Pati IV etid sou modèl 5-Fu/5-Fu+L-OHP-pwovoke repwesyon mwèl zo nan sourit
Oct 09, 2024
Kounye a, metòd yo souvan itilize pou konstwi modèl bèt nan repwesyon mwèl zo yo enkli modèl radyasyon [1,2], modèl piki siklofosfamid intraperitoneal [3-5], 5-fluorouracil (5-Fluorouracil, { {5}}FU) modèl piki intraperitoneal [6,7], radyasyon konbine avèkdwòg chimyoterapimodèl konpoze [8,9], modèl anti-epileptik carbamazepine gavage [10], elatriye. Diferan metòd modèl lakòz diferan mekanis nan repwesyon mwèl zo, ak efè sou divès selil san ak degre yo diferan; diferan dwòg chimyoterapi, akòz mekanis diferan yo nan aksyon, montre tou sèten diferans nan efè yo sou ematopoyez mwèl zo. Se poutèt sa, yon modèl bèt ideyal nan repwesyon mwèl zo gen gwo siyifikasyon pou etidye efè dwòg chimyoterapi sou ematopoyez mwèl zo.
Nan pratik klinik,chimyoterapi adjuvant pou kansè kolorektalsitou adopte rejim 5-FU ak 5-Fu konbine avèk rejim oxaliplatin (oxaliplatin, L-OHP). Te gen etid enpòtan sou itilizasyon 5-Fu pou kont li pou konstwi yon modèl bèt nan repwesyon mwèl zo. Sepandan, sijè ki abòde lan 5-Fu itilize relativman laj. Rapò literati yo enkli 110 mg / kg, piki intraperitoneal (ip) sou d1 ak d5 pou modèl [7, 150 mg / kg, ip, d1 pou modèl 16, 11], 200 mg / kg, ip, d1 pou modèl [{{ 15}}], ak 250 mg/kg, ip, d1 pou modèl [16]. Sepandan, pa gen okenn rapò sou itilizasyon 5-Fu konbine avèk L-OHP pou konstwi yon modèl bèt nan repwesyon mwèl zo. Yu Linghong et al. [17] te itilize 5-Fu konbine avèk L-OHP pou etabli yon modèl bèt nan blesi fwa. An referans a metòd administrasyon an ak dòz nan literati a, ekip la te fè yon eksplorasyon preliminè nan dòz la nan 5-Fu konbine avèk L-OHP pou etabli yon modèl bèt nan zo.repwesyon mwèl, epi konpare metòd modèl 5-Fu 200 mg/kg, ip, d1 ak metòd modèl 5-Fu 187.5 mg/kg + L-OHP 9 mg/kg, ip, d1. Rezilta yo te montre ke dòz la nan de modèl sa yo te twò gwo. Se poutèt sa, objektif etid sa a se kontinye eksplore dòz pi bon nan 5-Fu-pwovoke modèl bèt repwesyon mwèl zo a ak dòz la nan 5-Fu konbine avèk modèl L-OHP, yon fason pou bay modèl bèt ki pi ideyal pou lapwochen etap nan etidye efikasite aepimekanis nan preskripsyon Qitu Erzhi.
Sèvis Sipò Wecistanche
Imèl:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Materyèl ak metòd
1 Materyèl eksperimantal
1.1 Bèt eksperimantal
100 espesifik patojèn-gratis (SPF) BALB/c sourit gason, ki peze 20g ± 2g, yo te achte nan men SBEF (Beijing) Biotechnology co, Ltd ak loje nan kaj nan Sant la Animal eksperimantal nan Xiyuan Lopital, Lachin Akademi Medikal Chinwa. Syans (sètifika kalifikasyon: SYXK (Beijing) No. 2015-0011). Tout sourit yo te manje adaptive pou 1 semèn, epi yo te gen aksè gratis nan dlo ak manje pandan peryòd la manje. Kondisyon manje: tanperati andedan kay la 20-26 degre, imidite relatif 40% ~ 60%, tan limyè / fè nwa 12 èdtan / 12 èdtan. Eksperyans sa a estrikteman konfòme yo ak règleman ki enpòtan nan Komite Etik Jesyon Animal Experimental nan Lopital Xiyuan, Lachin Akademi Syans Medikal Chinwa ak konfòme ak estanda etik bèt yo.
1.2 Pwensipal dwòg eksperimantal ak reyaktif
5-Fu (piki fluorouracil) Oxaliplatin pou piki
0.01M tanpon fosfat (tanpon PBS) Diluant pou analiz selil san (MEK-640)
Solisyon netwayaj pou analiz selil san (MEK-680) Ajan emolitik pou analiz selil san (MEK-680) Solisyon netwayaj pou analizè selil san
Harris ematoksilin tach 0.5% tach eozin
Mwayen poze sele jansiv net
Kalite asid mineral tisi echantiyon dekalsifikasyon solisyon
1.3 Enstriman prensipal ak ekipman
Kontwa otomatik selil san (MEK6318) Tib koleksyon san kapilè (20 μL)
1000μL pwent pipèt
Tissue-TEK VIP6 dezidratasyon tisi byolojik Tissu-TEK TEC tisi byolojik entegre machin Leica RM2235 tranch tisi
Leica HI1210 tranch picker Leica HI1220 tranch machin boulanjri
Leica ST5020 otomatik tachye Leica CV5030 otomatik coverslipper Olympus Bx53 mikwoskòp
Path QC kontwòl kalite patoloji ak sistèm jesyon done
Lòt moun: pipèt, echèl elektwonik òdinè, sizo chirijikal, pensèt, 75% alkòl, twal gaz medikal, boul koton esteril, sereng, elatriye.
1.4 Preparasyon medikaman chimyoterapi
(1) Rejim Fu ki gen yon sèl dwòg 5-
Fonn {{0}}Fu ({0.25 g/10 ml) nan 40 ml 0.9% NaCl solisyon pou prepare yon solisyon ak yon konsantrasyon 5 mg/ml pou itilize sibstiti.
(2) 5-Fu konbine avèk rejim L-OHP
Fonn {{0}}Fu ({0.25 g/1{0 ml) nan 40 ml 0.9% NaCl solisyon pou prepare yon solisyon ak yon konsantrasyon 5 mg/ml pou sibstiti. itilize. Fonn 1 tib L-OHP (50 mg) nan 5 ml solisyon glikoz 5%, epi kontinye delye ak solisyon glikoz 5% nan yon solisyon 0.5 mg/ml pou itilize.
Tablo 4-1 Modèl rejim medikaman
Dapre rejim dòz ki anwo a, tout sourit yo te peze ak dòz endividyèlman dapre pwa kò. Nan gwoup dwòg doub, entèval tan ant 5-Fu ak L-OHP administrasyon an te plis pase 5 èdtan [17].
(2) Endikatè evalyasyon modèl repwesyon mwèl zo
Endikatè evalyasyon yo nan modèl repwesyon mwèl zo yo enkli diminye kantite selil periferik [18-22], oswa konte selil periferik konbine avèk selil nwayo nan mwèl zo [9.23-25]. Etid sa a te itilize dezyèm metòd pou evalye efè modèl.
2.2 Endikatè obsèvasyon ak materyèl
2.2.1 Kondisyon jeneral sourit yo
Pandan eksperyans la, yo te obsève rejim alimantè, defeksyon, aktivite, kondisyon, eta mantal ak kondisyon cheve nan chak gwoup sourit chak jou. Si sourit yo te mouri, yo te anrejistre nan tan.
2.2.2 Chanjman nan pwa sourit nan chak gwoup
Peze epi anrejistre pwa chak sourit anvan dòz la nan jou modèl la (d0), epi peze epi anrejistre pwa chak sourit chak lòt jou apre modèl la.
2.2.3 Chanjman nan konte selil periferik yo
Ranje sourit la ak yon fixateur sourit, ekspoze ke a, epi tranpe ke a nan dlo cho 45-50 degre. Apre siye ke a, koupe 1-2 mm pwent ke a. Byen vit ak dousman kous ke a soti nan baz la nan pwent la 2-3 fwa. Sèvi ak yon tib koleksyon san kapilè pou kolekte 20μL san, delye li nan diluan selil san prepare, epi fè analiz selil san sou machin nan. Kolekte san nan yon lè fiks chak jou; se yon sèl moun ki fè tout koleksyon san. Endikatè deteksyon yo enkli: globil blan, globil wouj, emoglobin ak plakèt.
2.2.4 Chanjman nan konte selil nwayo mwèl zo yo
Yon jou anvan pran echantiyon, sèvi ak yon mikropipèt pou pran 1000 μL solisyon PBS epi delye li nan yon tib EP 2 ml, epi estoke li nan yon frijidè 4 degre pou itilize pita. Sou d6, 8 sourit yo te chwazi owaza nan chak gwoup epi yo te touye pa dislokasyon nan matris. Anba yon ban pwòp esteril, yo te itilize sizo chirijikal pou koupe fouri tou pre femur la, retire femoral dwat la, epi vlope li ak twal gaz medikal pou retire tisi mou rezidyèl la. Sèvi ak yon zegwi sereng 1 ml (zegwi nimewo 4) pou ekstrè solisyon PBS la nan tib EP a, fè egzèsis nan yon bout femoral la pou lave mwèl zo a nan tib EP a; repete kole ak aspire plizyè fwa pou wete selil mwèl zo yo jiskaske femoral la vin blan. Sispansyon selil mwèl zo ki te prepare a te pase nan yon 200-privye nilon may. Sèvi ak yon kontwa selil san otomatik pou detekte selil nwayo mwèl zo yo. Sou d13, sourit ki rete yo te touye menm jan an epi yo te kolekte espesimèn.
2.2.5 Tach HE patoloji mwèl zo
Sou d6, apre yo fin touye sourit yo nan chak gwoup pa dislokasyon nan matris, sizo chirijikal yo te itilize pou koupe fouri a tou pre femur la anba yon ban pwòp esteril, retire femur gòch la, fè blòk sir, tranch ak tach HE.
(1) Preparasyon blòk sir ak etap seksyon
① Echantiyon: Ranje tisi a ak 4% paraformaldeyid pou plis pase 24 èdtan, tranpe nan solisyon dekalsifikasyon pou 24-48 èdtan, pike tisi a ak yon peny, koupe epi koupe tisi a apre li adousi, epi mete l nan blòk la sir. bwat;
② Dezidratasyon: Yo mete tisi a sekans nan 70% alkòl (2 èdtan), 80% alkòl (1.5 èdtan), 95% alkòl I (1.5 èdtan), 95% alkòl II (1.5 èdtan). èdtan), 100% alkòl I (0.5 èdtan), ak 100% alkòl II (0.5 èdtan), ak dezidrate nan yon fason gradyan.
③ Transparans: Tisi a se sekans mete nan etanòl anidrid ak solisyon xylene (rapò volim 1:1), xylene I, ak xylene II pou 40 minit chak.
④ Imèsyon sir: Tisi a se sekans mete nan yon melanj de xylèn ak parafin (1:1), parafin I, ak parafin II pou 20 minit chak. Se plonje sir te pote soti nan yon aparèy tanperati konstan nan 58 degre kenbe parafine a fonn.
⑤ Embedding: Apre w fin make blòk tisi a, prechofe pensèt yo, enjekte parafin ki fonn nan mwazi an, epi mete blòk tisi a epi tann parafine a solidifye.
⑥ Tranch: Apre entegre, mete blòk sir tisi a sou tranche a, ajiste ang tranche a, epi koupe blòk tisi a an tranch ak yon epesè 4-5 μm.
⑦ Mete soude: Gaye tranch parafin yo nan dlo 42 degre, ranmase tranch yo youn pa youn ak yon glise, epi kole yo sou glise a.
⑧ Kwit: Mete glise kole a nan yon bwat tanperati konstan nan apeprè 70 degre epi kwit pou 1.5 èdtan.
(2) Etap tach HE:
① Dewax pa tranpe nan xylene I ak II pou 15 minit chak.
② Tranpe nan 100% alkòl I ak II pou 5 min.
③ Tranpe nan 95%, 85%, ak 75% alkòl gradyan pou 3 minit, epi rense l avèk dlo distile.
④ Tach ematoksilin pou 1-3 minit, epi rense l avèk dlo distile.
⑤ Diferansasyon alkòl asid idroklorik pou 2-3 s, lave ak dlo distile.
⑥ Plonje nan dlo amonyak pou vire ble pou 1 minit, lave ak dlo distile.
⑦ Eosin tach pou 5 min.
⑧ Plonje nan 75%, 85%, 95% alkòl gradyan pou 2 min.
⑨ Plonje nan alkòl 100% I, IⅡ pou 3 minit chak.
⑩ Plonje nan xylene I, Ⅱ pou 5 minit chak.
⑪ Bouche ak jansiv net.
2.3 Metòd estatistik
Yo te itilize SPSS26.0 pou fè analiz estatistik sou done yo. Done mezi yo te eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda (x±s). Premyèman, yo te teste done yo pou nòmalite ak omojènite nan divèjans: Pou done nòmalman distribye, yo te itilize yon sèl-fason ANOVA pou konparezon ant plizyè gwoup: lè divèjans la te egal, yo te itilize tès LSD pou konparezon par; si divèjans la pa t egal, yo te itilize tès t2 Tamhane a pou konparezon par; si li pa t 'konfòme ak distribisyon nòmal la, yo te itilize yon tès ki pa parametrik. P<0.05 was considered statistically significant.
