R. Vesicarius L. Egzèsis efè nefroprotektif kont estrès oksidatif ki lakòz Cisplatin
Mar 26, 2022
Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com
Md Mahmudul Hasan1, Pifò. Sayla Tasmin2, Ahmed M. El-Shehawi3, Mona M. Elseehy4, Md. Abu Reza1ak Ariful Haque2*
Résumé
Background:Cisplatin se yon dwòg antikansè eksepsyonèl, men itilizasyon li yo te diminye konsiderableman akòz nefrotoksisite grav. R. vicarious L. se yon legim fèy ki evidan ak anti-angiogenic, anti-enflamatwa, anti-proliferative, epatoprotective, ak nephroprotective potansyèl. Se poutèt sa, etid sa a te fèt yo enspekte ekstrè methanol li yo (RVE) pou efè posib nefroprotective.
Metòd:Prensipalman, nan vitro, aktivite antioksidan RVE te konfime ki baze sou 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radikal gratis scavenging aptitid. Apre sa, sourit gason Swis Albino yo te trete ak cisplatin (2.5 mg / kg) pou 5 jou siksesif pou pwovoke nefrotoksisite. Yo te egzamine rekiperasyon nan nefrotoksisite nan trete bèt yo ak RVE (25, 50, ak 100 mg / kg) intraperitoneally (ip) pou pwochen 5 jou youn apre lòt. Apre tretman an fini, sourit yo te sakrifye ak ren yo te kolekte. Yon pati nan li te omojènize nan tanpon fosfat sodyòm pou evalye nivo malondialdehyde (MDA), yon lòt pati te itilize pou evalye ekspresyon jèn (NQO1, p53, ak Bcl-2). Anplis, oksijene idwojèn (H2O2) netralize kapasite RVE te evalye nan selil HK-2 nan vitro. Finalman, phytochemicals byoaktif nan RVE yo te detèmine lè l sèvi avèk gaz chromatografi-spèktrometri mas (GC-MS).
Rezilta:RVE te montre aktivite antioksidan an vitro nan yon mòd ki depann de dòz la ak 37.39 ± 1.89 ug/mL valè IC50.
Tretman ak RVE konsiderableman (p <{{0}}.05) diminye="" kontni="" mda="" nan="" tisi="" ren="" yo.="" anplis="" de="" sa,="" ekspresyon="" jèn="" nqo,="" p53,="" ak="" bcl-2="" te="" diminye="" anpil="" (p=""><0.05) nan="" yon="" fason="" ki="" depann="" de="" dòz="" akòz="" administrasyon="" rve.="" rve="" siyifikativman="" (p=""><0.05) ranvèse="" nivo="" h2o2="" nan="" selil="" hk-2="" nan="" prèske="" nòmal.="" soti="" nan="" gc-ms,="" dis="" konpoze="" ki="" gen="" ladan="" twa="" antioksidan="" li="" te="" ye="" "4h-pyran-4-yon="" sèl,="" 2,="" 3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl-"="" ,="" "hexadecanoic="" asid",="" ak="" "squalene"="" yo="" te="" detekte.="" ekstrè="" a="" te="" rich="" ak="" yon="" alkaloid="">
Konklizyon:An jeneral, RVE posede yon efè pwoteksyon kont domaj nan ren sisplatin-induit.
Mo kle:Cisplatin, R. vicarious, sourit, ren, selil HK-2, estrès oksidatif, jèn NQO1
Cistanche deserticola anpeche maladi ren, klike la pou jwenn echantiyon an
Entwodiksyon
Estrès oksidatif se rezilta disproporsyon ant fòmasyon espès oksijèn reyaktif (ROS) ak mekanis defans antioksidan regilye [1]. Reyaksyon byochimik regilye, ekspoze souvan nan anviwònman an favorab, ak konsomasyon elve nan ksenobiotik rezilta nan pwodiksyon ROS [1]. ROS kominike avèk rezidi sistein yo nan molekil siyal redox-sansib ki gen ladan faktè transkripsyon, pwoteyin tirozin fosfataz, ak pwoteyin kinaz; an konsekans, oksidasyon gwoup thiol sou résidus sa yo gide chanjman nan pwoteyin yo vize, aksyon byolojik, kapasite siyal, iminite, ak paradigm selil siplemantè vivan / mouri [2]. Espès chimik ki gen oksijèn ki gen pwopriyete reyaktif yo konnen kòm ROS ki gen ladan radikal gratis ak molekil ki pa radikal tankou superoksid ak H2O2, respektivman [3]. Estrès oksidatif pwovoke pa ROS lye ak etyoloji anpil maladi ki gen ladan kansè. Lesemi myeloid egi (AML) se yon kwasans kansè nan selil san nan mwèl zo a. Evènman selilè ak molekilè ki kache AML yo gen ladan domaj ADN, pwopagasyon klonal, ogmante lanmò selil, ak plis enstabilite jenetik, ki se rezilta estrès oksidatif ROS-induit [4]. Fizyoloji imen te gen don ak anpil mekanis ki ka jenere antioksidan pou egzèse pwoteksyon kont estrès oksidatif ki mennen nan pwoteje selil yo kont efè toksik ak sèvi nan prevansyon maladi [5]. Sepandan, selil yo devlope mekanis andojèn pou kontrekare estrès oksidatif ak konsève ROS ki nesesè yo [6].
NAD(P)H: kinon oksidoreductase 1 (NQO1) se yon flavoanzim [7] ki ka katalize rediksyon de oswa kat elektwon epi sèvi ak pwopriyete sa a pou dezentoksike kinin [8]. Li ka pwoteje selil yo kont domaj oksidatif lè yo kenbe redox monte bisiklèt sou kote ak nan diminye pwodiksyon an nan radikal gratis [8]. Anplis dezentoksikasyon ksenobyotik, NQO1 patisipe tou nan netralizasyon superoksid, modulasyon degradasyon p53 proteasomal [9], anpèchman Bcl-2 [10], ak sansiblite amelyore nan blesi selil [11].
Cisplatin se premye FDA (Food and Drug Administration) apwouve dwòg antikansè ki baze sou platinum [12]. Cisplatin egzèse apoptoz pa pwovoke estrès oksidatif ak ekspresyon jèn timè p53 [12]. Plizyè efè negatif ki gen ladan nefrotoksisite, epatotoksisite, gastrotoksisite, ototoksisite, myelosuppression, ak nerotoksisite se rezilta estrès oksidatif sisplatin-induit [12]. Efè segondè sa yo te konsiderableman diminye itilizasyon cisplatin menm si li gen aktivite antikansè eksepsyonèl. Cisplatin se byen li te ye pou pwovoke estrès oksidatif ak siprime jèn NQO1 nan ren sourit [13]. Se poutèt sa, rechèch ak validation pou sous natirèl efikas nan antioksidan yo ap vin tounen yon zòn nan konsyans. Konsomasyon antioksidan dyetetik ki sòti nan plant tankou flavonoid, karotenoid, ak konpoze fenolik ka mennen nan pwoteksyon kont maladi kadyovaskilè, katarak, ak kansè [14].
R. vicarious (Polygonaceae) ke yo rekonèt kòm "Takpalong/ Chukapalong/Amlabetom" nan Bengali [15]. Li grandi nan zòn dezè ak semi-dezè nan pwovens Lazi, Ostrali ak Afrik Dinò [16]. Li se yon ti plant ki an danje nan Bangladèch. Nan Bangladèch, moun konsome plant la antye kòm yon legim apre yo fin kwit manje ak sèl, epis santi bon diferan, ak lwil oliv. Pafwa, moun itilize sèlman fèy fre yo nan sòs salad melanje kòm yon altènativ a leti. Fèy kri a se yon ti kras tounen, men li vin trè tounen apre kwit manje. Anplis, yon ti kantite fèy yo anjeneral melanje nan asyèt pwason pandan kwit manje yo gen yon gou yon ti kras asid.
Plant sa a yo te itilize kòm yon legim ak zèb medsin atravè lemond [17]. Fèy yo ak grenn yo itilize kòm yon antidot pou venen koulèv ak eskòpyon, respektivman [17]. Nan tretman popilè, R. vicarious te itilize depi lontan nan trete maladi epatik, move dijesyon, konstipasyon, pil, vomisman, flatulans, pwoblèm kè, doulè, maladi larat, dispèpsi, mal dan, bwonchit, opresyon, gal, leucoderma, ak kòm yon laksatif, lestomak, aperitif, tonik, dyurèz, ak analgesic [18]. Plant sa a gen anpil konpoze biyolojik enpòtan tankou flavonoid, anthraquinones, karotenoid, vitamin, lipid, ak asid òganik, ki byen li te ye kòm antioksidan, antimikwòb, ak ajan antikansè [19]. Chak pati nan plant sa a gen quercetin (flavonoid) nan yon kantite ki wo [15]. Plant sa a gen 0.25 mg vitamin A, 1.33 mg vitamin C, 2.37 mg vitamin E [15], 3.38 mg flavonoid, ak 5.66 mg polifenol [20] pou chak 100 g pwa sèk.
Shahat ak kòlèg [21] te montre efè anti-angiogenic ak anti-proliferative nan metanol (80 pousan) ekstrè nan R. vikarious pati ayeryen kont karsinom hepatocellular nan yon modèl rat. Yon lòt etid te montre potansyèl anti-angiogenic nan R. vikarious ekstrè [22]. Methanol ekstrè nan antye R. vicarious egzèse pwoteksyon kont epatotoksisite kabòn tetrachloride-induit nan vivo [23]. Efè anti-enflamatwa nan lapen yo te evidan pa ekstrè fèy metanolik nan R. vicarious [24]. Yon etid resan [25] rapòte nan vivo efè nefroprotektif nan etanolik fraksyonè R. vikarious ekstrè kont gentamicin ak potasyòm dichromate toksisite.
Kenbe enfòmasyon ki anwo yo an konsiderasyon, nou vize pou enspekte efè R. vikarious ekstrè (RVE) an tèm de rekiperasyon nan nefrotoksisite sisplatin-induit atravè kenbe ekspresyon jèn NQO1 nan yon modèl bèt.
benefis sante cistanche: trete maladi ren
Materyèl ak metòd
Pwodwi chimik ak reyaktif
Cisplatin ak 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) yo te achte nan men SIGMA-ALDRICH (USA).
Kreatinin Kolorimetrik Essay Twous (ID pwodwi - 700,460) te achte nan men Cayman Chemical (USA). Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), serom fetal bovine (FBS), ak antibyotik (10,000 U/mL penisilin ak 10,000 ug/mL streptomycin) yo te achte nan men Gibco (Gibco Laboratories, USA). Twous ROS-Glo™ H2O2 Assay ak GoTaq® qPCR Master Mix te jwenn nan Promega (USA). Twous transkripsyon ranvèse TIAN- Script M-MLV te achte nan men TIANGEN (Lachin) ak primè nan IDT (Integrated DNA Technologies, Malezi). Tout lòt pwodwi chimik ak reyaktif yo te itilize nan eksperyans sa a te nan klas analyse.
Koleksyon echantiyon plant ak preparasyon ekstrè
Fresh R. plant vicarious yo te achte nan yon mache lokal nan Sonadighi, Rajshahi, Bangladèch. Doktè Ahmad Humayan Kabir, Depatman Botanik, University of Rajshahi, Bangladèch, te idantifye ak otantifye echantiyon plant. Yon echantiyon anba bon nimewo. 00095 te estoke nan èrbyòm Depatman Botanik, University of Rajshahi. Pati ayeryen yo nan plant la yo te netwaye, seche nan 37 degre, tè nan yon poud koryas lè l sèvi avèk yon seche rad elektwonik, epi estoke nan yon veso ki fèmen nan 4 degre. Poud amann lan (10 g) te fonn nan metanol (500 mL). Kontni an te sonike (Soni-prep 150, Lachin) nan 20 kHz pou 10 min. Filtrasyon ekstrè a te pote soti lè l sèvi avèk Fib Glass Filter papye (Macherey NAGEL, GmBH, Alman) ak DURAN Filtering Aparèy (Alman). Finalman, yo te konsantre filtraj la lè l sèvi avèk yon seche rad friz (VirTis Benchtop Pro, SP SCIENTIFIC, USA). Ekstrè a te finalman rele RVE.
Tès aktivite antioksidan in vitro
Kapasite antioksidan an vitro nan RVE te pote baze sou scavenging nan DPPH jan sa dekri deja [26] ak ti modifikasyon. Te evalye kapasite radikal DPPH nan RVE ki baze sou konvèti koulè wouj violèt DPPH nan koulè jòn. Melanj reyaksyon an nan chak tib mikwo-santrifij (2 mL) fèt 95 0 μL solisyon metanolik nan radikal DPPH (0.1 mM) ak 50 μL RVE soti nan senk konsantrasyon diferan (200, 500, 1000, 2000, ak 4000 ug). /mL metanol) pou fè konsantrasyon final 10, 25, 50, 100 ak 200 ug/mL. Yon lòt tib ki gen 50 μL metanol ak 950 μL solisyon metanolik nan DPPH te kenbe kòm kontwòl. Yo te kite tib tès yo pou 30 minit nan yon kote ki fè nwa. Yo te pran absorbans melanj yo nan 517 nm lè l sèvi avèk GENESYS 10S UV-VIS espektrofotomètr (Thermo SCIENTIFIC, USA). Finalman, yo te kalkile pousantaj aktivite radikal scavenging (RSA) ki baze sou dekolorasyon DPPH lè l sèvi avèk fòmil sa a pousantaj RSA=[(ADPPH − ARVE)/ADPPH] × 100 kote ADPPH se absòbe solisyon DPPH la. (kontwòl) ak ARVE se absòbe solisyon RVE a. Konsantrasyon kote RVE te lakòz 50 pousan RSA te rele kòm valè IC50 epi yo te kalkile lè l sèvi avèk yon graf ki mete pousan RSA kont diferan konsantrasyon RVE yo te itilize.
Bèt eksperimantal ak konsepsyon eksperimantal
Sourit Gason Swis Albino ki gen 42 jou (30-32 g pwa kò) yo te aklimate pou 1 semèn anvan yo kòmanse eksperyans la nan yon chanm (tanperati apeprè 25 ± 2 degre ak ~ 50 pousan imidite, 12 h sik nwa / limyè). Yo te bay dlo pou bwè ak manje ad libitum.
Sourit yo te owaza separe an uit gwoup (n {{0}}). Premye (kontwòl) gwoup la te trete ak 0.2 mL 0.9 pousan NaCl. Kat pwochen gwoup yo te trete ak cisplatin nan 2.5 mg / kg pou 5 jou nan yon entèval 24 èdtan. Apre administrasyon cisplatin, yon gwoup (dezyèm gwoup) te kite san okenn lòt tretman epi yo te plase kòm gwoup kontwòl ensiste. Twazyèm, katriyèm, ak senkyèm gwoup yo te plis trete ak RVE nan 25, 50, ak 100 mg / kg, respektivman pou 5 jou. Pli lwen twa gwoup yo te trete ak RVE sèlman nan 25, 50, ak 100 mg / kg, respektivman pou 5 jou. Cisplatin ak RVE te fonn nan dlo distile. Tout tretman yo te bay intraperitoneally. Apre 24 èdtan nan dènye tretman an, bèt yo te elimine apre dislokasyon nan matris [25]. Lè sa a, yo te louvri peritoneum la ak sizo, san yo te kolekte apre pike kè a, epi ren yo te kolekte lè l sèvi avèk forceps. San yo te sibi tcheke nivo a nan kreyatinin nan serom. Yo te sibi ren yo evalye nivo malondialdehyde ak ekspresyon jèn yo.
Mezi nan kreyatinin serik
Yo te mezire kreyatinin serik lè l sèvi avèk Creatinine Colorimetric Assay Twous-700,460 (Cayman Chemical, USA) swiv pwotokòl manifakti yo bay ak twous la.
Mezi peroksidasyon lipid ren
Malondialdehyde (MDA) se yon pwodwi final per-oksidasyon lipid nan tisi ren epi anjeneral yo mezire kòm yon endikatè pwodiksyon ROS. Sepandan, nivo MDA yo te mezire nan tisi ren dapre yon etid anvan [27]. Okòmansman, tisi ren yo te omojènize nan tanpon fosfat sodyòm (0.1 M, pH 7.4). Yon solisyon reyaksyon ki gen ladan 0.8 pousan asid thiobarbituric (1.5 mL), 8.1 pousan SDS (200 μL), 20 pousan (pH 3.5) asid acetic (1.5 mL), ak dH2O (600 μL) te ajoute nan 100. μL nan tisi omojeneize, ak melanj lan te Lè sa a, enkube nan 95 degre pou 1 èdtan. Apre refwadisman, melanj yo te santrifuje nan 10,000 g pou 10 min nan 4 degre epi yo te mezire absorpsyon nan supernatant a nan 532 nm ak estanda 1, 1, 3, 3- tetra methoxy propane. Kantite total pwoteyin yo te mezire lè l sèvi avèk Bradford Pwoteyin Essay twous (BIO-RAD, USA), epi lè w konpare li ak albumin serom estanda bovine (BSA). Entansite peroksid lipid yo te atikile kòm nanomol (nM) nan MDA pou chak miligram (mg) nan pwoteyin.
Reyaksyon chèn polymerase an tan reyèl (PCR an tan reyèl)
Yo te fè PCR an tan reyèl jan sa dekri deja [28, 29]. Yo te izole RNA total ki soti nan tisi ren yo lè l sèvi avèk TRIzol® reyaktif (Invitrogen) dapre pwotokòl manifakti a te founi. Lè sa a, RNA izole (1 ug) te konvèti nan cDNA. Premyèman, 2 μL hexamer o aza (10 μM), 2 μL dNTPs (10 mM), 1 ug RNA, ak nuclease-gratis HO jiska 15 μL yo te pran ak enkubasyon pou 5 min nan 70 degre. Te melanj lan imedyatman mete sou glas pou 2 minit. Lè sa a, 4 μL nan 1st strand tanpon (5x) ak 1 μL M-MLV transkriptaz ranvèse yo te ajoute nan chak tib ak enkubasyon pou 10 min ak 50.
min nan 25 degre ak 42 degre, respektivman. Finalman, anzim transkriptaz ranvèse M-MLV la te inaktive pa enkubasyon melanj lan nan 95 degre pou 5 min. Pwodwi cDNA sentèz yo te sibi PCR an tan reyèl pou kantite ekspresyon jèn NQO1, p53, ak Bcl-2 lè l sèvi avèk primè espesifik (Tablo 1). Chak reyaksyon (10 μL) te fèt an triple ki gen ladan 5 μL GoTaq qPCR Master Mix (2x) (Promega, USA), 0.5 μL (10 mM) chak primè, 3 μL dlo san nukleaz, ak 1 μL cDNA nan 48-plak reyaksyon byen yo. Te fè sikilasyon tèmik lè l sèvi avèk yon machin PCR an tan reyèl (Eco™ Real-Time PCR System, Illumine®, USA) ak kondisyon sa yo monte bisiklèt: 95 degre pou 10 minit, ki te swiv pa 40 sik nan 95 degre pou 30 s, 50 degre pou 30 s, ak 72 degre pou 25 s. Espesifik reyaksyon PCR te konfime pa analize koub fonn nan 95 degre pou 15 s, 45 degre pou 15 s, ak 95 degre pou 15 s. Espesifik reyaksyon PCR te konfime pa analize koub fonn nan 95 degre pou 15 s, 45 degre pou 15 s, ak 95 degre pou 15 s. Kantifikasyon relatif ekspresyon jèn yo te fèt lè l sèvi avèk jèn GAPDH andojèn kòm kontwòl ki baze sou metòd ΔΔCq.
Kilti selil ak tretman
Liy selil epitelyal tibil ren imen, selil HK-2, yo te konsève nan DMEM ak 10 pousan FBS ak antibyotik (50 U/mL penisilin ak 50 ug/mL streptomycin) nan yon enkibatè ak 5 pousan CO2 ak 95. pousan imidite nan 37 degre.
H2O2 tès mezi
Nivo H2O2 nan selil HK-2 yo te estime lè w itilize ROS-Glo™ H2O2 Assay kit (Promega, USA) dapre pwotokòl manifakti twous la bay. Selil HK-2 (1000 selil) nan 70 μL DMEM yo te plase nan pwi plak 96-byen microtiter la. Apre yo fin pèmèt atachman selil yo sou sifas miray la, yo te ranplase 10 μL DMEM ki soti nan pwi plak mikrotiter ak 10 μL cisplatin (25 μM nan DMEM) epi yo te kenbe nan yon kouveuz pou 12 èdtan. Lè sa a, yo te ajoute 10 μL RVE pou fè konsantrasyon final 125, 250, ak 500 ug/mL nan DMEM ak enkubasyon pou yon lòt 12 èdtan. Apre sa, yo te ajoute 20 μL H2O2 Solisyon Substra ak 100 μL ROS-Glo™ Solisyon Deteksyon nan chak pi. Reyaksyon an te enkube nan tanperati chanm pou 20 minit. Finalman, yo te mezire luminesans lè l sèvi avèk GloMax Luminometer (Promega, USA).
GC-MS analiz
Analiz GC-MS de RVE (disoud nan methanol) te fèt jan sa dekri deja [30] lè l sèvi avèk GCMS-QP2020 (SHIMADZU) ki gen ladann yon echantiyon oto (AOC{ {5}}s), yon oto-enjektè (AOC-20i), ak yon gaz Chromatograph (GC{-2010 Plus) koòdone ak yon espektwomèt mas ki ekipe ak yon SH-Rxi{{1{{ 37}}}}Sil MS kolòn kapilè (30 m × 0.25 μm ID × 0.25 μm DF). Elyòm gaz konpayi asirans lan te kenbe nan yon pousantaj koule konstan nan 1.72 mL / min, ak yon volim piki nan 5 μL te sibi ak yon rapò fann 10: 1. Tanperati a nan injektè a te kenbe nan 220 degre, tanperati a ion-sous te 280 degre, tanperati fou a te pwograme soti nan 80 degre (kenbe pou 2 min), ak yon ogmantasyon de 5 degre / min a 150 degre (kenbe tan 5.0). min), Lè sa a, 5 degre / min a 280 degre, ki fini ak yon izotèmik 8 min nan 280 degre. Yo te pran spectre mas nan 1.5 kV ak yon entèval eskanè 0.5 s epi echantiyon an te kouri nan yon seri 45-350 m / z. Reta sòlvan an te soti nan 0 a 3 min, ak tan an total GC-MS kouri te 55 min. Konsantrasyon relatif konpoze yo detekte yo te mezire lè w konpare zòn pik mwayèn li yo ak zòn total la. Entèpretasyon mas-spectre nan GC-MS te fèt lè l sèvi avèk baz done National Institute Standard and Technology (NIST) ki gen ladan NIST08, NIST08s, ak NIST14.
Analiz estatistik
Analiz estatistik yo te fèt pa ANOVA apre tès T3 Dunnett la lè l sèvi avèk lojisyèl IBM SPPS (vèsyon 20). Done yo atikile kòm vle di ± devyasyon estanda (SD). Konparezon enpòtan an te konsidere nan p<0.05. all="" of="" the="" graphs="" were="" prepared="" using="" microsoft="" excel="" (version="">
Rezilta yo
Tès aktivite antioksidan in vitro
Menm si te deja rapòte RVE pou gen aktivite antioksidan, nou te revcheke aktivite antioksidan ekstrè nou an lè l sèvi avèk kapasite DPPH gratis radikal. RVE netralize DPPH dòz-depandans (figi 1). RVE revele konsiderab aktivite antioksidan an vitro ak valè IC50 kalkile RVE te 37.39 ± 1.89 ug/mL.
Mezi nan kreyatinin serik
Nivo kreyatinin serik nan sourit yo te ogmante anpil (p <{{0}}.05) apre="" administrasyon="" cisplatin="" (tablo="" 2).="" tretman="" ak="" rve="" konsiderableman="" (p=""><0.05) amelyore="" nivo="" kreyatinin="" nan="" yon="" mòd="" ki="" depann="" de="" dòz="" (tablo="">
Mezi peroksidasyon lipid ren
Konpare ak kontwòl, cisplatin konsiderableman (p <{{0}}.05) ogmante="" kontni="" mda="" nan="" tisi="" ren="" nan="" sourit="" (tablo="" 3).="" kontrèman,="" tretman="" rve="" a="" konsiderableman="" (p=""><0.05) retabli="" mda="" nan="" prèske="" nòmal="" nan="" yon="" mòd="" ki="" depann="" de="" dòz="" (tablo="">
PCR an tan reyèl
Cisplatin anpil (p <{{0}}.05) diminye="" ekspresyon="" mrna="" nqo1="" pa="" 0.15-pliye="" epi="" ogmante="" p53="" ak="" bcl-2="" mrna="" ekspresyon="" pa="" 24="" ak="" 4.2-pliye,="" respektivman="" (figi="" 2).="" rve="" konsiderableman="" (p=""><0.05) diminye="" ekspresyon="" mrna="" nqo1,="" p53,="" ak="" bcl-2="" nan="" yon="" fason="" ki="" depann="" de="" dòz="" la="" (figi="" 2).="" konpare="" ak="" gwoup="" la="" sèlman="" sisplatin-trete,="" ekspresyon="" mrna="" nqo1="" te="" ogmante="" pa="" 3.57,="" 6.36,="" ak="" 9.28-pliye="" nan="" 25,="" 50,="" ak="" 100="" mg="" kg="" rve,="" respektivman="" (figi="" 2a).="" yon="" fwa="" ankò,="" ekspresyon="" mrna="" p53="" te="" diminye="" pa="" 0.63,="" 0.46,="" ak="" 0.21-="" pliye="" nan="" 25,="" 50,="" ak="" 100="" mg="" kg="" rve,="" respektivman="" (fig.="" 2b).="" ekspresyon="" mrna="" bcl-2="" te="" redwi="" tou="" pa="" 0.71,="" 0.40,="" ak="" 0.32-pliye="" nan="" 25,="" 50,="" ak="" 100="" mg="" kg="" rve,="" respektivman="" (fig.="" 2c).="" men,="" pa="" gen="" okenn="" chanjman="" enpòtan="" (p=""> 0.05) yo te jwenn nan nivo ekspresyon jèn NQO1, p53, ak Bcl-2 akòz tretman ak RVE (Fig. 3).
H2O2tès mezi
Nan tès mezi H2O2, H2O2nivo te konsidere kòm pwopòsyonèl ak luminesans. Administrasyon cisplatin anpil (p <{{0}}.05) ogmante="" nivo="" h2o2="" pa="" 2.2-pliye="" (figi="" 4).="" tretman="" ak="" rve="" diminye="" konsiderableman="" (p=""><0.05) nivo="" h2o2="" pa="" 0.25,="" 0.38,="" ak="" 0.49-pliye="" nan="" 125,="" 250,="" ak="" 500="" ug/ml,="">
GC-MS analiz
Yon total de 10 konpoze (Tablo 4 ak Fig. 5) ki gen ladan "Izoborneol, pentamethyldisilanyl etè (sesquiterpene alkòl)", "Thymine (pyrimidine nucleobase)", "4H-Py-ran-4-yon sèl, 2,{{ 8}}dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl- (saponin)", "Asid Hexadecanoic, methyl ester (methyl ester asid gra)", "9,12- Octadecadienoic asid, methyl ester (methyl ester asid gra)", "9- Octadecenoic asid (Z)-, methyl ester (methyl ester asid gra)", "methyl stearate (methyl ester asid gra)", "Diisooctyl phthalate (estè)", "13- Dokosenamid, (Z)- (alkaloid)", ak "Squalene (tri-terpene)" yo te detekte nan RVE.
benefis cistanche tubolosa: bese lipid nan san
Diskisyon
Antioksidan natirèl ak sentetik yo te etidye ak revele yo dwe fonksyonèl swa pou prevansyon oswa amelyore toksisite nan fizyoloji bèt [31]. Sipleman antioksidan yo se eleman ki devlope swa pa sentèz chimik oswa pa ekstraksyon nan manje natirèl, men sa yo pa idantik nan konpozisyon ak antioksidan ki disponib nan manje [5]. Se poutèt sa, opinyon yo separe sou tan si wi ou non antioksidan sentetik bay benefis sante menm jan ak antioksidan natirèl [32]. Ankourajman an ap vini diminye itilizasyon sipleman antioksidan sentetik epi chèche altènatif, bon mache, renouvlab, natirèl, epi pètèt sous antioksidan efikas natirèl.
Youn nan mekanis ki pi enpòtan yo se chemen faktè nikleyè erythroid-2 ki gen rapò ak faktè-2 (Nrf2) ki jeneralman pwoteje selil yo kont estrès oksidatif ki pwovoke pa estrès eksojèn oswa andojèn [27]. Antioksidan efikas yo pwovoke ekspresyon Nrf2, ki pi lwen deplase nan nwayo a epi li mare nan eleman repons antioksidan (ARE) ki pwovoke ekspresyon faz II dezentoksikasyon ak jèn antioksidan NQO1 [33, 34]. NQO1 se lajman ak diferansye eksprime nan yon fason espesifik tisi. NQO1 se yon flavoprotein antioksidan cytosolic ki katalize 2-rediksyon elektwon kinon nan idrokinon, sa ki lakòz dezentoksikasyon elektwofil yo ak antisipasyon sikilasyon redox [35]. Dapre yon etid anvan [36], -lapachone aktive NQO1, ki plis ogmante nivo NAD plis entraselilè ak pwoteje ren an kont sisplatin-induit blesi egi.
Cisplatin se li te ye pou pwovoke domaj nan manbràn filtraj glomerulè a atravè estrès oksidatif, enflamasyon, ak apoptoz ki tout ansanm mennen nan redwi pousantaj filtraj glomerulè ak pèt pèmeyabilite manbràn nòmal [37]. Se poutèt sa, nivo kreyatinin nan serik te ogmante. Kreyatinin serik se youn nan makè potansyèl fonksyonalite ren yo. Tretman Cisplatin ogmante kontni MDA nan tisi ren ki se yon pwodwi segondè nan peroksidasyon lipid ak rapò sa a se konstan ak etid anvan yo [27, 35, 37, 38]. Tretman ak RVE siyifikativman redwi kontni MDA nan tisi ren yo. An menm tan an, nivo a kreyatinin te tou diminye ki endike efè a amelyore nan RVE.
Anplis, ekspresyon NQO1 te siyifikativman diminye, epi ekspresyon p53 ak Bcl-2 te siyifikativman ogmante apre ekspoze a cisplatin. An tèm de ekspresyon NQO1 ak p53 nan vivo, rezilta nou an konsistan avèk yon etid anvan [13]. Yon etid resan [39] te montre ke cisplatin siyifikativman diminye ekspresyon Bcl-2 nan ren sourit, men etonan nou jwenn ekspresyon ki wo. Diferans sa a ka rezilta nan diferans dòz [40] kòm Mohamed ak kòlèg [39] te itilize 8 mg / kg pou 12 jou, tandiske nou te itilize 2.5 mg / kg pou sèlman 5 jou. Yon lòt etid [41] te deklare ke cisplatin ka ogmante ekspresyon Bcl-2 nan yon dòz lè li pa cytotoxik. Yon fwa ankò, ogmante ekspresyon Bcl-2 sansibilize selil yo nan estrès oksidatif [40].
Sepandan, ekspresyon de p53 ba nan kondisyon fizyolojik nòmal men espere yo dwe moute-reglemante yon fwa trete ak cisplatin paske ajan chimyoterapi ki baze sou platinum sa a aktive chemen apoptotik depandan p53. Yon fwa nou te trete sourit ak cisplatin, p53 te siyifikativman ogmante nan ren sourit konpare ak kontwòl. Yon lòt proto-onkogene Bcl-2 tou gen rapò ak nivo ekspresyon NQO1. Imite ekspresyon p53 la, nou te jwenn tou ke nivo Bcl- 2 yo te ogmante ak tretman cisplatin, men yo te re-kouvri anpil apre tretman ak RVE. Sa a posib, an repons a estrès oksidatif, jèn p53 la vin aktive ak rezilta nan arete sik selilè, senesans, oswa apoptoz [6]. Avèk dezentoksikasyon, NQO1 twòp ekspresyon souvan konsidere kòm korelasyon ak apoptoz nan selil kansè [10], menm si mekanis ki kache nan apoptoz ak ekspresyon NQO1 toujou kontwovèsyal. Anplis de sa, nan karsinom epatoselilè, NQO1 twòp ekspresyon diminye ekspresyon Bcl-2 [10]. Proto-onkogene Bcl- 2 tou gen p53 tankou korelasyon ak ekspresyon NQO1. p53 se yon faktè sekans-espesifik transkripsyon ki vin aktive pa anpil kalite estrès selilè [42], tandiske Bcl-2 twòp ekspresyon aji kòm mitokondriyo estabilize pò yo fasilite lage cytochrome-c sou estrès oksidatif [12]. Nan ka nou an, nou tcheke tou de repons jèn yo ak tretman cisplatin nan tisi ren nòmal epi nou jwenn ekspresyon ogmante yo. Tretman RVE te retounen ekspresyon p53 ak Bcl-2 nan prèske nòmal nan yon fason ki depann de dòz la. Sa a jan de Bcl -2 ekspresyon abrogasyon yo te montre tou lè l sèvi avèk ROS scavenger Trolox [43]. Anplis, nivo H2O2 a te ogmante ansibleman nan selil HK-2 akòz tretman ak cisplatin in vitro. Apre tretman ak RVE, nivo H2O2 te siyifikativman retabli nan anviwon nòmal. Sa a se petèt akòz efè tretman RVE ki ogmante ekspresyon NQO1 [44], ki egzèse pwoteksyon kont estrès oksidatif [6].
Kwomatogram GC-MS konfime egzistans dis konpoze nan RVE. Pami sa yo, "4H-Pyran- 4-yon sèl, 2, 3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl-", "Hexadecanoic asid", ak " Squalene" se byen koni antioksidan [45-47]. Twa konpoze sa yo tout ansanm petèt egzèse yon efè nefroprotektif sinèrjetik. Etid anvan yo te rapòte tou sou endiksyon ekspresyon NQO1 pa vitamin A [48], vitamin C [49], vitamin E [50], flavonoid [51], ak polifenol [50]. Se pou sa, rapò sa a sijere élucider si extrait patikilye sa a genyen anyen nan mitan vitamin A, vitamin C, vitamin E, flavonoïdes, ak polyphenol, ou non.
Konklizyon
Konklizyon an jeneral sijere ke RVE se fizyolojik efikas nan pwoteje ren kont domaj sisplatin-induit. Se poutèt sa, li enpòtan pou elicide konpoze egzak ki responsab pou diminye nefrotoksisite sisplatin ki ka vin benefisye pou aplikasyon imen.
Rekonesans
Otè yo rekonesan anvè Konsèy Bangladèch pou Rechèch Syantifik ak Endistriyèl (BCSIR), Rajshahi Branch pou bay sipò laboratwa pou quantifier RNA.
Kontribisyon otè yo
MMH te fè konsepsyon eksperimantal, eksperimantasyon, analiz ak preparasyon done, ekri ak koreksyon maniskri, revize ak ekri maniskri; MST & MME fè eksperimantasyon ak analiz done; AME & MAR kontribye nan sipèvizyon ak resous; AH te responsab pou konsèptualizasyon, sipèvizyon, resous, ak koreksyon maniskri. Tout otè
revize maniskri a. Otè yo li epi apwouve maniskri final la.
Finansman
Travay aktyèl la te finanse pa Taif University Researchers Supporting Project Number (TURSP - 2020/75), Taif University, Taif, Arabi Saoudit.
Disponibilite done ak materyèl.
Tout done ki enpòtan yo disponib epi yo ka bay otè korespondan an sou demann.
Deklarasyon
Apwobasyon etik ak konsantman pou patisipe
Etik pou fè eksperyans sa a te apwouve pa Komite Enstitisyonèl Animal, Etik Medikal, Biosekirite, ak Biosecurity (IAMEBBC), Enstiti Syans Byolojik (IBSc), University of Rajshahi, epi yo te bay sou nimewo memo 31/{{1} }IAMEBBC/IBSc. Tout metòd yo te fè dapre direktiv ak règleman yo bay nan komite etik ki mansyone anwo a. Etid sa a te fèt an konfòmite ak direktiv ARRIVE (Rechèch sou bèt: Rapò sou Eksperyans In Vivo). "Konsantman pou patisipe" pa aplikab pou etid sa a.
Detay otè
1Molekilè Biyoloji ak Syans Pwoteyin Laboratwa, Depatman Jeni Jenetik ak Biotechnologie, Fakilte Syans Lavi ak Syans Latè, University of Rajshahi, Rajshahi 6205, Bangladèch. 2Molecular Pathology Laboratwa, Enstiti Syans Byolojik, University of Rajshahi, Rajshahi 6205, Bangladèch. 3Depatman Biotechnologie, Kolèj Syans, Inivèsite Taif, PO Box 11099, Taif 21944, Arabi Saoudit. 4Depatman Jenetik, Fakilte Agrikilti, Alexandria University, Alexandria 21545, peyi Lejip.
Referans
1. Bagchi K, Puri S. radikal gratis ak antioksidan nan sante ak maladi: yon revizyon. East Mediterr Health J. 1998;4:350–60.
2. Koh EM, Lee EK, Song CH, Song J, Chung HY, Chae CH, et al. Ferulate, yon eleman aktif nan jèm ble, amelyore dezekilib PTK/PTP ak estrès oksidatif ki pwovoke ak inaktivasyon PP2A. Toksik Res. 2018;34(4):333–41.
3. Hassan AI, Ibrahim RY. Gen kèk pwofil jenetik nan fwa Ehrlich ascites sourit ki gen timè anba estrès iradyasyon. J Radiat Res Appl Sci. 2014;7(2):188–97.
4. Zhou FL, Zhang WG, Wei YC, Meng S, Bai GG, Wang BY, et al. Patisipasyon nan estrès oksidatif nan rplonje nan lesemi egi myeloid. J Biol Chem. 2010;285(20):15010–5.
5. Pham-Huy LA, He H, Pham-Huy C. Radikal gratis, antioksidan nan maladi ak sante. Int J Biomed Sci. 2008;4:89–96.
6. Srijiwangsa P, Na-Bangchang K. Wòl NAD (P) H-quinone oxidoreductase 1 (NQO1) sou pwogresyon kansè ak chemoresistance. J Clin Exp Oncol. 2017;6:1–6.
7. Siegel D, Yan C, Ross D. NAD (P) H: quinone oxidoreductase 1 (NQO1) nan sansiblite a ak rezistans nan kinon antitumor. Biochem Pharmacol. 2012;83(8):1033–40.
8. Dinkova-Kostova AT, Talalay P. NAD (P) H: quinone acceptor oxidoreductase 1 (NQO1), yon anzim antioksidan multifonksyonèl ak cytoprotection eksepsyonèlman versatile. Arch Biochem Biophys. 2010;501(1):116–23.
9. Cullen JJ, Hinkhouse MM, Grady M, Gaut AW, Liu J, Zhang YP, et al. Dicumarol anpèchman nan NADPH: kinon oksidoreductase pwovoke anpèchman kwasans nan kansè nan pankreyas atravè yon mekanis superoksid-medyatè. Kansè Res. 2003;63(17):5513–20.
10. Zhang X, Han K, Yuan DH, Meng CY. Ekspresyon twòp nan NAD (P) H: kinon oksidoreductase 1 inibit pwopagasyon selil epatoselilè karsinom ak pwovoke apoptoz pa aktive chemen AMPK/PGC-1. ADN selil Biol. 2017;36(4):256–63.
11. Zeekpudsa P, Kukongviriyapan V, Senggunprai L, Sripa B, Prawan A. Suppression de NAD (P) H-quinone oxidoreductase 1 amelyore sansiblite selil cholangiocarcinoma nan ajan chimyoterapi. J Exp Clin Cancer Res. 2014;33(1):1–13.
12. Dasari S, Tchounwou PB. Cisplatin nan terapi kansè: mekanis molekilè nan aksyon. Eur J Pharmacol. 2014;740:364–78.
13. Zhu X, Jiang X, Li A, Zhao Z, Li S. S-Allylmercaptocysteine diminye nefrotoksisite sisplatin-induit nan repwesyon nan apoptoz, estrès oksidatif, ak enflamasyon. Eleman nitritif. 2017;9(2):166.
14. Matkowski A. Plant nan kilti vitro pou pwodiksyon an nan antioksidan-yon revizyon. Biotechnol Adv. 2008;26(6):548–60.
15. El-Bakry AA, Mostafa HAM, Alam EA. Aktivite antioksidan Rumex vicarious L. nan etap vejetatif kwasans lan. Asian J Pharm Clin Res. 2012;5:111–7.
16. Rechinger KH. Rumex (Polygonaceae) nan Ostrali: yon rekonsiderasyon. Nuytsia. 1984;5:75–122.
17. Shahat AA, Alsaid MS, Alyahya MA, Higgins M, Dinkova-Kostova AT. NAD (P) H: Kinonon oksidoreductase 1 aktivite pwodiktè nan kèk plant medsin Arabi Saoudit. Planta Med. 2013;79(06):459–64.
18. El-Hawary SA, Sokkar NM, Ali ZY, Yehia MM. Yon pwofil konpoze bioaktif Rumex vicarious L. J Food Sci. 2011;76(8): C1195–202.
19. Barbosa-Filho JM, Alencar AA, Nunes XP, Tomaz AC, Sena-Filho JG, Athayde- Filho PF, et al. Sous alfa-, beta-, gama-, delta-ak epsilon- karotèn: yon revizyon ventyèm syèk la. Rev Bras. 2008;18(1):135–54.
20. Laouini SE, Ouahrani MR. Fitochimik tès depistaj, nan vitro antioksidan ak aktivite anti-bakteri nan Rumex vikarious L. ekstrè. Syans etid Res: Chem Chem Engi Biotech Food Ind. 2017;18:367–76.