Résumé

Ekstrè akeuz etanòl nan tij an poud nan Dendrobium loddigesii bay twa nouvo fenolik ki gen ladan twa -7-O-etil-9- O-({4-hydroxyphenyl)propionyl -diacylglycerol (1), (R){{ 7}},5,4ʹ-trihydroxy-3,3ʹ, -trimethoxybibenzyl (2) ak (S)-5,5′,7-trihydroxy{-3′,4′ -dimethoxyfavanone (3), ansanm ak onz analogue li te ye. Estrikti yo te detèmine pa analiz spektroskopik vaste. Pou idantifye antioksidan natirèl, blanchi, ak ajan anti-aje, yo te evalye kapasite fenolik sa yo pou elimine radikal 1,2-difenil{-2-picrylhydrazil (DPPH), kapasite yo pou anpeche pwodiksyon tirozinaz, ak kapasite yo nan estimile pwodiksyon kolagen an pa tès po moun fibroblasts-adult (HDFa). Li te jwenn ke konpoze 1, 4-8, 13, ak 14 ekspoze siyifikatif aktivite DPPH radikal scavenging, konpoze 10 ekspoze aktivite inhibition tirozinaz (IC50 37.904 ug/mL), ak konpoze 9 te montre siyifikatif pwodiksyon kolagen an ak yon valè EC50 de 3.182 ug/mL. Rezilta sa yo sijere ke konstitiyan fenolik soti nan D. loddigesii ka kandida antioksidan, blanchi po, ak / oswa ajan anti-aje.

Dapre etid ki enpòtan,sistanchse yon komenzèbsa ke yo rekonèt kòm "zèb mirak ki pwolonje lavi". Eleman prensipal li secistanoside, ki gen plizyè efè tankouantioksidan, anti-enflamatwa, epipwomosyon fonksyon iminitè. Mekanis ki genyen ant cistanche akblanchiman pomanti nan efè a antioksidan nancistanche glikozid. Melanin nan po moun pwodui pa oksidasyon antirozinkatalize pa tirozinaz, ak reyaksyon an oksidasyon mande pou patisipasyon nan oksijèn, kidonk radikal yo san oksijèn nan kò a vin yon faktè enpòtan ki afekte pwodiksyon melanin. Cistanche gen cistanoside, ki se yon antioksidan epi li ka diminye jenerasyon radikal gratis nan kò a, kidonkanpeche pwodiksyon melanin.

Klike sou Cistanche Tubulosa Supplement

Pou plis enfòmasyon:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Grafik Abstract

1. Entwodiksyon

Genus la Dendrobium (Orchidaceae) gen apeprè 1500 espès globalman, nan yo ki apeprè 80 espès grandi nan peyi Lachin [1]. Tij yo nan plizyè plant nan genus sa a yo konnen kòm "Shi-Hu", ki te itilize pou dè milye ane kòm tou de medikaman tradisyonèl Chinwa ak remèd popilè pou tretman pou doulè kwonik atrofik, aje po, lafyèv, maladi kadyovaskilè, ak yon tonik pou ankouraje pwodiksyon likid kò [2]. Syans anvan yo sou genus sa a te mennen nan izòlman nan yon seri de polisakarid, konpoze fenolik, alkaloid, ak sesquiterpenoids [1, 3-5], kèk nan yo ki genyen divès kalite byoaktivite ki gen ladan anti-enflamatwa [6], antimikwòb [2], antioksidan. [7], antitumoral [8], agrégation antiplakèt [9], imunomodulateur [10], ak kont aktivite grip A [11].

Dendrobium loddigesii, yon zèb epiphytic perennial, lajman distribiye nan zòn sidwès Lachin nan, tankou Guangxi, Guizhou, ak Yunnan Pwovens [12]. Tij li yo te aplike nan medikaman popilè pou trete doulè, lafyèv, ak vètij [13]. Nan kontinye rechèch la pou pwodwi natirèl estriktirèl divès ak byolojik aktif ki soti nan genus sa a [1, 5, 14-17], yo te fè yon envestigasyon an pwofondè nan elektè farmakolojik aktif nan espès plant sa a. Kòm yon rezilta, twa nouvo konpoze fenolik (1-3) osi byen ke onz li te ye (Fig. 1) yo te izole nan yon ekstrè 80 pousan etanolik nan tij la nan D. loddigesii. Izolasyon, elisid estrikti, ak evalyasyon byolojik nan konpoze sa yo prezante isit la.

2 Rezilta ak Diskisyon

Konpoze 1, ki te jwenn kòm yon solid blan, te bay yon fòmil molekilè C21H26O7 jan yo detèmine pa iyon (-)-HRESIMS nan m/z 389.1602 [M−H]− (kalki pou C21H25O7, 389.16{{ 28}}6) ak nèf degre ensaturasyon. Spectre 1 H NMR nan 1 gen sèt pwoton aromat nan δH 6.85 (1H, d, J=1.7 Hz), 6.75 (1H, d, J=8.0 Hz), 6.68 (1H). , dd, J = 8.0, 1.7 Hz), 7.01 (2H, d, J = 8.5 Hz) ak 6.68 (2H, d, J = 8.5 Hz), sigjere prezans yon bag benzèn 1,3,4-trisubstituted ak yon bag benzèn 1,4-disubstituted. Spectre 13C NMR li yo te montre 21 sonorans kabòn ki gen ladan de methyl (yon methoxy), kat methylene alifatik, nèf metin (de sp3, sèt sp2), ak sis kabòn kwatènè (yon karbonil, senk olefinik ki gen ladan twa oksijene). Korelasyon HMBC yo (figi 2) H-7/C-1 (δC 131.6), C-2 (δC 111.7), C-6 (δC 121.4), C -8 (δC 74.2), ak C{-10 (δC 65.3); H-9/C-7 (δC 83.8) ak C-8 (δC 74.2); H-10/C-11 (δC 15.6); 3-OMe (δH 3.81)/C-3 (δC 149.1), ansanm ak korelasyon H-7/H-8/H2-9 ak H{{ 87}}/H3-11 soti nan spectre 1 H-1 H COSY (Fig. 2) endike prezans 7- O-ethylguaiacylglycerol [18]. Li te rapòte ke J7,8 te apeprè 5 Hz pou izomè erythro ak 7 Hz pou twa izomè yo nan ka sereng-gliserin ak dérivés diacylglycerol. Kidonk, konpoze 1 te konsidere kòm twa izomè yo ak J7,8 (6.5 Hz) [18]. Korelasyon HMBC nan H-7ʹ (δH 2.79, t, J = 7.5 Hz)/C-8ʹ (δC 37.1), C-1ʹ (δC 132.7), C-2ʹ, 6ʹ (δC 130.2) ak C-9ʹ (δC). 174.6), H-8ʹ (δH 2.59, t, J = 7.5 Hz)/C-7ʹ (δC 31.0), C-1ʹ, ak C-9ʹ, ansanm ak COZY cross-peaks nan H-8ʹ/H-7ʹ endike prezans asid p-hydroxycoumaric [19]. Sou baz prèv ki dekri pi wo a, 1 te pwopoze pou gen yon 7-O-ethylguaiacylglycerol ak yon asid p-hydroxy-coumaric atravè yon lyen ester. Korelasyon HMBC soti nan H-9 a C-9ʹ sijere lyen ester la te ant C-9 ak C-9ʹ. Kidonk, estrikti 1 a te detèmine jan yo montre.

(R){{0}},5,4ʹ-Trihydroxy-3,3ʹ, -trimethoxybibenzyl (2) te jwenn kòm yon solid blan. Spectre HRESIMS 2 te montre yon pik iyon quasimolecular nan m/z 319.1180 [M−H]− (kalkid. pou C17H19O6, 319.1187) ak 8 degre ensaturasyon. Spectre 1H NMR nan 2 te montre twa gwoup methoxyl nan δH 3.75 (3H, s), 3.70 (3H, s), ak 3.17 (3H, s); yon pwoton metin oksijene nan δH 4.13 (1H, t, J=6.8 Hz, H-); de siyal metilèn nan δH 2.73 (1H, dd, J=13.5, 6.9 Hz) ak 2.96 (1H, dd, J=13.5, 6.9 Hz); ak senk pwoton aromat, ki parèt kòm yon bag aromat 1,3,4,5-tetrasubstituted nan δH 6.28 (1H, d, J=1.8 Hz) ak 6.34 (1H, d, J{{ 60}}.8 Hz), ak yon bag aromat 1,3,{4-trisubstituted nan δH 6.49 (1H, d, J{=2.0 Hz), 6.62 (1H, d, J=8.0 Hz) ak 6.52 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz). 13CNMR ak DEPT spectre nan 2 te montre twa oksimetilèn, yon sèl methylene, yon sèl metin oksijene, ak 12 kabòn aromat (senk oksijene). Konparezon done RMN li yo (Tablo 1) ak sa yo ki nan dendrocandin C [20] te montre gwo resanblans eksepte pou prezans nan yon lòt gwoup methoxyl, ki te lokalize nan C-3ʹ pa korelasyon HMBC ki soti nan 3ʹ-OMe ak H-5ʹ rive. C-3ʹ (δC 148.4). Anplis de sa, plizyè entèraksyon HMBC (figi 2) nan 3-OMe ak H-2/C -3 (δC 149.5); -OMe/C- (δC 86.9) sijere lòt gwoup methoxyl yo nan C-3, ak C-, respektivman. Konfigirasyon absoli nan C- te detèmine kòm R sou baz wotasyon negatif optik ([훼] 26 D -12.46), menm jan ak aphyllous D [훼] 20 D -20.3, MeOH) [15]. An konsekans, estrikti a nan 2 te detèmine jan yo montre.

(S){{0}},7,5′-Trihydroxy-3′,4′-dimethoxyfavanone (3) te jwenn kòm yon poud jòn amòf e li te gen molekilè C17H16O7 (1{{69} } endis defisyans idwojèn) dapre iyon (-)-HRESIMS nan m/z 331.0819 [M – H]− (calcd 331.0823). Maksimòm absòpsyon UV nan 206 ak 294 nm endike prezans yon flavanon [21]. Spectre 1 H NMR (Tablo 1) te montre twa siyal nan rejyon ki pa aromat yo mete nan δH 5.29 (1H, dd, J=12.7, 3.1, H-2), 3.04 (1H, dd, J=17.1, 12.7, H-3ax), ak 2.71 (1H, dd, J=17.1, 3.1, H{-3 eq), kat pwoton aromat δH 5.87 (1H, d, J=2.2, H{-6), 5.91 (1H, d, J=2.2, H-8), 6.62 (1H, d, J=2.0, H-2ʹ) ak 6.61 (1H, d, J{=2.0, H-6ʹ), de gwoup methoxyl δH 3.83 (3H, s) ak 3,77 (3H, s). 13C NMR ak DEPT spectre (Tablo 1) genyen rezonans pou 17 kabòn ki gen ladan de methoxys, yon sèl methylene, yon sèl metin, yon kabònil kabòn, ak 12 kabòn aromat. Analiz konplè nan done RMN li yo te endike ke estrikti planè li yo se pre relasyon ak sa yo ki an dihydro tricin [22], eksepte pou OH-4ʹ ak OCH3-5ʹ sonorans nan dihydro tricin yo te transpoze nan 3. Sa a te konfime pa HMBC kwa-. pik (figi 2) soti nan H-2ʹ, H-6ʹ, ak OCH3-4ʹ rive nan C-4ʹ (δC 137.7), soti nan H-6ʹ rive nan C-5ʹ (δC 151.8). Konfigirasyon absoli nan C-2 te postule kòm yo te nan fòm S la sou baz yon valè wotasyon espesifik negatif (- 46.64, MeOH) nan wotasyon optik li [23]. Se poutèt sa, estrikti nan konpoze 3 te konsa san anbigwite asiyen jan yo montre.

Yo te idantifye onz konpoze li te ye yo dwe trepidation 4 [24], mescalin 5 [25], 4,5,4′-trihydroxy- 3,3′-dimethoxybibenzyl 6 [26], 4′,5- dihydroxy-3,3′- dimethoxybibenzyl 7 [27], Tristin 8 [28], batatas nan III 9 [27], 3,5,3′-hydroxybibenzyl 10 [29], aphyllous C 11 [15], dentiform A 12 [30], dihydroconiferyl dihydro-p-coumarate 13 [31], p-hydroxyphenyl trans-ferulate 14 [32] pa analiz espektroskopik ak konpare done espèk yo ak literati.

Konpoze fenolik yo se yon pati esansyèl nan rejim imen an epi yo li te ye kòm antioksidan pwisan akòz aksyon ki pisan chèn-kraze yo epi yo ka kontribye dirèkteman nan aktivite anti-oksidatif la [33]. DPPH radikal scavenging tès la se youn nan metòd ki pi komen ak relativman rapid yo itilize pou evalye aktivite antioksidan. Konpoze ki ka bay yon atòm idwojèn nan radikal la DPPH, ak Lè sa a, bay monte nan fòm nan redwi nan DPPH yo pral konsidere kòm potansyèl ajan antioksidan. Tout konpoze yo te evalye pou aktivite radikal DPPH yo. Rezilta yo prezan (Tablo 2) montre ke majorite nan konpoze fenolik yo (1, 4-8, 13, ak 14) te montre aktivite enpòtan ak kapasite scavenging sòti nan 89.411 a 94.278 pousan nan 100 ug / mL.

Nan lòt men an, tirosinaz se yon anzim ki gen kwiv epi li jwe yon wòl enpòtan nan kontwole chemen biosentèz melanin nan melanosit [34]. Se poutèt sa, inibitè tirozinaz te vin eleman enpòtan nan pwodui kosmetik oswa pwodwi medsin pou ipèpigmantasyon ak devlope ajan blanchiman po. Nan etid sa a, tout izolat yo te evalye pou aktivite inhibition tirozinaz yo (Tablo 2). Kojic asid, yon swadizan po-eklèjman ajan, te itilize kòm yon kontwòl pozitif. 3,5,3′-hydroxybibenzyl (10) revele yon aktivite inhibition enpòtan ak yon valè IC50 nan 37.904 ug / mL. Aphyllals C (11) te montre modere anpèchman (IC50, 152.56 ug/mL). Tout konpoze ki rete yo te inaktif nan konsantrasyon jiska 200 ug/mL. Nan etid sa a, li ka konkli ke konpoze 10 ak 11 ka yon kandida potansyèl pou tretman maladi po ki gen rapò ak biosentèz melanin.

Lè ou konsidere ke espès sa a yo itilize medsinen pou aje po, depi, kolagen an se kritik pou fòs po ak elastisite, ak degradasyon li mennen nan ondilasyon ki akonpaye aje [35]. Pakonsekan, tout konpoze yo te tou espre evalye pou efè yo sou pwodiksyon kolagen an nan HDFa. Rezilta yo (Tablo 2) te montre ke konpoze 9 siyifikativman stimulation HDFa aktivite pwodiksyon kolagen an (EC 50 3.182 ug/mL). Konpoze 6 ak 7 te montre aktivite ki pi fèb, ak pwodiksyon kolagen an 33.062 pousan ak 29.157 pousan nan 10 ug/mL, respektivman. Rezilta prezan yo pa sèlman sipòte itilizasyon etnofarmakolojik D. loddigesii, men tou bay yon modèl estrikti serye pou devlope maladi defisi kolagen an ki asosye tankou boule ak maladi ilsè.

3 Eksperimantal

3.1 Pwosedi Jeneral Eksperimantal

3.2 Materyèl Plant

Tij yo nan D. loddigesii yo te kolekte nan mwa septanm nan 2014 nan vil Wenshan, pwovens Yunnan, Repiblik Pèp la nan Lachin, ak idantifye pa Pwofesè Hong Yu (Yunnan University, Kunming, Repiblik Pèp la Lachin). Yo te depoze echantiyon bon an (No. 20,140,829) nan laboratwa Eta kle fitochimik ak resous plant nan West Lachin, Kunming Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences.

3.3 Ekstraksyon ak Izolasyon

Tij yo sèk ak an poud (10.2 kg) nan D. loddigesii yo te ekstrè twa fwa ak 8 0 pousan etanòl anba tanperati chanm ak konsantre anba presyon redwi. Lè sa a, rezidi a te sispann nan H2O ak patisyon ak EtOAc jwenn fraksyon nan EtOAc (22 0 g), ki te sibi chromatografi kolòn jèl silica elye ak yon gradyan nan etè petwòl / asetòn (15:1 a { {110}}:1) pou bay 22 fraksyon (Fr.1–22). Fr.11 (6 g) te sibi CC jèl silica elite ak CHCl3/MeOH (300:1), Lè sa a, ki te swiv pa kolòn MCI (MeOH/H2O gradyan, 60:40-95:5) ak jèl silica CC (CHCl3/). MeOH, 200:1) pou bay 12 (4 mg). Fr.13 (850 mg) te separe sou yon kolòn MCI (MeOH/H2O, 60:40 a 95:5) pou bay senk fraksyon (Fr.13.1–Fr.13.5). Fr.13.4 (150 mg) bay konpoze 4 (3 mg) ak 5 (5 mg) pa preparasyon HPLC (MeOH/H2O, 60:40). Fr.16 (19 g) te chromatographed sou kolòn jèl silica eluye ak CHCl3 / MeOH (100: 1 a 20: 1) yo peye 6 subfraksyon (Fr.16.1-Fr.16.6). Fr.16.4 (2.3 g) te aplike kolòn MCI eluye ak MeOH/H2O (50:50-100:0) ak Lè sa a, plis fraksyon sou yon kolòn nan Sephadex LH-20 (MeOH/H2O, 90:10) nan sede 7 (716 mg) ak 13 (39 mg). Lè w itilize menm kondisyon yo nan Fr.16.4, Fr.16.6 (240 mg) bay konpoze 9 (7 mg). Fr.18 (10 g) te separe pa silica jèl CC (CHCl3/MeOH, 100:1-20:1), Lè sa a, pase nan MCI (MeOH/H2O gradyan, 50:50-100:0) ak Sephadex LH{{ 96}} (MeOH/H2O, 90:10) kolòn pou bay 3 (25 mg) ak 11 (4 mg). Fr.19 (20 g) te sibi yon kolòn MCI eluye ak MeOH / H2O (30:70-100:0) pou jwenn sèt fraksyon (Fr.19.1-Fr.19.7). Fr.19.5 (2.3 g) te separe pa repete kolòn jèl silica (CHCl3/MeOH, 30:1) pou peye 8 (15 mg) ak 10 (7 mg). Fr.19.6 (4.3 g) te fraksyon sou yon kolòn nan jèl silica (CHCl3/MeOH, 30:1) bay 5 fraksyon (Fr.19.6.1– Fr.19.6.5). Fr.19.6.1 (1.2 g) te sibi kolòn jèl silica (CHCl3/MeOH, 30:1) epi apre pirifikasyon pa HPLC (MeOH/H2O, 45:55), bay 1 (15 mg). Fr.19.6.3 (540 mg) te aplike nan yon kolòn nan kolòn Sephadex LH-20 eluye ak MeOH/H2O (90:10), ak Lè sa a, pirifye plis pa semipreparative HPLC (MeOH/H2O, 45:55) bay 2 (6 mg) ak 6 (5 mg). Fr.20 (12 g) te aplike nan yon jèl MCI (MeOH / H2O, 30:70-100:0) etap kwomatografik ak Lè sa a, te sibi jèl silica CC (CHCl3 / MeOH, 30:1) bay 14 (21). mg).twa {{0}}O-Ethyl-9-O-({4-hydroxyphenyl) propionyl-diacilglycerol (1): solid blan; []D 26 – 3.72 (c 0.51, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 203 (4.53), 225 (4.17), 280 (3.66) nm; IR (KBr) νmax 3426, 1727, 1516, 829 cm-1; 1H ak 13C RMN (CD3OD), gade Tablo 1; ESIMS m/z 389 [M−H]−, HRESIMS m/z 389,1602 [M−H]− (kalkile pou C21H25O7, 389,1606).

(R)-4,5,4′-Trihydroxy-3,3ʹ, -trimethoxybibenzyl (2): poud blan amorphe; []D 26 –12.46 (c 1.07, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 204 (4.59), 286 (3.75) nm; IR (KBr) νmax 3418, 1607, 1517, 1455, 1434, 796 cm−1; 1H ak 13C RMN (CD3OD), gade Tablo 1; ESIMS m/z 319 [M−H]−, HRESIMS m/z 319,1180 [M−H]− (kalkile pou C17H19O6, 319,1187).

(2S)-5,7,3ʹ-Trihydroxy-6,4,5-trimethoxyfavone (3): poud jòn amorphe; [ ]D 26 – 46.64 (c 0.46, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 206 (4.70), 294 (4.17) nm; IR (KBr) νmax 3335, 2940, 1641, 1514, 1462, 1345, 1434, 1182, 1091, 998, 833 cm−1; 1H ak 13C RMN (CD3OD), gade Tablo 1; ESIMS m/z 331 [M−H]−, HRESIMS m/z 331,0819 [M−H]− (kalkile pou C17H15O7, 331,0823).

3.4 DPPH Radical Scavenging Aktivite Assay

Yo te fè tès aktivite radikal gratis la dapre metòd anvan an [36] ak kèk modifikasyon. Yon ti tan, yo te ajoute 30 echantiyon μL (1000 ug/mL, ki fonn nan etanòl) ak Trolox (1 mM) nan 270 μL solisyon DPPH (100 μM, ki fonn nan metanol), respektivman. Reyaksyon an te kontinye pou 1 èdtan nan 37 degre sou yon 96-mikwoplak byen. Lè sa a, yo te li absorpsyon an nan 515 nm epi yo te kalkile pousantaj total aktivite radikal la ak fòmil sa a: pousan anpèchman =[(A0− A1)/A0]×100 pousan , kote A0 se absorpsyon nan. DPPH san echantiyon (reaksyon kontwòl) ak A1 se absòbe DPPH enkubasyon ak echantiyon yo. Tout tès yo te fèt an triple epi Trolox te itilize kòm yon ajan kontwòl pozitif.

3.5 Djondjon Tyrosinase Inhibitory Analyse

Yo te detèmine anpèchman aktivite tirozinaz espektwofotometrik dapre metòd ki dekri anvan [36] ak kèk modifikasyon. Yon ti tan, diferan konsantrasyon konpoze tès yo te prepare nan 10 pousan DMSO. Chak nan echantiyon solisyon an (20 μM) yo te melanje ak L-Dopa (1.25 mM), epi dilye ak 970 μL nan 0.05 mM tanpon fosfat sodyòm (PBS, pH 6.8) nan tib tès yo. Reyaksyon an te inisye lè w ajoute tirozinaz djondjon (25 U/mL). Te melanj reyaksyon an enkube pou 5 minit nan tanperati chanm. Kantite Dopachrome nan melanj lan te detèmine pa mezi absorbans chak pi nan 490 nm. Asid kojik te itilize kòm yon kontwòl pozitif. Yo te kalkile pousantaj inhibiteur nan tirozinaz dapre ekwasyon sa a: Pousantaj anpèchman=[(A0− A1)/A0] × 100 pousan , kote A0 se absòbe Dopachrome a san yo pa konpoze tès (reaksyon kontwòl) ak A1. se absòbe Dopachrome enkubasyon ak konpoze tès yo.

3.6 Pwodiksyon Kolagen pa HDFa Assay

Rekonesans Pwojè sa a te sipòte finansyèman pa Depatman Syans ak Teknoloji pwovens Yunnan (No. 2017ZF003-04, 2015HB093, ak 2019HA001). Otè yo rekonesan anvè anplwaye gwoup analyse Eta Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resources nan West Lachin, Kunming Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences, pou mezi tout spectre.

Konfòmite ak Estanda Etik

Aksè LouvriAtik sa a distribye dapre kondisyon Creative Commons Attribution 4.0 Lisans Entènasyonal, ki pèmèt itilizasyon, distribisyon ak repwodiksyon san restriksyon sou nenpòt mwayen, depi ou bay otè orijinal la (yo) ak sous la kredi apwopriye. , bay yon lyen ki mennen nan lisans Creative Commons, epi endike si yo te fè chanjman.

Referans

Pou plis enfòmasyon: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501