Pati 1: Acteoside Siprime Osteoclastogenesis RANKL-medyatè pa anpeche endiksyon C-Fos ak chemen NF-KB ak diminye pwodiksyon ROS.
Mar 05, 2022
Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com
Seung-Youp Lee1,2., Keun-Soo Lee3.¤, Sea Hyun Yi2., Sung-Ho Kook, Jeong-Chae Lee22,3*
Résumé
Anpil etid te rapòte ke sitokin enflamatwa yo se medyatè enpòtan pou osteoclastogenesis, kidonk sa ki lakòz twòp resorption zo ak osteyopowoz la.Acteoside soti nan zèb cistanche, prensipal konpoze aktif nan Rehmannia glutinosa, ki se lajman ki itilize nan medikaman tradisyonèl Oriental, gen potansyèl anti-enflamatwa ak antioksidan. Nan etid sa a, nou te jwenn saacteosideansibleman anpeche diferansyasyon osteoclast ak fòmasyon soti nan makrofaj mwèl zo (BMMs) ak makrofaj RAW264.7 ankouraje pa activator reseptè a nan ligand nikleyè faktè-kappaB (NF-kB) (RANKL).Acteosidepretreatment tou anpeche resorption zo pa osteoclasts matirite nan yon fason ki depann de dòz. Acteoside (10 mM) atténue aktivasyon RANKL-ankouraje nan p38 kinaz, ekstraselilè kinaz siyal-reglemante, ak c-Jun N-tèminal kinaz, epi tou li siprime deklanchman NF-kB pa anpeche fosforilasyon nan p65 subunit la ak inhibiteur kBa a. Anplis de sa, RANKL-medyatè ogmantasyon nan ekspresyon de c-Fos ak faktè nikleyè nan selil T aktive, sitoplasmik 1 (NFATc1), ak nan pwodiksyon an nan faktè necrosis timè-a, interleukin (IL)-1b , ak IL-6 te aparamman anpeche pa pretreatman akteozid. Pli lwen, oralacteosideredwi pèt zo ovariectomy-induit ak pwodiksyon sitokin enflamatwa pou kontwole nivo yo. Done nou yo sijere ke acteoside inibit diferansyasyon osteoclast ak spirasyon nan precurseur osteoclastic pa siprime aktivasyon RANKL-induit nan mitogen-aktive pwoteyin kinaz ak faktè transkripsyon tankou NF-kB, c-Fos, ak NFATc1. Ansanm, rezilta sa yo sijere ke acteoside ka aji kòm yon ajan anti-resorptive pou diminye pèt zo pa bloke aktivasyon osteoclast.
Entwodiksyon
Zo yo toujou ap remodele pa aktivite balanse osteoclast ak osteoblast [1]. Osteoclasts soti nan selil précurseurs ematopoyetik nan liy monosit / makrofaj la, pandan y ap osteoblast yo nan liyaj mesenchymal la [2]. Aktivasyon osteoclast nòmal oswa osteoblastogenesis redwi ka deranje omeyostazi zo, evantyèlman lakòz maladi tankou osteyopowoz, atrit, ak kansè nan zo [3,4]. Osteyopowoz la se yon maladi zo komen ki mennen nan yon risk ogmante nan ka zo kase. Fòm ki pi komen nan osteyopowoz la ki te koze pa defisi estwojèn nan fi menopoz. Medikaman tankou kortikoterapi ak anti-epileptik ka lakòz tou yon move balans ant resorption zo ak fòmasyon, ki ka lakòz maladi osteyopowoz la [5].
Anpil inibitè anti-resorptive ki gen ladan bisfosfonat, kalsitonin, estwojèn, ak modulateur reseptè estwojèn selektif yo te itilize pou trete maladi osteyopowoz la. Inibitè sa yo kenbe mas zo pa anpeche fonksyon osteoclast [6]. Terapi ranplasman estwojèn se tretman ki pi popilè pou anpeche ak trete osteyopowoz postmenopoz. Sepandan, terapi ranplasman estwojèn alontèm ka ogmante risk pou kansè andometri ak tete. Se poutèt sa, anpil envestigatè te konsantre efò yo sou devlope yon nouvo ajan anti-resorptive ki pa gen efè segondè [7-10]. Paske osteoclasts fonksyone nan resorption zo, espesyalman anpeche osteoclasts yo te konsidere kòm sib prensipal la nan anpil etid.
Osteoclasts yo se selil jeyan miltinukleye ki fòme pa zansèt mononikleyè nan fanmi monosit/makrofaj atravè pwopagasyon sekans, diferansyasyon, ak fizyon selil précurseurs ematopoyetik [11]. Macrophage koloni-stimulan faktè (M-CSF) ak activator reseptè nan faktè nikleyè (NF)-kB (RANK) ligand (RANKL) se faktè esansyèl pou diferansyasyon osteoclast [12]. Anplis de sa, plizyè sitokin enflamatwa, tankou faktè necrosis timè (TNF) ak interleukin (IL) -1b, kontribye nan osteoclastogenesis pa modulation endiksyon an nan RANKL, osteoprotegerin, ak M-CSF [7,13]. Liaison RANKL ak sifas selilè RANK reseptè rezilta yo nan konplèks RANKL/RANK/TNFR asosye faktè (TRAF) ki sekans aktive NF-kB ak mitogen-aktive pwoteyin kinaz (MAPKs), ki gen ladan c-Jun N-terminal kinase (JNK), p38. kinaz, ak kinaz ki gen rapò ak siyal ekstraselilè (ERK) [14]. Aktivasyon sa a jwe yon wòl kle nan medyasyon diferansyasyon osteoclast, aktivasyon, ak siviv. RANKL tou aktive ekspresyon faktè transkripsyon tankou yon faktè nikleyè nan selil T aktive, cytoplasmic 1 (NFATc1), ak c-Fos, ki esansyèl pou devlopman osteoclast [7,9]. Se poutèt sa, siyal RANKL konsidere kòm sib prensipal la nan ajan anti-resorptive ki siprime aktivasyon osteoclast ak pèt zo.
Acteosidese prensipal konpoze aktif Rehmannia glutinosa, ki itilize lajman nan medikaman tradisyonèl Oriental [15,16]. Acteoside se yon antioksidan fò epi li gen aktivite anti-epatotoksik, anti-enflamatwa, ak anti-nosiseptif [17-20]. Nou te deja jwenn ke acteoside diminye aktivite tirozinaz ak biosentèz melanin pa reglemante siyal ERK [21], pwoteje kont espès oksijèn reyaktif (ROS)-medyatè domaj gingival [22], ak siprime domaj selil mikotoksin-medyatè [23]. Efè sa yo gen rapò sere ak kapasite nukleozid yo retire ROS ak kontwole siyal MAPK-medyatè. An patikilye, ROS yo sijere pou medyatè RANKL-induit siyal chemen ak evènman selilè nan osteoclasts. Pretretman ak antioksidan anpeche aktivasyon NF-kB, ERK, ak IkBa RANKL-induit, kidonk siprime osteoclastogenesis [24]. Konklizyon sa yo sigjere ke, anplis aktivite anti-enflamatwa, aktivite antioksidan enpòtan anpil pou yon ajan anti-resorptive, kidonk acteoside ka siprime osteoclastogenesis RANKL-induit.
Nan etid la prezan, nou te eksplore si acteoside gen yon efè terapetik sou pèt zo. Nou egzamine efè acteoside sou diferansyasyon osteoclast ak resorption zo ak mekanis selilè ki gen rapò lè l sèvi avèk sistèm eksperimantal in vitro ak in vivo.
Cistanche acteoside siprime osteoclastogenesis RANKL-induit
Materyèl ak Metòd
Deklarasyon Etik
Swen ak itilizasyon bèt yo te apwouve pa Komite Inivèsite Nasyonal Chonbuk sou Etik nan Swen ak Itilizasyon Bèt Laboratwa (Pèmi No. CBU 2010-0007). Tout eksperyans nan etid sa a te fèt dapre direktiv Komite Swen ak Itilizasyon Animal nan Inivèsite a.
Sourit, pwodui chimik, ak machandiz laboratwa
Sourit ICR fi ki gen kat semèn te achte nan men Orient Bio Inc. (Seoul, Kore di) epi yo te loje nan 2261uC ak 5565 pousan imidite sou yon sik limyè / fènwa 12 èdtan ak aksè gratis nan manje ak dlo. Akteoside (3,4-dihydroxy-bphenethyl-Oa-rhamnopyranosyl-(1R3)-4-O-caffeoyl-bD-glucopyranoside; C29H36O15) (Fig. S1) te izole nan fèy Rehmannia glutinosa. Acteoside te fonn nan saline tampon fosfat (PBS) anvan ou itilize. RANKL, TNF-a, IL-1b, IL-6, ak M-CSF yo te achte nan men R & D Systems (Minneapolis, MN, USA). Antikò espesifik pou c-Fos, p65, p-p65, p-ERK, ERK, JNK, p-JNK, NFATc1, IkBa, p-IkBa, ak b-aktin yo te jwenn nan Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). ). Yo te achte antikò pou p-p38 ak p38 nan Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA). Kalsyòm Assay ak Osteocalcin (OC) EIA Twous yo te achte nan men BioAssay Systems (Hayward, CA, USA) ak teknoloji byomedikal (Stoughton, MA, USA), respektivman, pou detèmine paramèt byochimik serom. Twous tès fosfataz asid tartrate ki reziste (TRAP) sourit (Sistèm Immunodiagnostic, Scottsdale, AZ, USA) te itilize tou pou mezire nivo TRAP5b nan serom. Sòf si yo espesifye otreman, pwodwi chimik adisyonèl yo te jwenn nan Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA), ak machandiz laboratwa yo te soti nan SPL Life Sciences (Pochun, Kore di sid).
Kilti selil yo
Selil mwèl zo yo te jwenn nan tibya ak femora sourit ICR fi ki gen 6 semèn dapre metòd ki te dekri deja [25]. Yo te enkube sispansyon mwèl zo a nan yon plat kilti 100-mm nan prezans 50 ng/ml M-CSF. Apre 3 jou, selil aderan yo te itilize kòm makrofaj mwèl zo (BMM) pou pwovoke diferansyasyon osteoklastik. Gen kèk selil mwèl zo yo te tou enkube pou 48 èdtan san M-CSF, ak selil aderan yo te kiltive nan yon medyòm diferansye osteoblast, jan sa dekri yon lòt kote [25]. Selil macrophage RAW264.7 yo te kiltive nan mwayen Dulbecco a modifye Eagle's (DMEM) complétée ak 10 pousan serom fetal bovine (FBS), 2 mM L-glutamin, ak antibyotik. Selil sa yo te itilize kòm yon liy selil kontrepati pou BMM yo pou eksplore efè acteoside sou osteoclastogenesis.
Diferansyasyon osteyoklastik ak tach TRAP
BMM yo te pretrete ak divès kalite konsantrasyon (0-50 mM) nanacteosidepou 2 h anvan eksitan ak 100 ng/ml RANKL. Medya kilti yo te ranplase ak medya fre nan jou 2 ak 5. Apre 7 jou nan enkubasyon, kilti yo te fiks nan 4 pousan paraformaldehyde tampon PBS ak tache ak TRAP lè l sèvi avèk yon twous Sigma Aldrich dapre enstriksyon manifakti a. Selil TRAP-pozitif yo te konte lè l sèvi avèk mikwoskòp optik, epi selil ki gen 3 oswa plis nwayo yo te konsidere kòm osteoklast. Selil RAW 264.7 yo te tou ekspoze a 100 ng / ml RANKL apre pretreatman ak acteoside pou 2 èdtan, epi apre 7 jou nan enkubasyon, selil yo te trete pou tach TRAP.
Mezi nan viabilite selil
Vitabilite selil yo te detèmine lè l sèvi avèk reyaktif tetrazolyum sèl (WST) -8 idrosolubl. An brèf, BMMs oswa RAW264.7 selil kiltive nan yon mwayen kwasans ki gen 10 pousan FBS ak antibyotik yo te trete ak 10 mM acteoside oswa yon konpoze fenolik tankou quercetin, luteolin, apigenin, oswa epigallocatechin -3-gallate (EGCG). Reyaktif WST-8 te ajoute nan kilti yo apre 48 èdtan nan enkubasyon. Apre enkubasyon pou 4 èdtan anplis, yo te mezire absorpsyon espesifik WST-8- nan 450 nm lè l sèvi avèk yon lektè mikroplak (Packard Instrument Co., Downers Grove, IL, USA).
Esè Resorption Zo
BMM yo (16105 selil/ml) yo te sispann nan a-MEM ki gen 50 ng/ml M-CSF ak 100 ng/ml RANKL, Lè sa a, divize sou yon 24-plak byen kouvwi ak nanokristal fosfat kalsyòm (OAAS{{6} }; Osteoclast Aktivite Assay Substrate, Oscotec Inc., Choongnam, Kore di Sid) nan yon dansite 26104 selil/cm2 avèk ak san acteoside. Apre enkubasyon pou 7 jou, selil yo te retire nan plak yo ak 5 pousan ipoklorit sodyòm, epi yo te obsève fòmasyon twou anba yon mikwoskòp optik. Yo te mezire zòn nan resorbed tou pa yon analizè imaj ak eksprime kòm yon pousantaj nan valè kontwòl la.
Analiz Western Blot
Lysates pwoteyin antye yo te prepare nan yon tanpon liz jan sa dekri yon lòt kote [26]. Pwoteyin cytosolic ak nikleyè yo te prepare jan sa dekri deja [25]. Kantite egal ekstrè pwoteyin yo te separe pa 12-15 pousan SDS-PAGE ak efase sou manbràn polyvinyl difluoride. Blots yo te sonde ak antikò prensipal lannwit lan nan 4uC anvan enkubasyon ak antikò segondè nan bloke tanpon pou 1 èdtan. Tach yo te
devlope ak chemiluminescence amelyore (Amersham Pharmacia Biotech Inc., Buckinghamshire, UK) ak ekspoze a fim radyografi (Eastman-Kodak Co., Rochester, NY, USA).
Esè aktivite MAPK
Selil yo te pretrete akacteosidepou 2 h epi answit ankouraje ak RANKL pou yon lòt -30 min. Aktivite MAPK yo te detèmine lè l sèvi avèk twous tès imunometrik, tankou twous tès kinaz p-p38 (Assay Designs, Inc., MI, USA), twous tès p-ERK anzim (Assay Designs), ak twous ELISA sandwich p-SAPK/JNK. (Cell Signaling Technology, MA, USA). Tout pwosedi yo te swiv enstriksyon manifakti a, epi yo te mezire absorbans pa yon lektè microplate.
Elèktroforetik Mobilite Chanjman Esè (EMSA)
Reyaksyon ADN-pwoteyin obligatwa yo te fèt pou 30 minit nan tanperati chanm, ak 10-15 mg pwoteyin nan 20 ml tanpon ki gen 1 mg/ml BSA, 0.5 mg/ml poly (dI-dC), 5 pousan gliserin. , 1 mM DTT, 1 mM PMSF, 10 mM Tris-Cl (pH 7.5), 50 mM NaCl, 30,000 cpm [a-32P] oligonukleotid ki make dCTP, ak fragman Klenow. nan ADN polymerase. Echantiyon yo te separe sou 6 pousan jèl poliakrilamid, ki te cheche ak ekspoze a fim radyografi (Eastman Kodak Co.) pou 12-24 èdtan nan 270uC. Sekans premye oligonukleotid espesifik pou NF-kB yo te 59-AAG GCC TGT GCT CCG GGA CTT TCC CTG GCC TGG A-39 ak 39-GGA CAC GAG GCC CTG AAA GGG ACC GGA CCT GGA A -59.
NF-kB Luciferase Assay
RAW264.7 macrophages nan 24-plak byen yo te transfekte ak 0.8 mg kB-luciferase repòtè vektè lè l sèvi avèk 2 ml Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) dapre enstriksyon manifakti a. Nan 24 èdtan apre transfeksyon, selil yo te ankouraje ak RANKL nan prezans ak absans acteoside pou 24 èdtan. Selil yo te resuspend nan 100 ml repòtè lysis tanpon
(Promega, Madison, WI, USA). Kantite egal echantiyon pwoteyin yo te mete nan 96-mikwoplak byen epi melanje ak substrat luciferase. Yo te mezire luminesans lè l sèvi avèk yon luminomèt mikroplak (MicroLumat Plus LB 964, Berthold Technologies, Bad Wildbad, Almay). Nan eksperyans sa a, yo te itilize yon peptide inibitè NF-kB pèmeyab (BIOMOL, Butler Pike, PA, USA) kòm yon inibitè kB pozitif.
Mezi Cytokines
BMM oswa selil RAW264.7 yo te ankouraje ak RANKL nan prezans akteozid nan 24-plak kilti byen yo. Apre 48 èdtan nan enkubasyon, sipènatan kilti yo te kolekte epi evalye pa ELISA lè l sèvi avèk TNF-a-, IL-1b- ak IL-6-OptEIATM twous espesifik dapre enstriksyon manifakti a.
Reyaksyon chèn polymerase transkripsyon ranvèse an tan reyèl (RT-PCR)
Ekspresyon mRNA makè osteoklastik yo, tankou c-Fos, NFATc1, ak TNF-a, te detèmine pa RT-PCR an tan reyèl. An brèf, total RNA te extrait de macrophages ak réactif Trizol selon enstriksyon fabricant a (Invitrogen). cDNA te sentèz ak 1 mg RNA total lè l sèvi avèk SuperScript Reverse Transcriptase II ak primè (Invitrogen). Pouvwa SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) te itilize pou detekte akimilasyon pwodwi PCR pandan monte bisiklèt ak sistèm deteksyon sekans ABI 7500 (Applied Biosystems). Apre denaturasyon nan 95uC pou 10 min, PCR te
fè lè l sèvi avèk karant 3-sik etap denaturasyon nan 95uC pou 15 sec, annealing nan 60uC pou 1 segond, ak ekstansyon nan 72uC pou 30sec. Tout reyaksyon PCR yo te fèt omwen an triple, ak nivo ekspresyon yo te nòmalize nan jèn HPRT nan menaj nan menm reyaksyon an. Etid sa a te itilize menm sekans Jadendanfan yo dekri yon lòt kote [7].
Mezi ROS Entraselilè
Yon solisyon stock nan 29,79-dichlorodihydrofluorescein-diacetate (DCFH-DA) (50 mM; Calbiochem, Darmstadt, Almay) te prepare nan DMSO epi estoke nan 220uC nan fè nwa a. An brèf, yo te kiltive BMMs (106 selil/ml nan 6-plak byen) ak 50 ng/ml M-CSF pou 24 èdtan epi yo te trete ak divès konsantrasyon (0-10 mM) nanacteoside2 h anvan eksitasyon ak 100 ng/ml RANKL. Apre 1 èdtan nan ko-enkubasyon, selil sa yo te imedyatman enkubate ak 25 mM DCFH-DA pou 30 min. Fluoresans vèt 29,79-diklorofluorescein (DCF) te anrejistre nan 515 nm (FL 1) lè l sèvi avèk yon sistèm FACS VantageH (Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA), ak 10,000 evènman yo te konte pou chak echantiyon.
Endiksyon nan Osteyopowoz Ovariectomy-Enduced
Yo te itilize sourit ICR fi (6 semèn) pou etid sa a. Sourit yo te resevwa yon operasyon simulacre (Sham, n =10) oswa chirijikal ovariectomized (OVX, n=20) anba anestezi. Yon semèn apre operasyon, sourit OVX yo te owaza divize an 2 gwoup 10 sourit chak: bilateral OVX ak bilateral OVX konplete ak 200 ml.
PBS ki gen 1 mM acteoside oral (gwoup AC). Akteozid oral te administre yon fwa chak 3 jou pandan 8 semèn apre operasyon an, epi
yo te administre menm kantite PBS nan gwoup Sham ak OVX yo. Apre 1 jou nan dènye administrasyon an, sourit yo te sakrifye epi yo te analize paramèt byochimik nan serom ak 3-dimansyon estrikti zo yo.
Detèminasyon paramèt byochimik serom
Echantiyon san yo te kolekte atravè pike kadyak epi yo te kolekte serom pa santrifujasyon. Echantiyon serom yo te estoke nan 280uC pou analiz de paramèt byochimik. Yo te estime nivo serik IL-1b ak IL-6 lè w itilize twous ELISA jan sa dekri pi wo a, pandan y ap detèmine aktivite fosfataz alkalin (ALP) lè l sèvi avèk yon tès kolorimetri byochimik ki mezire kantite p. -nitrofenol ki pwodui nan yon substra fosfat p-nitrofenol, jan sa dekri yon lòt kote [27]. Pou estime biomarkers fòmasyon zo ak resorption, yo te detèmine tou serik OC, kalsyòm ak nivo TRAP5b dapre enstriksyon manifaktirè yo.
Analiz de estrikti zo ak paramèt mòfometrik
Femora sourit yo (Gwoup Sham, OVX, ak AC) yo te diseke epi yo te ranpli ak saline fizyolojik pou tès mekanik. Yo te mezire fòs mekanik femoral la jan sa dekri yon lòt kote [28]. Chaj la ka zo kase te anrejistre kòm fòs la pik nan newton nan pwen ke mitan-arbr a nan ka zo kase femoral dwat la. Anplis de sa, femoral limyè a nan chak bèt yo te analize isto-morfometrik lè l sèvi avèk yon sistèm tomografi mikwo-òdinatè (mikro-CT) (SkyScan 1076 microfocus X-ray system, Kontich, Bèljik). An brèf, zo yo nan 4 pousan depo fòmaldeyid yo te cheche supèrfisyèl sou tisi papye anvan yo te vlope nan plastik ''cling-film'' oswa nan parafilm, pou anpeche siye pandan optik. Chak zo ki te anvlope nan plastik yo te mete nan ti tiyo kim plastik/polystyrène ki te monte vètikal orizontal nan chanm echantiyon eskanè 1076 la pou
D 'mikwo-CT. Scanning te pote soti lè l sèvi avèk 100 kV sous vòltaj ak 140 mA sous aktyèl ak rezolisyon 35 mm.
Yo te rekonstwi modèl ki genyen twa dimansyon nan zo trabekulèr nan femoral la lè l sèvi avèk SkyScan CT Analyzer vèsyon 1.11. Paramèt estriktirèl yo tankou trabecular zo dansite mineral (BMD, g/cm3), volim zo pousan (volim zo (BV)/volim tisi (TV), pousan), epesè (Tb.Th, mm), separasyon (Tb.Sp). , mm), ak nimewo (Tb.N, 1/mm) yo te Lè sa a, mezire.
Osteogenic Differentiation and Mineralization Test Selil mwèl zo yo kiltive nan {{{{10}}}}plak kilti byen yo te trete ak DAG (10 nM dexamethasone, 50 mM asid ascorbic, ak 20 mM b-glycerophosphate) nan prezans 10 mM aktozid. Apre 2 semèn nan diferansyasyon, selil yo te fiks ak glas-frèt 70 pousan (vol / vol) etanòl pou 1 èdtan ak tache ak 0.2 pousan alizarin wouj S nan dlo distile pou 30 min nan tanperati chanm. Apre selil yo te dekole ak lè sèk, yo te evalye plak kilti selil yo pa mikwoskòp limyè lè l sèvi avèk yon mikwoskòp Envèse (Nikon TS100, Japon). Pou mezire kantite lank wouj la, yo te elimine tach la ak 10 pousan klori asetil piridinyòm lè w souke pou 20 min epi yo te mezire absòbe a nan 560 nm. Yo te mezire kantite kalsyòm ki depoze nan kouch selil yo tou lè l sèvi avèk yon twous Kalsyòm C (Wako Chemical Inc. Osaka, Japon) dapre enstriksyon manifakti a. Anplis de sa, ekspresyon makè mRNA espesifik nan zo yo, tankou faktè transkripsyon ki gen rapò ak runt -2 (Runx2), osterix, sialoprotein zo (BSP), ak OC te detèmine pa RT-PCR an tan reyèl. Jadendanfan oligonukleotid makè sa yo te fèt ak gwosè pwodwi mwens pase 200 bp lè l sèvi avèk Primer Express Software 3.0 (Applied Biosystems) jan sa dekri yon lòt kote [27].
cistanche acteoside ranfòse fòmasyon zo a
Rezilta yo
Acteoside anpeche fòmasyon osteoclast pa makrofaj yo nan yon fason ki depann de dòz la.
Pou verifye efè acteoside sou diferansyasyon BMM nan osteoclasts, selil yo te kiltive ak divès konsantrasyon (0-20 mM) nan acteoside pou 7 jou nan prezans 50 ng/ml M-CSF ak 100 ng/ml. RANKL. Acteoside redwi kantite osteoclasts nan yon fason ki depann de dòz la. Lè selil yo te pretreate ak 10 mM acteoside pou 2 èdtan, nimewo a osteoclast diminye pa 43 pousan konpare ak selil complétée ak M-CSF ak RANKL (Fig. 1A). Fig. 1B montre diferansyasyon osteoclast RANKL-medyatè ak anpèchman li pa tretman konbine ak acteoside. Konfòm ak rezilta sa a, pretreatment acteoside diminye diferansyasyon an RANKL-stimile nan selil RAW264.7 ak fòmasyon osteoclast (figi 1C ak D). Lè yo te konpare potansyèl anti-osteoclastic acteoside sou BMM yo ak potansyèl antiosteoclast plizyè konpoze fenolik nan menm konsantrasyon (10 mM), luteolin te montre aktivite ki pi wo a (Fig. 2A). Sepandan, luteolin, quercetin, oswa apigenin tèt li diminye viabilite selil yo (figi 2B). Tout konpoze yo anpeche diferansyasyon osteoclastic pa macrophages RAW264.7 ak aktivite relatif sa yo: luteolin. quercetin=apigenin .
Cistanche acteoside Inhibit Osteoclast
