Apèsi sou konstitiyan Phlorotannin yo nan Fucales Pati 2

5. Metòd pouKarakterizasyon ak Quantification

Malgre enterè eksponansyèl k ap grandi nan byoaktivite PT yo ak aplikasyon potansyèl nan yon seri estrateji ki ka geri ou, youn nan lit prensipal yo lè w ap fè fas ak konpoze sa yo se karakterizasyon chimik yo ak elisid estriktirèl yo. Akòz gwo varyasyon chimik ak konpleksite PT yo, ansanm ak disponiblite limite estanda komèsyal yo, analiz PT yo kounye a rete yon travay difisil. Li pito komen pou jwenn travay ki pa ale pi lwen pase estimasyon PT yo lè l sèvi avèk metòd kolorimetrik [56,72,73]. Men, yo te fè anpil efò nan direksyon pou elisid karakteristik estriktirèl PT yo, ki te deja bay Sur ki enpòtan nan chimi konpoze sa yo.

Glycoside nan cistanche ka ogmante tou aktivite SOD nan kè ak tisi fwa, ak siyifikativman redwi kontni an nan lipofuscin ak MDA nan chak tisi, efektivman scavenging divès kalite radikal oksijèn reyaktif (OH-, H₂O₂, elatriye) ak pwoteje kont domaj ADN ki te koze. pa OH-radikal. Cistanche phenylethanoid glikozid gen yon gwo kapasite scavenging nan radikal gratis, yon pi wo kapasite diminye pase vitamin C, amelyore aktivite a nan SOD nan sispansyon espèm, redwi kontni an nan MDA, epi yo gen yon sèten efè pwoteksyon sou fonksyon manbràn espèm. Cistanche polisakarid ka amelyore aktivite SOD ak GSH-Px nan eritrosit ak tisi nan poumon nan sourit senesan eksperimantal ki te koze pa D-galaktoz, osi byen ke diminye kontni an nan MDA ak kolagen an nan poumon ak plasma, ak ogmante kontni an nan elastin, gen yon bon efè scavenging sou DPPH, pwolonje tan an nan ipoksi nan sourit senesan, amelyore aktivite a nan SOD nan serom, ak retade koripsyon fizyolojik nan poumon nan sourit senesan eksperimantal Avèk koripsyon selilè mòfolojik, eksperyans yo te montre ke Cistanche gen bon kapasite antioksidan. epi li gen potansyèl pou yo dwe yon dwòg pou anpeche ak trete maladi po aje. An menm tan an, echinacoside nan Cistanche gen yon kapasite enpòtan pou elimine radikal gratis DPPH epi li gen kapasite pou elimine espès oksijèn reyaktif epi anpeche degradasyon kolagen an radikal gratis, epi tou li gen yon efè reparasyon bon sou domaj anyon radikal gratis timin.

Klike sou Cistanche Tubulosa Supplement

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Nan jaden sa a, likid kwomatografi konbine avèk espektrometri mas kontinye kanpe kòm yon zouti analyse pwisan pou analiz rapid nan konpoze sa yo, byenke gen kèk nuans lè w konpare ak fenolik tè. Sijè sa a avanse dekouvèt yo te fè pandan ane ki sot pase yo konsènan metòd yo itilize pou separe ak idantifye PT yo ak Fucales.

5.1. Spectrophotometric Quantification nan Phlorotanin

Metòd espektwofotometrik pou quantification PT yo ofri yon apwòch rapid ak senp pou evalye kontni PT nan yon echantiyon oswa yon ekstrè. Kòm konpoze fenolik, metòd Folin-Denis oswa Folin-Ciocalteu (FC) rete apwòch solid pou kontwole kontni total PT yo. Tou de metòd yo baze sou rediksyon ki byen koni pwodui chimik-fenolik-medyatè nan yon reyaktif phosphotungstic-phosphomolybdic (FC reyaktif) fòme yon koulè ble ak yon spectre absòpsyon nan apeprè 760 nm [74]. Sepandan, menm si PT yo se pi gwo konpoze fenolik ki prezan nan alg mawon, plizyè lòt konpoze fenolik ki pa florotanin yo prezan tou [75]. Anplis, reyaktif sa a manke sansiblite paske li pa reyaji sèlman ak fenolik, men tou ak nenpòt sibstans rediksyon (egzanp, sik, pwoteyin, vitamin, thiol, ak iyon inòganik) nan echantiyon an, kidonk, mezire kapasite rediksyon total li [76] . Se poutèt sa, lè konsantre a se PT yo, sa a ka pa apwòch ki pi apwopriye kòm reyaksyon sa yo ki pa espesifik ka mennen nan lekti fo ak estimasyon inègza. Yon metòd pi espesifik te devlope pa Stern et al. [77] lè l sèvi avèk 2,4- dimethoxybenzaldehyde (DMBA) pou reyaji espesyalman nan 1,3- ak 1,3,5-fenol ranplase, tankou phloroglucinol ak PTs, epi fòme pigman triphenylmethane ki ka kontwole nan seri a nan 510 nm. Sepandan, reyaksyon sa a depann de degre branch konpoze yo oswa prezans nan gwoup idwoksil adisyonèl, tankou halos. Paske reyaksyon an ak DMBA dwe fèt ant gwoup idroksil yo atravè de, kat, oswa sis pozisyon yo, ranplase pozisyon sa yo pral anpeche fòmasyon kwomofò, evantyèlman sa ki lakòz souzèstimasyon.

Malgre ke metòd sa yo konsidere kòm itil pou yon estimasyon rapid ak preliminè nan kontni PTs nan echantiyon anpil, gwo dezavantaj yo se enkapasite yo byen mezire ak idantifye konpoze endividyèl, ki fè li nesesè yo ale nan plis sofistike ak pisan teknik separatif ak analyse pou pèmèt. bon elisidasyon karakteristik estriktirèl PT yo.

5.2. Metòd pou Separasyon ak Idantifikasyon Phlorotannin yo

5.2.1. HPLC-DAD

Akòz resanblans estriktirèl yo ak konpleksite yo, analiz PT ak idantifikasyon konpoze endividyèl yo rete byen difisil. Youn nan pi gwo pwoblèm yo fè fas nan analiz PT yo se separasyon kwomatografik yo. Resanblans yo fèmen nan estrikti yo konpoze ak posibilite pou fòme izomè miltip fè li difisil reyalize yon separasyon apwopriye nan PT endividyèl lè w ap itilize HPLC, e menm nan Variant modènize li yo, UHPLC. Nan jaden sa a, literati a divize an de apwòch prensipal: chromatografi ranvèse ak nòmal-faz. Sou yon bò, byenke chromatografi ranvèse itil pou separe konpoze ki gen yon estrikti menm jan an nan echantiyon konplèks, gwo nati polè PT yo ba yo yon afinite patikilye ak faz mobil la, sa ki lakòz elisyon trè vit ak fòme "humps yo" tipik, mal rezoud. " [78]. Sepandan, teknik sa a te lajman itilize pou analiz PT plizyè Fucales, ki gen ladan plizyè espès ki soti nan genus Fucus (F. vesiculosus, F. Aguirre, F. serratus, ak F. spiralis), Cystoseira (C. nodi caulis). , C. tamariscifolia, ak C. usneoides), A. nodosum, ak B. bifurcate, pami lòt moun; e byenke li anjeneral pa pèmèt yo separe konpoze ki pi long pase 8-10 inite, li te trè itil pou akonpli bon jan konesans konsènan degre polymerization ba nan pwofil PTs 'alg sa yo [16,47,48,50,79]. Nan lòt bò a, faz nòmal la enplike itilizasyon yon faz polè-estasyonè ki pi byen konsève konpoze segondè-polè sa yo. Itilizasyon teknik sa a pou separasyon ak izolasyon PT yo te pi souvan nan tan lontan an, ak otè yo te aplike pre-acetylation nan konpoze yo. Vreman vre, lè l sèvi avèk teknik sa a Glombitza ak kòlèg travay li yo te kapab izole ak karakterize plizyè PT ki soti nan jenera Cystophora, Sargassum, ak Carpophyllum [80–83], e menm idantifye PT alojene nan Carpophyllum angustifolium [84] ak nan diferan espès ki soti nan genus la, Cystophora [85,86]. Plis resamman, Koivikko et al. [87] devlope yon metòd NP-HPLC apwopriye pou separe F. vesiculosus PT yo dapre degre yo nan polymérisation, san yo pa mande yon etap asetilasyon anvan, epi ki kapab pwodwi yon chromatogram ak tan retansyon amelyore ak definisyon pik, konpare ak RP-HPLC. Teknik sa a te itilize tou pou analiz de metabolit PT nan echantiyon pipi volontè imen A. nodosum te administre [88]. Pwoblèm nan pi gwo nan NP-HPLC se ke pi wo PT ak yon pi gwo kantite gwoup idroksi etabli entèraksyon fò ak faz polè estasyonè, ki fè yo trè difisil pou elite. Anplis, entèfas tipik solvang NP ak ESI ka difisil akòz sansiblite redwi ki te koze pa efikasite ionizasyon pòv nan 100 pousan solvang non polar [78].

Metòd altènatif yo te eksplore dènyèman simonte pwoblèm sa yo. Sa a se ka a nan idrofil entèraksyon likid chromatografi (HILIC), konsidere kòm yon varyasyon nan nòmal-faz chromatografi likid, epi li se karakterize pa konbinezon an nan faz estasyonè idrofil ak ranvèse faz-ba eluants akeuz, fè pwomosyon fòmasyon nan de kouch nan mobil la. faz, se sa ki, yon kouch dlo ki rich fòme sou sifas faz polè-estasyonè a ak yon lòt kouch ki rich ak òganik fòme anlè sa a (Figi 3), kreye yon sistèm ki sanble ak ekstraksyon likid/likid andedan kolòn nan [89 ]. Nan mòd kwomatografik sa a, analit yo distribye ant de kouch sa yo epi yo elimine dapre chanjman ekilib patisyon ki fèt ant de faz sa yo, byenke lòt entèraksyon, tankou dipol-dipol, lyezon idwojèn, ak fòs elektwostatik jwe tou yon wòl enpòtan [90]. ].

Karakteristik sa yo fè kolòn HILIC yo pi bon pou separe PT yo, sa ki pèmèt yo etabli entèraksyon fò ak faz nan polè-estasyonè, kidonk ogmante tan retansyon yo ak separasyon yo. Yo te aplike teknik sa a pou separe PT soti nan ekstrè nan diferan Fucales, sètadi F. vesiculosus, F. spiralis, A. nodosum, S. longicorns, ak P. canaliculata, sa ki pèmèt yo separe ak detekte konpoze ak degre polimerizasyon ki varye ant 3 ak 49 inite [78], ki se byen lwen pi lwen pase rive rapòte pa Tierney et al. [45], ki moun ki te fè yon etid menm jan an lè l sèvi avèk kolòn RP pou pwofil F. spiralis, A. nodosum, ak P. canaliculata, epi sèlman jere yo reyalize deteksyon an nan konpoze ak DP ki rive jiska 16 inite [45].

Plis dènyèman, teknik 2D LC (Figi 4) yo te travay avèk siksè pou evalye melanj konplèks nan PT nan ekstrè alg, reyalize separasyon siyifikativman amelyore. Nan apwòch sa a, echantiyon yo enjekte nan yon aparèy ki gen de kolòn separe ki konekte sekans pou ke eluyan ki sòti nan premye kolòn nan transfere nan dezyèm kolòn nan, ki kouri lè l sèvi avèk kondisyon diferan. Tipikman, dezyèm kolòn nan gen yon mekanis separasyon ki konplete premye kolòn nan, pou pik yo mal rezoud soti nan premye kolòn nan ka byen separe nan dezyèm lan [91]. Nan ka an patikilye nan PTs, konfigirasyon ki pi souvan rapòte yo dekri konbinezon an nan kolòn HILIC (premye dimansyon) pou separe konpoze yo dapre degre polymérisation yo, ak kolòn RP (dezyèm dimansyon), ki pèmèt pou separasyon dapre idrofobisite yo. Sèvi ak teknik sa a, Montero et al. yo te kapab separe ak detekte plis pase 50 konpoze nan espès yo, Cystoseria abies-marina [4], ak plis pase 70 konpoze nan Sargassum muticum [92]. Tablo 2 konpile diferan konfigirasyon kwomatografik ak kondisyon ki te itilize atravè tan pou separasyon ak deteksyon PT nan Fucales.

Natirèlman, kèlkeswa kolòn yo itilize, U/HPLC toujou mande pou kouple ak yon sistèm deteksyon pou kontwole konpoze yo pandan y ap elite. Detektè UV-Vis, espesyalman etalaj fotodyòd (PDAs), se sansab detektè ki pi komen yo ak HPLC paske anpil konpoze natirèl ki enterese absòbe nan rejyon UV-Vis (ki soti nan 190-600 nm) [93]. Fenolik, an patikilye, anjeneral montre absorpsyon fò alantou 270-280 nm, ak PT yo pa gen okenn eksepsyon, kòm maksimòm absorpsyon yo se tou pre 270 nm [94]. Idantifikasyon konpoze lè l sèvi avèk HPLC-PDA ka reyalize lè w konpare spectre UV ak tan retansyon yon konpoze bay ak sa ki nan estanda komèsyal li yo. Anplis, teknik sa a trè itil pou detèmine kontni an nan konpoze endividyèl nan echantiyon konplèks, kòm konsantrasyon nan konpoze sa yo, ki soti kòm absòbe, ka mezire quantitatively lè l sèvi avèk Lwa Byè a [95]. Sepandan, aplikasyon apwòch sa a pou idantifye ak quantifier PT yo trè limite paske gen sèlman yon ti kantite estanda komèsyal ki disponib pou objektif sa a. Se poutèt sa, idantifikasyon an nan PT anjeneral mande pou teknik ki pi pwisan, tankou espektrometri mas (MS) oswa sonorite mayetik nikleyè (NMR).

5.2.2. Spectrometry mas

Itilizasyon MS dirèkteman makonnen ak enstriman U/HPLC te revolusyone karakterizasyon ekstrè konplèks, bay gwo sansiblite ak amelyore kapasite analitik nan yon peryòd relativman kout. Pou rezon sa a, teknik sa a vin tounen yon pratik ki estab pou karakterizasyon ak idantifikasyon konpoze fenolik an jeneral, ki gen ladan PT. Tandem MS oswa MS/MS pèmèt deteksyon rapò mas-a-chaj (m/z) nan iyon pseudo-molekilè konpoze yo (anjeneral pwodwi atravè ionizasyon electrospray) pandan y ap elite nan kolòn nan, epi plis jwenn fwagmantasyon respektif yo. modèl atravè kolizyon-induced dissociation (CID) [118]. Sa a se yon etap enpòtan nan plasman PT yo paske fragman ki fòme yo ka bay enfòmasyon enpòtan sou karakteristik estriktirèl ion paran ki soti yo. Tipikman, prèske chak PT prezante yon pik baz nan MS2 ki koresponn ak pèt youn oswa de moso dlo [46]. Menm jan an tou, pèt 126 Da se yon karakteristik komen nan konpoze sa yo paske sa a koresponn ak mwatye phloroglucinol, ki se blòk bilding nan PTs [119]. Aparans sèten pèt net nan detriman lòt moun enpòtan pou konprann ki kalite lyen ki etabli ant inite phloroglucinol. Pou egzanp, sipoze ke lyezon C-C anjeneral mande pou pi wo enèji kraze pase lyen C-O-C, fucols, phlorethols, ak fucophlorethols ak menm degre nan polymerization pral montre menm pwa molekilè a, men evantyèlman pwodui diferan modèl fwagmantasyon. Nan phlorethols, fwagmantasyon ka rive sou chak bò nan kosyon etè a, jenere pèt net nan 126, 142, oswa 110 Da (Figi 5A), ki koresponn ak phloroglucinol, tetrahydroxy benzèn, oswa resorcinol, osi byen ke konbinezon yo ak plis phloroglucinol oswa dlo. inite yo. Kontrèman, kraze lyezon CC karakteristik nan konbistib yo ka sèlman bay monte pèt net nan 126 Da (phloroglucinol), epi paske lyezon sa yo mande pou pi wo enèji kraze, gaz tou souvan prezante pèt net nan 14, 28, 44, ak 84 Da. (Figi 5B), osi byen ke konbinezon yo ak plis phloroglucinol oswa dlo, ki endike klivaj kwa bag. Konpoze ki montre tou de kalite klivaj gen plis chans yo dwe fucophlorethols (Figi 5A, B) [48]. Fuhalols, nan lòt men an, se yon ti kras pi fasil yo distenge paske konpoze sa yo gen yon aranjman klowoetil-tankou ki gen omwen yon gwoup idroksil adisyonèl. Se poutèt sa, iyon pseudo-molekilè nan yon sal ak yon degre polymérisation bay toujou prezante yon m/z 16 Da pi wo, konpare ak ekivalan phloretin li yo (Figi 5C). Anplis, MS / MS spectre nan konpoze sa yo souvan prezante iyon pwodwi miltip ak / oswa pèt net ki koresponn ak tetrahydroxy benzèn ak konbinezon li yo ak phloroglucinol (egzanp, [MH] - nan m / z 265, 389, 513, ak sou sa) [92].

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】