Kontakte:jerry.he@wecistanche.com

Lin Bai|Gui‐ying Shi|Ya‐jun Yang|Wei Chen|Lian-feng Zhang|Chuan Qin

Cistanche gen yon efè anti-aje

Résumé

Background: N bès ki gen rapò ak tan nan kapasite rejenerasyon ak omeyostazi ògàn se yon karakteristik pi gwo nanaje. Rehmannia glutinosa ak Astragalus membranaceus yo te itilize kòm medikaman tradisyonèl Chinwa èrbal pou amelyore iminite ak lavi pwolonje. Sepandan, mekanis nan ki medikaman èrbal sa a ralanti aje se enkoni. Nan etid sa a, nou te envestige mekanis nan èrbal laefè anti-aje.

Metòd: Sourit yo te manje rejim siplemantè ak R. glutinosa oswa A. membranaceus pou 10 mwa; gwoup kontwòl la te manje yon rejim alimantè estanda. Yo te evalye fenotip yo lè l sèvi avèk yon sistèm nòt nòt ak analiz siviv. Pousantaj fenotip senesans selil souch ematopoyetik (HSCs) te detèmine pa analiz selilè fluoresans aktive. Fonksyon an ak mekanis HSC yo te analize pa tès klonojèn ak reyaksyon an chèn polymerase an tan reyèl.

Rezilta: laefè anti-ajenan R. glutinosa se akòz fonksyon an amelyore nan HSCs. Sourit manje ak R. glutinosa montre karakteristik yon ralantiajepwosesis, ki gen ladan diminye senesans ak ogmantasyon pousantaj siviv. Analiz sikometri koule te montre kantite selil Lin-Sca1 plis c-kit- (LSK), HSC alontèm (LT-HSCs) ak HSCs kout tèm (ST-HSCs) nan gwoup R. glutinosa. Nan vitro, tès klonojenik yo te montre kapasite pou renouvèlman pwòp tèt yo LT-HSC yo ki soti nan gwoup R. glutinosa a epi kenbe silans LSK atravè ekspresyon p18 regilasyon. Gwoup R. glutinosa la te montre tou diminye nivo espès oksijèn reyaktif yo ak pousantaj selil ‐gal plis atravè downregulation pwoteyin p53 ak p16 ki asosye ak senesans selilè yo.

Konklizyon: Rehmannia glutinosa fè egzèsisanti-ajeefè pa kenbe silans la ak diminye senesans nan HSCs.

MO KLE: anti-aje, selil souch ematopoyetik, trankil, Rehmannia glutinosa

1|ENTWODIKSYON

Aje yo defini kòm yon bès fonksyonèl ki depann de tan ki afekte pifò òganis vivan yo.1 Se selil souch ki kenbe lonjevite òganis yo sitou.2 Selil souch ki espesifik nan tisi yo gen kapasite pou renouvèlman pwòp tèt yo ak diferansye nan yon varyete selil efèktè yo. 3 Sepandan, pandan pwosesis aje a, kapasite pou renouvèlman pwòp tèt ou an bese, evantyèlman mennen nan akimilasyon nan tisi ki pa repare, ki domaje nan òganis ki gen laj yo.4 Pèt kapasite pou kenbe yon balans ant trankilman ak diferansyasyon nan selil souch/pwojenyè a. lòj ka lakòz lanmò oswa maladi ki asosye ak laj.2 Anplis de sa, etid resan yo sijere ke rajenisman selil souch ka ranvèse fenotip aje a.5,6 Nan sistèm ematopoyetik la, selil souch ematopoyetik (HSCs) responsab pou pwodiksyon selil san. Nan sourit ki gen laj, sistèm ematopoyetik la montre defisyans selil T ak B lenfoyid epi kantite selil myeloid ogmante. HSC ki aje yo te montre diminye aktivite renouvèlman pwòp tèt yo ak kapasite rekonstriktif ematopoyèz redwi. Miyò, chanjman ki gen rapò ak laj nan lòj HSC yo manifeste nan lame aje a kòm anemi, ogmante tandans pou neoplasm myeloproliferative, diminye fonksyon iminitè ak ogmante ensidans kansè.7-9 Sepandan, mekanis HSC aje ak aje. efè medikaman èrbal sou aje HSC yo enkoni.10

Moun yo te konsène ak reta pwosesis la vieillissement Et rete jenn depi nan tan lontan akanti-ajese yon konsantre aktyèl nan rechèch. Medikaman tradisyonèl Chinwa te resevwa pi plis atansyon pou tretman divès maladi ki asosye ak aje. Anpil remèd fèy yo itilize nan medikaman tradisyonèl Chinwa yo konnen yo bay efè pozitif kont aje atravè mekanis diferan. Rehmannia glutinosa ak Astragalus membranaceus yo te lajman itilize nan fason sa a pou dè milye ane.

Rehmannia glutinosa yo itilize pou trete divès maladi dyabetik, amelyore metabolis zo a nan maladi osteyopowoz la, ak anpeche enflamasyon fwa ak fibwoz. Anplis de sa, zèb sa a gen lòt efè ki gen ladananti-fatig, antidepresyon ak pwopriyete neuroprotective. Nan kèk ane ki sot pase yo, etid famasi sou R. glutinosa ak konpozan aktif li yo te konsantre sitou sou gwo aksyon li yo sou sistèm san, andokrin, kadyovaskilè ak sistèm nève yo.11-14 Kidonk, yo te montre R. glutinosa posede iminitè fò. ‐aktivite amelyorasyon, ki te bay baz teyorik pou plis etid.

Astragalus membranaceus posede pwopriyete tonik, epatopwotektif, dyurèz ak èkspèktoran15 epi yo montre li montre imunomodulateur,16.anti-enflamatwa,epiantioksidaneffects.17 Elisidasyon mekanis molekilè ki kache efè medikaman tradisyonèl Chinwa yo nan pratik klinik se yon etap kle nan aplikasyon yo atravè lemond, ak sijè sa a se kounye a yon sijè nan enterè rechèch entans.

Kidonk, nan etid sa a, nou te manje sourit alimantasyon complétée ak R. glutinosa ak A. membranaceus pou 10 mwa yo eksplore mekanis ki kache kapasite nan R. glutinosa ogmante lonjevite.

2|MATERYÈL AK METÒD

2.1|Gwoupman bèt ak tretman

Sourit fi C57BL/6J yo te kenbe nan yon anviwònman san patojèn epi yo te manje ak yon rejim alimantè estanda. Itilizasyon bèt nan etid sa a te apwouve pa Komite Swen ak Itilizasyon Animal nan Enstiti Syans Animal Laboratwa nan Peking Union Medical College. Sourit yo (ki gen laj 10 mwa) yo te owaza divize an twa gwoup (n=20/gwoup). Gwoup kontwòl la te manje ak yon rejim alimantè estanda (Beijing HFK Biosicence, Beijing, Lachin). Rejim yo nan de lòt gwoup yo te complétée ak tè R. glutinosa ak A. membranaceus (Beijing Tong Ren Tang Chinese Medicine, Beijing, Lachin), respektivman, nan yon dòz 200 mg / d pou 10 mwa. Yo te chwazi dòz sa a lè l sèvi avèk metòd nòmalizasyon sifas kò a pou konfime dòz dwòg yo soti nan etid imen ak etid sourit. Yo te detèmine pwa kò a chak 2 mwa epi yo te anrejistre siviv chak jou.

2.2|Evalyasyon degre nan senesans

Yo te adopte yon sistèm nòt nòt pou evalye degre senesans selon kritè defini pa Takeda et al.18 Yo te chwazi chak kategori ki nan lis nan pwotokòl la nan siy klinik ki asosye ak pwosesis aje a. Yo te bay chak sourit nan laj 18 mwa epi yo te ajoute nòt nan chak kategori pou detèmine nòt jeneral la.

2.3|Sitometri koule

Selil yo te rekòlte nan timus, larat, san periferik (PB) ak mwèl zo (BM). Yo te retire larat ak tim la imedyatman, yo te lave ak saline epi yo te peze. Larat ak tim yo te omojeneize dousman nan yon omojèn vè epi selil yo te sispann nan saline esteril tampon fosfat (PBS). Selil ki soti nan PB yo te aplike nan liz globil wouj nan san (BD Biosciences, San Jose, CA, USA). Selil ki soti nan BM yo te izole nan flòch tou de tibya ak femur ak PBS esteril. Tout selil yo te izole pa filtraj sou yon may esteril nilon epi yo te tache pandan 30 minit nan 4 degre ak antikò sa yo ki konjige fluorofor: phycoerythrin (PE)-konjige anti-CD3 (G4.18), allophycocyanin (APC)-konjige anti-konjige. ‐ CD4 (OX35) ak PE-Cy7-konjige anti-CD8a (OX8). Pou selil BM yo, makè liyaj yo te tache lè l sèvi avèk biotin-konjige anti-sourit CD4 (RM4-5), CD5 (53-7.3) CD8a (53-6.7), CD11b (M1/70), B220 (RA3-6B2), TER119 (TER‐ 119) ak Gr1 (RB6‐8C5), ki te swiv pa tach ak antikò APC-eFluor 780-streptavidin konjige a te jwenn tou nan eBioscience (San Diego, CA, USA). Yo te itilize antikò sa yo pou tach sifas yo: APC imunoglobulin (Ig)M (II/41), fluorescein isothiocyanate (FITC) IgD (11-26), PE-Cy7 Sca-1 (D7), PE Flt3 ( A2F10), FITC B220 (RA3‐6B2), FITC CD34 (RAM34), PerCP‐Cy5.5 CD127 (A7R34), PE CD16/CD32 (93) ak PerCP‐Cy5.5 CD3e (145‐2C11). Tout antikò yo te jwenn nan eBiosciences (San Diego, CA, USA). Done yo te akeri pa yon FACS

Aria II (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA) ak analize lè l sèvi avèk lojisyèl FlowJo (Three Star, Ashland, OSWA, USA).

2.4|Analiz sik selilè

Pou analiz sik selil yo, selil total BM yo te tache pou makè sifas selil souch yo (Lin–Sca‐ 1 plis c‐ KitHigh; LSTKs), answit fiks ak pèmeabilize (00‐5123‐43; Becton Dickinson; ) anvan tach ak FITC Ki‐

67 antikò ak 7-aminoaktinomycin D (7-AAD). Akizisyon done yo te fèt sou FACS Aria II (Becton Dickinson). Done yo te analize avèk lojisyèl FlowJo.

2.5|Senesans-asosye ‐gal tach

Senescence-asosye aktivite (SA)--gal tou te teste pa flow cytometry lè l sèvi avèk C12FDG jan sa dekri pa manifakti a (Molecular Probes, Eugene, OR, USA). Yon ti tan, selil souch yo te premye tache pou makè sifas selil yo ak Lè sa a, enkubasyon ak 100 nmol L-1 bafilomycin A1 pou 1 èdtan nan 37 degre pou pwovoke alkalinizasyon lizozomal. Apre yo fin lave ak PBS, selil yo te enkube ak yon 2 mmol L-1 C12FDG pou 1-2 èdtan nan 37 degre epi yo analize yo lè l sèvi avèk yon FACS Aria I (Becton Dickinson).

2.6|Detèminasyon pwodiksyon espès oksijèn reyaktif (ROS).

Selil yo te enkube ak dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA; Beyotime, Shanghai, Lachin) nan 37 degre pou 20 minit. DCFH-DA difize pasif nan selil yo, kote li deacetylated pa esteraz yo fòme 2′,7′-dichlorofluorescein ki pa fliyoresan (DCFH). Kantite fliyoresans ki emèt korelasyon ak kantite ROS nan selil la. Done yo te akeri sou yon FACS Aria I (Becton Dick-inson) epi yo te analize avèk lojisyèl FlowJo.

2.7|Analiz an tan reyèl reyaksyon chèn polymerase (PCR).

Yo te ekstrè RNA total nan selil yo lè l sèvi avèk reyaktif TRIzol (Invitrogen, San Diego, CA, USA) dapre enstriksyon manifakti a. Jèn enterè yo te anplifye nan RNA total ki te trete ak DNase I lè l sèvi avèk M-MLV Reverse Transcriptase (Promega, Madison, WI, USA)

ak primè poly-dT. Jadendanfan yo itilize pou PCR yo te jan sa a: p21 (5′‐TCCAGACATTCAGAGCCACA‐3′ ak 5′‐CGAAGAGACAACGG- CACACT‐3′, Tm=60 degre, 30 sik), p53 (5′‐CATGAACCGCCGACC-TATC‐ 3′ ak 5′‐TCCCGGAACATCTCGAGGC‐3′, Tm=62 degre, 35 sik), p16 (5′‐CGAACTCTTTCGGTCGTACCC‐3′ ak 5′‐ CGAATCTGCACCGTAGTTGAGC‐3′, Tm=62 degre, 35 sik), p57 (5′‐ AGGAGCAGGACGAGAATCAA‐3′ ak 5′‐ TTCTCCTGCGCAGTTCTC TT‐3′, Tm=61 degre, 30 sik), p19 (5′‐ATGGGTCGCAGGTTCTTGGT‐ 3′ ak 5′‐GGCAGTGGGGTCCTC ′, Tm=61 degre, 35 sik), p18 (5′‐GGGACCTAGAGCAACTTACT‐3′ ak 5′‐TGACAGCAAAAC-CAGTTCCA‐3′, Tm=61 degre, 30 sik), glyceraldehyde 3‐fosfat dehydrogenase (5′‐GAGCGAGACCCCACTAACAT‐3′ ak 5′‐TTCACACCCATCACAAACAT‐3′, Tm=60 degre, 25 sik). Yo te pote PCR an tan reyèl (RT) lè l sèvi avèk SYBR Premix Ex Taq II (TaKaRa Shuzo, Kyoto, Japon) sou sistèm deteksyon ABI StepOne™ (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA).

2.8|Esè klonojèn

Alontèm (LT)- HSC yo te klase pa klasman selil ki aktive fluoresans (FACS) epi yo te kiltive yo nan plak selil 96 pui yo lè l sèvi avèk yon mwayen baz metilceluloz (HSC007; R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) . Yo te prepare dis pwi replike pou chak echantiyon. Nou te itilize yon plak kilti selil 96 pui, twa selil pou chak pi. De semèn apre plak, kantite ak gwosè koloni yo te konte anba yon mikwoskòp.

2.9|Analiz estatistik

Done yo te analize pa yon sèl-fason ANOVA lè l sèvi avèk Microsoft Excel (Microsoft, Redmond, WA, USA) ak lojisyèl GraphPad Prism (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). Done yo te prezante kòm mwayen ± SD. Yo te konsidere P < 0.05="" pou="" endike="" siyifikasyon="">

3|REZILTA

3.1|R. glutinosa ak A. membranaceus te egzèse efè anti-aje

Pou konfime aefè anti-ajenan R. glutinosa ak A. mem- branaceus, nou envestige efè yo nan administrasyon kòm yon sipleman dyetetik (200 mg / d). Imedyatman, nou anrejistre pwa kò a, degre nan senesans ak pousantaj siviv nan sourit. Pwa kò sourit manje ak R. glutinosa oswa A. membranaceus te nòmal konpare ak sa yo ki nan gwoup kontwòl la, byenke te gen yon diminisyon nan pwa kò a nan gwoup la R. glutinosa ak A. membranaceus nan 20 mwa (Figi 1A). Analiz degre nan senesans revele yon ogmantasyon fiks ak irevokabl nan nòt nòt la ak laj avanse nan gwoup R. glutinosa ak A. membranaceus konpare ak sa ki nan gwoup kontwòl la, byenke ogmantasyon an te plis make nan A. membranaceus la. gwoup (Figi 1B). Nòt nan nòt segondè te akòz yon kòmansman pi bonè nan pèt pasivite ak reyaksyon, pèt nan glossiness po ak ogmante grossity, pèt cheve, blesi peryoftalmik, ogmante lordokyphosis nan kolòn vètebral la ak yon ogmantasyon pi plis nan severite yo.18 Sourit nan A. Gwoup sourit membranaceus te montre karakteristik fenotip senesans ki gen plis mak, ki gen ladan pèt glossiness po ak pèt cheve. Koub siviv yo te montre ke lavi sourit nan gwoup R. glutinosa ak A. membranaceus te yon ti kras pi long pase sa nan gwoup kontwòl la (Figi 1C). Done sa yo konfimeefè anti-ajenan tou de R. glutinosa ak A. membranaceus, byenke R. glutinosa yo te jwenn yo dwe pi efikas nan ralanti pwosesis la aje.

Figi 1 Rehmannia glutinosa ak Astragalus membranaceus te genyenefè anti-aje. Sourit yo te manje rejim siplemantè ak tè R. glutinosa oswa A. membranaceus (2 00 mg / d); gwoup kontwòl la te manje yon rejim alimantè estanda. A, Chanjman nan pwa kò sourit yo mezire chak 2 mwa. B, Chanjman nan nòt gradyasyon senesans sourit ak laj. C, koub siviv. Done reprezante mwayèn ± SD; n=20 sourit/gwoup. Done reprezante mwayèn ± SD; n=5 sourit/gwoup.*P <0.05, ***p=""><>

3.2|R. glutinosa redwi kantite selil souch ematopoyetik

Yo panse fatig selil souch yo se konsekans entegre plizyè kalite domaj ki asosye ak aje e youn nan pi gwo kòz aje tisi ak òganis yo.1 Etid resan yo sijere ke rajenisman selil souch yo ka ranvèse fenotip aje nan nivo òganis yo.5 Nou ipotèz ke laefè anti-ajenan R. glutinosa yo medyatè pa amelyore fonksyon selil souch. Se poutèt sa, nou te fè analiz sitometrik koule sou kantite selil tij ematopoyetik / progenitor ki izole nan sourit (ki gen laj 20 mwa) alimantasyon ki te manje ak R. glutinosa oswa A. membranaceus (200 mg / d) pou 10 mwa (Figi 2A) . Pousantaj LSK yo te redwi nan gwoup R. glutinosa ak A. membranaceus (Figi 2B). Kantite LT- ak kout tèm (ST)- HSC yo te redwi apeprè de fwa nan gwoup R. glutinosa konpare ak kantite nan gwoup kontwòl la (Figi 2C- D). Pi gwo kantite progenitors lenfoid komen (CLPs) te detekte nan gwoup la R. glutinosa konpare ak nimewo a nan gwoup kontwòl la (Figi 2I). Pa te gen okenn diferans nan kantite progenitors miltipotan (MPPs), myeloid progenitors (CMPs), progenitors granulocyte‐macrophage (GMPs) ak progenitors megakaryocyte‐erythroid (MEPs) nan gwoup R. glutinosa konpare ak kantite nan gwoup la. gwoup kontwòl. Nan gwoup A. membranaceus, pa te gen okenn diferans enpòtan nan kantite LT- ak ST- HSC yo konpare ak nimewo yo nan gwoup kontwòl la (Figi 2C- D). Anplis de sa, pa te gen okenn diferans nan nimewo yo nan MPP, CMP, MEP ak CLP selil konpare ak nimewo yo nan gwoup kontwòl la (Figi 2E, 2F, 2H ak 2I); sepandan, kantite GMP yo te diminye nan gwoup A. membranaceus la. Kidonk, sourit ki te manje alimantasyon ki te konplete ak R. glutinosa te montre diminye kantite selil tij ematopoyetik ak selil progenitor.

3.3|R. glutinosa amelyore fonksyon an epi kenbe silans HSC yo

Pou evalye fonksyon HSC yo, yo te egzamine potansyèl klonojenik LT‐ HSC yo in vitro. Nou klase selil LT-HSC yo nan yon mwayen metil-seluloz-baz lè l sèvi avèk FACS epi konte kantite ak gwosè koloni apre 14 jou. Konpare ak kantite ak gwosè koloni ki te pwodwi pa selil sourit nan gwoup kontwòl la, selil ki soti nan sourit nan gwoup R. glutinosa te montre yon ogmantasyon nan kantite koloni, espesyalman pou ti gwosè a (P=0.0241). ) ak gwo script gwosè (P=0.0418), pandan ke pa te gen okenn diferans nan nimewo a soti nan sourit nan gwoup la A. membranaceus (Figi 3). Gwosè ak kantite koloni ki ogmante nan gwoup R. glutinosa te sigjere ke zèb sa a amelyore potansyèl renouvèlman pwòp tèt ou nan LT‐ HSC yo.

Pifò HSC nan sourit adilt yo rete trankil;19 Se poutèt sa, antretyen nan trankil selilè se yon mekanis esansyèl pou renouvèlman pwòp selil souch yo.20,21 Diminisyon yo obsève nan HSC yo sijere diminye pwopagasyon selil nan R. glutinosa ak A. gwoup membranaceus; Se poutèt sa, nou te egzamine sitiyasyon sik selil HSC yo atravè analiz makè selil proliferatif Ki-67 la ansanm ak detèminasyon kontni ADN 7-AAD nan popilasyon LSK la. Nou te obsève yon kantite ogmante nan selil LSK nan faz G0 nan gwoup R. glutinosa ak A. membranaceus konpare ak sa ki nan gwoup kontwòl la (Figi 4A). Rezilta sa yo te endike ke R. glutinosa ak A. membranaceus te kenbe trankilman HSC yo.

Analiz PCR an tan reyèl nan regilatè sik selil yo nan selil LSK te revele ke p18, p19 ak p57 te jwe wòl enpòtan nan antretyen nan silans HSC.22-24 Pa te gen okenn chanjman evidan obsève pou p57 ak p19 (Figi 4C-). D), ak p18 te uppregu- lated nan gwoup la R. glutinosa konpare ak sa ki nan gwoup la kontwòl, ak yon ti kras upregulated nan gwoup la A. membranaceus (Figi 4B).

Figi 2 Rehmannia glutinosa ak Astragalus membranaceus te afekte kantite selil tij ematopoyetik/ansanèt yo. Sourit (ki gen laj

20 mwa) yo te manje rejim siplemantè ak R. glutinosa oswa A. membranaceus (200 mg / d) pou 10 mwa (n=5 / gwoup); gwoup kontwòl la te manje yon rejim alimantè estanda. Selil mwèl zo ki fèk izole (BM) yo te tache ak antikò ki endike yo epi yo te analize pa sikometri koule. A, pwofil tach reprezantan BM selil souch ematopoyetik ak popilasyon selil progenitor. B, Pousantaj Lin–Sca1 plis selil c-kit– (LSK) nan selil BM. C‐ I, Nimewo selil (C) alontèm (LT; Lin–, Sca‐ 1 plus , c‐ Kit , CD34 plus – , Flt3–); D, kout tèm (ST; Lin–, Sca‐ 1 plis, c‐ Kit, CD34 plis plis, Flt3–); E, miltipotan progenitor (MPP; Lin– ​​, Sca‐ 1 plus , c‐ Kit plus , Flt3 plus ); F, progenitor myeloid komen (CMP; Lin–, Sca‐ 1–, c‐ Kit–, CD34 plus, CD16/CD32–); G, granulocyte‐macrophage progenitor (GMP; Lin–, Sca‐ 1–, c‐ Kit–, CD34 plus, CD16/CD32 plus); H, megakaryocyte‐erythroid progenitor (MEP; Lin–, Sca‐ 1–, c‐ Kit–, CD34–, CD16/CD32–); epi mwen menm, progenitor lenfoyid komen (CLP; Lin– ​​, Sca‐ 1low, c‐ Kitlow, CD127 plus ). Done reprezante mwayèn ± SD; n=5 sourit/gwoup. *P <0.05, **p=""><>

3.4|R. glutinosa reta senesans HSCs

Sipleman dyetetik alontèm ak R. glutinosa ka pwolonje lavi sourit yo. Senesans selilè ogmante ak laj; Se poutèt sa, nou te mennen ankèt sou senesans HSC nan sourit ki aje yo pa analiz sikometrik nan HSC ki tache SA- ‐gal lè l sèvi avèk yon substrate fluoresan ‐gal (C12FDG). R. glutinosa gwoup, ki endike ke R. glutinosa reta senesans selil LSK (Figi 5A).

Espès oksijèn reyaktif jwe yon gwo wòl nan senesans HSC, epi pèt trankil HSC souvan korelasyon ak ogmante ROS selilè.26 Analiz de ROS intraselilè nan LSK yo te montre ke nivo yo te diminye nan gwoup R. glutinosa konpare ak sa yo ki nan kontwòl la. gwoup (Figi 5B). Done sa yo endike ke R. glutinosa ka kenbe HSC trankil epi amelyore fonksyon HSC lè yo diminye nivo ROS yo.

Apre sa, nou te envestige ekspresyon plizyè jèn ki enplike nan senesans selilè pa analiz RT-PCR selil LSK yo. Konpare

Figi 3 Fonksyon selil souch ematopoyetik ogmante pa sipleman dyetetik Rehmannia glutinosa. Potansyèl klonojèn in vitro nan selil epatik alontèm ki soti nan sourit (n=3)

ak gwoup kontwòl la, ekspresyon pwoteyin selil p53 ak p16 ki asosye ak senesans selilè yo te desann nan gwoup R. glutinosa (Figi 5D-E). Men, ekspresyon p53 ak p16 pa te siyifikativman downregulated ant gwoup A. membranaceus ak gwoup kontwòl (Figi 5D-E). Ansanm, done sa yo montre ke plizyè sik selil kle ak jèn ki gen rapò ak senesans selil kontwole fonksyon HSC yo nan rejim sourit ki te manje ak R. glutinosa.

3.5|R. glutinosa ogmante iminite selil B yo

Lenfosit B ak T yo tou de enpòtan pou repons iminolojik. Lenfosit T jwe yon wòl kritik nan iminite selilè a ak règleman li yo, pandan y ap lenfosit B patisipe sitou nan iminite umoral. Pwopagasyon lenfosit se endèks ki pi imedya ki reflete iminite òganik. Pou envestige wòl nan amelyorasyon iminolojik, efè R. glutinosa ak A. membranaceus sou pwopagasyon lenfosit yo te egzamine.

Sourit nan gwoup la R. glutinosa ekspoze kantite HSCs diminye ak nimewo ogmante nan CLPs. Flow cytometric analiz te montre ogmante kantite selil B ki gen matirite (B220 plis) nan PB a, BM ak larat nan sourit nan gwoup R. glutinosa konpare ak nimewo yo detekte nan gwoup kontwòl la (Figi 6A); sepandan, pa te gen okenn diferans enpòtan nan kantite selil T (CD4 plis ak CD8 plis), monosit ak granulosit (CD11b plis) ant de gwoup yo (Figi 6B‐D). Kidonk, rezilta sa yo endike ke dyetetik R. glutinosa amelyore iminite selil B yo.

Figi 4 Sipleman dyetetik nan Rehmannia glutinosa ak Astragalus membranaceus kenbe trankil nan selil souch ematopoyetik yo. A, Pousantaj selil yo nan chak faz nan sik selilè a. Flow cytometric analiz de 7-aminoaktinomycin D (7-AAD) ak Ki-67 tach nan Lin-Sca1 plis c-kit- selil (LSKs). B, analiz reyaksyon chèn polymerase an tan reyèl nan ekspresyon jèn selil LSK klase; GAPDH te itilize pou nòmalizasyon. Done reprezante mwayèn ± SD nan twa eksperyans. *P < 0.05,="" **p="">< 0.01,="" ***p=""><>

Figi 5 Rehmannia glutinosa sipleman dyetetik redwi senesans selil epatik stellate (HSC). Sourit (ki gen laj 20 mwa) yo te manje yon rejim siplemantè ak Rehmannia glutinosa oswa Astragalus membranaceus (200 mg/j) pou 10 mwa (n {{4}). }}/gwoup); gwoup kontwòl la te manje yon rejim alimantè estanda. A, Flow cytometric analiz de selil SA--gal-pozitif Lin-Sca1 plis c-kit- (LSK) lè l sèvi avèk yon substra fliyoresan ‐galactosidase (C12FDG). B, Pousantaj selil pozitif espès oksijèn reyaktif (ROS) nan LSK yo. Flow cytometric analiz de ROS-pozitif LSKs. Done reprezante mwayèn ± devyasyon estanda (SD). *P <0.05, ***p=""><0.001. c,="" modèl="" ekspresyon="" jèn="" ki="" asosye="" senesans="" selilè="" nan="" lsk="" yo;="" gapdh="" te="" itilize="" pou="" nòmalizasyon.="" done="" reprezante="" mwayèn="" ±="" sd="" nan="" twa="" eksperyans.="" *p=""><0.05, **p=""><0.01, ***p=""><>

4|DISKISYON

Nan etid sa a, nou te envestige mekanis nanefè anti-ajenan R. glutinosa oswa A. membranaceus pa konplete rejim sourit yo ak remèd fèy yo nan yon dòz 200 mg / d pou 10 mwa. R. glutinosa te jwenn efè anti-aje, ki gen ladan diminye senesans ak ogmante siviv HSCs osi byen ke

amelyore iminite selil B yo. An tèm de mekanis nanefè anti-aje, nou te jwenn ke R. glutinosa a diminye kantite HSCs, pandan y ap ogmante kapasite pwopagasyon an. Anplis de sa, R. glutinosa te kenbe silans HSC ak diminye kantite selil SA--gal-pozitif ak nivo ROS atravè règleman p18, p53 ak p16. Nan konbinezon, rezilta nou yo konfime ke laefè anti-ajenan R. glutinosa nan sourit yo pran medikaman lè yo kenbe silans la ak amelyore fonksyon HSC yo.

Rehmannia glutinosa, ki te itilize kòm medikaman tradisyonèl Chinwa èrbal pou dè milye ane, ka itilize pou trete ipoglisemi nan divès maladi dyabetik.27,28 Yo te rapòte tou ke R. glutinosa ekstrè amelyore metabolis zo yo.29 Anplis de sa, R. glutinosa inibit repons enflamatwa ak sendwòm,30,31 epi li pwoteje kont domaj selilè lè yo retire radikal gratis.14,32 Nan ​​etid sa a, nou te jwenn ke sourit sipleman dyetetik ak R. glutinosa egzèse.efè anti-ajeak amelyore iminite selil B nan ogmante kapasite proliferasyon LT-HSC yo epi diminye kantite selil pozitif SA-gal ak nivo ROS yo.

Yo jwenn degre nan domaj oksidatif ogmante ak laj nan yon varyete selil ak tisi. Estrès oksidatif se yon detèminan enpòtan nan renouvèlman pwòp HSC. Pèt silans LT‐ HSC souvan korelasyon ak ogmante ROS selilè, ki asosye negatif ak renouvèlman pwòp HSC yo.26 Catalpol se yon glikozid iridoid, ki te jwenn nan rasin R. glutinosa. Catalpol te montre inhibition estrès oksidatif, domaj ADN ak mantèg telomè atravè chemen PGC‐ 1 /TERT nan yon etid anvan.33 Nan etid nou an, nivo ROS te diminye nan selil LSK ki soti nan gwoup R. glutinosa konpare ak gwoup kontwòl la. Se konsa, R. glutinosa pwolonje siviv nan sourit pa anpeche estrès oksidatif nan HSC yo.

FIG 6 Flow cytometric analiz pousantaj selil iminitè ki gen matirite nan san periferik (PB), mwèl zo (BM), larat ak tim. Sourit (ki gen laj 20 mwa) yo te manje rejim siplemantè ak Rehmannia glutinosa oswa Astragalus membranaceus (200 mg / d) pou 10 mwa (n=5 / gwoup); gwoup kontwòl la te manje yon rejim alimantè estanda. A, Flow cytometric analiz pousantaj selil B (B220 plis) nan PB, BM, ak larat. B, Flow cytometric analiz de pousantaj monocyte ak granulocyte selil (CD11b plis) nan PB ak BM. C ak D, Flow cytometric analiz pousantaj CD4 plus ak CD8 plis selil nan PB, larat, ak tim. Done reprezante mwayèn ± SD. *P <>

Astragalus membranaceus yo itilize tou nan medikaman tradisyonèl Chinwa pou ankouraje iminite, diminye sik nan san ak ankouraje apoptoz selil timè, epi li gen tou.antioksidasyonepianti-ajepwopriyete yo. Nan etid sa a, nou te jwenn ke sipleman dyetetik ak A. memranaceus pou 10 mwa pa te gen okenn efè evidan konpare ak sa yo obsève nan sourit yo kontwòl, pandan y ap pwa a nan sourit te redwi nan 20 mwa. Se poutèt sa, A. membranaceus ka pa apwopriye pou tretman LT bay sourit manje.

An konklizyon, rezilta nou yo montre ke R. glutinosa ka pwolonje lavi sourit lè yo kenbe trankil ak amelyore fonksyon HSC yo. Anplis de sa, R. glutinosa ka diminye nivo entè-selilè ROS ak kantite selil SA--gal-pozitif epi amelyore iminite selil B yo.

REKONÈS

Etid sa a te sipòte an pati Fondasyon Nasyonal Syans pou Lachin (31672374), Fon Inovasyon CAMS pou Syans Medikal (CIFMS) (2016‐ 12M‐ 1‐012) ak Fon Jèn PUMC (2017310018).

KONFLI ENTERÈ

Okenn.

KONTRIBYON OTÉ

Tout otè ki nan lis ranpli kondisyon yo pou patènite. CQ ak LFZ te vin ansent ak fèt eksperyans yo. LB te fè eksperyans yo e li te ekri tès maniskri prensipal la. GYS te fè ak analize done FACS yo. YJY te fèt eksperyans lan sou medikaman tradisyonèl Chinwa a. WC jere sourit yo. Tout otè yo te li epi apwouve maniskri a.