Potansyèl benefis ki ka geri nan Cistanche dòz ki ba nan sendwòm fatig kwonik

Sendwòm Fatig Kwonik(ME/CFS) se yon multisystemic feblèskondisyon kwonik nan klas etyoloji enkonifified kòm yon malfonksyònman iminitèsendwòm ak maladi newolojik. Dekouvèt Transient a lajman eksprimeReseptè potansyèl Melastatin 3 (TRPM3) kòm yon kanal nociceptor ki vize anpilpa sèten reseptè opioid, ak enplikasyon li nan kalsyòm (Ca2 plis)-depandan Asasen Natirèl(NK) selil fonksyon iminitè te ogmante posiblite pou TRPM3 kapharmacologically vize pou trete sentòm karakteristik ME/CFS. Naltrexoneidroklorid (NTX) aji kòm yon antagonis nan mu a (m)-opioid reseptè konsa négationfonksyon inhibitor li sou TRPM3. Ki baze sou benefis yorapòte pa pasyan sou yosentòm, dòz ki ba NTX (LDN, 3.0–5. 0 mg/jou) tretman sanble ofri kèk benefis potansyèlSigjere ke efè li ka vize nan direksyon patomekanis ME/CFS. Kòm pa gen okenn literati ki konfimeefikasite anan LDN pou pasyan ME/CFSan vitro, etid sa a envestige potansyèl efè terapetik LDN nan pasyan ME / CFS. TRPM3aktivite chanèl ion yo te mezire apre modulasyon ak silfat Pregnenolone (PregS) ak okenn nanSelil NK sou 9 pasyan ME/CFS ki pran LDN ak 9 ki gen laj ak sèkskontwòl ki an sante lè l sèvi avèk teknik patch-clamp nan selil antye. Nou rapòte ke ME/CFS pasyan yopran LDN te retabli TRPM3-tankou kouran iyonik nan selil NK yo. Ti kouran iyonik ak yontipik TRPM3-tankou redresman deyòyo te mezire apre aplikasyon PregS, aTRPM3-agonist, nan selil NK ki soti nan pasyan ki pran LDN. Anplis de sa, PregS-evoke ionikkouran nan TRPM3 te siyifikativmanmodile pa okenn nan, yon antagonis TRPM3-,nan selil NK ki soti nan pasyan ME/CFS k ap pran LDN. Done sa yo sipòte ipotèz keLDN ka gen potansyèl kòm yon tretman pou ME / CFS pa karakterize kache a mekanis regilasyon nan tretman LDN ki enplike TRPM3 ak reseptè opioid nan NKselil yo. Finalman, etid sa a ka sèvi pou repurpose nan dwòg commercialisés, osi byen ke sipòapwobasyon etid klinik randomized potentiels sou wòl ak dòz NTX nantrete pasyan ME/CFS.

Mo kle:ti dòz cistanche, pasan reseptè potansyèl melastatin 3, kalsyòm, reseptè opioid, myalgicansefalomielit/sendwòm fatig kwonik, selil asasen natirèl, tout-selil patch-klanp elektwofizyoloji

ENTWODIKSYON

Ansefalomyelit Myalgic/Sendwòm Fatig Kwonik(ME/CFS) se yon kondisyon grav multisistemik karakterize papèsistan feblès fatig akonpaye pa yon seri desentòm enfimite ki gen ladan malèz apre egzèsis, dòmimalfonksyònman, doulè toupatou, osi byen ke nero-kognitif,otonòm, kadyovaskilè, neroendokrin ak iminitèmanifestasyon (1, 2). Gen diferan severite ME/CFS(lejè jiska trè grav) (3), kote enpòtanak konsistanmalfonksyònman iminitè ak anomali nan asasen natirèl (NK)fonksyon selil yo te rapòte selon severite (4). San yo payon tès dyagnostik etabli klinik, dyagnostik se konplèks akenpresif. Dyagnostik kounye a depann sou diferan sentòm ki baze soudefinisyon ka yo, ke yo rekonèt kòm kritè konsansis Kanadyen an(CCC, 2003) ak Kritè Ka Entènasyonal (2011), kiadrese karakteristik klinik ME/CFS (2, 5, 6). Laetyoloji ak espesifikfizyopatoloji nan kondisyon an, kiafekte 17 a 24 milyon moun atravè lemond (7), rete enkoni.ME/CFS potansyèlman devlope akòz andikap nanTransient Receptor Potential (TRP) kasyon ki pa selektifchanèl ki te koze pa swa faktè jenetik oswa akeri (8–13). Etid anvan yo sijere enpòtans TRP Melastatin 3(TRPM3), yon kalsyòm lajman eksprime (Ca2 plis)-pèmeyabnonselective cation channel, nan fizyopatoloji ME/CFS(8–10). Dènyèman, endepandan envestigasyon elektwofizyolojikdemontre yon pèt-of-fonksyon nan TRPM3 chanèl ion apreeksitasyon ak de pisan TRPM3-agonist, pregnenolonesilfat (PregS) ak nifedipine, ak anpèchman ak yon selektifak pisan blocker, deoxybezoin ononetin nan, nan selil NK soti nantwa diferan kowòt pasyan ME/CFS (11–13). TRPM3 te deja idantifyekòm yon chimyo- akchanèl nociceptor thermosensitive nan somatosensory lasistèm epi li enplike nan deteksyon an nan chalè danjere ak enflamatwachalè hyperalgesia osi byen ke nan transmisyon doulè(14). Literati ki sot pase yo sijere ke chemen siyal yoki asosye ak aktivasyon sèten G-pwoteyin makonnenreseptè yo (GPCR), yo rele reseptè opioid, ka anpeche TRPM3aktivite chanèl ion pa lyezon dirèk nan Gbgsou-inite nantrimerik G-pwoteyin nan kanal iyon an (15–18). Fizyolojik,reseptè opioid yo aktive pa peptides opioid andojèn yomodile mekanis doulè ak enflamatwachemen (19). Dwòg opioid oswa opiate pwodui tou de analgesi akefè segondè endezirab lè yo tache ak menm GPCR yo (19). Prèv endike ke reseptè opioid yo pa sèlman eksprimepa sistèm nève santral la (CNS), men yo lajman distribiyesou tisi ak sistèm ògàn deyò CNS la, tankou laselil iminitè yo (20). Aktivasyon reseptè opioid lekosit yomennen nan sekresyon nan peptides opioid andojèn, kiimedyatman aktive reseptè opioid newòn ak soulajedoulè (21). Opioid yo te montre tou yo gen imunosuppressiveefè sou sistèm iminitè natirèl ak adaptatif (22). MWEN/Patoloji CFS ka konsidere kòm yon maladi chanèl ion oswakanalopati (8–13) osi byen ke yon malfonksyònman iminitèsendwòm ak maladi newolojik (23, 24). Kidonk, li enpòtan anpilpou mennen ankèt sou mekanis regilasyon ki kache nanTRPM3-entèraksyon reseptè opioid nan selil NK ki soti nan ME/CFSpasyan yo pi byen konprann patojèn nan.Dekouvèt TRPM3 kòm yon chanèl nociceptorsibstansyèlman vize pa sèten reseptè opioid, osi byen ke li yoenplikasyon nan Ca2 plis-depandan fonksyon iminitè selil NKsijere ke kanal iyon TRPM3 ka pharmacologicallyvize pou trete ME/CFS. Naltrexone idroklorid (NTX) se yonantagonist opioid ki dire lontan espesyalmanvize mu-opioid lareseptè (MOR) epi, nan yon pi piti limit, delta-opioid lareseptè (dOSWA) (25, 26). Liaison NTX soumORs nyefonksyon inhibition reseptè opioid sa yo sou TRPM3 (15, 17, 18, 26). Nou te deja rapòte saan vitrotretmannan selil NK ki soti nan pasyan ME/CFS ak NTX pou 24hrs, retabliaktivite chanèl ion TRPM3 (13). Retablisman TRPM3 ionaktivite chanèl nan vire re-etabli Ca ki apwopriye a2 plissiyal akper seSelil NK' deklanchman ak fonksyon efèktè(13). NTX se souvan itilize nan tretman an nan opioid akdepandans alkòl nan yon dòz 50-100 mg/jou (25). Nan wodòz, NTX te panse yo bloke santiman yo efori nan beta-andorfinki patisipe nan sikui rekonpans natirèl akSe poutèt sa ka kenbe dejwe (27). Yon dòz ki ba (3.0–5.0 mg/jou,dòz ki ba NTX, LDN) parèt gen yon efè opoze,amelyore efè andorfin pou diminye doulè ak ranfòseplezi (28). Sa a se kwègen enpòtans nan maladitankou ME/CFS, kote ensifizansekresyon andojènpeptides opioid afekte repons iminitè oswa kontwòl doulè (29, 30), oswa liberasyon an nan pro-enflamatwasitokin (25, 31). Yon resanetid rapòte ke LDN an sekirite epi efikas pou soulaje ME/CFSsentòm yo pa yon egzamen retrospektiv nan pasyan klinik ladosye 218 pasyan ME/CFS yo te administre LDN (27). Menm sinouvo prèv endike ke LDN ka amelyore fonksyon chak jou akkalite lavi nan pasyan ME/CFS, pi lwenan vitroankèt sebezwen konprann mekanis regilasyon ki kache yoki enplike TRPM3 ak reseptè opioid nan selil NK pou edekonprann patomekanis ME/CFS epi idantifyeobjektif terapetik.Etid sa a prezan envestige potansyèl efè terapetiknan LDN nan pasyan ME/CFS pa restore kanal iyon TRPM3fonksyone nan selil NK lè l sèvi avèk teknik patch-clamp selil antye.Rezilta nou yo endike ke pasyan ME/CFS ki pran LDN genyenretabli TRPM3-tankou kouran iyonik nan selil NK yo. Retablisman nanFonksyon TRPM3 oblije ankouraje Ca2 plisrenovasyon siyalnan selil NK akper seAktivasyon selil NK ak fonksyon efèktè.Sa a se premye aetid pou rapòte efikasitenan LDN pou ME/CFSpasyan yoan vitro, Se poutèt sa konfimepotansyèl li pou itilize kòm yontretman pou maladi a.

Klike la a pou w konnen plis enfòmasyon sou fonksyon anti-fatig cistanche

MATERYÈL AK METÒDRekritman Patisipan

Nèf pasyan ME/CFS ak nèf laj ak sèks ki an santekontwòl (HC) yo te rekrite lè l sèvi avèk Sant Nasyonal pouNeuroimmunologie ak Maladi Emerging (NCNED) pasyanbaz done ant septanm 2019 ak fevriye 2021.Patisipan yo te gen laj ant 18 ak 60 ane. Tout ME/CFSpasyan yo te deja resevwa yon konfimedyagnostik medikalepi yo te tcheke avèk yon kesyonè konplè sou entènètkorespondan ak Sant pou Kontwòl Maladi akDefinisyon ka Prevansyon (CDC), CCC ak ICC. Tout nèf ME/Pasyan CFS yo te definipa CCC. Tout nèf pasyan ME/CFSyo te rekrite pa NCNED jan yo te deja kòmanse LDNtretman (3.0–5.0 mg/jou) pou omwen 4 semèn kòm yon pati nan yoplan jesyon apre preskripsyon pa doktè jeneralis yo.HC pa rapòte okenn ensidans nan fatig epi li te an bon santesan prèv maladi. Patisipan yo te eskli nan sa aetidye si yo te ansent oswa bay tete, oswa rapòte aistwa anvan fimen, abi alkòl oswa maladi kwonik(pa egzanp, maladi otoiminitè, maladi kadyovaskilè,dyabèt, sendwòm metabolik, maladi tiwoyid, malfezans,lensomni, fatig kwonik, ak prensipal twoub sikolojik)oswa yo te obèz (IMCPi gran pase oswa egal a30). Okenn patisipan pa rapòte itilizasyon opioidoswa nenpòt lòt anafèv nan 3 mwa anvan yo osi byen keajan famasi ki enfliyanse dirèkteman oswa endirèkteman TRPM3 oswa Ca2 plissiyal. Patisipan yo te bay laopsyon pou sispann nenpòt konflimedikaman pou yon minimòm de 14jou anvan bay san ak apwobasyon doktè yo.Tout patisipan yo te ranpli yon kesyonè sou entènèt pou baybackground sosyodemografik, istwa medikal, medikaman, akistwa sentòm pou pasyan ME/CFS (Tablo 1). 36-atik lasondaj sante kout fòm (SF-36) ak Òganizasyon Mondyal Lasante(WHO) Yo te itilize Orè Evalyasyon Enfimite (DAS).detèmine nivo andikap ak kalite lavi (Tablo 2) (32, 33). Finalman, pasyan ME/CFS yo te mande pou pwòp tèt ou-rapòte gravite a nansentòm anvan ak apre w fin pran LDN (Tablo 3). Sa aGriffith te apwouve ankèt laInivèsite imenKomite Etik rechèch (GU2019/1005) ak Gold CoastKomite Etik rechèch Imèn Lopital Inivèsite(HREC/2019/QGC/56469).

Selil mononukleyè san periferikIzolasyon ak izolasyon selil asasen natirèl

Yo te kolekte yon total de 85 ml san antyetib ethylenediaminetetraacetic asid (EDTA).viavenepuncturepa yon kalifyephlebotomist soti nan chak patisipan ant 8:30 amak 10:30 am nan lokal koleksyon yo enkli GriffithInivèsite,Royal Brisbane ak Fi's Lopital, Lopital Robina, SunshineCoast University Hospital, Calvary John James Hospital,

Royal Melbourne Hospital, Ostrali. Woutin analiz plen sante fèt nan kat èdtan apre koleksyon globil woujkonte, konte globil blan ak konte selil granulosit pou chakpatisipan nan Gold Cost University Hospital oswa Royal MelbourneLopital, Ostrali.Echantiyon yo te bay laboratwa a ak de-idantifyelè l sèvi avèk yonkòd inik pa yon pèseptè san endepandan. San periferikselil mononikleyè (PBMCs) yo te izole nan 80 ml nan antyesan pa santrifuje sou yon mwayen gradyan dansite (FicollPaque Premium; GE Healthcare, Upsala, Syèd) jan anvandekri (34, 35). PBMC yo te tache ak ble tripan(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) pou detèmine kantite selil akviabilite selilè. PBMC yo te ajiste afifinal konsantrasyon nan5x107 selil/ml pou izolasyon selil NK.Selil NK yo te izole pa seleksyon imunomayetik lè l sèvi avèk yonEasySep Negative Human NK Cell Isolation Kit (Selil souchTechnologies, Vancouver, BC, Kanada). NK selil pou pirifye te detèmine lè l sèvi avèkflflow sitometri. Selil NK yo te enkubepou 20 minit nan tanperati chanm nan prezans CD56FITC ({{0}}.25µg/5µl) ak CD3 PE Cy7 (0.25µg/20µl) monoklonalantikò (BD Bioscience, San Jose, CA, USA) kòm dejadekri (10). 7-amino-aktinomisin (7-AAD) (2.5µl/tès) (BDBioscience, San Jose, CA, USA) te itilize pou detèmine selilviabilite. Selil yo te lave ak resuspend nan 200ml nantach tanpon (BD Bioscience, New Jersey, USA) ak akerinan 10,000 evènman lè l sèvi avèk LSRFortessa X-20 (BD Biosciences,San Diego, CA, USA). Sèvi ak pi devan ak bò gaye, lapopilasyon lenfosit yo te fèmen pandan y ap jwenn echantiyon an.Lè sa a, yo te idantifye popilasyon selil NK lakòm CD3− CD56plisselil yo.

Anrejistreman elektwofizyoloji antye-selil

Anrejistreman elektwofizyolojik yo te fèt ak borosilikatelektwòd kapilè vè ak yon dyamèt deyò 1.5 mm ak ananndan dyamèt 0.86 mm (Harvard Apparatus, Holliston, MA,USA). Pipèt rezistans lè ranpliak solisyon pipèt te 8-12 MW. Pipèt yo te monte sou yon sèn nan tèt CV203BU(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) konekte ak yon 3-fasonmanipilatè koryas ak yon mikwo-manipulateur (Narishige, Tokyo,Japon). Siyal elektrik yo te anplifyeepi anrejistre lè l sèvi avèk yonAxopatch 200B anplifikatèak lojisyèl PClamp 10.7 (MolecularAparèy, Sunnyvale, CA, USA). Done yo te filtrenan 5 kHz akechantiyon dijital nan 10 kHzviayon Digidata 1440A analog tokonvètisè dijital (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Lapwotokòl vòltaj-ranp te yon etap soti nan yon potansyèl kenbe nan plis 10mV pou−90 mV, ki te swiv pa yon ranp 0.1 s pou plis 110 mV, anvanretounen nan plis 10 mV (repete chak 10 s). Junction likid lapotansyèl ant pipèt la ak solisyon benyen (−10 mV) tekorije. Yon eleman koule aktyèl pa te soustraksyon nankouran yo anrejistre. Elektwòd te ranpliak entraselilè asolisyon pipèt ki gen 30 mM CsCl, 2 mM MgCl2, 110 mML-Aspartic asid, 1 mM EGTA, 10 mM HEPES, 4 mM ATP,0.1 mM GTP, ajiste pH a 7.2 ak CsOH ak osmolalite nan

290 mOsm/L ak D-mannitol. Solisyon pipèt la te filtre lè l sèvi avèk yon 0.22mm filtre manbràn(Sigma-Aldrich, St. Louise, MO,USA), divize an aliquot ak estoke nan−20 degre. Solisyon benyengenyen: 130 mM NaCl, 10 mM CsCl, 1 mM MgCl2, 1.5 mMCaCl22H2O, 10 mM HEPES, ajiste pH a 7.4 ak NaOH akosmolalite 300 mOsm/L ak D-glikoz. Tout reyaktif yo teachte nan men Sigma-Aldrich, eksepte pou ATP ak GTP sayo te achte nan men Sapphire Bioscience. TRPM3 iyonikkouran sou selil NK yo te ankouraje lè yo ajoute 100mM PregS(Tocris Bioscience, Bristol, UK) nan solisyon an benyen, tandiskeKouran TRPM3 ki pwovoke PregS yo te bloke lè yo ajoute 10mM ononetin (Tocris Bioscience, Bristol, UK). Pou chak patisipan,Yo te fè 10 anrejistreman diferan. Pakonsekan, N refere a kantitepatisipan yo nan chak gwoup (ME/CFS pasyan oswa HC) ak n, nan lakantite lekti oswa gwosè echantiyon. Tout mezi yo tefèt nan tanperati chanm. Otè yo retire aposiblite pou klori aktyèl patisipasyon nan TRPM3evalyasyon lè l sèvi avèk L-Aspartic asid nan pipèt entraselilè asolisyon. Selil ki gen kouran enstab tou te esklisoti nan analiz la.Analiz estatistikPopilasyon lenfosit yo te idantifyepa parèyitilize sitometripi devan ak bò gaye simityè pwen. Pite CD3- CD56plislenfosit yo te detèmine. Done Cytometry te ekspòte soti nanFacsDiva v8.1 ak analize lè l sèvi avèk SPSS v24 (IBM Corp, Version24, Armonk, NY, USA) ak GraphPad Prism v7 (GraphPadSoftware Inc., Version 7, La Jolla, CA, USA). Elektwofizyolojikdone yo te analize lè l sèvi avèk lojisyèl pCLAMP 10.7 (MolecularAparèy, Sunnyvale, CA, USA). Orijin 2018 (OriginLabCorporation, Northampton, MA, USA) ak GraphPad Prismv7 (GraphPad Software Inc., Version 7, La Jolla, CA, USA) teitilize pou analiz estatistik ak prezantasyon done. Vizyèl akmetòd kalkile yo te itilize pou detèmine nòmal la nandone endepandan.

Espesyalman, trase istogram ak laYo te itilize tès nòmal Shapiro-Wilk, skewness ak kurtosisdetèmine distribisyon done ak nòmal. Tou depansou nòmal, yo te fè yon konparezon estatistik lè l sèvi avèk latès endepandan nonparametric Mann-Whitney U, oswaendepandan parametrik t-tès. Fishers egzat tès te itilize poudetèmine sansiblite selil NK nan ononetin. Siyifikasyonte metenan p<0.05 and="" the="" data="" are="" presented="" as="" mean="" ±="" sem="" unless="">otreman deklare.REZILTAPatisipan Karakteristik akParamèt sanDizwit patisipan laj ak sèks matche yo te enkli pouankèt sa a. Done demografik pou pasyan yorezime nanTablo 1. Pa te gen okenn enpòtandiferans nanlaj oswa sèks ant pasyan ME/CFS ak HC. SF-36 akYo te itilize sondaj WHODAS pou detèmine sante patisipan yoki gen rapò ak kalite lavi (Tablo 2) (36, 37). 

Kòm espere, te gen yon siyifikatifdiferans nan nòt SF-36 ak WHODAS antPasyan ME/CFS ak HC. Anplis, konte san konplèparamèt yo te mezire pou chak patisipan an sante akPasyan ME/CFS (Tablo 2). Pandan ke nou rapòte yon enpòtan diferans pou eozinofil ant patisipan ki an sante ak ME/Pasyan CFS, tout rezilta yo te nan espesifye areferansranje jan Gold Coast University Hospital bayInite Patoloji, laboratwa akredite NATA. Pa gen siyifikatif diferans yo te rapòte nan lòt paramèt. Finalman, ME/CFSpasyan yo rapòte amelyorasyon nan panse ki gen pwoblèm,konsantrasyon ak surcharge kognitif osi byen ke lòt iminitèsentòm latwoublay (gòj fè mal, lenfatik elaji oswa sansibnœuds, ak sansiblite nan rim sèvo/grip) apre tretman akLDN (Tablo 3), jan sa dekri anvan (27, 38). 

Pite Selil Asasen Natirèl

selil NKpite (CD3- /CD56plis) te 92.42 pousan ± 1.849 pou HC ak82.20 pousan ± 9.409 pou pasyan ME/CFS k ap pran LDN jan yo detèminepaflflow sitometri (Figi 1A). Pa te gen okenn enpòtan diferans nan pite selil NK nan pasyan ME / CFS k ap pran LDNkonpare ak HC (Figi 1B).

TRPM3 Ion Channel Aktivite AprePregnenolone Stimulation nan selil NKSoti nan Pasyan ME/CFS k ap pran LDNKonpare ak selil NK ki soti nan HC

Aktivite chanèl iyon TRPM3 te anrejistre nan NK moun izoleselil ki soti nan pasyan ME/CFS k ap pran LDN (3.0–5.0 mg/jou) akkonpare ak selil NK imen izole ki soti nan laj ak sèks matcheHC, lè l sèvi avèk tout-selil patch-clamp teknik la.Endogenous TRPM3 ion chanèl fonksyon te byen vit akaktive revèsib pa aplikasyon 100mM PregS, aesteroyid newòn. Stimulasyon ak PregS pèmèt mezinan yon ti kouran rektifye deyò anba vòltaj-klanpkondisyon ak obsèvasyon nan yon fòm tipik nan TRPM3 aktyèl-vòltaj larelasyon (I–V) (Figi 2). Se poutèt sa, noumezire yon ti kouran iyonik ak yon tipik TRPM3-tankouredresman deyònan selil NK izole nan HC apre aadisyon nan PregS (Figi 2A, B). Enteresan, PregSaplikasyon nan selil NK nan pasyan ME/CFS k ap pran LDNimite ogmantasyon PregS-induit nan selil NK soti nan HC(Figi 2C, D). Kidonk, eksitasyon PregS pwovoke yon ogmantasyonnan deyò a rektifyeanplitid aktyèl nan selil NK soti nanPasyan ME/CFS pran LDN nan menm nivo ak selil NK soti nanHC (Figi 2E). Anplis, kouran PregS-evoke yo prezante yontipikI–V nan TRPM3 (Figi 2D). Done yo sijere ke ME/Pasyan CFS k ap pran LDN pa gen yon pwoblèm ankòAktivite chanèl TRPM3 jan yo te rapòte deja (11–13), epiSe poutèt sa LDN ka gen yon potansyèl benefis terapetikpoupatoloji a.

Modulation nan PregS- Evoked CurrentsAvèk Ononetin nan selil NK soti nan ME / CFSPasyan k ap pran LDN konpare ak NKSelil ki soti nan HC

PregS-pwovoke Ca2 plis-afluak kouran iyonik atravè TRPM3chanèl ion yo ka efektivman anpeche pa yon konpoze natirèl,deoxybezoin ononetin (39). Se poutèt sa, konfimesa TRPM3aktivite patisipe nan PregS-evoke kouran iyonik nan selil NK, noupwochen itilize 10mM ononetin pou modile chanèl ion TRPM3aktivite (Figi 3). Jan yo montre deja (11–13), iyonik lakouran evoke pa aplikasyon an nan PregS te efektivmaninibit pa aplikasyon an similtane nan okenn nan nan izoleSelil NK ki soti nan HC (Figi 3A–C). Anplis, laI–V nanOnonetin kouran sansib te deyò-rektifyeak tipikpou TRPM3 (Figi 3B). Enteresan, kouran iyonik yo evokeby PregS aplikasyon yo te tou efektivman inibit paaplikasyon similtane nan 10mM ononetin nan izole NKselil ki soti nan pasyan ME/CFS k ap pran LDN (Figi 3D–G). Vreman vre, TRPM3-depandan aktyèl iyonik te dejarapòte yo dwe rezistan a ononetin nan selil NK izole soti nanPasyan ME/CFS (11–13). Sepandan, selil NK ki soti nan ME/CFSpasyan ki pran LDN yo sansib a ononetin nan menm seri akòm selil NK ki soti nan HC (Figi 3G). Anplis, laI–V nan ononetinkouran sansib yo te rektifye deyòak tipik pou TRPM3

(Figi 3E). Finalman,Figi 3Hrapò TRPM3 aktyèlanplitid apre eksitasyon PregS ak modulasyon ononetinnan gwoup HC ak ME/CFS pran LDN ak sèlman adosye sansib a ononetin yo te enkli. Yon enpòtan diminisyon anplitid aktyèl TRPM3 te rapòte apremodulasyon ak ononetin nan tou de pasyan ME / CFS pranGwoup LDN (p{0}}.0336) ak HC (p=0.0205). Graf sa a konfimeTRPM3 chanèl ion fonksyone menm jan an nan ME / CFSpasyan ki pran LDN an konparezon ak HC kòm menm kouran anyo rapòte ranje anplitid (Figi 3H). Kolektivman, sa yorezilta konfimeke pasyan ME/CFS k ap pran LDN pa gen yonandikape aktivite chanèl ion TRPM3, ki rapòte yo dwekarakteristik maladi a (11–13). An konklizyon, tretmanak LDN pèmèt retabli fonksyon chanèl ion TRPM3 nan ME/Pasyan CFS epi yo gen, Se poutèt sa, yon efè potansyèl terapetik.

DISKISYON

Nan etid la prezan, nou te itilize tout-selil patch-clamp lateknik pou mezire kanal iyon TRPM3 andojènfonksyon nan selil NK ki soti nan pasyan ME/CFS k ap pran LDN. Nourapò pou premye atan pasyan ME/CFS k ap pran LDN genyenretabli TRPM3-tankou kouran iyonik nan selil NK yo. Vreman vre, laaplikasyon PregS pèmèt mezi ti iyonikkouran ak yon TRPM tipik3-tankou redresman deyònan NKselil ki soti nan pasyan ki pran LDN. Anplis de sa, PregS-evoke ionikkouran nan TRPM3 te siyifikativmanmodule paononetin nan selil NK ki soti nan pasyan ME/CFS k ap pran LDN kòmmenm jan an dekri nan HC. Rezilta sa yo refleterezilta anvan nou yorapòte yon restorasyon fonksyon chanèl ion TRPM3nan selil NK soti nan pasyan ME / CFS aprean vitrotretman akNTX (13). Rezilta sa yo tou konsistan avèk anvan nou anenvestigasyon ki sijere ME/CFS ka konsidere kòm yonchannelopathy pwovoke pa TRPM3 pèt-of-fonksyon akkarakterize pa yon diminisyon nan kouran iyonik PregS-induitosi byen ke yon rezistans nan ononetin nan selil NK soti nan ME / CFSpasyan (8–13). Pèt fonksyon TRPM3 a ka responsabpou andikape Ca2 plissiyal ak Ca2 plis- fonksyon selilè medyatè,ki gen ladan fonksyon iminitè selil NK (11–13). Etid roman nou an se premye a an vitroetid konfime efikasite aak benefis terapetiknan LDN pou pasyan ME/CFSpa karakterize mekanis regilasyon ki kache nan LDNtretman ki enplike TRPM3 ak entèraksyon reseptè opioid lanan selil NK. LDN te deja rapòte ke yo dwe benefisyepoutretman nan yon varyete maladi, tankou paralezit miltip,Crohn'maladi a, fibromyaljya, kansè, enflamatwaentestenmaladi ak ME/CFS (40–44). Plis espesyalman, nanetid preliminè ki fèt pa Polo et al. sou sekirite a akefikasite nan tretman LDN, 73.9 pousan nan ME / CFS pasyan yorapòte yon repons pozitif nan tretman (27). Pifò pasyan yoki gen eksperyans amelyore vijilans/vijilans ak amelyore fizikak pèfòmans mantal. Gen kèk pasyan tou rapòte mwens doulèak lafyèv, ki montre ke LDN ka montre kèk potansyèl pousoulaje yon pakèt sentòm ME/CFS (27). Menm jan an tou,Bolton and al. dekri twa rapò ka konpile pa ME/CFSpasyan ki pran LDN epi rapòte seri repons yo,soti nan chanje lavi nan yon rediksyon nan kèk sentòm sèlman (38).

Ki baze sou benefis yopasyan rapòte sou sentòm yo,Tretman LDN ka itilize kòm yon tretman potansyèl ak pouvwavize patomekanis ME/CFS.Patojèn nan ME / CFS se enkoni, men ion nòmalchanèl ak plis espesyalmanfonksyon TRPM3 gen pwoblèmdènyèman parèt kòm yon karakteristik karakteristik maladi a (8–13). Nou te deja rapòte TRPM3 pèt-of-fonksyon apremodulasyon ak pisan TRPM3-agonis ak antagonis nan NKselil ki soti nan twa gwoup diferan pasyan ME/CFS (11–13). TRPM3 te dekri kòm yon aktè santral nan Ca2 plis- chemen siyal depandan yo, nan tou de eksitan ak ki pa eksitanselil, kote Ca2 plissiyal kondwi diferan selilè apwosesis (45). Papanikolaou et al, idantifyeTRPM3 kòm yoneleman enpòtan nan'Ca2 plisbwat zouti' ki fonde magazen ki opereCa2 plisantre ak dirab nan Ca2 plissiyal nanCNS matyè blan glia (46). Menm jan an tou, TRPM3 te montre pou dirijenan yon ogmantasyon de Ca2 plis foulnan selil beta pankreyas ki lakòzliberasyon ensilin ki vin apre (47). Chak kalite selil prezante yon iniksiyal fenotip ki kapab delivre byen reglemanteespas tanporèl Ca2 plissiyal yo modile fonksyon patikilye li yo(48). Kontinwe, nenpòt disregulations sibtil nan Ca2 plissiyal yo kagen anpil enpak sou fonksyon selilè yo epi lakòz maladi (48, 49). Selil NK yo mande tou Ca2 plispou efikaseksitasyon akfonksyon ki gen ladan sitotoksisite selil NK (50–53). KonpwomiNK selil cytotoxik fonksyon se yon byen dokimante ak konsistankarakteristik ME/CFS (54). Se poutèt sa, TRPM3 pèt-of-fonksyon kakontribye nan sentòm ME/CFS pa afekteCa2 plissiyal ak Ca2 plis-medyatè fonksyon selil, ki gen ladan NKfonksyon iminitè selilè yo.Yon fonksyon ki byen karakterize TRPM3 nan literati a se li yowòl nan deteksyon an nan chalè danjere (doulè egi) osi byen ke enflamatwahyperalgesia (doulè egi ak kwonik) (14). Opioid andojèn yo sentèzan vivopou moduler larepons fizyolojik analgesic nan enflamatwaepidoulè neropatik. Opioid andojèn ak ekzojèn mare akOR yo, yo jwenn nan periferik la, nan presinaptik ak postsinaptiksit nan kòn dorsal la nan mwal epinyè a, ak nan tij nan sèvo,talamus, ak cortical, nan sa ki konstitye doulè nan montesistèm transmisyon (55). Etid resan yo te rapòte sareseptè opioid yo eksprime tou pa selil iminitè yo fèiminitè selil-medyatè analgesi opioid pa pwodwi andojènpeptides opioid, ki enplike Gai/o–Gbg–fosfolipaz C(PLC)–inositol 1,4,5-reseptè trifosfat (IP3R)– entraselilèCa2 plischemen. Peptid opioid lage yo imedyatman aktivereseptè opioid newòn periferik yo ak soulaje doulè (21). Opioid yo te montre tou dirèkteman modile fonksyon yo nanlenfosit ak lòt selil ki enplike nan defans lame akiminite ki lakòz efè imunosuppressive (56, 57). Plis espesyalman, aktivasyon OSWA pa alkaloid opioid akpeptides tankou morfin ak peptides andojèn yo,ki gen ladan beta-andorfin ak peptides dynorphin yo, ki mennen nan adiminye kantite makrofaj, redwi lekositpwopagasyon ak migrasyon nan enflamatwasit, diminyeaktivite fagositotik nan makrofaj, diminye chemotaxis akpwodiksyon superoksid pa netrofil ak makrofaj,apoptoz akselere nan macrophages, febli mikrobyolojikpwoteksyon, ak adezyon redwi nan lekosit ak andotelyalselil (58). Lòt efè negatif yo te dekri tou nanrelasyon ak selil mast, selil dendritik, ak selil NK ak aredwi sitotoksisite selil NK ak pwodiksyon sitokin (22, 56, 59, 60). Selil iminitè yo, glia, ak newòn yo fòme kidonk yonrezo entegre ki kowòdone repons iminitè akmodile eksitabilite nan chemen doulè (61). Vize areseptè opioid sou selil iminitè yo ka lakòz chanjman nanrepons iminitè pou ankouraje rezolisyon an nanflflamasyon kòmbyen ke modulation nan doulè nan ME / CFS pasyan yo.Enteresan, molekil ki mare ak aktive opioidreseptè yo anpildiminye doulè ki depann de TRPM3-. Nanrepons a deklanchman egi pa agonist, reseptè opioidkoup pou Gi/o pwoteyin, ki disoye nan Gai/o ak Gbgsibinite pou kominike avèk efèktè entraselilè yo (62). TRPM3aktivite a fòtman anpeche pa aktivasyon µOR atravèentèraksyon dirèk ak Gbgkòm TRPM3-depandan Ca2 plisantre yo fòtman ak revèsib inibit lè selil lamanbràn seflflushed ak pirifye Gbg(15–18). NTX se yon ki dire lontanantagonist opioid espesyalmananpechemOSWA, konsaanile fonksyon an inhibition nan reseptè opioid sa a souTRPM3 (22, 26). Nan etid anvan nou an, nou te rapòte saan vitrotretman ak NTX retabli chanèl ion TRPM3aktivite nan selil NK izole nan ME/CFS (13). Menm jan an tou, nanetid aktyèl la, selil NK izole nan pasyan pran LDN te fèpa montre okenn aktivite chanèl ion TRPM3 ki gen pwoblèm. LDNtretman nan pasyan ME / CFS parèt retabli TRPM3 ionfonksyon chanèl nan selil NK, sa ki lakòz Ca2 plissiyal yorenovasyon pou kontribye nan restorasyon entegrite aak estabilite nan selil NK espesifiksistèm siyal (10–13). Enteresan, li te rapòte ke efè a antagonis nanNTX soumOSWA tou deranje règleman an fidbak negatif soudOSWA, kidonk ogmantedOSWA fonksyon.

Amelyorasyon nandOSWAaktivite ankouraje cytotoxicity selil NK an repons a beta-andorfin an vitrosou splenosit rat, sijere potansyèl laitilizasyon NTX nan tretman defisyans iminitè (63). Mekanis ki kache nan LDN's efikasitepou fatig,Crohn'maladi a, fibromyaljya, ak esklewoz miltip, Se poutèt sa,enplike bloke tanzantan nan reseptè opioid ki te swiv paCa2 plis depandan pwodiksyonak upregulation nan andojènopioid. Ludwig et al. rapòte ke serom [Met5 ]-enkephalinnivo yo te pi ba nan moun ki gen paralezi miltip parapò akpasyan ki pa esklewoz miltip, ak LDN retabli nivo yo.Menm jan an tou, nan sourit eksperimantal ansefalomyélit otoiminitè,[Te rankontre5 Nivo ]-enkephalin yo te deprime anvan aparans lanan maladi klinik epi yo te retabli ak tretman LDN(28). Se poutèt sa, li sanble ke rezilta tretman LDN nan laamelyorasyon nan efè analgesic yo epi yo ka enpòtan nanME/CFS, kote ensifizansekresyon nan peptides opioid afekterepons iminitè oswa kontwòl doulè (29, 30), oswa liberasyon an nan proinflammatorysitokin (25, 31). Vreman vre, redwi beta-andorfinyo te rapòte konsantrasyon nan ME/CFSpasyan ki soufri disregulation nan thermoregulatoryrepons ak doulè jeneralize grav oswa ki dire lontan (64). An konklizyon, etid sa a pou premye atan evalye ak idantifyeefè LDN sou fonksyon chanèl ion TRPM3 nanSelil NK nan pasyan ME/CFS. Etid roman sa a rapòte larestorasyon ki kache nan kanal reseptè opioid TRPM3-entèraksyon nan selil NK nan pasyan ME/CFS k ap pran LDN.Anplis, distribisyon lajè TRPM3 chanèl ion nan lakò sijere ke fonksyon konpwomèt yo ka kontribye nansiy ak sentòm ME/CFS ak Se poutèt sa tretman akLDN ka gen yon wòl terapetik. Finalman, etid sa a sèvi pousipòte planifikasyon ak apwobasyon potansyèl randomizedetid klinik sou wòl ak dòz NTX nan trete ME/Pasyan CFS.