AFRAKTI

Background:Yon bis resorcinol te izole kòm konstitiyan prensipal la nan kòf tèminal Heliciopsis yo (Proteaceae). Dènyèman, resorcinol aplike kòm yon ajan blanchi aktif nan divès kalite pwodui kosmetik. Paske nan mimik estriktirèl nan resorcinol, benefis nan bis resorcinol la kòm yon antagonist anzim aje yo te demontre nan etid sa a.

Dapre etid ki enpòtan, cistanche se yon zèb komen ke yo rekonèt kòm "zèb mirak ki pwolonje lavi". Eleman prensipal li se cistanoside, ki gen efè divès kalite tankou antioksidan, anti-enflamatwa, ak pwomosyon fonksyon iminitè. Mekanis ki genyen ant cistanche ak blanchiman po manti nan efè a antioksidan nan glikozid cistanche. Melanin nan po moun pwodui pa oksidasyon tirozin ki katalize pa tirosinaz, ak reyaksyon oksidasyon mande pou patisipasyon oksijèn, kidonk radikal oksijèn san yo nan kò a vin yon faktè enpòtan ki afekte pwodiksyon melanin. Cistanche gen cistanoside, ki se yon antioksidan epi li ka diminye jenerasyon radikal gratis nan kò a, kidonk anpeche pwodiksyon melanin.

Klike sou Cistanche Tubulosa pou blanchiman

Pou plis enfòmasyon:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Metòd:Bis resorcinol la te pirifye soti nan ekstrè etanolik brit nan kòf H. tèminal yo pa fè ekstraksyon sòlvan ak kromatografi preparasyon, respektivman. Aktivite inhibition sou kolagenaz, elastase, ak tirozinaz nan konpoze an te envestige lè l sèvi avèk yon teknik spektroskopik diferan. Molekilè debakadè te pote soti pou predi entèraksyon posib nan sibstans la alantou sit yo aktif anzim.

Rezilta:Valè IC50 sou kolagenaz bis resorcinol ak asid kafeyik yo te 156.7 ± 0.7 ak 308.9 ± 1.6 µmol L-1, respektivman. Pou aktivite elastase, IC50 nan 33.2 ± 0.5 ak 34.3 ± 0.3 µmol L-1 yo te detèmine respektivman pou bis resorcinol la ak asid ursolic. Bis resorcinol la te inhibiteur nan tirosinaz lè li te montre IC50 nan 22.8 µmol L-1, ak sa ki nan 78.4 µmol L-1 te prezan pou -arbutin. Bis resorcinol mare nan kolagenaz, elastaz, ak tirosinaz ak enèji obligatwa respektif yo nan -5.89, -5.69, ak -6.57 kcal mol-1. Enèji obligatwa sa yo te nan menm ranje kòm inibitè teste yo. Gwoup fenol aromat nan estrikti a te responsab pou prensip ak sipòte entèraksyon obligatwa ak anzim. Idwojèn obligatwa akòz gwoup idroksil ak fòs atire ki gen rapò ak π ki soti nan yon bag aromat (yo) bay adaptabilite obligatwa nan bis resorcinol.

Konklizyon:Bis resorcinol pirifye nan tèminal H. ta ka itil pou enklizyon nan pwodwi kosmetik kòm yon antagonist anzim aje.

Sijè Byochimik, byoenfòmatik, byoloji selilè, dèrmatoloji, done min, ak aprantisaj machin

Mo kleTèminal eliyopsis, Bisresorcinol, Collagenase, Elastase, Tyrosinase, Pwopriyete anti-aje, debakadè molekilè, Anpèchman anzim

ENTWODIKSYON

Yon bis resorcinol, (8′Z)-3,5-dihydroxy-1-[16′-(3″, 5″-dihydroxy phenyl)-8′-hexadecen{{ 11}}′-yl] benzèn, yo te izole kòm yon konstitiyan abondan nan kòf la nan tèminal Heliciopsis (Kurz) Sleumer, ki se yon plant nan fanmi Proteaceae e ki te itilize pa moun etnik nan Vyetnam pou efè hepatoprotective. Pou dat, benefis medikal konpoze sa a kòm yon ajan pou anti-enflamasyon, anpèchman pwodiksyon malondialdehyde (MDA), ak epatoprotection yo te klarifye nan vitro ak nan vivo (Giang et al., 2019). Li evidan nan ke yon molekil nan bis resorcinol la gen de molekil resorcinol (EC No 203-585-2), lyezon ansanm ak meta-C7H14C=CC7H14 linkage (Fig. 1A). Resorcinol dènyèman aplike nan yon fòm serom feminen konsantre pou terapi blan. Ki baze sou Komite Syantifik sou Sekirite Konsomatè, Brussels, Bèljik (SCCS 1270/09, Komisyon Ewopeyen an, Komite Syantifik sou Sekirite Konsomatè, 2010), resorcinol te reglemante kòm yon oksidan nan pwodwi ki gen entansyon pou koloran Coursil nan chenn konsantrasyon jiska 1.25 pousan. , oswa nan losyon cheve ak chanpou nan ranje konsantrasyon jiska 0.5 pousan . Aplikasyon kosmetik nan resorcinol yo se konsa divès. Pou ajan blanchi, yo te sipoze anpèchman sentèz melanin pa melanosit ki abite nan kouch selil fondamantal epidèm la. Tyrosinase (EC 1.14.18.1) se yon anzim kle pou katalize melanogenesis kote L-tirozin yo itilize kòm substra a. Malgre ke melanin ede pwoteje po a kont domaj nan reyon UV, depase pwodiksyon melanin ka lakòz ipèpigmantasyon, freckle, ak tach laj. Anplis de resorcinol, divès kalite konpoze sentetik ak natirèl ak estrikti chimik diferan yo te demontre yo montre aktivite anti-tirozinaz (Dobos et al., 2015).

Radyasyon UV se yon gwo faktè ekstèn ki lakòz aje po. Olye de sa, po ka laj sou tan pa espès oksijèn reyaktif (ROS) ak oksijene lipid ki entèn pwodwi apre ekspoze UV. Pwodwi segondè ki soti nan metabolis oksijene lipid ka domaje fib elastin ak kolagen nan matris ekstraselilè (ECMs). Se poutèt sa, ekspoze a reyon UV ka lakòz dezidratasyon, pèt elastisite, osi byen ke ondilasyon nan po a. Dapre nou konnen, ECM yo detanzantan remodele pou kenbe estrikti tisi nòmal yo akonpaye ak pwoteyin tisi ki ekspire yo byen degrade pa metaloproteinas matris, tankou kolagenaz, ak serin proteaz tankou elastase (Thring, Hili & Naughton, 2009). Anplis de sa, tou de kantite ak aktivite nan anzim aje yo te ogmante pa estrès oksidatif, ki mennen nan anpil degradasyon ECM ak aje pwogresif (Sherratt et al., 2019). Se poutèt sa, konpoze ki ka fòme konplèks ak iyon metal yo antisipe yo dwe inibitè nan kolagenaz, elastaz, ak tirozinaz kòmsadwa (Selvaraj et al., 2014). Pwojè sa a gen pou objaktif pou detèmine efè byolojik bis resorcinol sou tirozinaz, kolagenaz, ak elastaz nan vitro, epi yo te fè yon teknik debakadè pou klarifye entèraksyon yo nan nivo molekilè. Li se espwa retade pwosesis la aje ak amelyore aparans po ak bis resorcinol.

MATERYÈL AK METÒD

Pwodwi chimik ak enstriman

Pirifikasyon konpoze, idantifikasyon, ak ratifikasyon

Ekstrè brit nan etanòl nan kòf H. tèminal yo te jwenn san gad dèyè nan men Pwofesè PM Giang, Fakilte Chimi, Inivèsite Nasyonal Vyetnam, Hanoi, Vyetnam ak nimewo echantiyon bon HNIP-18473. Lè sa a, li te patisyon nan metanol / n-hexane pa twa fwa repete. Yo te evapore kouch metanòl la nan prèske sèk epi answit divize an acetate etil/1-butan. Kouch acetate etil la te vaporize jiskaske volim li te redwi pa 80 pousan. Lè sa a, likid gluan ki kapab lakòz yo te pirifye sou yon kolòn jèl silica lè l sèvi avèk elisyon gradyan klowofòm / metanol jan sa a: 100 pousan klowofò, 30:1, 20:1, 10:1, 7:1, 5:1, 3:1, 3. :2, ak 2:1 nan klowofòm / metanol, ak 100 pousan metanol, respektivman. Eliyan ki soti nan sòlvan an melanje 5:1 yo te kolekte epi evapore nan yon katriyèm volim, ki te swiv pa separasyon an sou kolòn nan ODS lè l sèvi avèk yon elisyon gradyan nan metanol ak asetòn. Konpoze an vle, sa vle di, bis resorcinol (Fig. 1), yo te jwenn nan eluyan ki gen 70 pousan asetòn ak konfime pa MS, NMR, ak espektroskopi IR konsènan done yo bibliyotèk enstrimantal. Yo te itilize chromatografi kouch mens pou estimasyon pite li yo.

Esay aktivite byolojik

Nan vitro, eksperyans ki te fèt nan tès anzim-inhibitory sou kolagenaz, elastase, ak tirozinaz pou bis resorcinol la ak inibitè li te ye yo te pote soti jan sa a.

Anpèchman kolagenaz

Dènye tès anti-kolagenaz la te modifye de sa ki te deja dekri pa Widyowati et al. (2016). An brèf, 50 mmol L-1 tricine tanpon pH 7.5 complétée ak 400 mmol L-1 NaCl ak 10 mmol L-1 CaCl2 yo te itilize kòm diluan an tanpon. Collagenase soti nan Clostridium histolyticum (EC.3.4.24.3) te fonn nan tanpon an nan yon konsantrasyon nan 1 mg L-1. Anzim-substra a, MOCAc-PRO-Leu-Gly-Leu-A2pr (Dnp)-Ala-Arg-NH2, te fonn anvan nan DMSO epi imedyatman dilye nan tanpon an nan yon konsantrasyon nan 1 mmol L-1. Yo te dilye yon echantiyon ki fonn nan DMSO nan diferan konsantrasyon lè l sèvi avèk tanpon an. Yo te enkube yon solisyon echantiyon 2-µl ak 100 µl solisyon anzim nan 37 ○C pou 10 min. Lè sa a, yo te ajoute yon 50-µl substra ak byen melanje. Emisyon fliyoresan (F) nan 405 nm te imedyatman anrejistre epi kontinye kontwole pou 30 min lè l sèvi avèk yon longèdonn 320 nm pou eksitasyon. Yo te itilize asid kafeyik kòm yon kontwòl pozisyon (figi 1). Kontwòl negatif te fèt ak dlo. Yo te kalkile pousantaj anpèchman (pousan) apati ekwasyon ki anba a:

pousan Anpèchman {{0}}{1 - (Fsam; 30 - Fsam; 0)÷(Fcont; 30 - Fcont; 0)} ×100.

Elastase anpèchman

Esè a dapre Abhijit & Manjushree (201{0) te aplike ak kèk modifikasyon. Yon ti tan, sistèm tanpon an te 0.2 mM Tris-HCl tanpon (pH 8.0). Yo te prepare yon solisyon 1 µg mL-1 elastaz pankreyas kochon (EC.3.4.21.36) nan dlo esteril. Substra anzim, N-Succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (SANA), te fonn nan tanpon an nan yon konsantrasyon 80 mmol L-1. Yo te dilye yon echantiyon ki fonn nan DMSO nan divès konsantrasyon lè l sèvi avèk tanpon an. Yon solisyon echantiyon 100-µl te melanje ak 50 µl solisyon anzim epi enkube pou 15 min. Apre sa, 50 µl nan solisyon anzim-substra a te ajoute ak byen melanje. Yo te mezire OD410 imedyatman (0 min) epi apre enkubasyon lannwit lan (o/n) nan 37 degre lè l sèvi avèk yon lektè microplate. Asid ursolik yo te itilize kòm yon kontwòl pozitif (Fig. 1), ak dlo yo te itilize kòm yon kontwòl negatif. Anpèchman pousantaj (pousan) te kalkile pa ekwasyon sa a:

pousan Anpèchman {{0}} {1 - [(Asam; o/n - Asam; 0)÷(Acont; o/n - Acont; 0)]} ×100:

Anpèchman tirozinaz

Yo te itilize tès inhibiteur tirozinaz la adapte nan metòd ki dekri deja (Jiratchayamaethasakul et al., 2020). An brèf, tès la te fèt nan 0.05 mol L-1 tanpon fosfat pH 6.8. Tirozinaz djondjon (EC.1.14.18.1) te fonn nan tanpon an nan yon konsantrasyon 100 inite mL-1. L-tirozin, yon substra anzim, te prepare nan yon konsantrasyon nan 0.25 mg mL-1 nan tanpon an. Yon konpoze tès ki fonn nan DMSO te dilye nan konsantrasyon ki varye ant 0.625 ak 10 mg mL-1. Nan yon pi ki gen plak 96-po, yo te melanje yon echantiyon 10 µl ak 40 µl solisyon L-tirozin epi enkube pou 10 minit nan tanperati chanm. Apre sa, 50 µl solisyon anzim yo te inokule epi melanje byen. Yo te sispann reyaksyon an apre enkubasyon sou glas pou 1 minit. OD475 la te mezire lè l sèvi avèk yon lektè microplate. -Arbutin ak dlo yo te itilize kòm yon kontwòl pozitif (figi 1) ak yon kontrepati negatif, respektivman. Anpèchman pousantaj (pousan) te kalkile pa ekwasyon an jan sa a:

ETID MOLEKILÈ DOCKING

Preparasyon nan ligand ak reseptè

Twa dimansyon (3D) estrikti bis resorcinol (CID 8917124) ak konpoze referans, ki gen ladan substrats ak inhibiteurs, yo te telechaje nan baz done PubChem pou etid debakadè molekilè. Yo te prepare yon estrikti ligand nan yon dosye fòma Protein Data Bank (PDB) lè l sèvi avèk Online SMILES Translator ak Structure File Generator. Estrikti kristal yo nan anzim, tankou kolagenaz (PDB ID 2Y6I), elastase (PDB ID 1BRU), ak tirozinaz (PDB ID 2Y9X) yo te jwenn nan baz done a pwoteyin RCSB. Dlo a ak molekil tache yo te diseke nan tout estrikti pwoteyin chwazi yo. Pandan se tan, atòm idwojèn polè yo te ajoute nan estrikti pwoteyin kristalize yo pa AutoDockTools 1.5.6. Fichye pwoteyin sib ak lòt konpoze itilize yo te sove nan fòma PDBQT anvan yo fè debakadè molekilè a.

Seleksyon nan rezidi sit aktif ak molekilè debakadè

Kadriyaj ak pwotokòl debakadè nan prediksyon sit aktif yo te prepare lè l sèvi avèk AutoDockTools 1.5.6. Sit gri yo te mete ak yon espas de 0.375 Å. Dimansyon xyz yo te fikse pou 126-135-160 Å3 pou kolagenaz, 130-120-126 Å3 pou elastase, ak 80-80-80 Å3 pou tirozinaz. Sant bwat kadriyaj (ak valè konpanse nan AutoDockTools) yo te 31.869 (5.000), -19.41 (-25.{{20}}), ak 17.815 pou kolagenaz. , 30.048 (−0.972), 51.253 (−2.722), 17.6 pou elastaz, ak −8.407 (−1.000), −23.795 (−0.250), −36.019 (−3.500) ) pou tirozinaz, respektivman. Te estrikti nan pwoteyin itilize kòm yon antite rijid pandan y ap konpoze an ligand yo te mete kòm yon molekil fleksib. Etid debakadè a te fèt lè l sèvi avèk algorithm jenetik Lamarckian (GA) aplike pa AutoDock4 vèsyon 4.2. Nimewo a nan kouri GA te 50 ak yon gwosè popilè nan 200. Enèji obligatwa (ΔGbind) te analize pa ADT. Entèraksyon (yo) te vizyalize lè l sèvi avèk BIOVIA Discovery Studio (BIOVIA, 2020). Entèraksyon molekilè ant konpoze an ak yon reseptè pwoteyin yo te analize ak vizyalize lè l sèvi avèk lojisyèl BIOVIA Discovery Studio (BIOVIA, 2020). Te estrikti nan konpoze an sit obligatwa pwoteyin lè l sèvi avèk pake Vizyèl Molekilè Dynamics (VMD) (Humphrey, Dalke & Schulten, 1996).

Analiz estatistik

REZILTA

Yon pi gwo konstitiyan te pirifye avèk siksè nan kòf H. tèminal yo lè l sèvi avèk ekstraksyon sòlvan ak teknik HPLC faz ranvèse, respektivman. Yo te konpare spectre 1 H-NMR ak 13C-NMR akeri yo ak sa yo ki nan sibstans referans atravè SciFinder la (https://scifinder.cas.org/) epi yo jwenn yo koresponn ak (8′Z)-1,{ {6}}dihydroxy-5- [16′-(3″,5″-dihyroxyphenyl)-8′-hexadecen-1′-yl] benzèn (Chaturvedula et al., 2{{ 23}}02). Li te klase kòm youn nan bisresorcinols yo. Bis resorcinol resan sa a te gen fòmil molekilè C28H40O4 ak yon pwa molekilè 463.2819 Dalton. Yo te kalkile pwodiksyon ekstraksyon an 0.086 pousan, ki baze sou pwa sèk kòf la. Pite li yo te plis pase 98 pousan, konsènan spectre 1 H ak 13C-NMR akeri (gade Fig. S1 ak S2).

Analiz bioaktivite nan vitro

Efè antagonis bisresorcinol la sou anzim aje, tankou kolagenaz, elastase, ak tirozinaz yo te detèmine nan vitro lè l sèvi avèk yon metòd spektroskopik diferan. Rezilta yo te rezime nan Tablo 1 ak Fig. 2. Pou anpèchman kolagenaz, yo te prepare echantiyon tès yo nan yon seri 50-550 µmol L-1 lè l sèvi avèk MOCAc-PRO-Leu-Gly-Leu-A2pr (Dnp)-Ala Arg-NH2. kòm anzim-substra ak asid kafeyik kòm yon inibitè anzim. Li te endike ke bisresorcinol nan yon konsantrasyon 156.7 µmol L-1 diminye aktivite anzim la pa 50 pousan (IC50). Olye de sa, IC50 asid kafeyik te 308.9 ± 13.7 µmol L-1. Kidonk, aktivite anti-kolagenaz bisresorcinol la te siyifikativman pi fò pase asid kafeyik.

Pou plis enfòmasyon: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501