Aksyon pwomitotik Oenothera Biennis sou fibroblasts po moun senesan Pati 2

3. Diskisyon

Nan etid sa a, nou te envestige efè yon ekstrè selil idrofil Oenothera biennis (ObHEx) sou senesans selilè, paske li te montre pwopriyete anti-aje po lè yo teste nan modèl in vitro ak ansyen vivo [18]. Nou te itilize yon modèl senesan menm jan an nan NHDF sibi SIPS pou tretman ak H2O2 [21,22].

Glycoside nan cistanche ka ogmante tou aktivite SOD nan kè ak tisi fwa, ak siyifikativman redwi kontni an nan lipofuscin ak MDA nan chak tisi, efektivman scavenging divès kalite radikal oksijèn reyaktif (OH-, H₂O₂, elatriye) ak pwoteje kont domaj ADN ki te koze. pa OH-radikal. Cistanche phenylethanoid glikozid gen yon kapasite gaya scavenging nan radikal gratis, yon pi wo kapasite diminye pase vitamin C, amelyore aktivite a nan SOD nan sispansyon espèm, redwi kontni an nan MDA, epi yo gen yon sèten efè pwoteksyon sou fonksyon manbràn espèm. Cistanche polisakarid ka amelyore aktivite SOD ak GSH-Px nan eritrosit ak tisi nan poumon sourit eksperimantal senesan ki te koze pa D-galaktoz, osi byen ke diminye kontni an nan MDA ak kolagen an nan poumon ak plasma, ak ogmante kontni an nan elastin, gen yon bon efè scavenging sou DPPH, pwolonje tan an nan ipoksi nan sourit senesan, amelyore aktivite a nan SOD nan serom, ak retade koripsyon fizyolojik nan poumon nan sourit senesan eksperimantal Avèk koripsyon selilè mòfolojik, eksperyans yo te montre ke Cistanche gen bon kapasite antioksidan. epi li gen potansyèl pou yo dwe yon dwòg pou anpeche ak trete maladi po aje. An menm tan an, echinacoside nan Cistanche gen yon kapasite enpòtan pou elimine radikal gratis DPPH ak kapasite pou elimine espès oksijèn reyaktif epi anpeche radikal gratis.

pwovoke degradasyon kolagen an, epi tou li gen yon efè reparasyon bon sou domaj anyon radikal gratis timin.

Klike sou Ki kote mwen ka achte Cistanche

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Pou konprann mekanis aksyon ObHEx sou fibroblasts po moun senesan, pa divilgasyon wout byolojik yo chanje pa ekstrè a, nou te fè yon apwòch pwoteomik ultra-pwofonde espektometri mas ki endepandan. Li te pèmèt nou jwenn analiz pwoteòm ki pi konplè nan selil senesan jiska dat ak, pou premye fwa, quantification an similtane nan makè senesan anpil.

Premye a tout, pou evalye endiksyon an senesans pa tretman H2O2 sou selil NHFD, nou quantifier makè senesans li te ye. Done pwoteomik nou yo konfime endiksyon senesans pa estrès oksidatif: tout bon, nou te obsève nivo chanje nan makè senesans deja li te ye ki gen rapò ak kontni an ogmante lizozomal (GLB1 ak FUCA1), domaj ADN (ATR, ATM, MACROH2A1, ak MACRO2A2) ak sik selil faz G2. arestasyon (CDK1NA ak MKI67). Anplis, analiz anrichisman chemen an nan pwoteyin ki pi downregulated nan H2O2 trete kont selil kontwòl montre mitoz, ki reflete arestasyon pwopagasyon senesan an.

Konpare pwoteòm nan selil SIPS NHDF trete ak ObHEx kont moun ki pa trete, nou te jwenn ke tretman an ak ekstrè a te kapab pasyèlman retabli nivo yo nan pwoteyin ak konplèks jwe wòl enpòtan nan plizyè etap nan mitoz. ObHEx enkubasyon ogmante nivo CDK1, yon pwoteyin mitotik kle ki deklannche antre nan mitoz pa fòme yon konplèks ak cyclin B [34]. Anplis, tout senk subinite nan konplèks kondensin I yo te regilasyon. Konplèks sa a konpoze de de antretyen estriktirèl kwomozòm (SMC), SMC2 ak SMC4, ak twa subinite ki pa SMC, NCAPD2, NCAPH, ak NCAPG. Nan prometaphase a, fonksyon konplèks kondensin I la se ankouraje kondansasyon kalite kwomozòm pa entwodiksyon supercoils pozitif nan ADN nan yon fason ki depann de ATP [35]. Anplis de sa, ekstrè a te kontwole KNTC1, NUF2, ak TRIP13, ki se twa pwoteyin ki asosye ak kinetochore a, yon gwo konplèks ki, pandan prometafaz la, konekte chromatin centromeric ak mikrotubule ki soti nan poto axe opoze pou favorize segregasyon nan chromatid sè yo. 36,37]. Yo te detekte tou restorasyon pasyèl nan nivo pwoteyin MCM yo. Pwoteyin sa yo se nan nwayo konplèks elikaz replikasyon ki dewoule ADN doub-chèn pou bay yon sèl-seksyon kòm modèl pou ADN polymerase. Konplèks MCM la konvèti nan yon helicase aktif pandan faz S la men li deja chaje sou chromatin pandan telophase la [38,39]. Ekstrè a ogmante nivo IQGAP3, PBK, ak DHFR tou. Premye a, IQGAP3, se yon regilatè enpòtan nan pwogresyon mitotik paske li ankouraje aktivite cdk7, esansyèl pou aktivasyon Cdc2 [40,41]; PBK se yon kinaz ki aktif sèlman nan mitoz; lè fosforile, li reyaji ak p53, destabilize li ak diminye chemen domaj ADN [42]; ak DHFR se yon anzim kle nan byosentèz ADN ki gen nivo yo byen diminye nan fibroblast imen senesan [43].

Egzamen bio-ortogonal yo te montre tou kapasite ObHEx pou refè karakteristik senesans pasyèlman, sètadi aktivite lizozomal ak arestasyon sik selilè. Vreman vre, pou verifye si restorasyon ekspresyon pwoteyin mitotik pa ObHEx tradwi nan reaktivasyon sik selilè a, nou te fè eksperyans FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting) sou selil SIPS NHDF trete oswa ou pa ak ekstrè a. Yo te montre ke ObHEx te kapab redwi fraksyon selil ki bloke nan faz G2 ak ankouraje re-antre yo nan sik selil senesan selil yo.

4. Materyèl ak Metòd

4.1. Kilti Selil

Nòmal Fibroblast Pokal imen (NHDF; Promocell) yo te kiltive nan Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Gibco) siplemantè ak 10 pousan nan serom fetis bovine (FBS; Gibco) ak 500 U / mL penisilin-streptomycin (Gibco) nan 95 pousan lè. , 5 pousan CO2 ak yon atmosfè imidite a 37 ◦C.

4.2. Endiksyon Prematire Senesans Estrès (SIPS)

Yon total de 10 1200 000 selil NHDF yo te simen nan chak nan asyèt kilti selil 60 mm, yon jou anvan enkubasyon yo ak 100 µM H2O2 nan 37 ◦C pou 2 èdtan [21,22]. Imedyatman, H2O2 a te lave ak Phosphate Buffered Saline (PBS; Gibco) pou mete fen nan tretman an epi selil yo te grandi nan yon mwayen nòmal pou 4 jou. Pou selil ki pa senesan yo, yo te itilize kòm yon kontwòl, 2240 000 selil NHDF yo te simen nan chak nan asyèt kilti selil 60 mm yo. Eksperyans lan te fèt nan 5 replike byolojik.

4.3. Preparasyon Oenothera Biennis Hydrophilic Extrait (ObHEx).

Ekstrè a te prepare nan laboratwa Arterra Bioscience SpA [18]. Kilti selil yo te jwenn nan fèy yo nan plant Oenothera biennis (ki bay pa GEEL Floricultura ss) lè yo pwovoke pwopagasyon selil meristematik sou plak agar solid jiskaske calluses yo jwenn. Selil yo te transfere nan mwayen kwasans likid la (Gamborg B5, complétée ak 2,4 dichloro phenoxy asid acetic (1 mg / L), adenine (1 mg / L), ak kinetin (0.01 mg / L). )) ak grandi kòm kilti sispansyon anba souke òbital. Yon fwa yo te jwenn kilti apeprè 150 g / L, yo te kolekte selil yo epi yo te lysed nan PBS nan pH 7.4 pou prepare yon ekstrè idrosolubl. Apre lyofilizasyon, yo te fonn poud yo jwenn nan dlo oswa nan medya kilti selil yo nan konsantrasyon apwopriye pou fè tès la.

4.4. Tretman Oenothera Biennis Hydrophilic Extrait (ObHEx).

Selil NHDF yo te enkube pou 24 èdtan ak 0.01 pousan (p/v) ObHEx nan yon mwayen konplè. Imedyatman, selil yo te lave twa fwa ak PBS epi trete pou yon lòt 24 èdtan ak 0.01 pousan (p / v) ObHEx nan yon mwayen san serom. Lè sa a, yo te detache pa trypsinization, santrifuje nan 500 g pou 10 min nan 4 ◦C, epi lave de fwa ak PBS. Selil kontwòl ki pa trete yo te sibi menm enkubasyon yo san ObHEx.

4.5. Preparasyon echantiyon pou analiz pwoteomik

Granules yo te resuspend nan 60µL nan tanpon Radioimmunoprecipitation assay (RIPA) ak lysed pa sonication. Konsantrasyon pwoteyin lysate selilè yo te mezire lè l sèvi avèk yon Twous Test Pwoteyin DC™ (Biorad; #5000112). S-TrapTM mikwo spin kolòn (Protifi, Huntington, CA, USA) te fè dijesyon sou 50 µg nan lysate selil dapre enstriksyon manifakti a. Yon ti tan, echantiyon yo te redwi ak 20 mM tris(2- carboxyethyl)fosfin (TCEP) ak alkylated ak 50 mM thioacetamide (CAA) pou 15 minit nan tanperati chanm. Lè sa a, asid fosfò akeuz te ajoute nan yon konsantrasyon final nan 2.5 pousan ki te swiv pa adisyon a nan yon tanpon S-Trap obligatwa (90 pousan akeuz metanol, 100 mM TEAB, pH 7.1). Lè sa a, melanj yo te chaje sou kolòn S-Trap. Yo te fè senk etap lave siplemantè pou bon jan eliminasyon SDS. Lè sa a, lisat selilè yo te dijere ak 2.5 µg trypsin (Promega) nan 47 ◦C pou 1 èdtan. Apre elisyon, peptides yo te seche vakyòm, resuspend nan 2 pousan ACN, 0.1 pousan FA ak quantifiée pa Nanodrop.

4.6. nanoLC-MS/MS Pwoteyin Idantifikasyon ak Quantification

Yon total de 400 ng nan chak echantiyon yo te enjekte sou yon nanoplat (Bruker Daltonics, Bremen, Almay) segondè-pèfòmans likid chromatography (HPLC) sistèm makonnen ak yon timsTOF Pro (Bruker Daltonics, Bremen). , Almay) mas spectrometer. Separasyon HPLC (Solvan A: {{30}}.1 pousan asid fòmik nan dlo; Solvant B: 0.1 pousan asid fòmik nan asetonitrile) te fèt nan 250 L / min lè l sèvi avèk yon kolòn emeteur chaje (C18, 25 cm × 75 µm 1.6 µm) (Ion Optics, Fitzroy, Ostrali) lè l sèvi avèk elisyon gradyan (2 a 13 pousan sòlvan B pandan 41 min; 13 a 20 pousan pandan 23 min; 20 pousan a 30 pousan pandan 5 min; 30 pousan a 85 pousan pou 5 min, epi, finalman, 85 pousan pou 5 min pou lave kolòn nan). Done mas-spectrometric yo te akeri lè l sèvi avèk done-endepandan analiz akimilasyon paralèl seri fwagmantasyon (diaPASEF) metòd akizisyon. Anviwònman kouchèt yo te: seri mas soti nan 400 a 1200 Da, chenn mobilite soti nan 0.60 a 1.43 1/k0, kantite fenèt mobilite nan 1, estimasyon tan sik nan 1.79 s, etap mas pou chak sik nan 32.

4.7. MS Data Processing ak analiz byoinformatik

Analiz done yo te fèt lè l sèvi avèk lojisyèl DIA-NN (vèsyon 1.8) [44]. Yo te fè yon rechèch kont baz done moun UniProtKB/Swiss-Prot Homo sapiens (lage fevriye 2021, 20,408 antre) lè l sèvi avèk yon workflow san bibliyotèk. Pou rezon sa a, opsyon "FASTA digest pou bibliyotèk gratis rechèch / jenerasyon bibliyotèk" ak "Deep learning spectra, RTs, and IMs prevision" te tcheke pou jenerasyon iyon precurseur. Yo te pèmèt yon maksimòm 2 klivaj trypsin rate epi yo te fikse maksimòm modifikasyon varyab la sou 5. Yo te fikse carbamidomethylation (Cys) kòm modifikasyon fiks, tandiske eksizyon pwoteyin N-tèminal methionine, oksidasyon methionin, ak asetilasyon N-tèminal yo te fikse kòm varyab. modifikasyon. Longè peptide yo te fikse sou 7-30 asid amine, ranje chaj précurseur 2-4, ranje m/z précurseur 300-1800, ak fragman ion m/z ranje 200-1800. Pou chèche mas paran yo ak iyon fragman yo, DIA-NN te dedwi otomatikman presizyon epi yo te fikse anviwon 13 ppm pou chak analiz. Pousantaj dekouvèt fo (FDR) nan nivo pwoteyin ak peptide yo te fikse a 1 pousan. Match ant kouri yo te pèmèt. Pou estrateji nan quantifikasyon, yo te itilize Robust LC (gwo presizyon) jan yo konseye nan dokiman lojisyèl an, tandiske paramèt default yo te kenbe pou lòt paramèt algorithm yo.

Analiz estatistik ak byoenfòmatik te fèt ak lojisyèl Perseus (vèsyon 1.6.15) ki disponib gratis sou sitwèb la (aksede sou 22 jen 2021) [45] ak R/R Studio ak RStudio vèsyon 20 21.09.1 30 (aksede sou 12 Novanm 2021). Tout analiz estatistik R yo te fèt lè l sèvi avèk pake estatistik R la. Pwodiksyon matris rapò pg pa DIA-NN te itilize ak entansite yo te transfòme log2 pou analiz estatistik. Pou konparezon estatistik la, nou mete kat gwoup, chak gen 5 replike byolojik. Lè sa a, nou filtre done yo kenbe sèlman pwoteyin ki gen omwen 3 valè valab nan omwen yon gwoup. Apre sa, done yo te imputer pou ranpli pwen done ki manke yo pa kreye yon distribisyon Gaussian nan nimewo o aza ak yon devyasyon estanda 33 pousan parapò ak devyasyon estanda nan valè yo mezire ak yon devyasyon estanda 1.8 downshift nan vle di a simulation distribisyon an nan ba. valè siyal yo. Yo te fè tès t elèv la ant SEN ak CTRL FDR < 0.05, S0=0.1 pou konfime prezans makè espesifik pou senesans. Lè sa a, pou envestige si diferans ki genyen nan gwosè efè ant absans la oswa prezans nan tretman an se menm bagay la pou selil kote senesans te pwovoke oswa ou pa, yo te envestige entèraksyon ki genyen ant tou de faktè (sa vle di, Endiksyon ak Tretman) lè l sèvi avèk Two-way ANOVA. an R. Lè sa a, p-valè yo te jwenn pou entèraksyon tou de faktè yo te ajiste pou tès miltip lè l sèvi avèk metòd Benjamini-Hochberg [46] pou kontwole Fo Dekouvèt Rate (FDR). Finalman, analiz post hoc Tukey HSD te fèt sou pwoteyin ki montre yon q-valè <0.05. Done pwoteomik espektometri mas yo te depoze nan ProteomeXchange Consortium atravè depo patnè PRIDE [47] ak idantifikasyon ansèy done PXD034222.

4.8. Senesans-asosye tach ß-galactosidase

Aktivite ß-galactosidase (SA-ß-gal) ki asosye ak senesans yo te evalye lè l sèvi avèk yon twous tach Teknoloji Siyal selil (#9860). Yon total de 1250 000 selil NHDF/pou yo te simen nan yon plak 6-byen yon jou anvan SIPS; tandiske, kòm yon kontwòl, 250 000 selil/pi. Apre 4 jou nan yon mwayen nòmal, selil yo te enkube oswa ou pa ak 0.01 pousan (p/v) ObHEx pou 48 èdtan. Imedyatman, yo te lave ak PBS epi trete ak solisyon an fikse pou 15 min. Apre de lave ak PBS, selil yo te enkube ak solisyon tach ß-gal (pH final 6.0) ki gen 5-bromo-4-kloro-3-indolil- -D-galakto. -pyranoside (X-Gal) nan 37 ◦C nan yon enkibatè sèk pou 20 èdtan. Selil pozitif yo ble. Koulè a ​​se akòz klivaj X-Gal nan galaktoz ak 5-Bromo-4-kloro-3-indoxyl (X) pa SA-ß-gal. Endoksil la soksid nan 5,50 -dibromo-4,40 -dikloro-endigo ki fòme yon presipite ble entans. Pousantaj selil pozitif nan selil total yo te evalye lè w konte 100-150 selil nan 5 imaj seleksyon owaza te kaptire pa mikwoskòp la, pou chak kondisyon. Selil yo te konte lè l sèvi avèk lojisyèl ImageJ. Eksperyans lan te fèt an triple.

4.9. Fluoresans-aktive analiz selilè klasman

Yon total de {{0}} selil NHDF/pou yo te simen nan yon plak {{6-pou yon jou anvan SIPS; tandiske, kòm yon kontwòl, 50 000 selil/pi. Apre 4 jou nan yon mwayen nòmal, selil kontwòl ak senesan yo te trete oswa ou pa avèk 0.01 pousan (p/v) ObHEx pou 72 èdtan. Lè sa a, selil yo te enkube nan prezans 5 µg/mL Hoechst 33342 pou 30 minit nan 37 ◦C. Apre tripsinizasyon ak santrifujasyon nan 500 g pou 2 min, yo te resuspend nan 200 µL PBS. Finalman, fluoresans selil yo te mezire pa yon BD LSRFortessa Cell Analyzer. Done yo te analize lè l sèvi avèk lojisyèl FlowJo v10.8.1. Eksperyans lan te fèt an triple.

5. Konklizyon

Pwoteyòm pwoteòm mondyal ki asosye ak senesans pwofondè yo jwenn isit la bay plizyè santèn pwoteyin deregleman pa SIPS ki ka eksplwate pa kominote syantifik la pou plis konprann senesans ak evalye efè nouvo modulateur potansyèl yo. Anplis, travay nou an pwouve yon mekanis pro-mitotik nan aksyon ObHEx sou fibroblasts po moun senesan: atravè yon ogmantasyon nan ekspresyon pwoteyin mitotik, li ankouraje restorasyon nan pwopagasyon nan selil senesan. Kidonk, baze sou rezilta sa yo, nou pwopoze ObHEx kòm yon adjuvant pwisan kont senesans ki asosye ak aje po.

Kontribisyon otè:Konseptyalizasyon, SC, MCM ak ICG; metodoloji, SC, KR, IM, CC (Cerina Chhuon) ak ICG; lojisyèl, KR; ankèt, SC, IM, CC (Cerina Chhuon), KT, SF, ADL, IP ak CC (Corinne Cordier); resous, MCM ak ICG; ekri — preparasyon bouyon orijinal, SC ak ICG; ekri—revizyon ak koreksyon, SC, MCM, ak ICG Tout otè yo te li epi yo te dakò ak vèsyon ki te pibliye maniskri a.

Deklarasyon Disponibilite Done:Done pwoteomik espektrometri mas yo te depoze nan ProteomeXchange Consortium atravè depo patnè PRIDE [47] ak idantifikasyon ansanm done PXD034222 (Detay kont Revizyon an: Non itilizatè: revizyon_pxd034222@ebi.ac.uk; Modpas: fK9Pjv90) .

Rekonesans: Etid sa a te sipòte pa Programma Operativo Complementare Ricerca e Innovazione 2014–2020, Asse I "Capitale Umano", Azione I.1 "Dottorati Innovativi con caratterizzazione Industriale". Nou remèsye lòt manm platfòm Proteomics Necker Vincent Jung ak Joanna Lipecka pou sipò syantifik anpil valè yo ak sijesyon ki bay anpil pitit.

Referans

1. Di Micco, R.; Krizhanovsky, V.; Baker, D.; d'Adda di Fagagna, F. Senesans selilè nan aje: Soti nan Mekanis nan Opòtinite ki ka geri. Nat. Rev Mol. Selil Biol. 2021, 22, 75–95. [CrossRef] [PubMed]

2. González-Gualda, E.; Baker, AG; Fruk, L.; Muñoz-Espín, D. A Guide to Assessing Cellular Senescence in Vitro and in Vivo. FEBS J. 2021, 288, 56–80. [CrossRef] [PubMed]

3. Sikora, E.; Bielak- ˙Zmijewska, A.; Mosieniak, G. Ki sa ki ak sa ki pa selil Senesans. Postepy Biochem. 2018, 64, 110–118. [CrossRef] [PubMed]

4. Choi, E.-J.; Kil, IS; Cho, E.-G. Vezik ekstraselilè ki sòti nan fibroblast senesan diminye efè po a sou diferansyasyon Keratinocyte. Ent. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1022. [CrossRef] [PubMed]

5. Krtolica, A.; Parrinello, S.; Lockett, S.; Desprez, PY; Campisi, J. Senescent Fibroblasts Ankouraje kwasans selil epitelyal ak tumorigenèz: Yon lyen ant kansè ak aje. Pwosedi. Natl. Acad. Sci. USA 2001, 98, 12072–12077. [CrossRef]

6. Wlaschek, M.; Maity, P.; Makrantonaki, E.; Scharffetter-Kochanek, K. Tisi konjonktif ak Fibroblast Senesans nan aje po. J. Envesti. Dermatol. 2021, 141, 985–992. [CrossRef]

7. Paez-Ribes, M.; González-Gualda, E.; Doherty, GJ; Muñoz-Espín, D. Targeting Senescent Cells in Translational Medicine. EMBO Mol. Med. 2019, 11, e10234. [CrossRef]

8. Soto-Gamez, A.; Demaria, M. Entèvansyon terapetik pou aje: Ka a nan senesans selilè. Dwòg Discov. Jodi a 2017, 22, 786–795. [CrossRef]

9. Latorre, E.; Birar, VC; Sheerin, AN; Jeynes, JCC; Hooper, A.; Dawe, HR; Melzer, D.; Cox, LS; Faragher, RGA; Ostler, EL; et al. Ti Molekil Molekil Ekspresyon Faktè Splicing ki asosye ak sekou nan senesans selilè. BMC selil Biol. 2017, 18, 31. [CrossRef]

10. Munir, R.; Semmar, N.; Farman, M.; Ahmad, NS Yon Revizyon Mizajou sou Aktivite Farmakolojik ak Konstitiyan Fitochimik nan Evening Primrose (Genus Oenothera). Pac Azyatik. J. Trop. Biomed. 2017, 7, 1046–1054. [CrossRef]

11. Timoszuk, M.; Bielawska, K.; Skrzydlewska, E. Evening Primrose (Oenothera biennis) Byolojik Aktivite Depandan sou Konpozisyon Chimik. Antioksidan 2018, 7, 108. [CrossRef]

12. Lee, SY; Kim, CH; Hwang, BS; Choi, K.-M.; Yang, I.-J.; Kim, G.-Y.; Choi, YH; Park, C.; Jeong, J.-W. Efè pwoteksyon Oenothera Biennis kont estrès oksidatif oksijene idwojèn ki pwovoke ak lanmò selil nan Keratinocytes po. Lavi 2020, 10, 255. [CrossRef]

13. Granica, S.; Czerwi ´nska, ME; Piwowarski, JP; Ziaja, M.; Kiss, AK Konpozisyon Chimik, Antioksidatif ak Anti-enflamatwa Aktivite Ekstrè Prepare nan Pati Ayeryen nan Oenothera Biennis L. ak Oenothera Paradoxa Hudziok Jwenn apre Kiltivasyon Grenn. J. Agric. Manje Chem. 2013, 61, 801–810. [CrossRef]

14. Fecker, R.; Bouda, V.; Alexa, E.; Avram, S.; Pavel, IZ; Muntean, D.; Kokan, mwen .; Watz, C.; Minda, D.; Dehelean, CA; et al. Depistaj fitochimik ak byolojik nan ekstrè Oenothera Biennis L. Hydroalcoholic. Biomolecules 2020, 10, 818. [CrossRef]

15. Schäfer, L.; Kragballe, K. Sipleman ak lwil oliv Primrose aswè nan dèrmatit atopik: Efè sou asid gra nan netrofil ak epidèm. Lipid 1991, 26, 557-560. [CrossRef]

16. Barbulova, A.; Apone, F.; Colucci, G. Kilti Selil Plant kòm Sous Kosmetik Engredyan Aktif. Kosmetik 2014, 1, 94–104. [CrossRef]

17. Seza, LK; Cech, NB Sinèrji ak antagonism nan ekstrè pwodwi natirèl: Lè 1 plis 1 pa egal 2. Nat. Prod. Rep. 2019, 36, 869–888. [CrossRef]

18. Ceccacci, S.; De Lucia, A.; Tito, A.; Tortora, A.; Falanga, D.; Arciello, S.; Ausanio, G.; Di Cicco, C.; Monti, MC; Apone, F. Yon Ekstrè Oenothera Biennis Kilti Selil Dou ak Aktivite Po Anti-Aje amelyore Pwopriyete Mekanik Selil yo. Metabolites 2021, 11, 527. [CrossRef]

19. Farwick, M.; Köhler, T.; Schild, J.; Mentel, M.; Maczkiewitz, U.; Pagani, V.; Bonfigli, A.; Rigano, L.; Bureik, D.; Gauglitz, GG Pentacyclic Triterpenes ki soti nan Terminalia Arjuna montre plizyè benefis sou po aje ak sèk. Po Pharmacol. Fizyol. 2014, 27, 71–81. [CrossRef]

20. Bonte, F.; Dumas, M.; Chaudagne, C.; Meybeck, A. Enfliyans asid Azyatik, Madecassic Asid, ak Asiaticoside sou Kolagen Imen Sentèz. Planta Med. 1994, 60, 133–135. [CrossRef]

21. Chowdhary, S. Efè yo nan estrès oksidatif sou pwovoke senesans nan fibroblasts imen. J. South Carol. Acad. Sci. 2018, 16, 2.

22. Wang, Z.; Wei, D.; Xiao, H. Metòd endiksyon senesans selilè lè l sèvi avèk estrès oksidatif. Metòd Mol. Biol. 2013, 1048, 135–144. [PubMed]

23. Hildebrand, DG; Lehle, S.; Borst, A.; Haferkamp, ​​S.; Essmann, F.; Schulze-Osthoff, K. -Fucosidase kòm yon nouvo biomarker pratik pou senesans selilè. Cell Cycle 2013, 12, 1922–1927. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, BY; Han, JA; Mwen, JS; Morrone, A.; Johung, K.; Goodwin, EC; Kleijer, WJ; DiMaio, D.; Hwang, ES Beta-Galactosidase Asosye Senesans se Lisosomal Beta-Galactosidase. Aging Cell 2006, 5, 187–195. [CrossRef] [PubMed]

25. Gorgoulis, V.; Adams, PD; Alimonti, A.; Bennett, DC; Bischof, O.; Bishop, C.; Campisi, J.; Collado, M.; Evangelou, K.; Ferbeyre, G.; et al. Senesans selilè: Defini yon chemen pou pi devan. Cell 2019, 179, 813–827. [CrossRef]

26. Matsuoka, S.; Ballif, BA; Smogorzewska, A.; McDonald, ER; Hurov, KE; Luo, J.; Bakalarski, CE; Zhao, Z.; Solimini, N.; Lerenthal, Y.; et al. Analiz Substra ATM ak ATR revele rezo pwoteyin vaste ki reponn a domaj ADN. Syans 2007, 316, 1160–1166. [CrossRef]

27. Zhang, R.; Chen, W.; Adams, PD Diseksyon molekilè nan fòmasyon nan fokis eterokromatin ki asosye ak senesans. Mol. Selil Biol. 2007, 27, 2343–2358. [CrossRef]

28. LaBaer, ​​J.; Garrett, MD; Stevenson, LF; Slingerland, JM; Sandhu, C.; Chou, HS; Fattaey, A.; Harlow, E. Nouvo Aktivite Fonksyonèl pou Fanmi P21 Inibitè CDK yo. Genes Dev. 1997, 11, 847–862. [CrossRef]

29. Scholzen, T.; Gerdes, J. Pwoteyin Ki-67: Soti nan Konnen ak Enkoni. J. Selil Physiol. 2000, 182, 311–322. [CrossRef]

30. Passos, JF; von Zglinicki, T. Metòd pou klasman selil jèn ak selil senesan. Metòd Mol. Biol. 2007, 371, 33–44.

31. Dai, Y.; Tang, H.; Pang, S. Wòl yo esansyèl nan fosfolipid nan Règleman aje ak lavi. Devan. Fizyol. 2021, 12, 1998. [CrossRef]

32. Dashty, M. Hedgehog Signaling Pathway Lye ak Maladi Ki Gen Laj. J. Dyabèt Metab. 2014, 5, 2. [CrossRef]

33. Wang, D.; Lu, P.; Liu, Y.; Chen, L.; Zhang, R.; Sui, W.; Dumitru, AG; Chen, X.; Wen, F.; Ouyang, H.-W.; et al. Izolasyon Selil Senesan Prematire Viv Sèvi ak Teknoloji FUCCI. Sci. Rep. 2016, 6, 30705. [CrossRef]

34. Qian, J.; Beullens, M.; Huang, J.; De Munter, S.; Lesage, B.; Bollen, M. Cdk1 Lòd Evènman Mitotik atravè Kowòdinasyon yon Chanjman Phosphatase Kwomozòm Asosye. Nat. Komin. 2015, 6, 10215. [CrossRef]

35. Kong, M.; Cutts, EE; Pan, D.; Beuron, F.; Kaliyappan, T.; Xue, C.; Morris, EP; Musacchio, A.; Vannini, A.; Greene, EC Imèn Condensin I ak II Kondwi yon gwo konpaksyon ATP-depandan nan ADN nukleozòm lié. Mol. Cell 2020, 79, 99–114.e9. [CrossRef]

36. Kops, GJPL; Gassmann, R. Kouwone Kinetochore la: Corona Fibrous nan Segregasyon Kwomozòm. Tandans Cell Biol. 2020, 30, 653–667. [CrossRef]

37. Ma, HT; Poon, RYC TRIP13 Fonksyone nan Etablisman Pwen Asanble Spindle a pa ranpli O-MAD2. Rep. selilè 2018, 22, 1439–1450. [CrossRef]

38. Kuipers, MA; Stasevich, TJ; Sasaki, T.; Wilson, KA; Hazelwood, KL; McNally, JG; Davidson, mw; Gilbert, DM Trè Stable Chajman nan Mcm Pwoteyin sou Chromatin nan selil k ap viv yo mande pou replikasyon pou dechaje. J. Cell Biol. 2011, 192, 29–41. [CrossRef]

39. Meng, Q.; Gao, J.; Zhu, H.; Li, H.; Lu, Z.; Hong, M.; Zhou, H. Etid la Proteomik nan Serily Passaged Po moun Fibroblast selil Dekouvwi Down-Règleman nan Pwoteyin Konplèks Chromosome Condensin ki enplike nan Replicative Senesans. Byochim. Biophys. Res. Komin. 2018, 505, 1112–1120. [CrossRef]

40. Larochelle, S.; Pandur, J.; Fisher, RP; Salz, HK; Suter, B. Cdk7 Se esansyèl pou mitoz ak pou aktivite kinaz kdk-aktive nan Vivo. Genes Dev. 1998, 12, 370–381. [CrossRef]

41. Leone, M.; Cazorla-Vázquez, S.; Ferrazzi, F.; Wiederstein, JL; Gründl, M.; Weinstock, G.; Vergarajauregui, S.; Eckstein, M.; Krüger, M.; Gaubatz, S.; et al. IQGAP3, yon sib YAP, obligatwa pou bon pwogresyon sik selilè ak estabilite jenom. Mol. Kansè Res. 2021, 19, 1712–1726. [CrossRef] [PubMed]

42. Nandi, AK; Ford, T.; Fleksher, D.; Neuman, B.; Rapoport, AP Atténuation nan ADN Domaj Checkpoint pa PBK, yon Nouvo Mitotic Kinase, Enplike Pwoteyin-pwoteyin entèraksyon ak timè Suppressor P53. Byochim. Biophys. Res. Komin. 2007, 358, 181–188. [CrossRef] [PubMed]

43. Bon, L.; Dimri, GP; Campisi, J.; Chen, KY Règleman nan ekspresyon jèn Dihydrofolate Reductase ak E2F Konpozan nan Fibroblasts Diploid Imèn pandan Kwasans ak Senesans. J. Selil Physiol. 1996, 168, 580–588. [CrossRef]

44. Demichev, V.; Messner, CB; Vernardis, SI; Lilley, KS; Ralser, M. DIA-NN: Neural Networks and Interference Correction Enable Deep Proteome Coverage in High throughput. Nat. Metòd 2020, 17, 41–44. [CrossRef]

45. Tyanova, S.; Temu, T.; Sinitcyn, P.; Carlson, A.; Hein, MWEN; Geiger, T.; Mann, M.; Cox, J. Perseus Computational Platform pou analiz konplè sou done (pwoteje) Omics. Nat. Metòd 2016, 13, 731–740. [CrossRef]

46. ​​Benjamini, Y.; Hochberg, Y. Kontwole pousantaj dekouvèt fo: yon apwòch pratik ak pwisan nan tès miltip. JR Stat. Soc. Ser. B (Metod.) 1995, 57, 289-300. [CrossRef]

47. Perez-Riverol, Y.; Bai, J.; Bandla, C.; García-Seisdedos, D.; Hewapathirana, S.; Kamatchinathan, S.; Kundu, DJ; Prakash, A.; Frericks-Zip, A.; Eisenacher, M.; et al. Resous baz done PRIDE an 2022: Yon sant pou prèv pwoteomik ki baze sou espektometri mas. Asid nikleik Res. 2021, 50, D543–D552. [CrossRef]

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】