Wen-Lan Li, Jing-Xin Ding, Jing Bai, Yang Hu, Hui Song, Xiang-Ming Sun, Yu-Bin Ji

Kontakte: Joanna.jia@wecistanche.com

Résumé

Teknoloji LC se yon metòd rekonèt atravè lemond pou evalye kalite medikaman tradisyonèl Chinwa yo (TCM). Bon jan kalite a nan TCM gen yon enpak dirèk sou efikasite li yo. Se poutèt sa, byen revele ki jan TCM egzèse efikasite li yo, premye a tout bagay, li nesesè yo konprann baz la materyèl pou efikasite li yo, ak Lè sa a, kontwole bon jan kalite a nan konpoze aktif. Aplikasyon metòd relasyon spectre-efè a enpòtan anpil pou detèmine baz materyèl famasi a. Objektif papye sa a se te mennen ankèt sou korelasyon ki kache ant pwofil chimik yo ak aktivite estwojèn.Cistanche, pou revele konpoze aktif yo. Pwofil chimik yo nanCistancheyo te anrejistre lè l sèvi avèk HPLC / Q-TOF-MS / MS, ak aktivite estwojèn yo te detèmine pa tès la kwasans matris ak tès la MTT. Lè sa a, konbine rezilta analiz bivarye, analiz eleman prensipal, ak metòd analiz korelasyon gri, yo te idantifye kenz konpoze aktif. Yo se 8-asid epiloganik, salidroside, siringalid A 3'{- -l-ramnopiranosid, cistanoside A,echinacoside, cistanoside F, cistanoside B, cistanoside C, osmanthuside B, acteoside, isoacteoside, tubuloside B, 2'-acetylatteoside, ak de konpoze enkoni. Etid sa a mete yon fondasyon pou etid in vivo deCistanche, ak pou devlopman aplikasyon klinik li yo.

Cistanche ka ranfòse estwojèn, klike la a pou aprann plis

Mo kle:Cistanchedeserticola; LC/Q-TOF-MS; aktivite estwojèn; analiz eleman prensipal (PCA); Tès kwasans matris.

Abreviyasyon yo

TCM: Medsin tradisyonèl Chinwa

HPLC/Q-TOF-MS: High-pèfòmans likid chromatographie/quadrupole tan-of-vol mas spectrométrie

BA: analiz bivarye

PCA: Analiz prensipal eleman

GCAM: Metòd analiz korelasyon gri

MTT:Trypsin, 3-(4, 5-Dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolimbromid

DMSO: dimethyl sulfoxide

RPMI1640 Roswell Park Memorial Institute 1640

1. Entwodiksyon

Dènyèman, TCM te vin pi plis ak plis popilè nan peyi Azyatik ak Lwès akòz efè ki estab ki ka geri li yo ak toksisite ki ba nan klinik la. Kòm yon rezilta, li nesesè pou devlope nouvo kalite TCM ak konprann konpozisyon efikas yo itilize pandan aplikasyon klinik yo [1-6].

Premyèman, yo etidye relasyon spectre-efè a pou disène korelasyon ant anprent kwomatografik ak efikasite farmakodinamik. Lè sa a, lè l sèvi avèk relasyon an chèche konpozan efikas nan TCM, ak fòmile estanda kontwòl yo reflete bon jan kalite entèn yo. Relasyon spectre-efè yo te aplike nan anpil domèn rechèch TCM, tankou baz materyèl TCM sèl ak konpoze, konpatibilite eleman, mekanis pwosesis, previzyon efè famasi, ak optimize teknoloji [7-12]. Relasyon spectre-efè yo itilize pou mete nouvo lide ak metòd pou eksplore sibstans aktif, optimize fòmil, amelyore pwosesis preparasyon, swiv ak separe engredyan sib yo, ak devlopman nouvo dwòg TCM [13-17].

Cistanchete lajman itilize pou tretman malfonksyònman seksyèl, konstipasyon, prostatit, ak deficiency ren. Li gen yon pakèt domèn byoaktivite ki gen ladan efè estwojèn, anti-aje, antioksidasyon, ak aksyon iminitè [18-19]. Anjeneral, glikozid phenylethanoid (tankou cistanoside A, tubuloside A), lignans, ak glikozid iridoid yo te konsidere kòm konstitiyan famasi ak makè chimik pou kontwòl kalite Cistanche ak pwodwi li yo [20-21]. Spectre chimik yo nanCistancheki soti nan diferan zòn yo te anrejistre lè l sèvi avèk High-Performance likid chromatography (HPLC) [22-23]. Nan etid sa a, nou chwazi tès kwasans matris ak tès pwopagasyon selil MCF7 pou evalye aktivite estwojèn yo. Analiz prensipal eleman, analiz bivarye, ak metòd analiz korelasyon gri yo te itilize pou korelasyon aktivite estwojèn ak eleman endividyèl yo. Etid sa a te vize idantifye konpoze bioaktif nan Cistanche ki responsab pou efè estwojèn nan vivo. Etid la mete yon fondasyon pou etid apwofondi nanCistanche.

Tout pwosedi eksperimantal yo te revize ak apwouve pa Komite Etik Animal nan Harbin University of Commerce.

Cistanchedeserticola(cd-20120227-005) te achte nan mache dwòg ak idantifye pa pwofesè Zhang Delian (Harbin University of Commerce). Diethylstilbestrol te achte nan men HEFEI JIULIAN PHARMACEUTICAL CO., LTD. RPMI1640 ak RPMI1640 san wouj fenol yo te achte nan men HyClone Company (USA). MTT ak DMSO yo tout te achte nan men Sigma-Aldrich Co LLC (St Louis, USA). Liy selil MCF7 kansè nan tete imen an te bay nan Sant Rechèch Syans Lavi ak Syans Anviwònman (Harbin University of Commerce). Estanda yo itilize yo te jan sa a: acteoside (111530- 200505), echinacoside (111670-200503), ak salidroside (110736-200628) yo te jwenn nan Enstiti Nasyonal pou kontwòl pwodwi famasetik ak byolojik (Beijing). , Lachin). Acetonitrile, methanol, ak asid fòmik te MS-klas, tandiske dlo te ultrapur. Lòt reyaktif yo te nan klas analyse epi yo te disponib nan komès.

EchinacosidenanCistanchetubulosa gen anpil efè

2 Pwosedi eksperimantal

2.1 Materyèl

Sistèm HPLC Agilent 1290, Agilent 6530 Series Quadrupole Time-of-Flight LC/MS (Q-TOF) sistèm, ak estasyon travay Chimik HPLC-3D yo te itilize pou eksperyans chimi analyse ak pwosesis done. Milli-Q dlo ultrapure te itilize pou preparasyon echantiyon ak estanda. Enstriman adisyonèl yo enkli elektwonik Balans Analiz AR1140 (Ohaus International Ltd), 680 Microplate Reader (Bio-Rad Corporation), ak 64R High-Speed ​​Centrifuge (Beckman Coulter Allegra).

Ki pa gen matirite sourit fi Kunming (apeprè 21 d nan nesans, sevre) ki peze (12 ± 2) g, yo te achte nan Changchun National Biological Industry Base Laboratory Animal Center (Changchun, Lachin). Sourit yo te loje nan yon chanm tanperati ki reglemante (22 ± 2 degre) ak aksè san restriksyon nan manje ak dlo. Eksperyans bèt yo te kòmanse apre senk jou nan aklimatasyon. Sourit yo te fè jèn lannwit lan ak aksè gratis nan dlo anvan yo administre solisyon tès yo. Etid sa a te fèt an akò strik ak rekòmandasyon yo nan Gid pou Swen ak Itilizasyon Bèt Laboratwa nan Enstiti Nasyonal Sante yo.

2.2 Preparasyon echantiyon solisyon an

Echantiyon Cistanche yo te kolekte nan dis abita divès, sètadi Neimeng, Xinjiang, Ningxia, Guizhou, Chaidamu, Xizang, Alashan, Qinghai, Sichuan, ak pwovens Hubei.

Solisyon (1.0 g/mL) echantiyon Cistanche a te prepare nan dlo distile pou administrasyon oral. Konsantrasyon diethylstilboestrol te 20ug/mL e li te itilize kòm solisyon kontwòl pozitif. Solisyon (1.0 g/mL) echantiyon Cistanche a te prepare nan 50 pousan acetonitrile. Acteoside, echinacoside ak salidroside (2.0 mg chak) te fonn nan 10 mL nan 50 pousan solisyon acetonitrile. Tou de echantiyon an ak solisyon estanda yo te filtre lè l sèvi avèk yon filtè 0.45-μm anvan analiz.

2.3 LC-MS kondisyon yo

Yo te itilize yon Waters Symmetry Shield RP18 (3.9 mm × 150 mm, 5μm; Waters Corporation, Milford, MA, USA) pou analize echantiyon yo. Faz mobil la fèt ak asetonitrile (A) ak 0.2 pousan (v/v) solisyon akeuz asid fòmik (B) epi li te ponpe nan yon vitès koule 0.5 mL/min. Volim piki chak echantiyon te 10 μL. Pwogram elisyon gradyan an te jan sa a: Faz mobil A te kòmanse nan 5 pousan epi li te ogmante lineyè a 23 pousan nan 35 min. Solisyon A te vin ogmante imedyatman a 25 pousan (35 a 65 min). Lè sa a, faz mobil A a te diminye a 5 pousan pou dènye 5 minit nan kouri a (65 a 70 min). Tanperati kolòn lan te kenbe nan 30 degre. Chromatogram yo te kontwole nan 254 nm. Presyon gaz atomizasyon an te 30 psi, ak vòltaj kapilè a te 3.5 kV. Pousantaj koule gaz sèk la te fikse a 8 L/min ak yon tanperati 30 degre. Yo te anrejistre spectre mas yo nan seri eskanè 100- 3,000 Da epi yo te nan mòd optik ion negatif.

2.4 Evalyasyon anprent

Anprent LC echantiyon yo te kolekte nan 10 pakèt diferan yo te etabli ak matche otomatikman lè l sèvi avèk Sistèm Evalyasyon Resanblans pou Anprent Chromatografik nan TCM (vèsyon 2012; Komite Farmakope Lachin, Beijing, Lachin). Anplis de sa, kat jeyografik chromatogram referans la te pwodwi lè l sèvi avèk metòd medyàn lan. Anplis de sa, analiz gwoup yo te aplike pou evalye kalite echantiyon yo soti nan dis abita divès.

2.5 Analiz eleman prensipal (PCA)

PCA se yon metòd estatistik miltivarye. Li ka kenbe ase enfòmasyon ki soti nan akizisyon done yo. Nan etid la prezan, PCA te teste pik karakteristik ki soti nan LC chromatogram epi yo te vize idantifye konpoze aktif ki baze sou relasyon spectre-efè.

2.6 Tès kwasans matris

Sourit yo te divize an 12 gwoup (10 pou chak gwoup). Solisyon echantiyon yo te prepare nan Cistanche yo te kolekte nan dis abita divès epi yo te administre de fwa chak jou (maten ak aswè) pa gavage nan yon dòz 30 g / kg pwa kò pandan kat jou. Gwoup kontwòl vid ak pozitif yo te gen ladan volim egal dlo distile ak solisyon diethylstilboestrol epi yo te administre de fwa pa jou pandan kat jou. Sou senkyèm jou a, yo te retire echantiyon san ki gen dwòg nan sourit anestezi yo. Echantiyon yo te santrifuje (5, 000 rpm, 10 min), epi supernatant yo (echantiyon serom ki gen dwòg) yo te separe. Echantiyon serom ki gen dwòg yo te inaktive lè yo chofe a 56 degre nan yon beny dlo pou 30 minit epi yo te filtre nan yon filtè 0.22-μm anvan tès MTT la. An menm tan an, matris sourit yo te imedyatman retire epi peze yo pou kalkile endis pwa matris yo. Eksperimantasyon bèt la te kòmanse apre senk jou nan aklimatasyon. Sourit yo te jene lannwit lan ak aksè gratis nan dlo anvan administrasyon an nan solisyon tès yo. Etid la te fèt an akò strik ak rekòmandasyon Gid pou Swen ak Itilizasyon Bèt Laboratwa Enstiti Nasyonal Sante yo. Tout pwosedi eksperimantal yo te revize ak apwouve pa Komite Etik Animal nan Harbin University of Commerce. Tout pwosedi potansyèlman estrès yo te fèt anba anestezi pentobarbital sodyòm.

2.7 MTT tès

Selil MCF7 yo te ko-kilti ak RPMI 1640 san wouj fenol (ki gen 5 pousan CDT-FBS) pou kat jou. Selil yo te simen nan 96-plak pi nan yon dansite 2,000 selil/pi. Yo te reyalize yon kilti aderan epi apre 72 èdtan nan kilti, selil yo te ko-kilti nan mwayen RPMI 1640 ki gen echantiyon serom soti nan Cistanche-trete nan sourit. Eksperyans yo te fèt nan sis kopi. Imedyatman, yo te ajoute 20 μL nan solisyon MTT (5 mg / mL nan PBS) nan chak pi, epi selil yo te enkube pou 4 èdtan. Apre yo retire mwayen, yo te ajoute 150 µL DMSO pou pwodui pwodwi formazan, epi plak yo te souke nan fè nwa a pou yo fonn nèt. Yo te mezire absorbans nan 570 nm lè l sèvi avèk yon Microplate Reader. Pousantaj pwopagasyon an te kalkile kòm valè mwayèn absorption gwoup serom ki gen dwòg divize pa valè mwayèn absorption gwoup kontwòl vid (selil ko-kilti nan RPMI 1640 san serom).

2.8 Analiz estatistik

Yo te itilize pè echantiyon t-tès (de-tailed) pou idantifye diferans estatistik enpòtan nan mitan valè nan kontwòl vid ak gwoup eksperimantal yo. Diferans yo te konsidere kòm enpòtan nan yon nivo konfyans 95 pousan (p <>

Yo te itilize PCA pou evalye zòn pik karakteristik nan kwomatogram echantiyon yo soti nan dis abita divès. Analiz bivarye ak analiz korelasyon Gray yo te itilize pou evalye korelasyon zòn pik yo ak aktivite estwojèn yo. Te korelasyon an kalkile pa estatistik lojisyèl SPSS estatistik (SPSS pou Windows 21.0, SPSS Inc., USA). Diferans yo te konsidere kòm enpòtan nan yon nivo konfyans 95 pousan (de-tailed).

Apwobasyon etik: Rechèch ki fèt la pa gen rapò ak itilizasyon ni moun ni bèt.

cistanche acteoside gen anpil fonksyon

3 Rezilta ak diskisyon

3.1 Analiz gwoup ak evalyasyon resanblans

Devyasyon estanda relatif tan retansyon an ak zòn pik pik karakteristik yo te {{0}}.58 ak 0.34 pousan pou presizyon, 0.52 ak {{8} }.31 pousan pou repwodiksyon, ak {{10}}.19 ak 0.13 pousan pou estabilite, respektivman. Konklizyon sa yo te endike ke metòd LC nou an pou etabli anprent te rezonab ak serye. Resanblans chromatogram yo nan dis echantiyon yo te pi gran pase 0.9. Pik yo komen pou tout echantiyon yo pa t 'kapab konplètman reprezante eleman karakteristik nan Cistanche, depi pik la te kapab pèdi. Se poutèt sa, nimewo matche echantiyon an te ajiste soti nan 26 a 20 pou jwenn yon kat kwomatogram ki pi egzak. Yo te jwenn yon total de 26 pik, ak sòm zòn yo te pi gran pase 0.8 konpare ak sa yo ki nan zòn nan pik an jeneral nan echantiyon an. Se poutèt sa, nou konkli ke pik chromatografik sa yo ka efektivman reflete eleman prensipal chimik Cistanche. Rezilta analiz gwoup yo montre nan Figi 1. Yon total de dis abita divès te divize an twa kategori jan sa a: (A) 2, Guizhou; 3, Qinghai; 4, Chaidamu; 10, Neimeng; 7, Xinjiang ak 6, Sichuan. (B) 1, Xizang; 8, Ningxia ak 5, Alashan. (C) 9, Hubei. Tandans analiz gwoup la te montre ke abita yo nan remèd fèy medsin yo sanble lè yo nan pati anba a nan papòt la. Men, ak ogmantasyon nan papòt la, klima a ak kondisyon kwasans nan abita yo pre. Li montre ke analiz gwoup la ka pa sèlman distenge divès abita yo byen, men tou reflete afinite ki genyen ant yo.

3.2 Idantifikasyon konstitiyan chimik yo

Based on the synergy between components, TCM exerted pharmacological effects. Certain studies have been conducted to identify the chemical compositions of C. deserticola [24-26]. The correlation of inherent constituents with their activities indicated that they could be identified based on the combination of LC with the corresponding indices of pharmacological activity. Q-TOF-MS is suitable for multi-constituent identification of TCM since it can provide the exact molecular mass because of its high resolution. A total of 26 compounds were identified by analyzing the primary and secondary MS data. PCA was used to assess whether these compounds concerning their oestrogenic activity. A contribution of the activity is indicated by an eigenvalue higher than 1 (> 1) and a cumulative contribution rate of variables higher than 0.8 (>0.8). Pi wo, valè absoli chaj Eigen a, se pi wo enfliyans konpoze yo sou endis estwojèn yo.

Chromatogram yo nan Cistanche ak echantiyon estanda yo te konpare pou idantifye eleman endividyèl yo nan menm kondisyon LC-MS yo. Jan yo montre nan Tablo 1, yo te idantifye yon total de 26 elektè ki baze sou tan retansyon an ak done MS [24-26]. Engredyan aktif yo administre oralman nan fòm melanj olye ke monomè kòm medikaman tradisyonèl Chinwa se nan fòm lan nan yon melanj yo jwe yon wòl terapetik. Yon sèl konpoze apre yo te separe endividyèlman pa te jwenn yo jwe yon wòl. Objektif nou se revele konpoze ki gen aktivite estwojèn nan eleman yo li te ye nan Cistanche [23-30], ak Se poutèt sa pa t 'seleksyon NMR ak lòt mwayen teknik valide idantite yo. Pik 1 te endike yon iyon deprotonasyon dominant ak yon rapò m/z 373 (C16H22O10), ki te idantik ak konpozisyon elemantè asid jeniposidik. Sa a te sipòte pa pèt la nan yon moyete glikoz ki bay yon iyon fragman ak yon rapò m / z nan 211. Pik 2 endike yon ion deprotonasyon dominan ak yon rapò m / z nan 461 (C20H30O12), ki te idantik ak konpozisyon eleman nan. nan decaffeoylacteoside, epi li te sipòte pa pèt la nan yon moso rhamnosyl, fòme yon fwagmantasyon ak yon rapò m/z nan 315. Pik 4 endike yon ion deprotonated dominan ak yon rapò m/z nan 375 (C16H24O10), ki te idantik ak la. konpozisyon elemantè 8-asid epiloganik. Pèt la nan yon moso glikoz, ki te fòme yon fwagmantasyon ak yon rapò m / z nan 213, plis sipòte enferans la. Pik 6 te endike yon iyon deprotonasyon dominant ak yon rapò m/z 607 (C29H36O14), ki te idantik ak konpozisyon elemantè syringalide A3'- - l-rhamnopyranoside.

Pèt la nan yon moso caff, ki te fòme yon iyon fragman ak yon rapò m / z nan 445, plis sipòte enferans la. Pik 8 te endike yon ion deprotonasyon dominan ak yon rapò m/z nan 799 (C36H48O20), ki te ki idantik ak konpozisyon elemantè nan cistanoside A. Pèt la nan yon mwatye caff, te fòme yon ion fragman ak yon rapò m/z nan 637, plis sipòte dediksyon an. Pik 11 te endike yon ion deprotonasyon predomine ak yon rapò m/z nan 487 (C21H28O13), ki te idantik ak konpozisyon elemantè cistanoside F. Sa a te sipòte pa pèt la nan yon mwatye rhamnosyl ki bay yon fragman ion ak yon m/z. rapò nan 341, ak pèt la nan yon lòt mwatye caff fòme yon ion fragman ak yon rapò m / z nan 179, plis sipòte enferans la. Pik 12 te endike yon ion deprotonasyon predomine ak yon rapò m/z nan 813 (C37H50O20), ki te idantik ak konpozisyon elemantè cistanoside B. Pèt la nan yon moso glikoz, te fòme yon iyon fragman ak yon rapò m/z nan 651, plis sipòte dediksyon an. Pik 13 te endike yon iyon deprotonasyon dominant ak yon rapò m/z de 827 (C37H48O21), ki te idantik ak konpozisyon elemantè tubuloside A. Pèt la nan yon moso rhamnosyl, te fòme yon fwagmantasyon ak yon rapò m/z nan 681, pi lwen. sipòte dediksyon an. Pik 14 te endike yon iyon deprotonasyon dominan ak yon rapò m / z nan 637 (C30H38O15), ki te idantik ak konpozisyon eleman nan cistanoside C. Pèt la nan yon mwatye rhamnosyl, te fòme yon iyon fragman ak yon rapò m / z nan 491, plis sipòte dediksyon an.

Pik 15 te endike yon ion deprotonasyon dominan ak yon rapò m/z nan 591 (C29H36O13), ki te idantik ak konpozisyon elemantè osmanthuside B. Pèt la nan yon moso rhamnosyl, te fòme yon iyon fragman ak yon rapò m / z nan 445, plis sipòte dediksyon an. Pik 16 te endike yon ion deprotonasyon ki gen yon rapò m/z 623 (C29H36O15), ki te idantik ak konpozisyon elemantè actoside. Pèt la nan yon moso caff, te fòme yon iyon fragman ak yon rapò m / z nan 461,plis sipòte dediksyon an. Pik 18 te endike yon ion deprotonasyon ki gen yon rapò m/z 623 (C29H36O15), ki te idantik ak konpozisyon eleman izoakteozid. Pèt la nan yon moso caff, forepeak15 te endike yon ion deprotonasyon dominan ak yon rapò m/z nan 591 (C29H36O13), ki te idantik ak konpozisyon elemantè osmanthuside B. Pèt la nan yon moso rhamnosyl, te fòme yon ion fragman ak yon rapò m/z nan 445, pi lwen. sipòte dediksyon an. Pik 16 te endike yon ion deprotonasyon ki gen yon rapò m/z 623 (C29H36O15), ki te idantik ak konpozisyon elemantè actoside. Pèt la nan yon moety caff, ki te fòme yon iyon fragman ak yon rapò m / z nan 461, plis sipòte enferans la. Pik 17 te endike yon iyon deprotonasyon dominant ak yon rapò m/z 623 (C29H36O15), ki te idantik ak konpozisyon elemantè cis-acteoside. Pèt la nan yon mwatye caff, te fòme yon fragman ioda fragment ion ak yon rapò m/z nan 461, plis sipòte enferans la. Pik 21 te endike yon ion deprotonasyon dominan ak yon rapò m/z nan 653 (C30H38O16), ki te idantik ak konpozisyon elemantal nan campneoside Ⅰ.

Pèt la nan yon moso caff fòme yon iyon fragman ak yon rapò m / z nan 491, ak pèt la nan yon lòt mwatye rhamnosyl fòme yon ion fragman ak yon rapò m / z nan 345, plis sipòte enferans lan. Pik 22 te endike yon ion deprotonasyon dominan ak yon rapò m/z nan 665 (C31H38O16), ki te idantik ak konpozisyon eleman nan tubuloside B. Pèt la nan yon moso CH3 CO fòme yon ion fragman ak yon rapò m/z nan 623, ak pèt la nan yon lòt moety caff fòme yon iyon fragman ak yon rapò m / z nan 461, plis sipòte enferans la. Pik 23 te endike yon iyon deprotonasyon dominan ak yon rapò m/z nan 639 (C29H36O16), ki te idantik ak konpozisyon elemantal nan campneoside. Pèt la nan yon rhamnosyl moety, ki te fòme yon iyon fragman ak yon rapò m / z nan 493, plis sipòte enferans la. Pik 24 te endike yon iyon deprotonasyon dominant ak yon rapò m/z 665 (C31H38O16), ki te idantik ak konpozisyon elemantè 2'-acetylatteoside. Pèt la nan yon moso Ac, te fòme yon iyon fragman ak yon rapò m / z nan 623, ak pèt la nan yon lòt mwatye caff fòme yon ion fragman ak yon rapò m / z nan 461, plis sipòte enferans lan. Pik 25 te endike yon ion deprotonasyon dominan ak yon rapò m / z nan 445 (C20H30O11), ki te idantik ak konpozisyon eleman nan cistanoside G. Pèt la nan yon moyete rhamnosyl, te fòme yon iyon fragman ak yon rapò m / z nan 299, plis sipòte dediksyon an. Estrikti konpoze yo endike nan Figi 2.

3.3 PCA

As shown in Table 2, the eigenvalues of the first eight principal components were higher than 1(> 1), and the cumulative contribution rate of the first six principal components was 93.417%. Therefore, the first six principal components were evaluated further. Table 2 indicates their eigenvalues and factor loadings. The first principal component exhibited a higher load based on the eigenvalues of the eight peaks (>0.9). Pik sa yo te sa ki annapre yo: 9, 12, 14, ak 15. Kontinwe, echinacoside, cistanoside B, osmanthuside B, ak acteoside, ki koresponn ak yon total de 4 pik yo te chwazi kòm varyab reprezantan pou aktivite estwojèn (Figi 3).

.

3.4 Detèminasyon aktivite estwojèn

Yo te kalkile rapò pwa mouye matris la ak pwa kò chak sourit (Figi 4). Bèt yo ekspoze a Cistanche soti nan nèf abita ekspoze aktivite estwojèn enpòtan lè yo ogmante pwa matris yo konpare ak sourit nan gwoup la kontwòl vid. Figi 4 plis montre pousantaj pwopagasyon selil MCF7 trete ak serom sourit trete Cistanche yo. Selil yo trete ak sera sourit yo ki te administre Cistanche soti nan dis abita ekspoze siyifikativman pi wo kwasans konpare ak selil san tretman.

3.5 Analiz bivarye

Nan etid prezan an, nou te obsève ke pwa matris nan sourit Kunming fi ki pa gen matirite ogmante e li te ankouraje pwopagasyon selil kansè nan tete imen MCF7. Konklizyon sa yo verifye aktivite estwojèn Cistanche. Figi 5 endike endis matris yo ak pousantaj pwopagasyon selil MCF7 nan elektè sa yo. Koefisyan korelasyon Pearson te itilize pou kalkile zòn pik relatif yo, ki te koresponn ak aktivite estwojèn echantiyon yo genyen. Koefisyan korelasyon ki pi wo pase 0.3 yo te konsidere kòm siyifikatif (p < 0.05),="" tandiske="" koyefisyan="" korelasyon="" ki="" pi="" wo="" pase="" 0.5="" yo="" te="" konsidere="" kòm="" trè="" siyifikativ="" (p).=""><0.01). dapre="" rezilta="" yo,="" yo="" te="" montre="" cistanche="" posede="" aktivite="">

Yon total de nèf konpoze siyifikativman korelasyon ak ogmantasyon nan pwa matris la (p <{{0}}.05), tandiske="" dis="" konpoze="" siyifikativman="" korelasyon="" ak="" pwopagasyon="" selilè="" mcf7="" (p=""><0.05). konpoze="" ki="" te="" gen="" rapò="" siyifikativman="" ak="" pwa="" matris="" ak="" pwopagasyon="" selil="" yo="" te="" 8-asid="" epiloganik,="" salidrozid,="" siringalid="" a3'{-="" -="" l-ramnopiranosid,="" cistanoside="" a,="" cistanoside="" b,="" cistanoside="" c,="" osmanthuside="" b,="" akteozid,="" isoacteoside,="" tubuloside.="" b,="" 2'-acetylatteoside,="" ak="" de="" konpoze="" enkoni="" (figi="" 5).="" sa="" yo="" trèz="" konpoze="" egzèse="" aktivite="">

3.6 Metòd analiz korelasyon gri

Figi 6 montre korelasyon relatif pik karakteristik 26 konpoze yo ak endis matris yo, ak Figi 7 montre korelasyon relatif pik karakteristik 26 konpoze yo ak pousantaj pwopagasyon selil yo. Yon total twa konpoze te montre korelasyon ki pi wo a ak endis matris yo, sètadi 8-asid epiloganik, cistanoside F, ak acteoside (Figi 6, nan lòd desandan); Lè nou konsidere ke sis konpoze ki te montre korelasyon ki pi wo a ak pwopagasyon selil MCF7 yo te echinacoside, cistanoside F, cistanoside B, osmanthuside B, isoacteoside, ak tubuloside B (Figi 7, nan lòd desandan). Korelasyon relatif yo nan echinacoside, osmanthuside B, acteoside, ak isoacteoside te pi wo pase 0.5.

3.7 Optimizasyon kondisyon LC-MS

Pou jwenn yon pi bon kat chromatogram, metanol ak asetonitrile yo te konpare. Nan final, konbinezon an nan asid fòmik akeuz (0.2 pousan, v/v) - acetonitrile te pi bon faz mobil pou separasyon. Nan seri a nan 200-400 nm optik longèdonn konplè, 254nm te chwazi kòm pi bon an. Anplis de sa, paramèt MS yo te amelyore tou. Yo te chwazi mòd optik ion negatif paske li amelyore valè repons pifò engredyan nan Cistanche.

4 Konklizyon

Teknoloji LC-Q-TOF-MS te itilize pou idantifye eleman aktif estwojèn nan Cistanche. Etid la montre ke 8-asid epiloganik, salidroside, syringalideA3'- - l-rhamnopyranoside, cistanoside A, echinacoside, cistanoside F, cistanoside B, cistanoside C, osmanthuside B, acteoside, isoacteoside, tubuloside B, 2'-acetylatteoside, ak de konpoze enkoni yo te eleman prensipal yo aktif nan Cistanche. Sepandan, rezilta sa yo mande pou plis etid yo eksplore efè yo nan vivo ak mekanis nan aksyon nan elektè yo.

sistanchacteoside gen anpil fonksyon, tankou ranfòse sistèm iminitè a

Rekonesans:

Pwojè sa a te sipòte pa Fondasyon Nasyonal Syans Natirèl Lachin nan (No 81073015), Fondasyon Syantifik Lanati nan pwovens Heilongjiang (ZD2017014), ak plan fòmasyon Young talan inovatè nan Kolèj la nan pwovens Heilongjiang (UNPYSCT-2017209) . Otè yo deklare ke pa gen okenn konfli enterè konsènan piblikasyon papye sa a.

Referans

[1] Wang Z., Xia Q., Liu X., Liu W., Huang W., Mei X., Luo J., Shan M., Lin R., Zou D., Ma Z., Phytochemistry, farmakoloji , kontwòl kalite ak rechèch nan lavni nan Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl: Yon revizyon, J. Ethnopharmacol., 2018, 210, 318- 339.

[2] Shu Y., Liu Z., Zhao S., Song Z., He D., Wang M., Zeng H., Lu C., Lu A., Liu Y., entegre ak mondyal pseudotargeted metabolomics estrateji aplike nan tès depistaj pou makè kontwòl kalite nan Citrus TCMs, Anal. Bioanal. Chem., 2017, 409(20), 4849-4865.

[3] Yang B., Wang Y., Shan L., Zou J., Wu Y., Yang F., Zhang Y., Li Y., Zhang Y., Yon roman ak pratik chromatografik "Anprent-ROC-SVM " Estrateji aplike nan analiz Kalite nan piki medikaman tradisyonèl Chinwa: Sèvi ak KuDieZi piki kòm yon etid ka, molekil., 2017, 22 (7). PII: E1237.

[4] Zhuo L., Peng J., Zhao Y., Li D., Xie X., Tong L., Yu Z., Depistaj makè kontwòl kalite byoaktif nan QiShenYiQi grenn gout ki baze sou relasyon ki genyen ant pèfòmans ultra-segondè. likid kwomatografi anprent ak aktivite pwoteksyon vaskilè, J. Sep. Sci., 2017, 40 (20), 4076-4084.

[5] Liu N., Li J., Li BG, Aplikasyon analiz estatistik miltivarye ak panse nan kontwòl kalite medikaman Chinwa, Zhongguo. Zhong. Yao. Za. Zhi., 2014, 39 (21), 4268-4271.

[6] Wang DD, Liang J., Yang WZ, Hou JJ, Yang M., Dai J., Wang Y., Jiang BH, Liu X., Wu WY, Guo DA, HPLC/qTOF-MS oryante done konpozan karakteristik seri ak analiz chimyometrik pou kontwòl kalite holistic nan preparasyon konplèks TCM: Niuhuang Shangqing grenn kòm yon egzanp, J. Pharm. Biomed. Anal., 2014, 89, 130-141. [7] Hernaez R., Thrift AP, Segondè Valè Prediktif Negatif, Ba Prevalans, ak Efè Spectrum: Atansyon nan Entèpretasyon an, Clin. Gastroenterol. Hepatol., 2017, 15(9), 1355-1358.

[8] Liang J., Chen Y., Ren G., Dong W., Shi M., Xiong L., Li J., Dong J., Li F., Yuan J., Screening Hepatotoxic Components in Euodia rutaecarpa by UHPLC-QTOF/MS Baze sou Relasyon Spectrum-Toksisite, Molecules., 2017, 22(8). PII: E1264.

[9] Li W., Sun X., Liu B., Zhang L., Fan Z., Ji Y., Depistaj ak idantifikasyon eleman epatotoksik nan Evodia rutaecarpa ki baze sou relasyon spectre-efè ak UPLC-Q-TOFMS, Biomed . Chromatogr., 2016, 30(12), 1975-1983.

[10] Chopard G., Puyraveau M., Binetruy M., Meyer A., ​​Vandel P., Magnin E., Berger E., Galmiche J., Mauny F., Spectrum Effect and Spectrum Bias in the Screening Test Performance for Amnestic defisyans kognitif modere: Ki sa ki enplikasyon klinik yo?, J. Alzheimers. Dis., 2015, 48(2), 385-393.

[11] Xu GL, Xie M., Yang XY, Song Y., Yan C., Yang Y., Zhang X., Liu ZZ, Tian YX, Wang Y., Jiang R., Liu WR, Wang XH, She GM, Relasyon Spectrum-efè kòm yon apwòch sistematik nan rechèch tradisyonèl medikaman Chinwa: sitiyasyon aktyèl ak pèspektiv nan lavni, Molecules., 2014, 19(11), 17897-17925.

[12] Zheng Q., Zhao Y., Wang J., Liu T., Zhang B., Gong M., Li J., Liu H., Han B., Zhang Y., Song X., Li Y. , Xiao X., Relasyon spectre-efè ant anprent UPLC ak byoaktivite nan rasin segondè brit nan Aconitum carmichaelii Debeaux (Fuzi) ak twa pwodwi li yo trete sou kwasans mitokondriyo makonnen ak analiz korelasyon kanonik, J. Ethnopharmacol., 2014,153 (3) , 615-623.

[13] Shi Z., Liu Z., Liu C., Wu M., Su H., Ma X., Zang Y., Wang J., Zhao Y., Xiao X., Spectrum-Efè Relasyon ant anprent chimik ak efè anti-bakteri Lonicerae Japonicae Flos ak Lonicerae Flos baz sou UPLC ak mikrokalorimetri, devan. Pharmacol., 2016, 7, 12.

[14] Usher-Smith JA, Sharp SJ, Griffin SJ, Efè spectre nan tès pou prediksyon risk, tès depistaj, ak dyagnostik, BMJ, 2016, 353, i3139.

[15] Chen Y., Yu H., Wu H., Pan Y., Wang K., Liu L., Jin Y., Zhang C., Trase nouvo konpoze emostatik soti nan pwodwi chofaj nan flavonoid total nan Flos Sophorae pa spectre -efè relasyon ak kolòn kwomatografi, J. Sep. Sci., 2015, 38(10), 1691-1699.

[16] Liu X., Wang XL, Wu L., Li H., Qin KM, Cai H., Pei K., Liu T., Cai BC, Envestigasyon sou relasyon spectre-efè Da-Huang-Fu- Zi-Tang nan rat pa metòd UHPLC-ESI-Q-TOF-MS, J. Ethnopharmacol., 2014, 154(3), 606-612.

[17] Xie RF, Zhou X., Shi ZN, Li YM, Li ZC, Etid sou relasyon efè spectre nan rizom Rhei, cortical Magnoliae Officinalis, Fructus Aurantii Immaturus ak fòmil yo, J. Chromatogr. Sci., 2013, 51(6), 524-532. [18] Li F., Yang X., Yang Y., Guo C., Zhang C., Yang Z., Li P., Aktivite antiosteyopowotik nan echinakozid nan rat ovariectomized, Phytomedicine., 2013, 20 (6), { {9}}.

[19] Xiong WT, Gu L., Wang C., Sun HX, Liu X., Efè anti-ipèglisemi ak ipolipidemi Cistanche tubulosa nan sourit DB / DB dyabetik tip 2, J. Ethnopharmacol., 2013, 150 (3) , 935- 945.

[20] Morikawa T., Ninomiya K., Imamura M., Akaki J., Fujikura S., Pan Y., Yuan D., Yoshikawa M., Jia X., Li Z., Muraoka O., Acylated phenylethanoid glycosides , echinacoside ak acteoside soti nan Cistanche tubulosa, amelyore tolerans glikoz nan sourit, J. Nat. Med., 2014, 68(3), 561-566.

[21] Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y., Tu PF, Phenylethanoid glycosides ak aktivite anti-enflamatwa soti nan tij yo nan Cistanche deserticola kiltive nan dezè Tarim, Fitoterapia., 2013, 89, {{4 }}.

[22] Lu D., Zhang J., Yang Z., Liu H., Li S., Wu B., Ma Z., Kantitatif analiz de Cistanches Herba lè l sèvi avèk segondè-pèfòmans likid kromatografi makonnen ak deteksyon etalaj dyòd ak segondè- espektometri mas rezolisyon konbine avèk metòd chimyometrik, J. Sep. Sci., 2013, 36(12), 1945-1952.

[23] Han L., Boakye-Yiadom M., Liu E., Zhang Y., Li W., Song X., Fu F., Gao X., Karakterizasyon estriktirèl ak idantifikasyon glikozid phenylethanoid soti nan Cistanches deserticola YC Ma pa UHPLC/ESI-QTOF-MS/MS, Phytochem. Anal., 2012, 23(6), 668-676.

[24] Xiang Y., Jing Z., Haixia W., Ruitao Y., Huaixiu W., Zenggen L., Lijuan M., Yiping W., Yanduo T., Antiproliferative Aktivite nan Phenylpropanoids izole nan Lagotis brevituba Maxim, Phytother . Res., 2017, 31(10), 1509-1520.

[25] Yan Y., Song Q., Chen X., Li J., Li P., Wang Y., Liu T., Song Y., Tu P., Detèminasyon similtane nan eleman ak polarite lajè ak chenn kontni nan Cistanche tubulosa lè l sèvi avèk seri makonnen ranvèse faz-hydrophilic entèraksyon chromatografi-tandem mas spectrometri, J. Chromatogr. A., 2017, 1501, 39-50.

[26] Zou P., Song Y., Lei W., Li J., Tu P., Jiang Y., Aplikasyon metabolomik ki baze sou 1H NMR pou diskriminasyon diferan pati ak devlopman yon nouvo workflow pwosesis pou Cistanche deserticola, Acta. Pharm. Sin. B., 2017, 7(6), 647-656.

[27] Pan YN, Etid sou konstitiyan yo ak byoaktivite nan fre Cistanche tubulosa, Ph.D. tèz, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang, Lachin, 2011.

[28] Cui Q., ​​Pan Y., Xu X., Zhang W., Wu X., Qu S., Liu X., pwofil la metabolik nan acteoside ki te pwodwi pa moun oswa rat entesten bakteri oswa anzim entesten in vitro anplwaye UPLC Q-TOF–MS, Fitoterapia., 2016, 109, 67-74.

[29] Cui Q., ​​Pan Y., Bai X., Zhang W., Chen L., Liu X., Karakterizasyon sistematik metabolit echinacoside ak acteoside soti nan Cistanche tubulosa nan plasma rat, kòlè, pipi ak poupou ki baze sou UPLC-ESI-Q-TOF-MS, Biomed. Chromatogr., 2016(9), 1406-1415.

[30] Cui Q., ​​Pan Y., Yan X., Qu B., Liu X., Xiao W., Yon fason metabolik yo mennen ankèt sou obstak ki gen rapò ki lakòz pòv byodisponibilite nan livrezon oral nan isoacteoside nan rat anplwaye ultrahigh pèfòmans likid chromatografi / quadrupole tan-de-vòl tandem mas spectrométrie, Rapid. Komin. Mass. Spectrom., 2017(4), 371-380.