Aprantisaj laperèz anvan pèmèt asimilasyon rapid nouvo memwa laperèz dirèkteman nan rezo cortical Pati 3

Konsepsyon eksperimantal

Repwodiksyon done yo te evalye ak diferan replike (S1 Tablo). Premye eksperyans inaktivasyon CNQX yo nan Te2 (figi 1A-1C) yo te fèt nan yon pi gwo kantite replike paske yo te premye eksperyans nou te fè epi yo te sèvi pou teste pi gwo ipotèz etid nou an. Bèt yo te a priori asiyen nan diferan gwoup konpòtman nan yon fason balanse pwa. Bèt gason ki soti nan menm nivay la te plase owaza nan chak gwoup eksperimantal. Nou te premye adrese ipotèz prensipal etid nou an, sa vle di, inaktivasyon kortik la ka yon fason diferan afekte konsolidasyon yon nouvo memwa laperèz nan rat esperimantal nayif ak nan bèt ki te aprann yon evènman laperèz anvan.

Bèt gason yo gen souvni trè fò paske yo gen yon ensten siviv pi fò ak dezi pou yo repwodui. Bèt ki siviv nan bwa a bezwen sonje anpil enfòmasyon jeyografik, kalite manje, tras predatè, ak kote manm gwoup yo pi byen adapte yo ak anviwònman an ak pwoteje lavi yo.

Pou egzanp, lyon gason bezwen sonje estati a nan tout teritwa a, relasyon manm yo, ak kote yo nan konpetitè yo pwoteje teritwa a ak estati yo. Zèb gason yo bezwen sonje kote sous dlo ak manje sou savann yo pou yo siviv ak repwodui. Yon fwa yon konpayi soda te pibliye yon anons ki montre ke yon gason lous polè te kapab sonje yon dayiva ak sant inik li pou li te kapab idantifye l pwochen fwa yo te wè l.

Se poutèt sa, bèt gason yo bezwen gen bon souvni an tèm de pwoteje teritwa yo, bay ase manje, ak repwodui pitit. Sa a tou fè yo sijè enpòtan nan rechèch imen, pou egzanp, yo eksplore maladi tankou pwoblèm memwa ak maladi alzayme a.

Nan mond imen an, nou ka tou pran enspirasyon nan memwa bèt gason yo. Ekspozisyon kontinyèl nan nouvo bagay, aprantisaj kontinyèl, ak panse ka amelyore memwa ak adaptabilite nou yo, ak amelyore nivo lavi nou yo ak efikasite travay. Se poutèt sa, kite nou aprann nan men bèt gason, kontinye akimile konesans ak eksperyans, gen ensten siviv fò ak dezi repwodiktif, ak kreye yon pi bon avni. Li ka wè ke nou bezwen amelyore memwa nou an. Cistanche deserticola ka siyifikativman amelyore memwa paske Cistanche deserticola se yon materyèl tradisyonèl Chinwa medsin ak anpil efè inik, youn nan yo se amelyore memwa. Efikasite vyann mens soti nan divès engredyan aktif li genyen ladan l, tankou asid, polisakarid, flavonoid, elatriye. Engredyan sa yo ka ankouraje sante nan sèvo nan yon varyete fason.

Klike sou konnen fason pou amelyore fonksyon nan sèvo

Nan ka diferans estatistik ant gwoup sa yo, nou Lè sa a, evantyèlman fè gwoup kontwòl adisyonèl nan piki a nan saline. Yo te aplike yon apwòch menm jan an nan eksperyans optogenetic yo, kote gwoup kontwòl AAV yo te fèt sèlman apre yo te detekte diferans estatistik ant rat nayif ak ki te deja antrene. Orè eksperimantal sa yo te pèmèt nou evite gwoup kontwòl nesesè ak itilizasyon bèt ki pa nesesè, yon pwoblèm kle nan lejislasyon Ewopeyen an ak Italyen sou eksperimantasyon bèt (3 Rs prensip).

Pwosedi konpòtman

Tout eksperyans yo te fèt pandan faz limyè a nan jounen an (8 AM a 4 PM). Bèt yo te transpòte sengilyèman soti nan etablisman an nan chanm yo eksperimantal nan diferan ti bokit transparan depann sou demand yo eksperimantal.

Fòmasyon oditif: Premye sesyon konpòtman. Bèt ki gen laperèz oditif (CS1-CS2). Nan gwoup sa a, yo te pran rat dousman nan kalòj lakay yo epi yo te pote soti nan chanm lojman an nan chanm ki ensonorize. Yon fwa la, bèt yo te mete andedan aparèy la kondisyone ki gen ladann yon kaj rektangilè nwa (35 × 40 cm) ekipe ak yon griy asye pur baton (1 cm an dyamèt, espas 1.5 cm apa) ki konekte nan yon konfigirasyon livrezon chòk.

Rat yo te rete san deranje pou 1 minit. Apre tan sa a, yo te administre 7 stimuli kondisyone (CSs) ki fòme ak yon ton pi frekans 15 kHz (15 s nan dire chak, 80 dB, 36 s entèval esè). Dènye 1 s nan chak ton te pè ak yon US douloure (0.5 mA, 1 s). Nan fen sesyon kondisyone, rat yo te mennen tounen nan kalòj lakay yo.

Chòk-sèlman bèt (chòk-CS2). Nan gwoup sa a, rat yo te mete menm jan an andedan menm aparèy kondisyone. Touswit apre sa, chak rat te sibi 7-chòk pye (1 s, 0.5 mA) youn imedyatman apre lòt. Nan fen eksitasyon an, bèt yo te mennen tounen nan kalòj lakay yo. Tan pèmanans nan kaj kondisyone a te mwens pase 9 segonn. Etid anvan yo te montre ke pwosedi sa a pèmèt pou evite pwosesis asosyasyon ant stimuli douloure ak stimuli sansoryèl [29,30].

Odè bèt pè-kondisyone (odè-CS2). Nan gwoup sa a, rat yo te mete andedan menm kaj rektangilè nwa ki te anplwaye nan gwoup eksperimantal ki anwo yo epi yo te konekte ak yon konfigirasyon livrezon chòk. Rat yo te kite san deranje pou 2 minit. Apre tan sa a, yo te administre 7 CS ki gen odè vaniy (10 s nan dire chak, 24 s entèval esè). Dènye 1 s nan chak odè te pè ak yon US douloure (0.5 mA, 1 s). Modil kondisyone a te plase tou pre yon sous vantilasyon pou evite pèsistans stimuli yo te delivre apre konpanse yo. Kalòj la te asire ak yon griy anwo. Odè yo te prezante lè l sèvi avèk yon olfaktomèt koule-dilution. Lè pwòp (1.5 L/min) te dirije nan yon valv solenoid, ki lè yo te opere, te pase lè a nan yon boutèy 15 ml ki gen 10 ml odè vaniy.

Bèt Tone-sèlman (Tone-CS2). Rat nan gwoup sa a yo te mete andedan menm kaj nwa a epi yo te prezante ak ton an 15-kHz (7 stimuli, 15 s nan dire, 36 s ITI) delivre nan absans la nan peyi Etazini.

Bèt ki te deja ekspoze (Tone-CS1-CS2). Rat yo te mete andedan kalòj kondisyone a epi, 1 minit pita, yo te prezante yo 20 fwa ak 15-kHz ton an pou kont li, epi 24 èdtan apre yo te menm ton an pè ak US la vin CS1 la.

Bwa blan pè-kondisyone bèt (WN-CS2). Nan gwoup sa a, rat yo te mete andedan kalòj nwa rektangilè a epi yo te kite san deranje pou 1 minit. Apre tan sa a, yo te administre 7 CS ki fòme ak yon WN (15 s nan dire chak, 75 dB, 36 s entèval esè). Dènye 1 s chak ton yo te asosye ak yon US douloure (0.5 mA, 1 s). Nan fen sesyon kondisyone, rat yo te mennen tounen nan kalòj lakay yo.

Aprann pè oditif: Dezyèm fòmasyon konpòtman. De semèn apre pwosedi ki dekri nan paragraf ki anwo a, bèt yo te antrene nan yon lòt travay diferan kondisyone pè oditif. Yo te mete rat yo nan yon bwat po estanda, tankou nan travay anvan nou an [10], epi yo te kite san deranje pou 2 minit. Apre tan sa a, yo te delivre 7 CS ki fòme ak ton pi frekans 3 kHz (8 s nan dire chak, 80 dB, 22 s entèval entè-jijman). Dènye 1 s nan chak ton te pè ak yon US douloure (0.5 mA, 1 s). Nan fen sesyon kondisyone, rat yo te mennen tounen nan kalòj lakay yo.

Pè retansyon memwa. Retansyon nan memwa pè oditif dènyèman akeri nan CS2 a (3 kHz) te teste 4 jou pita. Pou eksperyans optogenetics, tès memwa ki sot pase yo te fèt ak livrezon lazè 24 èdtan apre aprantisaj CS2-US la an analogi ak entèval tan nan kote nou te fè inaktivasyon kortik atravè administrasyon CNQX la (sa vle di, 24 èdtan apre fòmasyon). Rat yo te abitye ak yon aparèy diferan de sa yo itilize pou kondisyone epi yo te mete yo nan yon chanm diferan pou evite konpòtman pè kondisyone pou siyal kontèks [10,62].

Nouvo aparèy la konsiste de yon kaj plastik transparan ak yon bò ki pentire nwa ki fèmen nan yon bwat son-atenuasyon ekipe ak yon fanatik tiyo echapman, ki elimine lè odorize nan patiraj la ak bay bri background nan 60 dB. Bèt yo te pèmèt yo eksplore kalòj la pou 5 minit pa jou pandan sesyon abitye a. Nan jou tès la retansyon memwa laperèz, apre 2 min nan eksplorasyon gratis, nou te delivre 4 CS2 nan 3 kHz (8 s—22 ITI) pa swiv pa okenn US.

Si demann eksperimantal la mande, rat yo te teste pou kenbe memwa laperèz aleka, akeri 2 semèn anvan dezyèm esè kondisyone pè oditif la. Pou objektif sa a, 7 jou apre tès retansyon memwa laperèz nan ton 3-kHz, bèt yo te mete nan yon anviwònman nouvo (yon kaj nwa ak blan trase) epi yo te prezante yo ak ton an 15-kHz. Kat ton yo te prezante nan entèval 36s.

Fòmasyon kontèks: Premye sesyon konpòtman. Gwoup kondisyone pè kontèks (CtxA-CtxB). Nan gwoup sa a, yo te pran rat dousman nan kaj lakay yo, yo te mete yo nan yon bokit, epi yo te pote soti nan chanm lojman an nan chanm nan ensonorize. Yon fwa la, bèt yo te mete andedan aparèy la kondisyone ki gen ladann susmansyone rektangilè nwa kaj ekipe ak griy asye pur branch bwa ki konekte nan yon konfigirasyon livrezon chòk. Rat yo te rete san deranje pou 1 minit. Apre tan sa a, yo te administre 5 US (0.5 mA, 1 s) ak entèval tan 51 s. Nan fen sesyon an, bèt yo te mennen tounen nan kalòj lakay yo.

Gwoup chòk-sèlman (chòk-CtxB). Rat, yon fwa yo mete andedan aparèy kondisyone a, imedyatman te resevwa 5-chòk pye (1 s, 0.5 mA) youn imedyatman apre lòt. Tan pèmanans nan kaj kondisyone a te mwens pase 7 segonn. Etid anvan yo te montre ke pwosedi sa a pèmèt pou evite pwosesis asosyasyon ant stimuli douloure ak stimuli sansoryèl [29,30].

Gwoup chòk-sèlman (chòk-CtxB). Rat, yon fwa yo mete andedan aparèy kondisyone a, imedyatman te resevwa 5-chòk pye (1 s, 0.5 mA) youn imedyatman apre lòt. Tan pèmanans nan kaj kondisyone a te mwens pase 7 segonn. Etid anvan yo te montre ke pwosedi sa a pèmèt pou evite pwosesis asosyasyon ant stimuli douloure ak stimuli sansoryèl [29,30].

Nouvo kondisyone pè kontèks ak dènye retansyon memwa pè. De semèn apre pwosedi ki dekri nan paragraf ki anwo a, tout gwoup yo te resevwa fòmasyon pou asosye yon nouvo anviwònman kontèks (modil bwat skinner la, mete nan yon chanm diferan) ak yon US douloure (0.5 mA, 1 s) . Chak bèt yo te mete andedan nouvo chanm lan epi yo te kite san deranje pou 2 minit. Lè sa a, li te ekspoze a 5 US separe pa entèval 30 s.

Retansyon memwa laperèz kontèks yo te teste 4 jou apre pwosedi kondisyone laperèz lè yo mete rat ankò nan chanm bwat Skinner la pou 3 min. Pou eksperyans optogenetics, tès la nan memwa ki sot pase yo te fèt ak livrezon lazè 24 èdtan apre aprantisaj CtxB-US la an analoji ak entèval tan an kote nou te fè inaktivasyon kortik atravè administrasyon an nan CNQX la (sa vle di, 24 èdtan apre fòmasyon). Si demann eksperimantal la mande, rat yo te teste pou kenbe memwa laperèz aleka lè yo mete bèt yo nan yon kontèks ki asosye ak Etazini 2 semèn anvan nouvo asosyasyon an.

Bèt yo te pote nan 2 bokit diferan nan chanm yo kondisyone dapre diferan pwosedi kontèks yo.

Mezi konjelasyon. Nan tout pwosedi eksperimantal yo, yo te detèmine evalyasyon an nan retansyon memwa laperèz kòm yon repons konjelasyon [10], analize kòm absans konplè nan mobilite somatik eksepte pou mouvman respiratwa. Pou chak bèt, kantite tan (an segonn) pase nan konjelasyon te mezire offline pa 2 obsèvatè endepandan ki te avèg pou gwoup bèt yo.

Pwosedi chirijikal

Pou administre sibstans yo chwazi nan sit sib yo, rat yo te anestezi ak isoflurane: Endiksyon an te fèt nan 4% [vol/vol] nan 2 L/min lè medikal epi pwolonje nan yon ekspoze kontinyèl nan 2% [vol/vol]) lè rat yo te monte nan aparèy estereyotaksik la.

Yo te fè yon ensizyon nan zo bwa tèt la, epi yo te fè ti twou bav pou pèmèt yon 28-zegwi perfusion kalib. Yo te itilize yon sereng 10-ul Hamilton ki te monte sou yon ponp perfusion pou bay sibstans. Apre perfusion, zegwi a te rete an plas pou yon lòt 3 minit. Lè sa a, Ensizyon an te fèmen ak klip blesi asye pur, epi yo te bay bèt la yon piki lar nan ketopwofèn analgesic / anti-enflamatwa (2 mg / kg pwa kò), epi yo te kenbe bèt la cho ak anba obsèvasyon jiskaske rekiperasyon nan anestezi.

Kòm nan etid anvan yo [10,32-34], kanulasyon bèt yo pa nesesè, ak konpoze aktif yo te administre dirèkteman estereyotaksik. Pwosedi sa a se yon avantaj paske chòk chirijikal nannan nan pwosedi pèmanan-kanulasyon an evite, kidonk mete restriksyon sou chòk nan yon sèl pénétration zegwi [10,32-34]. Vreman vre, anestezi jeneral pa afekte siyifikativman konsolidasyon memwa [10,32-34]. Pou asire ke distribisyon an nan administrasyon konpoze ki gen rapò ak esè aprantisaj la te egzat pou ke rat yo te resevwa konpoze yo chwazi alantou 1 èdtan ak anviwon 1 jou apre fòmasyon, yo te pwovoke anestezi isoflurane 5 minit anvan tan an nan piki a te planifye, pa egzanp, nan 55. min nan rat trete 60 min apre fòmasyon ak 23 èdtan ak 55 min nan bèt sou fòm piki nan 24 èdtan apre fòmasyon. Chak rat te kondisyone ak Lè sa a, opere separeman. Bèt ki fè pati diferan gwoup konpòtman yo te manipile nan yon fason interleaved.

Inibitè selektif nan AMPA/kainate glutamate reseptè CNQX ({{0}}syano-7-nitroquinoxaline-2, 3-dyon) (Tocris, 10 ng /ul) [20,21] te fonn nan solisyon saline esteril (NaCl, 0.9%) ak ajiste nan pH 7.4 ak HCl. Pwoteyin sentèz inhibitor anisomycin (Merck, 125 ug/ul) te fonn nan ekivalè HCl, dilye ak saline esteril, ak ajiste nan pH 7.4 ak NaOH. Saline esteril (0.9% NaCl) te itilize kòm kontwòl machin. Sibstans sa yo te enjekte bilateralman nan yon pousantaj de 0.1 ul/min ak yon volim de 0.5 ul pou chak sit nan kowòdone stereotaksik sa yo te pran nan Paxinos ak Watson atlas [26], ak Te2 jaden cortical arbitre nan atlas la Zilles [25]:

Cortical oditif segondè (Te2): 1) AP: -5,8 L: ±7,2 DV: -6. 2) AP: -6,8 L: ±7,2 DV: -6.

Antérieur cingulate cortical (ACC): 1) AP: +2,5 L: ±0,6 DV: -2,2. 2) AP: +3,7 L: ±0,6 DV: -2,2.

Volim nan piki (0.5 ul pou chak sit) te chwazi baze sou etid anvan yo kote konpoze aktif yo te sou fòm piki nan Te2 [10,34] ak ACC [55,63] nan rat granmoun.

Pou inaktive ipokanp dorsal la, yo te enjekte konpoze aktif nan yon volim 0.6 ul pou chak sit nan kowòdone stereotaksik sa yo:

Dorsal Hippocampus: 1) AP: -2,8 L: ±1,6 DV: -3,3. 2) AP: −4,2 L: ±2,6 DV: −3.

Yo te pwovoke blesi irevokabl nan ipokanp dorsal la lè yo te administre NMDA (Tocris, 18 ug/ul, ki fonn nan solisyon saline esteril, 0,4 ul pou chak sit) nan yon pousantaj de 0.1 ul/ min nan pwen nan kowòdone yo mansyone pi wo a. Menm kowòdone yo te itilize pou kontwòl saline-enjekte ak bèt ki te opere simultan.

Retrobeads wouj (Lumafluor, 1:2 dilution nan saline, 0.6 ul) yo te enjekte nan BLA selon kowòdone sa yo: AP: -2.8; L: ± 5.4; DV: -8.3.

Nan fen eksperyans yo, tras zegwi yo nan ka CNQX, anisomicin, oswa piki saline oswa ekstansyon blesi yo nan ka piki NMDA yo te verifye histolojikman. Rat yo te pwofondman anestezi ak entracardially perfused ak 4% fòmaldeyid. Sèvo yo te seksyone a 30 μm sou yon kriostat. Nissl-tache seksyon seri yo te prepare lè l sèvi avèk pwosedi konvansyonèl la ak seksyon yo te verifye istolojikman anba yon mikwoskòp agrandi nan 2.5 ×.

Eksperyans optogenetic

Piki viris. Viris adeno-asosye AAV5:CaMKII ::eNpHR3.0-cherry ak vektè kontwòl AAV5:CaMKII -cherry yo te jwenn nan University of North Carolina Vector Core (Chapel Hill, North Carolina, Etazini). Fraz sa aViraltiter te 5:8 Tit viral te 5.8 × 10^12 vg/ml pou tou de viris yo. Itilizasyon pwomotè CaMKII pèmèt ekspresyon transjèn favorize newòn piramidal yo. Viris yo te loje nan yon frizè −80˚C. Perfusion viral ki vize Te2 oswa ACC a te fèt nan kowòdone stereotaksik ki anwo yo nan volim 0.5 ul pou chak twou. Yo te enjekte viris la nan yon pousantaj de 0.1 ul / min, epi yo te kite zegwi a an plas pou yon lòt 5 min. Piki viral yo te fèt 4 semèn anvan eksperyans optogenetics.

Ekleraj.

Fib optik yo (Plexon, 200/230 μm nwayo; 10 mm longè) te implanté bilateralman nan BLA a (AP=-2.8, L=± 5.4, V=-8.2 mm soti nan bregma). Anpèchman optogenetic nan pwojeksyon Te2 nan BLA oswa nan pwojeksyon ACC nan BLA te jwenn lè l sèvi avèk PlexBright Optogenetic Stimulation System makonnen ak yon dyod lazè (Laserglow Technologies). Limyè jòn (589 nm) pwodwi ak pase nan yon fib optik. Dansite pouvwa a te estime nan pwent fib optik la te 10 a 15 mW pou ekleraj la nan sit pwojeksyon. Pandan retansyon memwa laperèz, emisyon limyè te inisye 4 s anvan aparisyon ton, pèsiste pandan tout ton an, epi yo te sispann 4 s apre konpanse ton an. Bèt ki fè pati gwoup kondisyone pè kontèks yo te resevwa eksitasyon limyè pandan tout eksplorasyon kontèks la (3 min). Rat yo te familyarize ak kòd patch la pou 2 jou anvan esè retansyon memwa a.

Imunohistochimi. Lè yo te fini eksperyans optogenetics, rat yo te pwofondman anestezi ak perfused intracardially ak 4% PAF pou egzamine difizyon viris la. Sèvo yo te diseke, estoke lannwit lan nan 4˚C, epi finalman transfere nan 30% sikwoz. Seksyon koronèl (30 μm) yo te koupe sou yon kriostat ak kolekte nan PBS. Seksyon k ap flote gratis yo te enkube nan yon solisyon bloke pou 1 èdtan nan RT. Lè sa a, yo te enkube nan antikò sourit monoklonal prensipal anti mCherry (1:500 dilution, Abcam) nan solisyon an bloke lannwit lan nan RT. Imedyatman, seksyon yo te lave ak PBS ak enkubasyon pou 1 èdtan nan RT ak yon segondè fliyoresan AlexaFluor-568 antikò anti-sourit (1:600, Invitrogen) dilye nan PBS. Seksyon yo te lave nan PBS, monte ak aliye medya ki gen DAPI (Vektè), ak kouvèti a.

Sèvo rat ki te sibi piki NMDA yo te kolekte menm jan an. Seksyon k ap flote gratis, apre plizyè rense, yo te enkube ak antikò sourit monoklonal anti-Neun (1:1, 000 dilution, Merck) nan solisyon an bloke lannwit lan nan tanperati chanm. Apre sa, seksyon yo te lave ak PBS ak enkubasyon pou 1 èdtan nan tanperati chanm ak antikò chwal anti-sourit biotinilate (1:2 00 dilution, Vector). Konplèks avidin-biotin (ABC konplèks 1:100, Vector, 2 h ak mwatye nan enkubasyon) te makonnen ak diaminobenzidine (0.03%, Merck) tach Neun. Lè sa a, seksyon yo te rense nan PBS epi transfere nan glisad jelatin-kouvwi, dezidrate, epi kouvri ak yon kouvèti.

Seksyon Te2 nan rat retro ki enjekte pèl yo te sibi enkubasyon ak antikò prensipal lapen poliklonal anti-Fos (1:2, 000, Siyal selil) nan solisyon an bloke lannwit lan nan RT. Apre sa, tranch yo te lave ak PBS ak enkubasyon pou 1 èdtan nan RT ak anti-lapen Alexa 488 (1: 1, 000, Invitrogen, nan PBS). Finalman, seksyon imunolabeled yo te lave nan PBS, monte sou glisad jelatin-kouvwi, epi kouvri ak yon mwayen DAPI-sipleman aliye.

Mikwoskopi

Yo te egzamine etikèt mCherry lè l sèvi avèk yon mikwoskòp konfokal Zeiss Airyscan: Yo te itilize de lazè (405 ak 561 nm), chak ki koresponn ak spectre emisyon pik pou DAPI (tach Nissl pou nwayo selil) ak Alexa 568 (mCherry). ), respektivman. Pou analize difizyon viris la nan sit piki yo, mikrografi Te2 ak ACC yo te akeri kòm imaj mozayik (yo chak sèl akeri lè l sèvi avèk yon objektif 10 ×). Axon tèminal nan BLA yo te analize lè l sèvi avèk yon objektif 40 × kòm yon z-pile nan 10 seksyon, espace 1 μm apa (159 μm kare; rale fraksyon, 1.0).

Pou bèt retrobeads-enjekte ki te sibi cFos imunolabeling, imaj yo te akeri nan yon agrandisman 40× (159 μm kare; fraksyon zoom, 1.0) ak 3 lazè diferan, ki koresponn ak spectre emisyon pik la. pou DAPI (tach Nissl pou nwayo selilè), AlexaFluor 488 (cFos), ak Texas Red (Retrobeads), respektivman. Seksyon 0.7 μm yo te akeri sou yon pil z 10-μm. Kantite nwayo ki eksprime cFos, pèl-labeled, ak doub-pozitif (cFos + pèl ki make) te quantifye pou chak bèt nan rejyon an Te2 nan kowòdone anteroposterior yo soti nan 6.7 a 7.3 mm soti nan bregma a [10]. Lè sa a, done yo te mwayèn yo pwodwi mwayèn nan chak bèt ak rezilta yo te estatistik konpare. Imaj nan seksyon ak tach DAB nan Neun yo te analize lè l sèvi avèk lojisyèl Neurolucida ki konekte nan yon mikwoskòp atravè yon kamera koulè CCD [10].

Analiz done ak kritè esklizyon

N pou chak gwoup te etabli a priori dapre etid anvan nou yo [10,16,17], travay deja pibliye nan domèn nan (gade kòm referans pou ACC [6,22,55] ak Te2 [10,59]), ak nan estimasyon G-power, dapre tablo sa a (Tablo 1):

Pou chak analiz, nou te estime yon kantite final vle di 8 a 10 bèt pou chak gwoup. Gwoup yo te kouri ak kontwòl entèn nan menm sesyon eksperimantal la (S1 Table). Bay varyasyon nan pwosedi chirijikal ak konpòtman, nou te enkli a priori yon pi gwo kantite sijè eksperimantal (jiska 15% plis) ki nan kèk ka satisfè kritè eksperimantal yo epi yo te enkli, kidonk evite yon esklizyon abitrè. Nan ka syans ipokanp yo, pou evalye efè piki NMDA ak CNQX nan entèval tan diferan, nou balanse kantite total bèt kontwòl ant machin ak rat ki fonksyone fot nan mitan diferan gwoup yo.

Analiz konpòtman, enspeksyon istolojik, ak konte selil yo te fèt avèg. Bèt ki gen lokalizasyon ensifizan nan tras zegwi a oswa blesi a nan ka blesi NMDA-irevokabl yo te eskli nan analiz done (S1 Table). Nan syans famasi, nou eskli 57 bèt sou yon total de 465 bèt akòz yon plasman zegwi kòrèk (22/255 pou Te2, 31/179 pou ACC, ak 4/31 pou ipokanp). Nan etid trase, sou 21 bèt, nou elimine 3 matyè nan ki piki retrobeads rate BLA la. Nan etid optogenetics Te2, sou yon total de 30 bèt, nou eskli 1 rat paske plasman nan fib optik yo pa te pi wo a rejyon an sib, 1 rat. Apre yo tout, viris la te absan nan Te2, ak 2 rat paske difizyon viris la te respektivman mwens pase 4.7% ak 5.3% nan zòn nan Te2 nan sit yo piki. Nan rat ki enkli nan analiz estatistik la, difizyon viris minim la te 39.6% nan kowòdone stereotaksik ki pi anteryè a ak 50.2% nan kowòdone estereyotaksik ki pi dèyè a.

Menm jan an tou, nan eksperyans optogenetics ACC yo, sou yon total de 32 bèt, 2 rat yo te elimine paske plasman fib optik la pa t 'anwo a rejyon sib la. De rat yo te eskli paske viris la nan ACC te absan, 1 bèt paske viris la te nan cortical motè segondè adjasan a, ak 1 rat paske difizyon viris la te mwens pase 2.3% nan zòn nan ACC nan sit piki yo. Nan rès rat yo, difizyon minim viris la te 33.3% nan kowòdone estereyotaksik ki pi anteryè a ak 42.2% nan kowòdone ki pi dèyè a.

Nan syans blesi NMDA yo, blesi yo sitou vize rejyon CA1 nan ipokanp dorsal la. Minim (wouj) ak maksimòm ekstansyon (woz) nan blesi ipokanp sou tout zòn nan ipokanp dorsal la te respektivman 23.2% ak 53.5% nan kowòdone estereyotaksik ki pi anteryè ak 28.3% ak 62.3% nan kowòdone ki pi dèyè. Plis pase yon total de 73 bèt, 4 rat yo te elimine paske blesi a te absan, pandan y ap 3 bèt adisyonèl yo te jete paske ekstansyon blesi yo te mwens pase 5.0% (sa vle di 4.8%, 4.3%, 3.1). %) konsènan zòn ipokanp nan 2 kowòdone yo.

Analiz kontou zòn yo te fèt atravè enspeksyon vizyèl ak quantifikasyon manyèl lè l sèvi avèk zouti kontou rejyon an nan lojisyèl ZEN 3.0. Lè sa a, valè zòn yo te nòmalize sou zòn total rejyon an. Kowòdone estereyotaksik Te2, ACC, ak ipokanp yo te baze sou atlas Paxinos [26] epi, nan ka Te2, ak jaden kortik yo te abitye nan Zilles atlas [25].

Analiz estatistik

Tout done yo prezante kòm mwayen ± SEM. Tout done yo te pase tès Levene pou egalite divèjans yo. Kidonk, estatistik parametrik yo te anplwaye nan tout eksperyans yo. Done ki soti nan 2 gwoup yo te konpare lè l sèvi avèk 2-tès etidyan ki pa pè yo. Konparezon plizyè gwoup yo te evalye lè l sèvi avèk yon tès ANOVA 1-fason ak tès post hoc Tukey a. Pou abòde diferans ki genyen ant ak anndan gwoup yo, nou kalkile yon modèl ANOVA 3 × 2 melanje ak yon gwoup (CS1-CS2, Tone-CS1-CS2, WN-CS2) kòm ant- sijè varyab ak kondisyon (anvan ak apre dènye kondisyone + piki) kòm varyab andedan-sijè yo. Kote gwoup × entèraksyon kondisyon an te enpòtan, nou te fè yon senp analiz efè prensipal epi nou ajiste chak p-valè ak koreksyon Bonferroni. Pou chak modèl ANOVA melanje, nou evalye sipozisyon Sphericity atravè Tès Sphericity Mauchly a.

Paramèt estatistik yo (sa vle di, valè egzak n pou chak gwoup, SEM, tès estatistik la, gwosè efè a, ak valè p egzak la) yo rapòte nan lejand yo. Pou gwosè echantiyon egal, gwosè efè pou tès t ki pa pè yo te detèmine lè yo kalkile d Cohen a oswa d Glass a dapre resanblans SD yo pandan y ap, pou gwosè echantiyon diferan, Hedges'g. Yo te kalkile korelasyon ant konte selil yo ak konjelasyon lè l sèvi avèk koyefisyan Pearson la. Pou detèmine si done yo satisfè sipozisyon apwòch estatistik la, nou rejte ipotèz nil la nan nivo P < 0.05. Tout analiz estatistik yo te fèt lè l sèvi avèk SPSS Statistics 22 (IBM).

Sipòte enfòmasyon

S1 Fig. Agrandisman tras zegwi Te2 (A) ak ACC cortical (B) sou fòm piki ak CNQX, chwazi kòm egzanp. (C) Lè yo reprezante ak menm kontèks la 2 semèn apre pwosedi a, bèt ki te pran chòk sèlman te montre yon repons laperèz ki ba, ki montre pwosedi a pa t lakòz konjelasyon kondisyone nan kontèks kote chòk la te delivre. (D) Rezilta menm jan ak nan Fig 1 yo te jwenn nan kontrebalans 2 ton yo anplwaye kòm CSs (CS1, 3 kHz ak CS2, 15 kHz) (Elèv t tès, t (14)=3.44, p {{ 13}}.0040, Glass a d=4.14). (E) Nan rat yo kondisyone odè-CS konjelasyon nan odè a, 2 semèn apre kondisyone, te wo menm si yo teste nan yon anviwònman diferan konsènan kontèks la kondisyone, kidonk ki montre ke pè te espesyalman asosye ak livrezon siy sa a. Ba echèl, 300 μm. ��P <0.01. Tout done yo vle di ak SEM. Done rezime pou S1 Fig yo ka jwenn nan enfòmasyon sipò nan dosye a ki rele S1 Sipòte Figi Done. (TIF)

S2 Fig. Piki CNQX afekte retansyon souvni pè oditif ki sot pase yo nan rat kote jeneralizasyon laperèz te bese pa yon ton pou kont li pre-ekspozisyon oswa pa anplwaye yon ton bri blan kòm CS1. Yon ANOVA 3 × 2 konsepsyon melanje (efè prensipal gwoup la: F(2,42)=6.478, p {{10}}.00 4, η2=0. 236, efè prensipal kondisyon: F(1,42)=0.161, p=0.691, η2=0.004, gwoup × kondisyon entèraksyon F(2,42)=3.942, p=0.027, η2=0.158) te montre ke konjelasyon nan ton an 3 kHz anvan asosyasyon li nan peyi Etazini an te pi ba nan bèt ki te resevwa ton 15 kHz pre-ekspozisyon anvan kouple 15 kHz-US (n=10, p=0.001) oswa nan rat kondisyone nan yon bri blan (n=13 , p=0.008) konpare ak bèt CS1-CS2 (n=22) ki te montre yon repons jeneralizasyon pè varyab. Sepandan, apre aprantisaj CS-US ak piki cnqx nan cortical Te2, memwa laperèz ki sot pase yo te andikape nan tout gwoup (p> 0.05). Senp efè prensipal nan gwoup (anvan ak apre aprantisaj CS-US ki te swiv pa piki cnqx): CS1-CS2, p=0.025; Ton-CS1-CS2, p=0.189; WN-CS2, p=0.347) �P < 0.05, ��P < 0.01. Tout done yo vle di ak SEM. Done rezime pou S2 Fig yo ka jwenn nan Sipò enfòmasyon nan dosye ki rele S1 Sipò Figi Done yo. (TIF)

S3 Fig. (A) Egzanp o aza nan piki retrobeads vize BLA. (B ak C) Egzanp plasman fib optik pi wo a BLA bèt yo sou fòm piki ak vektè AAV nan Te2 (B) ak cortical ACC (C). Ba echèl, 500 μm.

Rekonesans

Nou remèsye Doktè E. Manassero pou sipò ak konsèy kontinyèl yo.

Kontribisyon otè

Konsepyalizasyon: Giulia Concina, Annamaria Renna, Benedetto Sacchetti.

Done curation: Giulia Concina, Luisella Milano, Benedetto Sacchetti.

Analiz fòmèl: Giulia Concina, Annamaria Renna, Luisella Milano.

Akizisyon finansman: Giulia Concina, Benedetto Sacchetti.

Ankèt: Giulia Concina, Annamaria Renna, Luisella Milano.

Metodoloji: Giulia Concina, Annamaria Renna, Luisella Milano.

Sipèvizyon: Benedetto Sacchetti.

Validasyon: Benedetto Sacchetti.

Ekri - bouyon orijinal: Giulia Concina, Benedetto Sacchetti.

Redaksyon – revizyon & koreksyon: Annamaria Renna, Luisella Milano.

Referans
1. Frankland PW, Bontempi B. Òganizasyon souvni ki sot pase ak aleka. Nat Rev Neurosci. 2005; 6:119–130. https://doi.org/10.1038/nrn1607 PMID: 15685217

2. Dudai Y. nerobiyoloji konsolidasyon yo, oswa, ki jan ki estab engram nan? Ann Rev Psychol. 2004; 55:51–86. https://doi.org/10.1146/annurev.psych.55.090902.142050 PMID: 14744210

3. Squire LR, Genzel L, Wixted JT, Morris RG. Konsolidasyon memwa. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2015; 3:7. https://doi.org/10.1101/cshperspect.a021766 PMID: 26238360

4. Alvarez P, Squire LR. Konsolidasyon memwa ak lòb tanporèl medyal la: yon modèl rezo senp. Proc Natl Acad Sci US A. 1994; 91:7041–7045. https://doi.org/10.1073/pnas.91.15.7041 PMID: 8041742

5. McClelland JL, McNaughton BL, O'Reilly RC. Poukisa gen sistèm aprantisaj konplemantè nan ipokanp la ak neocortex: Sur nan siksè ak echèk nan modèl koneksyonist nan aprantisaj ak memwa. Psychol Rev 1995; 102:419–457.

For more information:1950477648nn@gmail.com