Pati 1: Yon inibitè nan NF-kB ak yon agonis nan AMPK: Prediksyon rezo ak entegrasyon milti-omik pou derive chemen siyal pou Acteoside kont maladi alzayme a.
Mar 03, 2022
Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com
Ying-Qi Li1†, Yi Chen1†, Si-Qi Jiang1 , Yuan-Yuan Shi2 , Xiao-Li Jiang1 , Shan-Shan Wu1 , Ping Zhou1 , Hui-Ying Wang1 , Ping Li1* ak Fei Li1,2*
1 Eta Kle Laboratwa nan Natirèl Remèd, Lachin Famasetik Inivèsite, Nankin, Lachin, 2 Kolèj nan famasi,Inivèsite Medikal Xinjiang, Urumqi, Lachin
ENTWODIKSYON
Avèk aje ak kwasans rapid nan popilasyon an, kantite ka demans nan mond lan te montre yon tandans anlè.Maladi alzayme a(AD) se yon maladi neurodegenerative komen akonpaye pa mantal andikap ak diskinezi (Perea et al., 2020), ki se kalite ki pi souvan nan demans. Li karakterize pa pèt newòn grav, plak senil, ak tangle neurofibrary (Shiao et al., 2017). Patojèn nan AD(Maladi alzayme a)se miltidimansyonèl ak lyen ak neroenflamasyon. Neuroenflamasyon kondwi pa aktivasyon selil glial yo, ki gen rapò ak ensidan ak devlopman AD.(Maladi alzayme a)(Hanslik ak Ulland, 2020; Linnerbauer ak Rothhammer, 2020). Pandan pwogresyon ak vin pi grav nan neroenflamasyon, mikroglia yo konsidere kòm yon faktè kle.
Microglia yo se selil iminitè prensipal yo nan sistèm nève santral la, ki asosye byen ak yon kaskad nan pwosesis tankou devlopman nan sèvo, antretyen nan anviwònman neral, osi byen ke repons yo nan aksidan ak reparasyon (Perea et al., 2020). Anplis, microglia ka ankouraje nan yon fenotip M1 epi ogmante ekspresyon cytokin pro-enflamatwa lè maladi neuroenflamasyon ki gen rapò tankou AD.(Maladi alzayme a)rive (Tsukahara et al., 2020). Etid yo montre tou ke polarizasyon nan fenotip M1 souvan akonpaye pa maladi metabolik (Li L. et al., 2020), ki mennen nan dezekilib metabolis enèji ak malfonksyònman mitokondriyo (Agrawal and Jha, 2020). Chanjman negatif sa yo sòti nan neurodegeneration, menm AD(Maladi alzayme a).
Acteoside(ACT), yon glikozid phenylethanoid, se prensipalman sòti nanCistanche tubulosa. Ogmante prèv sijere ke ACT posede anpil aktivite famasi, ki gen ladan efè neuroprotective (Wei et al., 2019), anti-enflamatwa (Lai et al., 2019), ak efè antioksidan (Ji et al., 2019). An patikilye, li te pwouve ke ACT ka amelyore aprantisaj ak pwoblèm memwa kòm byen ke upregulate metabolis enèji nan rat streptozotocin-induit (Chen J. et al., 2020). Anplis de sa, li kapab tou anpeche lanmò selil newòn apoptotik ak domaj mitokondriyo nan sourit eksperimantal ansefalomyélit otoiminitè (Li W. et al., 2020). Sepandan, efè ACT sou polarizasyon microglia M1/M2 ak mekanis li yo raman rapòte. Jiska kounye a, mekanis yo tankou reparasyon fonksyon mitokondri ak règleman metabolis selil yo pa klè e yo bezwen plis rechèch syantifik pou klarifye mekanis egzak la.
Objektif rapò sa a se pou mennen ankèt sou efikasite terapetik ACT ak mekanis molekilè ki kache nan ACT sou AD.(Maladi alzayme a). Isit la, yo etabli yon metòd sistematik in silico pou idantifikasyon sib dwòg ki baze sou baz done konsolide yo. Nou plis envestige mekanis posib ACT nan nivo byolojik molekilè pa entegre RNA-sekans (RNA-seq) ak metòd metabolomik ak teknik byoloji molekilè. Konbinezon an nan in silico, in vivo, ak in vitro estrateji tès depistaj sistematik bay yon nouvo pwotokòl pou dekouvri objektivman konpoze milti-sib nan medikaman tradisyonèl Chinwa.
Cistanche tubulosa ka treteMaladi alzayme a
MATERYÈL AK METÒD
Modèl rezo
Kat platfòm sou entènèt yo te konbine pou predi ak dekouvri objektif ACT, sètadi, GeneCards1, apwòch ansanbl resanblans (SEA2), SwissTargetPrediction3, ak PharmMapper4. Tout asosyasyon jèn nan AD(Maladi alzayme a)yo te kolekte poukont yo nan DisGeNET5 ak GeneCards. Apre analiz entèraksyon sib-sib ki fèt pa String database6 , rezo a te plis entegre pa lojisyèl Cytoscape (Vèsyon 3.8.2). Yo te fè analiz anrichisman GO ak KEGG sou baz done DAVID7 pou anote ak min rezo a.
Bèt ak gwoupman modèl
Nan etid sa a, yo te chwazi pwason zèb sovaj (souch AB, 4 mwa) (Nanjing Qi Wu Biotechnology Co., Ltd.). Yo te kenbe anba yon sik limyè / fènwa 14/10-h nan 28oC, swiv metòd anvan an (Li YQ et al., 2020). Tout eksperyans zèb zèb yo te fèt anba sipèvizyon Komite Etik Animal nan University Pharmaceutical Lachin.
Lav zèb zèb yo te divize an sis gwoup epi yo te trete soti nan 3 jou apre fètilizasyon (dpf) a 7 dpf: gwoup kontwòl, gwoup modèl, modèl plis donepezil idroklorid (DPZ, Shanghai Aladdin Bio-Chem Technology Co., Ltd.), ak gwoup. modèl plis ACT (HPLC pite 98 pousan, Baoji Herbest Bio-Tech co, Ltd) gwoup. Gwoup kontwòl la te kenbe nan mwayen an ak 0.2 pousan DMSO ak gwoup modèl la te trete ak 150 uM AlCl3 (pH 5.8). Modèl la plis gwoup DPZ te ko-trete ak AlCl3 ak 8 uM DPZ. Modèl plis gwoup ACT yo te ko-trete ak AlCl3 ak diferan konsantrasyon ACT (200, 100, ak 50 u M).
Analiz Konpòtman
Mouvman lav pwason zèb yo te anrejistre pa yon analizè konpòtman ViewPoint (Zebralab, 2018, ViewPoint Life Sciences Co., Ltd.) nan 28oC. Yon ti tan, paramèt konpòtman yo ak pwosesis rezilta yo te konsistan avèk metòd nou te etabli pi bonè (Li YQ et al., 2020). Isit la, vitès mwayèn (AS), chanjman vitès (AS), pousantaj rekiperasyon diskinezi (DRR), ak efikasite repons (RE, pousan) yo te chwazi pou evalye rekiperasyon diskinezi nan pwason zèb.
Detèminasyon Aktivite Acetylcholinesterase ak Kolin Acetyltransferase
Apre yo fin trete soti nan 3 a 7 dpf, yo te kolekte lav zèb zèb pou mezire aktivite Acetylcholinesterase (AChE) ak Kolin Acetyltransferase (ChAT). Ki baze sou pwotokòl manifakti a, yo te detekte aktivite a pa twous tès imunosorban anzim ki lye (ELISA) (MLBIO Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, Lachin).
Kilti selil ak tretman
Liy selilè BV-2 te achte nan men American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, Etazini). Yo te kiltive nan DMEM (KeyGen Biotech Co, Ltd, Nanjing, Lachin). Mwayen an te konplete ak 10 pousan FBS (Gibco, Grand Island, NY, Etazini),
100 U/ml penisilin, ak 100 mg/ml streptomycin, akonpaye ak 95 pousan lè/5 pousan CO2 nan 37oC. Selil BV-2 yo te enkube ak ACT (50, 25, ak 12.5 uM) oswa ankouraje ak lipopolysaccharide (LPS, 1 ug/ml; Sigma-Aldrich, St Louis, MO, Etazini) pou 24 èdtan. Selil yo te obsève anba mikwoskòp envèse (Nikon ECLIPSE Ti2, Japon).
Selil Viabilite Essay
Selil konte Twous-8 (CCK-8) tès (JianCheng Bioengineering Institute, Nanjing, Lachin) te itilize pou evalye viabilite selil la. Yon ti tan, yo te mezire absorbans nan 450 nm ak yon lektè mikroplak (Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, Etazini).
Esay pwodiksyon oksid nitrique
Yo te detèmine oksid nitrik (NO) lè w mezire nivo nitrit nan sipènatant kilti BV-2 la ak reyaktif Griess. Yon ti tan, yo te transfere mwayen an (100 ul) nan yon nouvo plak 96-byen, yo te ajoute menm volim reyaktif Griess nan chak pi epi li te reyaji pou 15 minit nan fè nwa. Absòpsyon nan 540 nm te detèmine pa yon lektè Microplate.
Nivo Sitokin enflamatwa nan Supernatant
Konsantrasyon TNF-a, IL-1, ak IL-10 nan sipènatan selil BV-2 yo te detèmine pa twous ELISA dapre enstriksyon manifakti a.
Detèminasyon metabolis selilè pa analiz HPLC-Q-TOF-MS
Selil BV-2 yo te simen nan yon plat sis-pou separeman (n=6/gwoup). Apre tretman an, yo te retire mwayen an, epi selil yo te lave twa fwa ak PBS frèt. Lè sa a, yo te imedyatman ekspoze a nitwojèn likid pou siprime metabolis selil yo. Selil yo te rekòlte ak 80 pousan metanol frèt. Pou fasilite presipitasyon pwoteyin, selil yo te kouray toubiyon pou 1 min ak santrifuje nan 13, 000 rpm (15 min, 4oC). Sispansyon selil la te cheche anba yon kouran nitwojèn. Te rezidi a sèk rekonstitye nan 150 ul nan pre-refwadi 25 pousan acetonitrile. Yo nan lòd yo asire estabilite ak presizyon nan analiz la sekans, chak echantiyon selil ak volim egal (10 ul) te konbine kòm echantiyon kontwòl kalite. Pandan deteksyon metabolit, echantiyon sa yo te enjekte apre chak sis echantiyon pou konfime estabilite yo. Yo te enjekte yon aliquot 1-ul pou HPLC-Q-TOF-MS.
Analiz la te fèt sou yon sistèm HPLC Agilent 1290
konekte ak espektwomèt mas Agilent 6530 Quadruppole Time-of-Flight (Q-TOF) (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Etazini). Separasyon an te fèt sou yon kolòn ACQUITY UPLC BEH C18 (2.1 min 100 mm, 1.7 um). Faz mobil la te konpoze de 0.1 pousan asid fòmik-dlo (v / v; A) ak asetonitrile (B).
Yo te fikse to koule a nan {{0}}.4 ml/min ak kondisyon elisyon gradyan optimal sa a: 0 a 2 min, 5 pousan B; 2 a 20 min, 5 a 95 pousan B (mòd ion pozitif); 0 a 2 min, 5 pousan B; 2 a 20 min, 5 a 95 pousan B (mòd ion negatif). Paramèt operasyon yo nan espektromèt mas la te fikse jan sa a: tanperati gaz, 320oC; seche gaz, 10 L / min; nebilizè, 35 psi; VCap, 4,000 V; fragmenter, 120 V.
done yo te fèt ak MetaboAnalyst8. Konbine ak literati a, metabolit diferans yo (VIP > 1, t-tès p <{3}}.05) yo="" te="" idantifye="" sou="" hmdb9.="" finalman,="" analiz="" chemen="" yo="" te="" fèt="" ak="">
Mezi nan potansyèl manbràn mitokondriyo
Yo te detekte potansyèl manbràn mitokondriyo (MMP) lè l sèvi avèk sond fliyoresan JC-1 (Beyotime, Lachin) an akò ak enstriksyon manifakti a. Yon ti tan, selil ki soti nan diferan gwoup yo te rense ak PBS epi enkubate ak solisyon tach JC-1 pou 20 minit nan 37oC. Apre tach, selil yo te lave de fwa lè l sèvi avèk tanpon tach. Lè sa a, siyal fliyoresan yo te detekte pa sikometri koule (BD Accuri C6).
Mezi Mitokondriyo Adenosine 5f-Triphosphate
Adenosine 5/-triphosphate (ATP) konsantrasyon nan mitokondri yo te detekte pa yon ATP Assay Twous (Beyotime, Lachin). Yon ti tan, yo te jete mwayen kilti BV-2 selil ki soti nan diferan gwoup, epi selil yo te omojeneize ak tanpon liz sou glas. Supernatant yo jwenn apre santrifujasyon an (12,000 g,
5 min) yo te itilize pou detèmine konsantrasyon ATP. EnVision Multimode Microplate Reader (PerkinElmer) te detekte luminesans la.
Jesyon nan(Maladi alzayme a)
Mezi Nivo Espès Oksijèn Reyaktif Entraselilè
Espès oksijèn reyaktif (ROS) Test Kit (Beyotime, Lachin) te itilize pou mezire nivo ROS. Selil ki soti nan diferan gwoup yo te enkube ak DCFH-DA (10 uM) pou 20 min nan 37oC. Apre chaj sond, selil yo te lave twa fwa ak DMEM. Lè sa a, siyal fliyoresan yo te detekte pa sikometri koule (BD Accuri C6).
Mikwoskopi elektwonik transmisyon
Selil BV-2 yo te simen nan yon plat sis pui. Yo te retire mwayen an epi yo te ajoute rapidman 1 ml 2.5 pousan glutaraldehyde nan chak pi. Lè sa a, selil yo te rasanble epi yo te fikse ak nouvo 2.5 pousan glutaraldehyde nan 4oC lannwit lan. Apre yo fin fikse, dezidratasyon, ak entegre, yo te obsève selil yo ak yon mikwoskòp elektwonik transmisyon HT7800 (Hitachi, Tokyo, Japon).
RNA-Seq ak analiz done byoenfòmatik
Yo te ekstrè RNA total ki soti nan selil BV{{{{10}}}} lè l sèvi avèk reyaktif Trizol (Vazyme Biotech, Lachin). Tout echantiyon analyse yo te voye bay Majorbio (Shanghai Majorbio Bio-pharm Teknoloji co, Ltd.) pou tès sekans RNA. Done yo te analize sou platfòm sou entènèt Majorbio Cloud Platform10. RSEM11 te itilize pou quantifier abondans jèn. Esansyèlman, ekspresyon diferansyèl Done anvan tout koreksyon yo te opere anba MassHunter Workstation Software vèsyon B.07.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Etazini). Done kri yo te pre-trete pa platfòm XCMS la. Analiz konpozan prensipal yo (PCA) ak analiz diskriminan pasyèl pi piti kare (PLS-DA) analiz nòmalize a te fèt lè l sèvi avèk DESeq2/DEGseq/EdgeR ak valè Q 0.05; DEG ak|log2FC| > 1 ak Q valè 0.05 (DESeq2 oswa EdgeR) / Q valè 0.001 (DEGseq) yo te konsidere yo dwe siyifikativman diferan jèn eksprime. Anplis de sa, yo te fè analiz fonksyonèl-anrichisman ki gen ladan GO ak KEGG pou idantifye ki DEG yo te siyifikativman anrichi an tèm GO ak chemen nan valè p korije Bonferroni 0.05 konpare ak background nan transcriptome antye. Done sekans orijinal yo te soumèt nan baz done NCBI Sequence Read Archive.
Quantitative an tan reyèl Polymerase chèn reyaksyon
Yo te rekòlte RNA total selil BV-2 yo lè l sèvi avèk RNA-easyTM Isolation Reagent (Vazyme Biotech, Lachin), epi yo te fè reyaksyon ranvèse transkripsyon ak FastKing-RT SuperMix (TIANGEN Biotech, Lachin). Reyaksyon yo te fèt dapre pwotokòl manifakti a. cDNA te sibi tès reyaksyon chèn polymerase an tan reyèl (qRT-PCR) ak primè espesifik ak TransStart TOP Green qPCR SuperMix (TransGen Biotech, Lachin). Jadendanfan yo ki nan lis nan Tablo Siplemantè 1 ak -aktin te itilize kòm kontwòl entèn la. Yo te itilize metòd 2-AA CT pou analiz quantitative.
Analiz Western Blot
Selil BV-2 yo te lysed pa RIPA lysis buffer (KeyGen Biotech Co., Ltd., Nanjing, Lachin) ki gen 1 pousan Protease Inhibitor Cocktail (Thermo Fisher) pou jwenn pwoteyin total. Pwoteyin yo te separe pa 10 pousan SDS-PAGE epi yo te transfere nan manbràn NC. Apre bloke ak 5 pousan lèt ekreme/BSA, manbràn yo te enkube ak AMPKa (Proteintech), p-AMPKa (Afnity Biosciences), PGC-1a (Proteintech), NF-kB (Proteintech), p-NF- kB (ABclonal), oswa GAPDH (ABclonal) antikò nan 5 pousan TBST nan 4oC lannwit lan. Manbràn yo te enkube ak yon antikò segondè peroksidaz-konjige (ABclonal) nan tanperati chanm pou 1 èdtan. High-sig ECL Western blotting substrate (Tanon, Lachin), sistèm D 'jèl (Tanon, Lachin) ak lojisyèl ImageJ yo te itilize pou vizyalizasyon ak kantite.
Docking molekilè
Yo te fè analiz molekilè ak lojisyèl Autodock (Vèsyon 4.2). Lojisyèl AutodockTools te obsève afinite ant ACT ak pwoteyin. Estrikti pwoteyin ki genyen twa dimansyon (3D) AMPKa (PDB ID: 5g5j) ak NF-kB (PDB ID: 4q3j) yo te rekipere nan Pwoteyin Done Bank12.
Analiz estatistik
Tout done yo eksprime kòm devyasyon estanda mwayèn ak analize pa GraphPad Prism Software (Vèsyon 8.0.1). Diferans ki genyen ant gwoup yo te analize pa yon sèl-fason analiz de divèjans (ANOVA), ki te swiv pa tès konparezon miltip Tukey a. p < 0.05="" te="" konsidere="" estatistik="">
Sipleman Cistanche pou maladi alzayme a
REZILTA
ACT-AD vize rezo entèraksyon ak prediksyon chemen
Atravè konsolidasyon plizyè baz done, yo te jwenn 253 sib ACT, alòske yo te rasanble yon total 1,697 sib ki gen rapò ak AD. Apre kat rezo sib, yo te absòbe yon total de 70 sib nan rezo entèraksyon sib ACT-AD (Figi 1A). Analiz anrichisman KEGG te enplike ke ACT te kapab gen yon gwo spectre ak efè miltip sib (Figi 1B). Li sigjere tou ke ACT a gen plizyè chemen, pwen sib ak eleman nan AD(Maladi alzayme a)tretman. Klasifye chemen sa yo pou jwenn entèpretasyon egzat mekanism yo. ACT ta ka sitou korelasyon ak transdiksyon siyal, sistèm andokrin lan, sistèm iminitè a, ak kwasans selil ak lanmò pou jwe yon wòl konfwontasyon kont AD.(Maladi alzayme a)(Figi 1C). Li enpòtan pou remake ke vas majorite nan chemen sa yo gen rapò ak reyaksyon enflamasyon. Yo espekile ke aksyon anti-enflamatwa ACT ta ka yon pati inextricable nan wòl konfwontasyon li kont AD.(Maladi alzayme a).
ACT soulaje diskinesi ak amelyore fonksyon sistèm kolinerjik nan AD(Maladi alzayme a)Lav pwason zèb
Pou verifye modèl rezo a, AlCl3-pwovoke AD(Maladi alzayme a)modèl nan lav pwason zèb yo te itilize pou demontre efè ACT. Mouvman lav pwason zèb yo te obsève nan sik limyè/fè nwa, epi yo te anrejistre santye naje yo (Figi 1D). Rezilta yo te montre ke ACT te efektivman ogmante AS ak AS nan pwason zèb, ak efè sinèrjik la ogmante ak ogmantasyon nan dòz (Figi 1E). DRR ak RE dekouvri yon konparezon pi entwisyon nan ACT ak DPZ (Figi 1F). An konsekans, ACT soulaje diskinezi, ki montre efè ki sanble ak DPZ.
Li jeneralman dakò ke sistèm kolinerjik la jwe yon wòl enpòtan nan pwosesis aprantisaj ak memwa. Kidonk, aktivite AChE ak Chat yo te itilize pou revele efè ACT. Ekspozisyon AlCl3 nan pwason zèb te rann ak chanjman kolinerjik nan sèvo (Figi 1G). Li te siyifikatif ke tretman ACT siprime aktivite AChE. Anplis de sa, aktivite ChAT montre yon diminisyon apre tretman ACT. Se poutèt sa, ACT te montre yon enpak pwofon nan AD AlCl3-pwovoke(Maladi alzayme a)lav pwason zèb.
ACT siprime polarizasyon M1 ak ankouraje polarizasyon M2 nan selil BV-2 LPS yo
Pou plis konfime rezo a, yo te etidye efè anti-enflamatwa ACT an vitro lè l sèvi avèk selil microglial BV-2. Apre tretman LPS pou 24 èdtan, viabilite selil BV-2 yo diminye anpil. Erezman, ACT te ogmante viabilite selil BV -2 LPS-induit (Figi 2A). Anplis de sa, yo te obsève mòfoloji selil BV-2 yo. Apre 24 èdtan nan eksitasyon LPS, li te montre ke selil BV-2 te sibi yon eta polarizasyon M1. Chanjman mòfolojik yo te anpeche pa ACT ko-tretman (Figi 2B).
Anplis, rezilta yo te endike ke, kontrèman ak BV-2 selil yo ankouraje pa LPS, BV-2 selil ko-trete ak ACT siyifikativman siprime TNF-a, IL-1, ak NO (Figi 2C) ekspresyon nan supernatant selil. Sa yo se sitokin pro-enflamatwa klasik kòm endikatè polarizasyon M1 microglia. Menm jan ak rezilta ELISA, rezilta qPCR te dekouvri ke TNF-a, nitrique oksid synthase (iNOS),
IL-1, ak ekspresyon mRNA CD86 yo te siyifikativman anpeche pa tretman ACT konpare ak gwoup LPS la (Figi 2D).
Anplis de sa, nou mezire nivo polarizasyon M2 microglia pa ELISA (Figi 2C) ak qPCR (Figi 2E), ak rezilta yo endike ke ACT ogmante siyifikativman nivo ekspresyon makè M2 microglia ki gen rapò ak (IL-10, CD206, TGF-, ak Arg-1). Nan yon mo, rezilta sa yo te montre ke ACT siprime polarizasyon microglia M1 ak ankouraje fenotip M2.
ACT reglemante polarizasyon M1/M2 atravè anpèchman chemen NF-kB.
RNA-seq te fè analiz transcriptomik la pou eksplore mekanis ACT nan selil BV-2 nan yon nivo jeneral. PCA montre ke gwoup kontwòl, LPS, ak ACT yo ka byen distenge (Figi 3A). Li revele 899 jèn ki eksprime diferan (DEG) ant gwoup kontwòl la ak gwoup LPS, ak 49 DEG ant gwoup LPS ak ACT.
gwoup (Figi 3B). Toujou, GO (Figi 3C) ak analiz anrichisman KEGG (Figi 3D) te dekouvri ke efè ACT te enplike nan chemen NF-kB la. Ansanm jèn ki asosye ak chemen NF-kB la te konfime plis, epi LPS te afekte omeyostazi yo. Kòm espere, ACT te afekte ekspresyon yo anpil (Figi 3E).
Chemen NF-kB a se yon chemen klasik pou kontwole pwogresyon enflamasyon an, finalman sa ki lakòz liberasyon faktè pro-enflamatwa. Pou jwenn sipò mekanistik, yo te evalye pwoteyin kle nan chemen NF-kB pa Western blot. Eksitasyon LPS te mennen nan aktivasyon NF-kB, ki asosye ak pwomosyon polarizasyon M1. Konfòm ak analiz RNA-seq, ACT anpeche fosforilasyon NF-kB ki te ankouraje LPS (Figi 3F). Se poutèt sa, ACT ka soulaje polarizasyon M1 LPS-induit atravè chemen NF-kB nan selil BV-2.
ACT Enfimite Byosentèz Arginine osi byen ke Pantothenate ak Biosentèz CoA
Rezo prediksyon ACT revele ke li te gen rapò ak arjinin (Arg) ak metabolis prolin (Figi 1B). RNA-seq te demontre ke chemen yo afekte pa ACT te gen ladan tou Arg byosentèz osi byen ke pantothenate ak CoA byosentèz (Figi 3D). Li te sijere ke maladi metabolis BV-2 selil ki pwovoke pa eksitasyon LPS asosye ak polarizasyon M1 (Orihuela et al., 2016). Kidonk,
metabolom selil ki pa sible HPLC-Q-TOF-MS te itilize pou idantifye efè ACT sou metabolis selil la. PCA ak PLS-DA (Figi 3G) montre ke gwoup kontwòl, LPS, ak ACT yo ka byen distenge dapre metabolit intraselilè. Nivo divès metabolit nan selil BV-2 ki te pwovoke LPS yo te chanje apre tretman ACT (Figi 3H). Konpare ak gwoup kontwòl la, te gen 11 metabolit ki chanje anpil nan gwoup LPS (Tablo Siplemantè 2), tandiske 14 metabolit yo te chanje klèman apre tretman ACT (Tablo Siplemantè 3), ki enplike 11 chemen metabolik (Figi 3I). Efè ACT sitou fèt nan reglemante metabolis asid amine, metabolis nukleotid, metabolis enèji, ak metabolis kofaktè ak vitamin. Enteresan, chemen metabolik yo te jwenn nan metabolom yo te konsistan avèk prediksyon rezo ak RNA-seq, ki gen ladan Arg byosentèz osi byen ke pantothenate ak CoA byosentèz. Pi wo a te montre ke ACT te kapab kontwole Arg byosentèz osi byen ke pantothenate ak CoA byosentèz nan selil BV- 2 ki ankouraje LPS yo.
Cistanche ekstrè anti-Maladi alzayme a
Pls klike isit la pou pati 2
