Repons pwoteksyon iminitè ak selilè pou SARS-CoV-2 pèsiste jiska 1 ane apre rekiperasyon an

Vaksen kont SARS-CoV-2 yo te lanse atravè lemond pou devlope iminite efikas nan nivo popilasyon an pou anpeche pwopagasyon viris sa a. Efikasite ak dire iminite pwoteksyon yo se faktè enpòtan pou sante piblik. Isit la, nou rapòte sinetik repons iminitè espesifik SARS-CoV-2 nan 204 moun jiska 1-ane apre rekiperasyon nan COVID-19. Konsantrasyon RBD-IgG ak tout longè Spike-IgG ak kapasite netralize serik diminye pandan 6 premye mwa yo, men yo kenbe estab jiska 1 ane apre egzeyat lopital la. Menm moun ki te pwodwi nivo IgG segondè pandan premye etap konvalesans te gen nivo IgG ki te diminye nan yon nivo menm jan an yon ane pita.

Iminite twoupo yo refere a pwoteksyon efikas nan moun ki pa vaksinen oswa ki pa enfekte nan yon sosyete lè plis ak plis moun nan yon sosyete te akeri iminite nan yon sèten maladi atravè vaksen oswa enfeksyon natirèl. Kidonk diminye posiblite pou pwopagasyon ak ensidan epidemi an. An jeneral, lè 70 pousan a plis pase 90 pousan nan popilasyon an nan yon sosyete te akeri iminite kont yon maladi, iminite popilasyon sosyete a ka rive nan yon nivo ase pou pwoteje moun ki pa vaksinen oswa ki pa enfekte. Moun ki enfekte yo iminize kont maladi a.

An menm tan, nou bezwen tou amelyore iminite nou an, ki mande pou bon abitid lavi tankou yon rejim alimantè ki an sante ak egzèsis ase. Anplis de sa, nou te jwenn ke Cistanche kapab tou amelyore iminite. Cistanche se moun rich nan sibstans antioksidan, ki ka diminye radikal gratis nan kò imen an. wòl la, kidonk amelyore iminite.

Klike sou benefis cistanche tubulosa

Miyò, nivo RBD-IgG pozitivman korelasyon ak kapasite netralize serik, sijere wòl reprezantan RBD-IgG nan predi pwoteksyon serom. Anplis de sa, pwoteksyon iminitè selilè espesifik viral, ki gen ladan Spike ak nucleoprotein espesifik, pèsiste ant 6 mwa ak 12 mwa. An jeneral, etid nou an sipòte pèsistans iminite pwoteksyon espesifik viral sou 1 ane.

Viris kowonaviris 2 sendwòm respiratwa grav grav (SARS-CoV-2) repons iminitè espesifik yo enpòtan anpil pou siprime replikasyon viris, amelyore severite maladi a, epi anpeche re-enfeksyon1–4. Moun ki te refè nan enfeksyon SARS-CoV-2 nan kalite sovaj te kapab pwoteje kont re-enfeksyon pa yon mutan D614G1. Deng et al. te demontre ke primat ki pa moun ki ekspoze a SARS-CoV-2 devlope repons antikò ki pisan nan modèl enfeksyon makak rhesus la epi yo sitou iminize kont re-enfeksyon2.

In a clinical trial testing the protective effect of neutralizing antibodies, outpatients who received neutralizing antibody therapy were less likely to have a COVID-19–related hospitalization or visit to an emergency department and were less likely to develop severe symptoms3. A two-dose regimen of BNT162b2 elicited robust immune protection against COVID-19 in persons aged >16 ane 4. Pasyan ki konvalesan SARS-CoV-2 ak moun k ap resevwa vaksen yo anjeneral jenere repons iminitè solid. Repons iminitè pwoteksyon kont enfeksyon SARSCoV-2 konpoze de de pati prensipal, imunoglobin umoral (IgA ak IgG) ak repons selil T.

Objektif ideyal la se reyalize enfeksyon esteril; konsa, pifò etid konsantre sou analiz IgG serom pwoteksyon pou disponiblite pare li yo1,2,4,5. Yon pwoteksyon iminitè selil T ki pisan pral vize selil ki gen viral, mete restriksyon sou gaye viral nan vivo, akselere clearance viral, ak soulaje fado maladi a. Repons umoral ak selil T espesifik viral yo ka dire, ak yon ti bès, jiska 6 a 8 mwa nan moun ki konvalesan SARS-CoV-25,6. Si memwa iminitè pwoteksyon ka kenbe alontèm epi si antikò oswa selil T ka bay pwoteksyon dirab mande pou plis envestigasyon, ak konpreyansyon sou zòn sa a pral benefisye tou devlopman vaksen an.

Isit la, nou analize chanjman dinamik repons iminitè umoral ak selilè espesifik viral yo jiska 1 ane nan yon kowòt swivi longitudinal COVID-19. Nan gwoup reprezantatif pasyan sa a, SARS-CoV-2 nivo espesifik IgM ak IgA diminye anpil nan nivo background nan yon ane. Spike-espesifik IgG ak kapasite pwoteksyon serik tonbe siyifikativman nan premye 6 mwa yo men yo te konsève pou jiska 1 ane. Repons iminitè espesifik SARS-CoV-2 selil T yo rete estab jiska 1 ane apre egzeyat lopital la. Konklizyon sa yo vle di repons iminitè pwoteksyon kont SARS-CoV-2 ka dire omwen 1 ane.

Rezilta yo

COVID{0}} karakteristik kòwòt.

Yon kowòt reprezantan 204 moun refè (68.2 pousan) nan 299 pasyan yo pandan menm peryòd la ki te admèt yo nan Guangzhou Eighth People's Hospital, Guangzhou, Lachin, soti 20 janvye rive 29 fevriye 2020, te patisipe nan etid swivi sa a. Nan patisipan sa yo, 29 yo te dyagnostike kòm sentòm grav, 162 kòm modere, 12 kòm modere, ak youn kòm senptomatik (Tablo 1). Laj yo ak sèks yo te reprezante tout popilasyon pasyan an (Supp. Fig. 1). Eksepte pou sèl pasyan ki asymptomatik, tout moun te bay echantiyon san nan plizyè moman; erezman, 50 moun (24.5 pousan nan 204) te akonpli tout wonn nan swivi ak kontribye echantiyon san nan tout kat pwen tan swivi. Kidonk, yon evalyasyon sinetik nan memwa iminitè te posib. Nan ti bout tan, kowòt swivi a reprezante tout popilasyon pasyan COVID-19 nan Guangzhou nan kòmansman 2020.

Chanjman Longitudinal nan antikò umoral kont SARSCoV-2.

Domèn reseptè-obligatwa (RBD) nan Spike SARS-CoV-2 jwe yon wòl esansyèl nan lyezon viral ak reseptè li yo, anzim konvèti anjyotansin 2 (ACE2), nivo antikò RBD-espesifik korelasyon ak reprezante li. netralize kapasite7. Nou analize sinetik sikile RBD-espesifik IgM, IgA, ak IgG antikò sou tan ak de-etap endirèk imunoassay electrochemiluminescence immunoassay kits8.

First, all patients were positively seroconverted (at least one IgM >1 COI, IgA >1 COI, or IgG >1 COI) ak yon pwen omwen yon fwa, ki konfime yon enfeksyon SARS-CoV-2 reyèl te fèt pou tout pasyan yo chwazi yo. Pasyan grav yo te pwodwi siyifikativman pi wo RBD-IgA, RBD-IgG, ak Spike-IgG, men se pa RBD-IgM, pase pasyan modere nan etap lopital la (Fig. 1a-d ak Supp. Fig. 2). Rezilta nou an te sipòte ke plis ekspoze pwolonje nan sistèm iminitè a nan viris te amelyore jenerasyon antikò espesifik viral.

Apre sa, nou te jwenn ke nivo RBD-espesifik IgM diminye dramatikman soti nan 4.669 (vle di COI, apre sa) a 0.785 (negatif) (apeprè sis fwa, p <0.0 001, yon tès t ki pa pè ak koreksyon Welch) nan 3 mwa apre egzeyat (figi 1a). RBD-espesifik IgA tou te diminye anpil soti nan 9.283 a 3.234 (sèlman 2.86-pliye, p <0.0001, yon tès t ki pa pè ak koreksyon Welch a) nan 3 mwa, men kenbe jiska 6 mwa (3.491, p { {24}}.073, yon tès t ki pa pè ak koreksyon Welch). Finalman, RBD-IgA te vin negatif nan 12-mwa pwen (0.57) (p <0.0001, yon tès t ki pa pè ak koreksyon Welch) (Fig. 1b). Depi IgA fè yon fonksyon netralizasyon nan mukoza a, nivo serik li yo te espere pi ba menm nan pik la pase sa ki nan tisi mukoza. Si tisi mukoza yo ta ka kenbe yon IgA ki estab mande pou plis envestigasyon.

RBD-IgG te konsidere kòm endikatè kritik pwoteksyon iminitè kont enfeksyon viris. Analiz nou an te montre ke RBDIgG te gen yon rediksyon 2.87-pliye soti nan 825 a 287 AU/ml nan 3 premye mwa yo (p <0.0001, yon tès t ki pa pè ak koreksyon Welch a), epi pi lwen nan 153 AU/ml nan pwen yo 6-mwa tan (p=0.0033) (Fig. 1c, yon tès t ki pa pè ak koreksyon Welch a), ki te konsistan avèk rapò anvan yo5,6 .

Miyò, nivo RBD-IgG yo kenbe estab jiska 1 ane (170 AU / ml an mwayèn, Fig. 1c). Nivo tout longè Spike-IgG, mezire endepandamman, montre yon modèl ki sanble ak sa yo ki nan RBD-IgG (Fig. 1d), plis koribe obsèvasyon ki anwo a ke antikò ta kenbe ki estab soti nan 6 mwa a 1 ane apre yon bès rapid.

RBD-IgG ak tout longè Spike-IgG nivo yo te montre yon gwo korelasyon pozitif (r=7411, p <0.0001,n=474, Pearson korelasyon, Fig. 1e). Yon gwo korelasyon pozitif ant RBD-IgG ak tout longè Spike-IgG yo te obsève nan plizyè pwen tan (Fig.1e ak Supp. Fig. 3).

Thus, RBD-IgG was used in the following analysis. To investigate what kind of patients tends to maintain long-term RBD-IgG-producing capacity, we test the influence of initial antibody titers on antibody persistence. We divided the follow-up individuals with at least the first three follow-up visits into high RBD-IgG (maximal titer >1000 AU/ml) ak ba (100

Fig. 1 Kinetics of SARS-CoV-2 viral-specific antibodies up to 1 year. SARS-CoV-2-infected individuals who attended the follow-up program were included in this analysis. a–c RBD-IgM, IgA, and IgG changes since symptom onset. x-axis, follow-up time (day). y-axis, antibody titer (COI cut-off index; or arbitrary unit, AU/ml). The shaded regions represent the in-patient stage. The average values in the 1-month, 3-month, 6-month, and 12-month stages were labeled. P values (two-tailed) were shown. Mild (black dots), moderate (blue dots), and severe (red dots) symptoms. d Full-length spike-IgG changes since symptom on-set. x-axis, follow-up time (day). y-axis, antibody titer (AU/ml). e Correlation of RBD-IgG and Spike-IgG. In-hospital stage (black), 1-month follow-up (red), 3-month follow-up (blue), 6-month follow-up (purple), and 12-month follow-up (green). Pearson r number and p-value (two-tailed) were shown. f Longitudinal analysis of RBD-specific IgG between patients with high titer (RBD-IgG >1000 AU/ml, sèk zoranj) ak pasyan ki gen tit ki ba (RBD-IgG<1000 AU/ml, empty circle). g Longitudinal analysis of RBD-specific IgG between severe patients (red circle) and moderate patients (pink circle). Lines in the x-axis and y-axis in a–e indicate the cut-off values. a–d, Mean values were labeled for each column. f, g, Data were presented as median with interquartile range. An unpaired t-test with Welch's correction analysis was applied, and p-values (two-tailed) were labeled. Source data are provided as a Source Data file.

Sinetik pwoteksyon serik kont SARS-CoV-2.

Nou te fè yon tès mikronetralizasyon serik lè l sèvi avèk sistèm enfeksyon SARSCoV-2 vivan, estanda lò pou evalye pwoteksyon serik kont enfeksyon viris, pou chèche konnen si serom toujou pwoteje kont enfeksyon SARS-CoV-2. Nou te jwenn ke tit netralize serik yo te diminye soti nan 1 mwa a 3 mwa (p=0.0024, yon tès t ki pa pè ak koreksyon Welch a) ak 6 mwa (p=0.0168, yon tès ki pa depaire). tès ak koreksyon Welch a), nan yon fason ki sanble ak RBD-IgG ak Spike-IgG (Fig. 2a). Apre sa, yo te kenbe estab jiska 12-mwa (p=0.591, yon tès t ki pa pè ak koreksyon Welch), sa vle di ke SARSCoV-2 pwoteksyon umoral espesifik te kapab pèsiste alontèm.

Piske pasyan grav yo te pwodwi nivo segondè nan antikò pase pasyan modere, si nivo segondè yo te kapab bay pwoteksyon ki pi pisan te toujou enkoni. Nou te jwenn ke sentòm grav yo sèlman te lakòz yon kapasite netralize tanporèman pi wo nan etap konvalesans ki pi bonè (p=0.020, yon tès t ki pa pè ak koreksyon Welch a), ki te diminye soti nan 3-mwa a rive nan {{. {4}}ane vizit (Sup. Fig. 4).

Lè sa a, nou analize korelasyon RBD-IgG ak mikroneutralizasyon serom. Nou te jwenn yon korelasyon pozitif enpòtan ant RBD-IgG ak netralizasyon (r=0.4070, p < 0.0001, n {{6} }, Pearson korelasyon) (Fig. 2b). Se pa etonan, nivo Spike-IgG te gen yon korelasyon pozitif ak kapasite netralizasyon serik (Supp. Fig. 4). Nan nòt, korelasyon ki genyen ant RBD-IgG ak netralizasyon serik echwe pou pou rive nan siyifikasyon estatistik pandan etap entène lopital la (r=0.2101, p=0.0905, korelasyon Pearson, Supp. Fig. 5a) pandan y ap pozitivman kenbe nan 1-mwa (r=0.3952, p <0.0001, korelasyon Pearson), 3-mwa (r=0.2769, p=0. 0135, korelasyon Pearson), 6-mwa (r=3846, p=0.0005, korelasyon Pearson), ak 12-mwa (r=0.5216, p <0.0001, Pearson korelasyon) vizit (Supp. Fig. 5b-e).

Sinetik repons iminitè espesifik nan SARS-CoV-2 selil T.

Viris-espesifik selil T memwa ka evantyèlman diminye severite maladi a lè yo elimine selil ki enfekte ak viris9, fòme yon lòt branch enpòtan nan konbat enfeksyon viris lè li rive. Pou mennen ankèt sou si yon repons iminitè selilè T pwoteksyon ta ka pèsiste, nou te pwodwi pisin peptide Nucleoprotein (N) paske nan pwoteyin viral ki pi abondan li yo10 ak pisin peptide Spike akòz enpòtans yo nan enfeksyon viral ak aplikasyon lajè6. Spike peptides yo te itilize pou jenere pisin peptide S1 ak S2 pou manyen pratik. Nou te itilize twa pisin peptide yo pou analiz tach imunosorban ki lye ak anzim (ELISPOT) gamma interferon (IFN-) nan selil T espesifik viral yo lè l sèvi avèk PBMC fre izole nan vizit 6-mwa ak 12-mwa. Yo montre rezilta deteksyon ELISPOT ki soti nan yon moun reprezantan (figi 3a).

Konpare ak pasyan konvalesans yo nan lopital la, total de selil ki sekrete IFN espesifik viral yo te diminye nan vizit 6-mwa epi yo te kenbe estab nan vizit 12-mwa (figi 3b). Chanjman ki sanble yo te obsève pou pwoteyin N, S1, ak S2 (figi 3c). Pasyan grav yo sanble jenere iminitè selilè T ki pèsistan kont pwoteyin Spike (Sup. Fig. 7). Analiz konpozisyon SARSCoV-2 T repons selilè a revele ke pousantaj N, S1, ak S2 yo byen konsève ak sèlman yon ti bès (figi 3d), ki endike egzistans posib memwa ki dire lontan T jis. kòm enfeksyon SARS nan 200311.

Diskisyon

Nan yon aspè, etid nou an te demontre ke tou de repons iminitè iminitè espesifik SARS-CoV-2 yo ka kenbe pou jiska 1 ane. Nou te obsève ke viral-espesifik RBD-IgG, Spike-IgG, ak kapasite netralizasyon serik te bese byen vit nan 6 mwa, menm jan ak rapò anvan yo5,6,12,13. Erezman, twa paramèt yo kenbe estab apre sa pou 1 ane. Li sanble ke IgG viral-espesifik la ka kenbe nivo aktyèl yo pou yon ti tan.

Fig. 2 Analiz longitudinal pwoteksyon serik kont enfeksyon SARS-CoV-2. Yo te teste serom yo kolekte nan plizyè moman kont enfeksyon viris SARS-CoV-2 vivan. yo te fè yon tès mikronetralizasyon lè l sèvi avèk yon sistèm kilti selil enfeksyon SARS-CoV-2 vivan. aks y, serom dilution pli. Done yo te prezante kòm valè mwayèn ± SEM. Pwen koulè reprezante gravite maladi a. Sentòm modere (pwen vid), modere (pwen ble) ak grav (pwen wouj). Yo te aplike yon tès t ki pa pè ak analiz koreksyon Welch a, epi yo te make valè p (de-ke). b Korelasyon mikroneutralizasyon (pli dilution) ak RBD-IgG (inite abitrè, AU/ml). Yon total de 475 pè yo te analize, ak Pearson r ak p valè (de-tailed) yo te montre. Liy nan aks x ak aks y nan a ak b endike valè koupe yo. Done Sous yo bay kòm yon dosye Done Sous.

Fig. 3 repons espesifik selil T SARS-CoV-2 nan pasyan COVID-19 ki refè yo. Yon reprezantan ELISpot byen imaj ki montre selil IFN ki sekrete yo. N, S1, ak S2, Sentetik pisin peptide sipèpoze nan nucleocapsid (N), Spike 1 subunit (S1), ak 2 (S2). Con A, Concanavalin A pozitiv control. b Tach kantite selil ki sekrete IFN ki endike rediksyon repons iminitè espesifik SARS-CoV-2 sou tan. Nimewo yo se sòm N, S1, ak S2-pi estimile. Done yo te prezante kòm medyàn ak seri entèrkwatil. c Raincloud plot montre diferan nivo repons selilè T pami twa pisin peptide nan diferan moman swivi. d Waffle dot plot ki montre pousantaj konpozisyon repons SARS-CoV-2 pandan 1-ane swivi. Estatistik pa Mann-Whitney U-tès. P valè (de-tailed) te montre. b, c Done yo te reprezante kòm simit bwat-ak-moustach (medyàn ak entèrkartil, limit siperyè, ak limit pi ba). Done Sous yo bay kòm yon dosye Done Sous.

Nan lòt aspè a, etid nou an te montre ke repons espesifik selil T SARS-CoV-2 ta ka relativman estab pou tèm long la (figi 3). Obsèvasyon sa a trè enpòtan nan sitiyasyon aktyèl la. Plizyè souch notwa14-18, tankou B.1.1.7 (tou 501Y.V1, UK souch), B.1.351 (tou 501Y.V2, souch Lafrik di sid), B.1.617.1 ak B.1.617.2 (Lend). souch), B.1.525 (tou 20 A, Nijerya souch), ak B.1.1.28.1 (tou 501Y.V3, Brezil souch) te parèt ak swa plis enfeksyon oswa patojèn oswa toude. Nouvo mutan yo, ki fèt sitou nan domèn RBD, ta ka sove pwoteksyon netralizasyon akeri swa atravè enfeksyon natirèl oswa vaksen SARS-CoV-215,17,18.

Kontrèman ak antikò netralize, selil T ki espesifik viral yo pa t 'kapab bloke antre viris nan selil yo, men yo toujou kapab touye viris entraselilè a lè yo detwi dirèkteman selil ki enfekte ak viris ki prezante peptides viral yo2,11. Kòm anpil epitop viral yo19 ka pwodui nan nenpòt pwoteyin viral san konte Spike pwoteyin pou gwo prezantasyon konplèks istokonpatibilite, nouvo mitasyon pa t 'kapab fasil kraze siveyans iminitè selil T yo. Nan pèspektiv sa a, vaksen ki ta ka pwovoke repons iminitè selil T dirab espesifik viral yo pral pwomèt pou konstwi yon iminite efikas popilasyon kont SARS-CoV-2.

Metòd

Enfòmasyon sou pasyan yo.

Guangzhou Eighth People's Hospital, lopital ofisyèl gouvènman Guangzhou te nonmen an, te resevwa epi trete pasyan COVID-19 pandan premye vag SARS-CoV-2 andemik ki te gaye soti janvye 2020 pou rive mas 2020. 299 pasyan yo te admèt nan Guangzhou Wityèm Lopital Pèp la te enskri nan etid retrospektiv sa a. Desan ak kat pasyan te patisipe nan etid la swivi lè yo bay omwen yon fwa. Enfòmasyon jeneral pasyan yo, ki gen ladan laj, sèks, ak dyagnostik klinik, yo te kolekte nan sistèm enfòmasyon lopital la. Tout pasyan yo te dyagnostike dapre kritè yo nan nouvo dyagnostik nemoni Coronavirus ak plan tretman an (vèsyon esè 7) pibliye pa Komisyon Nasyonal Sante ak Sante. Dyagnostik sentòm grav la te selon kritè sa yo:

1. Detrès respiratwa, to respiratwa (RR) Pi gran pase oswa egal a 30 fwa/min nan eta repo a.

2. Saturasyon oksijèn Mwens pase oswa egal a 93 pousan nan eta repo a.

3. Oksijèn san atè presyon pasyèl (PaO2) / konsantrasyon oksijèn (FiO2) Mwens pase oswa egal a 300 mmHg).

4. Deteryore radyoloji pwatrin D' (X-Ray ak gwo rezolisyon D' CT) kòm yon èd.

Sentòm modere a te dyagnostike lè pasyan yo te gen nemoni vizib, lafyèv, ak/oswa lòt sentòm respiratwa. Sentòm modere a te dyagnostike lè yon ti kras alèz men san sentòm nemoni. Ka asymptomatik yo te dyagnostike lè pasyan yo pa te gen okenn siy sentòm klinik men yo te konfime ke yo te SARS-CoV-2 RNA viral pozitif pandan etap swiv-up apre ekspoze viral oswa kontak sere ak ka konfime.

Definisyon.

Tout moun ki te patisipe nan pwogram swivi sa a te divize an de etap: etap pasyan an ak etap swivi. Yo te gwoupe lèt la kòm 1-mwa (nan 60 jou apre egzeyat), 3-mwa (70 a 135 jou), 6-mwa (150 a 220 jou), ak {{11 }}mwa (280 a 360 jou).

Mezi antikò IgA, IgG ak IgM ki espesifik pou viral.

Echantiyon plasma oswa serom yo te inaktive nan 56 degre pou 30 min epi estoke nan -80 degre anvan tès la. Yo te teste antikò IgA, IgG ak IgM kont SARS-CoV-2 RBD Spike pwoteyin nan echantiyon plasma yo ak twous imunoessai electrochemiluminescence endirèk de-etap (Kangrun Biotech Co., Ltd.), dapre enstriksyon manifakti a. Yon ti tan, echantiyon serom yo te premye enkube ak mikropartikil modifye. Mikropartikil yo te kouvwi ak RBD nan SARS-CoV-2 pwoteyin Spike ak ak antikò akridin ester ki make kont domèn Fc nan antikò imen. Apre plizyè jij nan lave sibstans ki pa lie, deteksyon siyal yo te fèt sou yon analizeur iminitè otomatik chemiluminescence (KAESER1000, Chongqing Cosmax Biotech Co., Ltd.).

Menm jan an tou, yo te teste antikò IgG kont SARS-CoV-2 pwoteyin Spike tout longè nan echantiyon plasma ak twous imunoessai elèktrochemiluminesans endirèk de-etap (Mairui Biotech Co., Ltd.), dapre enstriksyon manifakti a. Tout tès yo te fèt nan kondisyon sevè biosekirite. Titer antikò yo te teste yon fwa pou chak echantiyon serik. Nivo antikò yo prezante kòm valè kimiluminesans mezire divize pa koupe a (endèks koupe, COI). COI<1 was regarded as negative, and COI >1 te konsidere kòm pozitif.

Esè mikronetralizasyon.

Yo te dilye serik chalè-inaktive kat fwa (soti nan 1:4 rive 1:1024) epi answit melanje ak yon volim egal (125 ul) nan yon solisyon viral ki gen 100 TCID50 nan SARS-CoV-2. Apre sa, melanj serom-viris yo te premye enkube pou 2 èdtan nan 37 degre epi yo te Lè sa a, aplike nan yon monokouch VERO E6 semiconfluent an kopi. Apre yon 4-jou enkubasyon, yo te evalye pi ki enfekte ak viris yo. Wells ki gen yon efè vizib sitopatojèn yo te defini kòm enfeksyon viris pozitif.

Tès IFN- ELISPOT imen

Yo te fè tès IFN-ELISPO jan sa te dekri anvan an (1) Yon ti tan, MultiScreen 96-plak filtre byen (Merck Millipore, Darmstadt, Almay) te kouvri ak antikò IFN-monoklonal antimoun (U-Cytech, Netherlands, No. CT{ {5}}) lannwit lan nan 4 degre C. Yo te lave pwi yo ak PBS epi yo te bloke ak mwayen R10 (RPMI-1640, 0.05 mM, 2-mercaptoethanol, 1 mM piruvat sodyòm, 2mM L-glutamat, 10mM 4-({2-hydroxyethyl)-1-piperazineetansulfonic asid [HEPES], 10 pousan serom fetis bovin [FBS], ak penisilin/streptomycin (1×)) pou 2 h nan 37 degre C. Yo te plake PBMC ki te fèk izole epi ankouraje yo an prezans SARSCOV-2 S1 oswa S2 oswa N pisin peptide (GenScript, Lachin) pou 24 èdtan nan 37 degre C. SARS-COV{{29 }} peptides yo gen 20 asid amine nan longè, ak dis asid amine sipèpoze ant peptides sekans. Plak yo te lave ak PBS-Tween 20 (PBST), ki te swiv pa enkubasyon ak biotinylate antimoun IFN-deteksyon antikò (U-Cytech, Netherlands, No. CT640-10) ak alkalin fosfataz (AKP)-konjige streptavidin (BD). , USA, Nimewo 554065). Tach yo te devlope pa enkubasyon nan NBT/BCIP (Pierce, USA) pou 10 min. Tach yo te konte lè l sèvi avèk yon lektè ELISPOT (Bioreader 4000, BIOSYS, Almay). Kantite selil ki fòme tach yo (SFC) rapòte kòm kantite selil ki sekrete IFN- -espesifik antijèn pou chak milyon PBMC.

Analiz estatistik.

Yo te itilize tès t ki pa pè ak koreksyon Welch a, tès Chi-kare ak tès korelasyon Pearson pou analize done yo nan lojisyèl GraphPad PRISM (Vèsyon 5.01). Diferans ant gwoup yo te konpare lè l sèvi avèk tès U Mann-Whitney la ak tès ran-som Kruskal-Wallis pou konparezon miltip ak R estidyo (vèsyon 4.0.2).

Apwobasyon etik.

Etid la te apwouve pa komite etik medikal nan Guangzhou wityèm Lopital Pèp la (No 202001134 ak 202020153). Yo te jwenn konsantman alekri nan men moun volontè.

Rezime rapò.

Gen plis enfòmasyon sou konsepsyon rechèch ki disponib nan rezime rapò rechèch la nati ki lye nan atik sa a.

Done disponiblite

Otè yo deklare ke tout done ki sipòte rezilta etid sa a disponib nan papye a ak dosye enfòmasyon siplemantè li yo. Done Sous yo enkli kòm yon dosye Done Sous. Done sous yo bay nan papye sa a.

Referans

1. Garcia-Beltran, WF et al. Antikò ki netralize COVID-19-predi gravite maladi a ak siviv. Selil 184, 476–488 (2020).

2. Deng, W. et al. Prensipal ekspoze a SARS-CoV-2 pwoteje kont re-enfeksyon nan makak rhesus. Syans 369, 818–823 (2020).

3. Chen, P. et al. SARS-CoV-2 netralize antikò LY-CoV555 nan pasyan ekstèn ki gen Covid-19. N. Engl. J. Med 384, 229–237 (2020).

4. Polack, FP et al. Sekirite ak efikasite vaksen BNT162b2 mRNA Covid-19 la. N. Engl. J. Med. 383, 2603–2615 (2020).

5. Huang, C. et al. 6-mwa konsekans COVID-19 nan pasyan ki sòti nan lopital: yon etid kòwòt. Lancet 397, 220–232 (2021).

6. Dann, JM et al. Memwa iminolojik pou SARS-CoV-2 evalye pou jiska 8 mwa apre enfeksyon. Syans 371, eabf4063 (2021).

7. Tan, CW et al. Yon tès netralizasyon viris ranplasan SARS-CoV-2 ki baze sou entèraksyon ACE2-pwoteyin ak pwoteyin ki bay antikò. Nat. Biotechnol. 38, 1073–1078 (2020).

8. Hu, F. et al. Yon repons iminitè umoral espesifik konpwomèt kont domèn reseptè SARS-CoV-2 ki gen rapò ak pèsistans viral ak koule peryodik nan aparèy gastwoentestinal la. Selil Mol. Imunol. 17, 1119–1125 (2020).

9. Lukacs, NW & Malinczak, CA Exploiter iminite selilè pou pran vaksen kont viris respiratwa. Vaccines 8, 783 (2020).

10. Kim, D. et al. Achitekti SARS-CoV-2 transcriptome. Selil 181, 914–921 (2020).

11. Le Bert, N. et al. SARS-CoV-2-iminite selil T espesifik nan ka COVID-19 ak SARS, ak kontwòl ki pa enfekte. Nature 584, 457–462 (2020).

12. Li, Z. et al. Seroprevalans ak rezistans iminitè umoral nan antikò anti-SARSCoV-2 nan Wuhan, Lachin: yon etid longitudinal, nan nivo popilasyon an. Lancet 397, 1075–1084 (2021).

13. Figueiredo-Campos, P. et al. Seroprevalans antikò anti-SARS-CoV-2 nan pasyan COVID-19 ak volontè ki an sante jiska 6 mwa apre maladi a kòmanse. Lajan ewo. J. Immunol. 50, 2025–2040 (2020).

14. Marot, S. et al. Eterojenite netralizasyon Wayòm Ini a ak varyant SARS-CoV-2 Sid Afriken yo nan travayè swen sante BNT162b2-ki vaksinen oswa konvalesans COVID-19. Clin. Enfekte. Dis. ciab492 https://doi.org/ 10.1093/cid/ciab492 (2021). [En liy devan enprime].

15. Sabino, EC et al. Rezurjans COVID-19 nan Manaus, Brezil, malgre gwo seroprevalans. Lancet 397, 452–455 (2021).

16. Singh, J., Rahman, SA, Ehtesham, NZ, Hira, S. & Hasnain, SE SARS-CoV-2 varyant enkyetid yo ap parèt nan peyi Zend. Nat. Med. 27, 1131–1133 (2021).

17. Planas, D. et al. Sansiblite enfektye SARS-CoV-2 B.1.1.7 ak B.1.351 variants pou neutraliser antikò. Nat. Med. 27, 917–924 (2021).

18. Hacisuleyman, E. et al. Enfeksyon dekouvèt vaksen ak SARS-CoV-2. N. Engl. J. Med. 384, 2212–2218 (2021).

19. Kiyotani, K., Toyoshima, Y., Nemoto, K. & Nakamura, Y. Prediksyon bioenfòmatik nan potansyèl epitop selil T pou SARS-Cov-2. J. Hum. Genet. 65, 569–575 (2020).

Rekonesans

Nou remèsye tout manm gwoup swivi COVID-19 pou kontribisyon endirèk yo nan etid sa a. Nou remèsye tout doktè ak enfimyè ki te pran swen pasyan sa yo e ki te ranmase echantiyon yo nan pawas izolasyon an. Nou remèsye tou tout teknisyen laboratwa yo ki te okipe echantiyon yo epi ki te fè mezi yo nan Guangzhou Uityèm Lopital Pèp la. Travay sa a te sipòte pa Fondasyon Nasyonal Syans Natirèl Lachin nan (No. 81670536, 81770593, ak 82061138006), National Grand Program on Key Infectious Disease Control (2017ZX10202203-004-002 and 2018ZX10301404-003-002), Guangdong Province Department. Fon Syans ak Teknoloji (No. 2020B1111330002), Pwogram Syans ak Teknoloji Sante Guangzhou (20211A010029), Sino-Alman Sant pou Pwomosyon Rechèch (SGC) Rele pou Finansman Repons Rapide pou Pwopozisyon Kolaborasyon Bilateral Ant Lachin ak Almay nan COVID{{14 }} Rechèch ki gen rapò (No. C-0032), ak Pwogram Kle Ijans nan laboratwa Guangzhou (EKPG21-29).

Kontribisyon otè

XD, FH, CL, XT, ak FL te responsab pou konsepsyon etid, sipèvizyon etid, ak analiz done. FH ak FL te ekri papye a. CF, YW, HH, FC, GT, YL, JL, JC, ak MJ te responsab pou rekritman pasyan yo ak echantiyon ak koleksyon done klinik yo. JS, PL, LF, ak LC te fè analiz yo sekans ak byoenfòmatik. QF, LG, ak SC te fè deteksyon viral RNA ak tès antikò. CK te fè tès mikroneutralizasyon an.

Enterè konpetisyon

Otè yo deklare pa gen okenn enterè konpetisyon.

Lòt enfòmasyon

Korespondans ak demann pou materyèl yo ta dwe adrese a XD, FH, XT, oswa FL

Enfòmasyon sou revizyon parèy yo Nature Communications remèsye Bin Cao ak lòt evalè ki anonim yo pou kontribisyon yo nan revizyon parèy travay sa a. Rapò evalyatè kanmarad yo disponib.

Nòt Piblikatè Springer Nature rete net sou reklamasyon jiridiksyon nan kat pibliye yo ak afilyasyon enstitisyonèl yo.

Aksè Louvri

Atik sa a gen yon lisans Creative Commons Attribution 4.0 Entènasyonal Lisans, ki pèmèt itilizasyon, pataje, adaptasyon, distribisyon, ak repwodiksyon nan nenpòt mwayen oswa fòma, toutotan ou bay otè orijinal la (yo) kredi apwopriye. ) ak sous la, bay yon lyen ki mennen nan lisans Creative Commons, epi endike si yo te fè chanjman. Imaj yo oswa lòt materyèl twazyèm pati nan atik sa a enkli nan lisans Creative Commons atik la sof si yo endike otreman nan yon liy kredi nan materyèl la. Si materyèl yo pa enkli nan lisans Creative Commons atik la epi règleman legal yo pa otorize itilizasyon ou a oswa depase itilizasyon otorize a, w ap bezwen jwenn pèmisyon dirèkteman nan men moun ki gen copyright.

For more information:1950477648nn@gmail.com