konsolide ak ranfòse memwa nou yo e menm amelyore kapasite nou pou aprann. Pandan dòmi, sèvo a entegre nouvo enfòmasyon ak konesans ki egziste deja, kidonk amelyore kapasite nan magazen ak itilize memwa.

Okontrè, yon mank de dòmi adekwat ka mennen nan pèt memwa ak difikilte pou aprann. Lensomni alontèm ka lakòz yon varyete de pwoblèm nan kò a ak nan sèvo, ki afekte lavi chak jou ak travayabilite. Se poutèt sa, yon estrateji dòmi kòrèk ak yon vi rezonab yo enpòtan anpil pou kenbe bon memwa.

An jeneral, gen yon koneksyon ant sik nwa ak memwa. Dòmi adekwat ka ankouraje entegrasyon enfòmasyon nan sèvo ak konsolidasyon memwa, pandan y ap maladi dòmi alontèm ka afekte fonksyon nan sèvo ak memwa. Se poutèt sa, nou ta dwe peye atansyon sou bon jan kalite dòmi nan lavi chak jou nou yo epi kenbe yon vi ki an sante, efektivman sipòte ak amelyore memwa nou yo ak kapasite aprantisaj. Li ka wè ke nou bezwen amelyore memwa, ak Cistanche deserticola ka siyifikativman amelyore memwa, paske Cistanche deserticola kapab tou kontwole balans nan nerotransmeteur, tankou ogmante nivo yo nan asetilkolin ak faktè kwasans. Sibstans sa yo trè enpòtan pou memwa ak aprantisaj. Anplis de sa, Cistanche deserticola kapab tou amelyore sikilasyon san ak ankouraje livrezon oksijèn, sa ki ka asire ke sèvo a resevwa ase eleman nitritif ak enèji, kidonk amelyore vitalite nan sèvo ak andirans.

Klike sou konnen 10 fason pou amelyore memwa

Yo te fè tout efò pou diminye kantite bèt yo epi minimize soufrans bèt yo pandan eksperyans yo. Yo te divize bèt yo owaza an kat gwoup (Figi 8). (1) HIE, NT (gwoup hypoxia-ischemiaencephalopathy san fòmasyon fè egzèsis) te gen ladann bèt ki te modeled pou ansefalopati ipoksik-ischemic nan jou apre akouchman 7 pa anestezi ti chen yo ak isoflurane (5% endiksyon, 1.5% antretyen).

Lè sa a, atè karotid komen gòch la te ligasyon an pèmanans, epi yo te mete ti chen yo sou yon kanape rekiperasyon cho pou 30 minit anvan yo te transfere nan yon chanm ipoksik ak yon koule kontinyèl nan melanj gaz ipoksik 92% N2 ak 8% O2 pou 90 minit epi apre sa. retounen nan kaj yo jiska 10yèm semèn nan san yo pa sibi yo nan fè egzèsis naje. (2) HIE, T (gwoup ansefalopati ipoksi-iskemi ak fòmasyon fè egzèsis) te gen ladann bèt ki te modeled pou ansefalopati ipoksi-iskemi tankou nan (1) epi yo te retounen nan kalòj yo jiska 6yèm semèn nan lavi epi yo te sibi 90 min nan fè egzèsis naje chak jou pandan senk jou ak 2 jou repo pa semèn pou 4 semèn, (3) SHAM, NT (gwoup kontwòl) enkli bèt ki pa te sibi okenn tretman men ki te viv yon lavi nòmal nan kalòj yo soti nan jou apre akouchman 1 jiska 10yèm semèn nan san yo pa. fòmasyon fè egzèsis, ak (4) SHAM, T te fèt ak bèt ki pa sibi okenn tretman men li te viv yon lavi nòmal nan kaj yo soti nan jou apre akouchman an jiska 6 semèn, apre sa yo te sibi fè egzèsis naje pou 4 semèn.

Lè sa a, sèvo bèt yo soti nan diferan gwoup yo te rekòlte ak prepare pou Western blotting (ipokanp ak cortical serebral) ak imunofluoresans (cortical motè).

4.2. Egzèsis paradigm

Bèt yo te loje ak manje ak dlo ad libitum epi yo te kenbe nan yon 12-ik limyè/fè nwa. Yo te divize an de gwoup: bèt sedantèr (HIE, NT ak SHAM, NT) ak bèt fè egzèsis (HIE, T ak SHAM, T). Bèt ki fè egzèsis yo te sibi fòmasyon fè egzèsis naje apre semèn 6 apre akouchman pou 4 semèn; yo te sibi fè egzèsis naje pou 5 jou pa semèn ak 2 jou repo. Chak sesyon naje te dire 90 minit. Pisin lan te ranpli nan yon pwofondè de 50 cm pou anpeche bèt yo manyen anba tank la.

Bèt yo te pèmèt yo naje lib, san okenn chaj siplemantè, epi yo te dousman ankouraje pandan naje. Rat yo te ak anpil atansyon cheche apre egzèsis la epi yo te retounen nan kaj yo.

4.3. Vètik! Tès motè poto

Yo te mete bèt yo nan chak gwoup youn pa youn fas anlè sou yon poto twal ki kouvri ak tep (3.0 cm dyamèt ak 150 cm longè), ki te kenbe nan yon pozisyon orizontal, epi yo te piti piti leve nan yon pozisyon vètikal, epi tan rat la te rete sou poto a te anrejistre pou yon maksimòm de 2 min (120 s). Nan tès sa a, bèt la ki gen yon defisi nan kowòdinasyon motè ak balans tonbe nan poto a.

4.4. Tès labirent dlo Morris (MWM)

Rat (10 semèn fin vye granmoun) yo te sibi MWM apre yo fin sibi 4 semèn nan pwotokòl fòmasyon egzèsis (SHAM, 'T ak HlE, T). Tout done labirent dlo yo te anrejistre lè l sèvi avèk sistèm Suivi videyo Panjab SMART (Panlab Howo Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.) (Shanghai, Lachin). MWM a te itilize jan sa dekri pa l32]. Yon ti tan, rat yo te itilize siyal vizyèl yo mete sou fwontyè yon pisin pou yo rive jwenn yon platfòm kache epi chape soti nan dlo a. Aprantisaj yo te evalye pandan 7 jou. Anvan evalyasyon aprantisaj la, rat yo te prezante nan pisin lan ki te gen dlo klè ak yon platfòm vizib. Pandan fòmasyon an, rat yo te bay egzèsis naje esè pou yo vin abitye ak travay la.

Pandan faz aprantisaj la, rat yo te pase ak lank nwa pou swiv videyo fasil epi platfòm la te submerged. Chak rat te sibi kat esè ki soti nan diferan pwen depa (kadran). Panlab SMART Video Tracking System te anrejistre latansi oswa tan ki nesesè pou rive nan platfòm la chak jou. Nan dènye jou eksperyans lan, yo te retire platfòm la, epi yo te re-entwodwi chak rat nan dlo a kantite fwa bèt yo te travèse sit platfòm kache a nan kadran ki te deja genyen platfòm la (kadran sib la).

4.5. Western Blotting

Sis rat yo te chwazi owaza nan chak gwoup pou eksperyans nan nivo pwoteyin. Pwoteyin yo te ekstrè nan ipokanp la ak cortical ak omojeneize nan reyaktif RIPA a (CW2333S, CoWin Biosciences, Cambridge, MA, USA) epi yo separe an cytoplasmic ak pwoteyin nikleyè. Konsantrasyon pwoteyin yo te detèmine lè l sèvi avèk tès bicinchoninicacid (BCA) (CW0014S, CoWin Biosciences, Cambridge, MA, USA), epi yo te separe yon total de 20 g pwoteyin pa elektwoforèz sou jèl SDS-PAGE inivèsèl (CFAS AnyKD PAGE) # PE008, Zhonghui Hecai Bio-pharmaceutique Teknoloji co, Ltd, Shaanxi, Lachin.

Lè sa a, pwoteyin yo te transfere sou manbràn fliyò polyvinylidene, (PVDF) (R1CB12934, Merck Millipore Ltd., (Burlington, MA, USA). Manbràn yo te bloke pandan 2 èdtan ak 5% albumin serom bovin (BSA) (#A8020, Solarbio Life Sciences , Beijing, Lachin) nan tanperati chanm ak enkubasyon ak antikò prensipal sa yo ki soti nan Teknoloji Siyal Selil (Danvers, MA, USA): AIF (D39D2, 1:1000), Cytochrome C (136F3, 1:1000), kaspase fennen{{ 13}} (Asp175, 1:1000), Smac/Diablo (D553R, 1:1000), ak OPA1 (D7C1A,1:1000).

GAPDH soti nan Servicebio, Wuhan, Lachin (GB11002, 1:2000), ak H3 soti nan Proteintech (17168-1-AP, 1:1000) nan 4 ◦C lannwit lan ki te swiv pa HRP-konjige segondè anticorps SA00001-2 soti nan Proteintect. (1:5000) enkubasyon pou 2 h nan tanperati chanm. Gwoup pwoteyin yo te vizyalize ak yon twous kimiluminesans amelyore #KF005 soti nan Affinity Biosciences ak imaj ak sistèm nan analiz Bio-Imaj (Zhengzhou University, Zhengzhou, Lachin). Rapò yo nan entansite bann pwoteyin nan GAPDH (cytoplasmicproteins) ak H3 (pwoteyin nikleyè) kòm referans entèn yo te detèmine lè l sèvi avèk ImageJ.

4.6. Iminofluoresans

Yo te jwenn {{0}}µm tisi nan sèvo yo lè l sèvi avèk yon mikrotom ki konjele (Leica, Almay) pou imunofluoresans. Glisad yo te bloke pou 2 èdtan ak PBS ak 10% serom fetal bovin, (#A8020, Solarbio Life Sciences, Beijing, Lachin) ak 0.3% Triton × -100, Amresco 0694, Biosharp, Estoni nan tanperati chanm ak Lè sa a enkube ak antikò prensipal ki soti nan Teknoloji Siyal Selil (Danvers, MA, USA): anti-AIF, D39D2 (dilutionof 1:400), anti-Cytochrome C, 136F3 (dilution of 1:200), anti-cleaved caspase-3 , Asp175 (dilution 1:400), anti-Smac/Diablo, D553R (dilution 1:200) ak anti-OPA1, D7C1A (dilution 1:400) lannwit lan nan 4 ◦C.

Lè sa a, glisad yo te lave 3 fwa chak ki dire 10 minit nan PBS, ak Lè sa a, enkube ak antikò segondè (ab150077 soti nan Abcam,Cambridge Biomedical Campus, Cambridge, UK) pou 2 èdtan nan tanperati chanm nan fè nwa a.DAPI,#C0065 soti nan Solarbio Life. Syans, Beijing, Lachin (1:100PBS) te ajoute pou 5 minand vide koupe, lave nan PBS pou 3 fwa chak dire 5 min, seche, anti-quenchingagent la te ajoute (#P0126, Beyotime Biotechnology, Shanghai, Lachin), vè glise yo te fikse sou glisad yo, epi echantiyon yo te estoke nan -20 ◦C pou 2 èdtan epi yo te pran pou imaj mikwoskopik. Yo te kaptire imaj tisi yo lè l sèvi avèk yon mikwoskòp fliyoresan konfokal (Ni-U942877, Nikon, Tokyo, Japon), ak imaj yo reprezante. Pwoteyin yo nan cortical motè a te kasantifye lè l sèvi avèk FIJI-ImageJ jan sa dekri nan [33].

4.7. Analiz estatistik

GraphPad Prism vèsyon 8.0.0 pou Windows (GraphPad Software, San Diego, CA, USA) te itilize pou tout analiz. Yon sèl-fason ANOVA ki te swiv pa tès post hoc Dunnett, respektivman, yo te itilize pou mezire siyifikasyon estatistik. Rezilta yo prezante kòm mwayèn ± SEM, epi yo te konsidere p < 0.05 estatistik siyifikatif.

5. Konklizyon

Etid sa a demontre ke fè egzèsis naje amelyore aktivite motè, memwa, ak aprantisaj ki asosye ak HIE nan siprime apoptoz mitokondriyo atravè theCyto.C/cleaved caspase-3 ak chemen siyal AIF. Anplis de sa, yo te montre entèvansyon egzèsis naje estabilize mitokondriyo krista ak potansyèl manbràn jan yo montre nan ranvèse Smac/Diablo ak OPA1 nan rat ak HIE. Kòm yon rezilta, sa a se yon fondasyon atiran ak solid pou rechèch adisyonèl pou dechifre plis molekilè ki ta ka manipile pou jere efektivman HIE ak defisi yo. pa HIE, li pa te fin itilize tout metòd posib pou etabli kijan mitokondriyo krista yo estabilize; sa a se kritik pou rechèch nan lavni sou sijè sa a.

Kontribisyon Otè: Konsepyalizasyon, FG, FP, YW, ak CC; gerizon done, FG, FP, YW,HL, ak JF; analiz fòmèl, FG, HL, ak CC; akizisyon finansman, CC; ankèt, FG,FP, YW, HL, ak JF; metodoloji, FG, FP, YW, ak CC; administrasyon pwojè, FG, YW, ak CC; resous, CC; lojisyèl, FG, FP, JF, ak CC; sipèvizyon, CC; validation, FG, FP, YW, HL, ak CC; vizyalizasyon, FG, FP, YW, HL, ak JF; ekri – bouyon orijinal, FG, ak YW; ekri – revize ak koreksyon FG ak HL Tout otè te li epi dakò ak vèsyon ki te pibliye maniskri a.

Finansman: Pwojè rechèch syantifik ak teknolojik Depatman HenanProvincial Syans ak Teknoloji sipòte etid sa a (sibvansyon nimewo 212102310217) ak yon sibvansyon nan fon Fondasyon Nasyonal Syans natirèl Lachin nan (sibvansyon nimewo 81401015).

Deklarasyon Komisyon Konsèy Revizyon Enstitisyonèl: etid la te fèt dapre direktiv Komite pou Swen Rechèch Bèt Zhengzhou University; ZZUIRB2022-32.

Deklarasyon Konsantman Enfòme: Pa aplikab.

Deklarasyon Disponibilite Done: Pa aplikab.

Konfli enterè: Otè yo pa deklare okenn konfli enterè.

Referans

1. Li, B.; Konsepsyon, K.; Meng, X.; Zhang, L. entèraksyon sèvo-iminitè nan blesi nan sèvo ipoksik-ischemic perinatal. Pwog. Neurobiol.2017, 159, 50-68. [CrossRef]

2. Douglas-Escobar, M.; Weiss, MD Ansefalopati ipoksik-iskemik: Yon revizyon pou klinisyen an. JAMA Pediatr. 2015, 169, 397–403.[CrossRef] [PubMed]

3. Nwa, RE; Cousens, S.; Johnson, HL; Lawn, J.; Rudan, mwen; Bassani, D.; Jha, P.; Campbell, H.; Walker, CF; Cibulskis, R.; et al.Kòz mondyal, rejyonal, ak nasyonal nan mòtalite timoun nan 2008: Yon analiz sistematik. Lancet 2010, 375, 1969–1987. [CrossRef]

4. Juul, SE; Ferriero, DM Farmacologic Neuroprotective Estrateji nan Neonatal Blesi nan sèvo. Clin. Perinatol. 2014, 41, 119–131.[CrossRef]

5. Zhu, C.; Rodriguez, JI; Li, T.; Xu, Y.; Solèy, Y. Wòl faktè ki pwovoke apoptoz nan blesi nan sèvo ipoksik-ischemik perinatal. NeuralRegen. Res. 2021, 16, 205–213. [CrossRef] [PubMed]

6. Song, S.-H.; Jee, Y.-S.; Ko, I.-G.; Lee, S.-W.; Sim, Y.-J.; Kim, D.-Y.; Lee, S.-J.; Cho, YS Treadmill fè egzèsis ak wou fè egzèsis amelyore fonksyon motè pa siprime lanmò selil newòn apoptotik nan rat enflamasyon nan sèvo. J. Egzèsis. Reyabilitasyon. 2018, 14, 911–919.[CrossRef]

7. Kelly, M.; Darrah, J. Akwatik egzèsis pou timoun ki gen paralezi serebral. Dev. Med. Timoun. Neurol. 2005, 47, 838–842. [CrossRef]

8. Müller, P.; Duderstadt, Y.; Lessmann, V.; Müller, NG Lactate ak BDNF: medyatè kle nan newoplastisite Egzèsis Enduit?J. Clin. Med. 2020, 9, 1136. [CrossRef]

9. Intlekofer, KA; Cotman, CW Egzèsis kontrekare dekline fonksyon ipokanp nan aje ak maladi alzayme a. Neurobiol.Dis. 2013; nan laprès. [CrossRef]

10. Imobilye, C.; Ferreira, A.; Chaves-Kirsten, G.; Torrão, A.; Pires, R.; Britto, L. BDNF reseptè blokaj anpeche efè benefisye fè egzèsis nan yon modèl rat nan maladi Parkinson la. Nerosyans 2013, 237, 118-129. [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com