Pati 1: Acteoside kontrekare entèleukin-1 -pwosesis katabolik ki pwovoke atravè modulasyon kinaz pwoteyin ki aktive ak mitojèn ak chemen siyal selilè NFκB.
Mar 05, 2022
Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com
HyangI Lim ,1 Do Kyung Kim ,1 Tae-Hyeon Kim ,1 Kyeong-Rok Kang
Osteoartriti (OA) se maladi jwenti dejeneratif ki pi komen ak doulè nan jwenti kwonik ki te koze pa koripsyon pwogresif nan Cartilage articular nan jwenti synovial.Acteoside, yon glikozid kafeoylphenylethanoid, gen divès kalite aktivite byolojik tankou efè antimikwòb, anti-enflamatwa, antikansè, antioksidatif, cytoprotective, ak efè neuroprotective. Pli lwen, administrasyon oral nanacteosidenan yon dòz segondè pa lakòz genotoksisite. Se poutèt sa, objektif etid la se verifye efè antikatabolik yoacteosidekont artroz ak chemen siyal antikatabolik li yo.Acteosidepa t diminye viabilite selil fibroblast L929 sourit yo itilize kòm selil nòmal ak kondrosit prensipal rat yo.Acteosidekontrekare IL-1 -pwovoke pèt proteoglikan nan chondrocytes yo ak Cartilage artikulè yo pa siprime ekspresyon ak aktivasyon yon anzim ki degrade Cartilage tankou matris metalloproteinase- (MMP-) 13, MMP-1, ak MMP{ {6}}. Anplis de sa, akteozid siprime ekspresyon medyatè enflamatwa tankou sintaz oksid nitrique endivizib, cyclooxygenase -2, oksid nitrique, ak prostaglandin E2 nan chondrocytes rat prensipal yo trete ak IL-1. Answit, ekspresyon sitokin pro-enflamatwa te diminye pa akteozid nan chondrocytes rat prensipal yo trete ak IL-1. Anplis, acteoside siprime pa sèlman fosforilasyon mitogen-aktive pwoteyin kinaz nan chondrocytes rat prensipal trete ak IL-1, men tou translokasyon nan NFκB soti nan sitosol la nan nwayo a atravè repwesyon nan fosforilasyon li yo. Administrasyon oral 5 ak 10mg / kg acteoside atenue koripsyon pwogresif nan Cartilage artikulèr nan modèl la sourit osteoartriti ki te pwodwi pa destabilizasyon nan menisk la medyal. Konklizyon nou yo montre saacteosidese yon ajan antikatabolik potansyèl pwomèt oswa sipleman pou diminye oswa anpeche koripsyon pwogresif nan Cartilage articular.
1. Entwodiksyon
Osteoartriti (OA) se maladi jwenti dejeneratif ki pi komen ak doulè nan jwenti kwonik ki te koze pa koripsyon pwogresif nan Cartilage artikulèr nan jwenti synovial [1]. Akòz ogmantasyon nan esperans lavi, prévalence de OA ak pèt nan mobilite ak doulè nan jwenti kwonik ki te koze pa koripsyon pwogresif nan cartilaj artikulèr nan jwenti synovial yo estime yo dwe 18 pousan ak 9.6 pousan nan fanm apre menopoz ak nan gason, respektivman [2]. ]. Malgre ke 2 Medikaman Oksidatif ak Lonjevite Selilè atravè lemond prévalence OA ogmante chak ane, etyoloji fizyolojik OA toujou enkoni. Li ka koze pa faktè risk trè konplèks ak miltifaktoryèl tankou aje, sèks, eritaj jenetik, blesi jwenti twomatik, ak chaj grav jwenti mekanik. Anplis de sa, relasyon nero-patolojik ki genyen ant koripsyon pwogresif nan Cartilage artikulè ak devlopman nan doulè nan jwenti kwonik yo pa konnen [3]. Pakonsekan, objektif jesyon klinik pou pasyan ki gen OA se antretyen nan mobilite kò ak fonksyon mekanik jwenti atravè soulajman nan doulè nan jwenti kwonik, lè l sèvi avèk apwòch famasi ak nonfarmakolojik ak operasyon ranplasman jwenti. Demann pou devlopman entèvansyon efikas oswa sipleman, ak sekirite byolojik alontèm, pou anpeche oswa diminye OA pou kenbe kalite lavi atravè antretyen fonksyon jwenti mekanik nan popilasyon granmoun aje yo ap ogmante.
Jan yo montre nan Figi 1, acteoside (CAS No. 61276-17-3; C29H36O15) se yon glikozid kafeoylphenylethanoid izole nan plizyè plant èrbal tankou klori Verbascum [4], Buddleja globosa [5], ak Plantago australis [6]. Acteoside gen plizyè aktivite byolojik tankou antimikwòb [5], anti-enflamatwa [7], antikansè [8], antioksidatif [9], cytoprotective [9], ak efè neuroprotective [10]. Anplis de sa, administrasyon oral nan acteoside nan yon gwo dòz pa lakòz jenotoksisite [11].
Se poutèt sa, nou te sipoze ke akteozid ak sekirite byolojik anti-enflamatwa gen efè antikatabolik ki asosye ak pwoteksyon nan cartilaj atikil kont koripsyon pwogresif nan cartilaj atikul atravè repwesyon nan faktè katabolik tankou sitokin proenflamatwa, medyatè enflamatwa, ak enflamatwa nan jwenti syngrading. . Se poutèt sa, objektif etid sa a se te mennen ankèt sou efè antikatabolik akteozid yo ak chemen siyal selilè li yo tou de nan vitro, lè l sèvi avèk kondrosit prensipal izole nan Cartilage atik nan jwenti jenou rat, ak nan vivo, lè l sèvi avèk yon modèl bèt OA ki te pwodwi pa chirijikal. destabilizasyon nan menisk la medyal nan jwenti a jenou nan sourit.
acteoside soti nansistanch
2. Metòd
2.1. Kilti Selil. Chondrocytes prensipal rat yo te izole nan cartilaj atikil la nan jwenti jenou rat (5-jou; Sprague–Dawley), an akò ak pwotokòl (CIA-CUC2019-A0027) apwouve pa Enstitisyon an. Komite swen ak itilizasyon bèt nan Chosun University, Gwangju, Repiblik Kore di. Yo te konsève kondrosit prensipal izole nan Dulbecco's Modified Eagle's Medium/Nutrient Mixture F-12 (DMEM/F12) (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) ak 10 pousan serom fetal bovine (FBS) (Life Technologies). , Grand Island, NY, USA), antibyotik (50U/mL penisilin ak 50ug/mL streptomycin), ak 50ug/mL asid ascorbic. Yo te achte liy selil nòmal sourit fibroblast L-929 nan American Type Culture Collection (ATCC). Dapre enstriksyon ATCC yo bay, selil L-929 yo te kiltive nan mwayen esansyèl minimòm Eagle a, ki gen 10 pousan FBS, epi yo te grandi nan yon enkibatè imidite a 37 degre ak 5 pousan CO2.
2.2. Selil Viabilite Essay. Yo te fè tès dimethyl thiazolyl diphenyltetrazolium sèl (MTT) pou evalye viabilite selil selil L929 sourit fibroblast yo itilize kòm yon selil nòmal ak chondrosit rat prensipal yo trete ak acteoside. Yon ti tan, selil L929, ak chondrosit rat prensipal yo te kiltive nan yon dansite selil 8 × 105 selil/mL nan plak kilti pou 24 èdtan epi yo trete yo ak 2.5, 5, 10, 25, 50, ak 100μM akteozid pou 24h. Apre tretman ak solisyon MTT, tou de selil L929 ak chondrocytes yo te kiltive plis pou 4h. Apre enkubasyon, kristal MTT ki te fòme yo te sispann konplètman nan sulfoksid dimethyl ak mezire pou absòbe nan 570nm lè l sèvi avèk yon espektromètr (Epoch microplate spectrophotometer, BioTek®, Winooski, VT, USA) pou evalye viabilite selil.
2.3. Selil Viv/Mouri Assay. Yo te fè siviv selil yo lè l sèvi avèk twous tès Cell Live/Dead (Molecular Probes, Carlsbad, CA, USA), ki konpoze de kalsein-AM vèt pou etikèt selil vivan yo (avèk fliyoresans vèt) ak etidyòm homodimer-1 pou etikèt sou moun ki mouri yo. selil (avèk fliyoresans wouj). Yon ti tan, tou de selil L929 ak chondrosit rat prensipal yo te kiltive nan yon dansite selil 8 × 105 selil/mL sou glisad chanm (Nunc® Lab-Tek® Chamber Slide™ sistèm; Sigma-Aldrich; Merck KGaA) pou 24 èdtan epi yo te trete ak 50 ak 100μM acteoside pou 24h. Apre kiltivasyon, yo te fè yon tès siviv selil dapre enstriksyon manifakti a. Apre sa, yo te imajine selil ki tache yo lè l sèvi avèk yon mikwoskòp fliyoresans (Eclipse TE200; Nikon Instruments, Melville, NY).
2.4. Dimethylmethylene Blue (DMMB) Esay. Yo te fè tès DMMB pou evalye chanjman nan kontni proteoglikan nan chondrocytes rat prensipal ki te trete ak acteoside pandan 21 jou nan prezans oswa absans IL-1. Pou kenbe karakteristik prensipal chondrocytes rat pou 21 jou, yo te sispann chondrocytes rat prensipal (2 × 106 selil) nan 1mL nan 1.2 pousan alginate ak Lè sa a, encapsulé pa degoute sispansyon selil/aljinat nan yon solisyon 105mM CaCl2. Chondrocytes rat prensipal yo ankapsule nan aljinat yo te kiltive pou 24 èdtan nan DMEM / F12 (ki gen 10 pousan FBS, 50U / mL penisilin, 50ug / mL streptomycin, ak 50ug / mL asid ascorbic) ak Lè sa a, adapte pou 24 èdtan nan DMIN / F12 pousan. mini-ensilin-transferrin-selenium (mini-ITS) ak 50ug/mL asid ascorbic. Imedyatman, chondrocytes yo te trete ak 50 oswa 100μM acteoside nan prezans oswa absans 1ng/mL IL-1 pou 21 jou. Nan jou 21, yo te kolekte chondrocytes rat prensipal yo pou evalye kontni proteoglikan lè l sèvi avèk tès DMMB, jan sa dekri deja [12]. Anplis de sa, pou quantifier kontni proteoglycan pou chak selil ak evalye pwopagasyon prensipal chondrocytes rat, nimewo selil yo te mezire pa tès ADN lè l sèvi avèk PicoGreen (Molecular Probes, Carlsbad, CA), dapre enstriksyon manifakti a.
2.5. Kilti ògàn Ex Vivo nan tisi Cartilage Rat Articular. Tisi Cartilage atik yo te izole nan jwenti jenou 5-rat Sprague-Dawley ki te gen yon jou epi yo te kiltive yo nan DMEM/F12 ki te konplete ak 10 pousan FBS. Apre sa, Cartilage a articular
echantiyon yo te trete ak 100μM acteoside nan laprezans oswa absans 10ng/mL IL-1 pandan 7 jou. Nan fen peryòd kilti a, echantiyon yo te kolekte epi yo te fikse nan 4 pousan paraformaldehyde pou 72h pou analiz istolojik.
2.6. Analiz histolojik. Yo te fè analiz histolojik lè l sèvi avèk safranin-O ak tach vèt rapid pou verifye pèt proteoglikan nan Cartilage artikulèr la trete ak 100μM acteoside nan prezans oswa absans 10ng/mL IL-1 pou 7 jou. Pou yon ti tan, yo te dekalsifye echantiyon cartilaj artikilè fiks yo nan asid ethylenediaminetetraacetic epi answit yo te entegre nan parafin. Apre sa, yo te koupe blòk parafin ki te prepare ki gen Cartilage articular a yon epesè 5μm epi yo mete yo sou glisad. Safranin-O ak tach vèt rapid yo te fèt answit pou evalye pèt proteo-glikan nan sibstans tè a cartilaj artikulè. Anplis de sa, ematoksilin ak tach eozin yo te fèt pou obsève mòfoloji jeneral nan Cartilage articular la.
2.7. Western Blotting. Western blotting te fèt pou mennen ankèt sou ekspresyon faktè katabolik ki gen ladan MMP-13, MMP-1, MMP-3, sintaz oksid nitrique endivizib (iNOS), ak siklooksijenaz-2 (COX). -2) ak chanjman nan molekil siyal selilè tankou mitogen-aktive kinaz pwoteyin ak faktè nikleyè-kappa B (NFκB). Yon ti tan, kondrosit prensipal rat yo te trete ak 50 oswa 100μM akteozid nan prezans oswa absans 10ng/mL IL-1 pou 24 èdtan. Apre sa, kondrosit prensipal rat yo te rekòlte pa santrifujasyon epi yo te lysed lè l sèvi avèk liz tanpon (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) dapre enstriksyon manifakti a. Anplis de sa, pou verifye translokasyon nikleyè NFκB la, yo te trete chondrocytes prensipal rat ak 50 oswa 100μM acteoside nan prezans oswa absans 10ng/mL IL-1 pou 24h. Apre sa, yo te ekstrè fraksyon sitosolik ak nikleyè lè l sèvi avèk reyaktif ekstraksyon nikleyè ak sitoplasmik NE-PER™ (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) dapre enstriksyon manifakti a. Yo te detèmine konsantrasyon total pwoteyin ki soti nan chondrocytes rat prensipal yo lè l sèvi avèk yon twous tès pwoteyin asid bicinchoninic (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) dapre enstriksyon manifakti a. Anplis de sa, yo te kolekte mwayen kondisyone a pou detekte nivo anzim ki degrade Cartilage ki sekrete nan chondrocytes. Kantite egal pwoteyin ak mwayen kondisyone yo te electrophoresis sou sodyòm dodecyl silfat-polyacrylamide jèl elektwoforèz (SDS-PAGE) ak Lè sa a, transfere sou manbràn nitrocellulose. Apre sa, Western blotting te fèt lè l sèvi avèk anti-kò prensipal vize kont MMP-13, MMP-1, MMP-3, iNOS, COX-2, phosphoERK1/2, total-ERK1. /2, phosphop38, total-p38, phosphor JNK, total JNK, phosphoNFκB, total NFκB, - actin, ak lamin B. Gwoup iminoreaktif yo te vizyalize lè l sèvi avèk yon sistèm kimiluminesans amelyore (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) dapre enstriksyon manifakti a ak Lè sa a, imaj pa yon aparèy Microchemi (DNR Bioimaging Systems, Jerizalèm, Izrayèl).
2.8. Quantitative Polymerase Chain Reaction (qPCR) ak Quantitative Real-Time PCR (qRT-PCR). Chondrocytes rat prensipal yo te trete ak 50 oswa 100μM actoside nan prezans oswa absans 10ng/mL IL-1 pou 24h. Apre sa, RNA total yo te izole nan chondrocytes rat prensipal yo lè l sèvi avèk TRIzol reyaktif (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) dapre enstriksyon manifakti a. Yo te mezire konsantrasyon total RNA lè l sèvi avèk yon NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA). Pou fè sentèz cDNA, yo te transkri 1ug RNA lè l sèvi avèk yon sistèm PCR ThermoScript (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) dapre enstriksyon manifakti a. qPCR nan cDNA te fèt lè l sèvi avèk 2 × TOPsimple ™ DyeMIX-Taq (Enzynomics, Seoul, Repiblik Kore di) ak primè espesifik sou yon TaKaRa PCR Thermal Cycler Aparèy (TaKaRa Bio Inc., Shiga, Japon). Apre sa, pwodwi PCR yo te electrophoresed sou yon jèl agarose pou detèmine nivo ekspresyon jèn sib yo. Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) te itilize kòm yon kontwòl andojèn. Anplis de sa, pou qRT-PCR, cDNA te anplifye lè l sèvi avèk yon sistèm PCR an tan reyèl Eco™ (illumine Inc., San Diego, CA, USA). -Actin te itilize kòm yon kontwòl andojèn. Sekans premye yo itilize nan qPCR ak qRT-PCR yo rezime nan Tablo 1 ak 2, respektivman.
cistanche (acteoside) benefis: amelyore iminite
3. Rezilta yo
3.1. Acteoside pa Afekte Selil L929 ak Vitabilite Chondrocyte Rat Prensipal. Liy selil fibroblast sourit L929 yo te itilize kòm selil nòmal yo te trete ak 2.5, 5, 10, 25, 50, ak 100μM acteoside pou 24h. Apre sa, yo te fè tès MTT la pou evalye sitotoksisite actoside sou selil L929 yo. Jan yo montre nan Figi 2(a), yo te detèmine viabilite relatif selil L929 yo 94:8±8 pousan, 93:6±7 pousan, 100 ± 5 pousan, 103:9±5 pousan, 126:1±8 pousan. , ak 122:7±4 pousan nan 2.5, 5, 10, 25, 50, ak 100μM acteoside, respektivman, konpare ak kontwòl (100:02 ± 3 pousan). Anplis de sa, pou verifye sitotoksisite nan acteoside sou chondrocytes rat prensipal yo, yo te fè tès MTT la jan yo montre nan Figi 2 (b). Vitabilite prensipal chondrocytes rat trete ak 2.5, 5, 10, 25, 50, ak 100μM acteoside yo te detèmine kòm 114 ± 4 pousan, 117:8±6 pousan, 123:9± 5 pousan, 132:6±4 pousan, 153:1± 7 pousan, ak 142:1±6 pousan, respektivman, konpare ak kontwòl (100:4±5 pousan). Anplis de sa, pou konfime efè acteoside sou rantabilite tou de selil L929 ak kondrosit prensipal rat yo, yo te fè yon tès Cell Live/Dead jan yo montre nan Figi 2 (c). Kantite selil ki mouri tache kòm fliyoresans wouj pa t ogmante pou tou de selil L929 ak chondrosit rat prensipal yo te trete ak 50 ak 100μM akteozid pou 24 èdtan. Done sa yo toujou demontre ke dòz ki defini nan akteozid pa t 'afekte viabilite selil L929 ak kondrosit prensipal rat yo. Se konsa, 50μM acteoside ak 100μM acteoside, ki se dòz ki pa toksik nan tou de selil L929 ak kondrosit prensipal rat, yo te itilize pou verifye efè antikatabolik li yo nan etid vitro lè l sèvi avèk chondrocytes rat prensipal.
3.2. Acteoside Kontrekase IL-1 -Pèt Proteoglycan Enduit nan Chondrocytes Rat Prensipal yo. Chondrocytes rat prensipal ki entegre nan pèl aljinat yo te trete ak 50 ak 100μM actoside nan prezans oswa absans 1ng/mL IL- 1 pou 21 jou. Apre sa, yo te fè yon tès DMMB pou evalye chanjman nan kontni proteoglycan jan yo montre nan Figi 3 (a). Kontni proteoglikan relatif yo te detèmine kòm 88:3±18:1 pousan ak 86:8±16:3 pousan nan chondrocytes rat prensipal yo te trete ak 50 ak 100μM actoside, respektivman, konpare ak kontwòl (103:8±). 32:3 pousan). Malgre ke akteozid te diminye kontni pwoteoglikan relatif yo, rezilta sa yo pa t enpòtan. Sepandan, kontni pwoteoglikan relatif la te siyifikativman diminye pa 37:1± 14:7 pousan nan chondrocytes rat prensipal yo te trete ak 1ng/mL IL-1 , men 50 ak 100μM akteozid te siyifikativman redwi kontni an proteoglikan pa 57±12:4. pousan ak 64 ± 14:5 pousan, respektivman, nan prezans 1ng/mL IL-1. Apre sa, pou verifye si acteoside siprime pèt pwoteoglikan IL-1 - pwovoke, yo te trete Cartilage artikulèr ki soti nan jwenti jenou rat yo ak 100μM acteoside nan prezans oswa absans 10ng/mL IL-1 pandan 7 jou. Apre sa, evalyasyon istolojik lè l sèvi avèk H & E tach ak safranin-O ak vit vèt tach yo te fèt jan yo montre nan Figi 3 (b). Chanjman mòfolojik la pa te obsève lè l sèvi avèk tach H&E; sepandan, safranin-O ak vit vèt tach revele ke proteoglycan a tache kòm koulè wouj la pa t 'chanje nan cartilages yo articular trete ak 100μM acteoside konpare ak sa ki nan kontwòl. Sepandan, 10ng/mLIL-1 nan Cartilage artikulè a te pwovoke yon pèt sevè proteoglikan, epi 100μM akteozid siyifikativman te siprime pèt proteoglikan nan Cartilage artikilyè a ki te trete ak 10ng/mL IL- 1. Ansanm, done sa yo toujou montre ke akteozid gen yon efè antikatabolik ki retade koripsyon nan Cartilage artikulèr nan kontrekare IL-1 -pèt proteoglycan pwovoke.
3.3. Acteoside Gen yon Efè Antikatabolik Ki Siprime Ekspresyon MMP ak Aktivasyon nan Chondrocytes Rat Prensipal Trete ak IL-1. Pou mennen ankèt sou si efè antikatabolik ki pwovoke akteozid ki asosye ak repwesyon ekspresyon MMP ak aktivasyon, yo te trete chondrocytes rat prensipal ak 50 ak 100μM acteoside nan prezans oswa absans 10ng/mL IL-1 pou 24h. Apre sa, yo te envestige chanjman nan MMP yo. Jan yo montre nan Figi 4(a), byenke ekspresyon de anzim ki degrade Cartilage tankou MMP-13, MMP-1, ak MMP-3 te ogmante siyifikativman nan medya kondisyone nan rat prensipal. chondrocytes trete ak 10ng/mL IL-1 , li te diminye pa acteoside nan yon fason ki depann de dòz la. Anplis de sa, rezilta tou de qPCR (Figi 4(b)) ak qRT-PCR (Figi 4(c)) te revele ke IL-1 ogmante siyifikativman nivo mRNA MMP yo tankou MMP-13, MMP{ {22}}, ak MMP-3 nan kondrosit prensipal rat yo. Sepandan, yo diminye dòz-depandans nan chondrocytes rat prensipal yotrete ak 50 ak 100μM acteoside. Anplis, 50 ak 100μM actoside efektivman siprime aktivasyon MMPs nan chondrocytes prensipal rat yo trete ak 10ng / mL IL-1 (Figi 4 (d)). Ansanm, done sa yo toujou endike ke acteoside gen yon efè antikatabolik ki siprime ekspresyon ak aktivasyon anzim ki degrade Cartilage.
3.4. Acteoside Siprime Ekspresyon ak Pwodiksyon IL1 -Medyatè Enflamatwa Katabolik ak Sitokin Proenflamatwa nan Chondrocytes Rat Prensipal yo. Pou detèmine si acteoside gen yon efè prevantif kont OA, yo te trete chondrocytes rat prensipal yo ak 50 ak 100μM acteoside nan prezans oswa absans 10ng/mL IL-1 pou 24h. Apre sa, yo te envestige chanjman nan medyatè enflamatwa yo, faktè katabolik reprezantan tankou iNOS, COX-2, ak PGE2. Nivo mRNA iNOS, COX-2, ak PTGS-2 te ogmante siyifikativman pa IL-1 nan kondrosit prensipal rat yo.
Sepandan, yo diminye dòz-depandans nan chondrocytes rat prensipal yo trete ak acteoside (Figi 5 (a)). Anplis de sa, acteoside pa sèlman siprime ekspresyon iNOS ak COX-2 nan chondrocytes rat prensipal yo trete ak IL-1 (Figi 5(b)), men tou siyifikativman diminye pwodiksyon relatif NO ak PGE2 jan yo montre. nan Figi 5(c) ak 5(d), respektivman. Done sa yo sijere ke acteoside siprime ekspresyon de cytokin pro-enflamatwa pwovoke medyatè enflamatwa ki aji kòm faktè katabolik pou pwovoke koripsyon pwogresif nan Cartilage articular. Pakonsekan, pou mennen ankèt sou chanjman ekspresyon nan sitokin proenflamatwa pa 50μM akteozid nan chondrocytes rat prensipal yo trete ak 10ng/mL IL- 1, yo te fè yon seri cytokine jan yo montre nan Figi 6. Acteoside siprime ekspresyon cytokine-induit. chemoattractant- (CINC-) 2, CINC-3, ciliary neurotrophic factor (CNTF), fractalkine (CX3CL1), IL-1, IL{- 1, leptin, monocyte chemoattractant protein{{22} } (MCP-1), pwoteyin enflamatwa makrofaj- (MIP-) 3 , ak nèfaktè kwasans (NGF) nan kondrosit prensipal rat yo trete ak IL-1 konpare ak IL-1 pou kont li. Ansanm, done sa yo sijere ke acteoside anpeche koripsyon pwogresif nan cartilaj artikulèr atravè repwesyon medyatè enflamatwa ak sitokin proenflamatwa kont efè katabolik IL-1 -pwovoke nan kondrosit prensipal rat yo.
3.5. Acteoside Siprime MAPK ak NFκB Fosforilasyon nan Chondrocytes Rat Prensipal Trete ak IL-1. Pou mennen ankèt sou chemen siyal selilè ki asosye ak efè antikatabolik akteozid yo kont chanjman sitokin IL-1 proenflamatwa nan MAPK ak NFκB, yo te trete chondrosit rat prensipal yo ak 50 ak 100μM akteozid nan prezans oswa absans IL{8. }} pou 24h. Apre sa, yo te ekstrè pwoteyin total ak elektwoforèz sou jèl SDS-PAGE pou fè blot lwès la. Jan yo montre nan Figi 7, MAPK tankou ERK1/2, p38, ak JNK te siyifikativman fosforilasyon nan chondrocytes rat prensipal yo trete ak IL-1, tandiske 50 ak 100μM akteozid pa t 'siyifikativman pwovoke fosforilasyon MAPK konpare ak la. kontwòl nan chondrocyte prensipal rat. Sepandan, 50 ak 100μM akteozid depann de dòz la siprime fosforilasyon MAPK IL-1 -pwovoke nan chondrosit rat prensipal yo. Anplis de sa, fosforilasyon NFκB nan chondrocytes rat prensipal yo trete ak 10ng/mL IL-1 te piti piti diminye pa acteoside nan yon fason ki depann de dòz la. Done sa yo endike ke MAPK ak NFκB siyal selilè yo enplike sere ak efè antikatabolik akteozid yo kont IL-1 nan chondrocytes rat prensipal yo.
3.6. Acteoside Siprime Translokasyon NFκB soti nan Cytosol la nan Nwayo a atravè Suppression nan IL-1 -Fosforilasyon NFκB pwovoke nan Chondrocytes Rat Prensipal. Pou envestige si acteoside siprime translokasyon NFκB soti nan sitosol la nan nwayo a, chondrocytes rat prensipal yo te trete ak 50 ak 100ug/mL acteoside nan prezans oswa absans 10ng/mL IL-1. Jan yo montre nan Figi 8 (a), NFκB te siyifikativman transloke nan nwayo a soti nan sitosol la nan chondrocytes rat prensipal yo trete ak 10ng/mL IL-1. Sepandan, li te siyifikativman inibit pa akteozid nan yon fason ki depann de dòz la. Anplis de sa, byenke nivo NFκB la te ogmante nan fraksyon nikleyè ekstrè nan chondrocytes rat prensipal yo trete ak 10ng/mL IL-1, li te diminye dòz-depandans pa acteoside jan yo montre nan Figi 8 (b). Nivo NFκB te diminye nan fraksyon cytosolic extrait nan chondrocytes rat prensipal yo te trete ak 10ng/mL IL-1, men li te ogmante depandans ak dòz la pa acteoside. Ansanm, done sa yo toujou endike ke efè antikatabolik akteozid ki pwovoke kont IL-1 yo enplike nan repwesyon translokasyon soti nan sitosol la nan nwayo a sou modulasyon chemen siyal NFκB la nan chondrocytes rat prensipal yo.
3.7. Acteoside atenye koripsyon pwogresif nan Cartilage atikul nan bèt yo OA jwenti jenou chirijikal DMM-induit. Pou elicide efè antikatabolik akteozid yo te pwovoke nan vivo, bèt ki te pwovoke OA te pwodwi pa DMM chirijikal ki te fèt sou jwenti jenou sourit BALB/c yo te administre oralman 5 ak 10mg/kg akteozid rezoud nan 5 pousan etanòl. chak lòt jou pou 8 semèn. Apre sa, jwenti jenou yo te evalye histolojikman lè l sèvi avèk safranin-O ak tach vèt vit jan yo montre nan Figi 9. Pèt la proteoglikan ak blesi nan sifas la cartilaj artikulèr yo te ogmante siyifikativman nan jwenti a jenou disseke soti nan DMM-pwovoke bèt OA. Sepandan, administrasyon oral la nan acteoside siprime pèt la proteoglycan ak mwens blesi nan Cartilage articular konpare ak machin sèlman. Anplis de sa, nòt Mankin te ogmante siyifikativman nan gwoup bèt OA (n =5, 3± 0:7) te bay machin sèlman konpare ak Naïve (n =5, 0 :67 ± 0:5). Sepandan, administrasyon oral 5 ak 10mg/kg akteozid nan gwoup bèt OA (n =5) diminye nòt Mankin nan nòt 2±0:7 ak 1:67 ± 0:5. , respektivman, konpare ak machin sèlman. Ansanm, done sa yo endike ke administrasyon oral la nan acteoside atenue koripsyon pwogresif nan Cartilage articular nan jwenti synovial ak kondisyon katabolik.
sistanch (Acteoside)sipleman: anti-fatig
