Efè sinèrjetik anti-enflamatwa nan Laminaria Japonica Fucoidan ak Cistanche Tubulosa ekstrè

Kòm yon repons iminitè kont antijèn etranje yo, makrofaj lage sitokin pro-enflamatwa tankou faktè nekwoz timè- (TNF-), interleukin-1 (IL{- 1), IL-6, ak lòt moun. Sitokin sa yo pwovoke yon foul chemotaktik nan granulosit, monosit, lenfosit, ak selil mast nan tisi ki domaje ki ankouraje retire antijèn ak rekiperasyon tisi. Sepandan, twòp enfiltrasyon ak aktivasyon nan selil yo agrave blesi tisi yo, ki mennen nan èdèm (eksudasyon vaskilè) ak doulè ki se fenomèn byen li te ye nan enflamasyon.

TNF- se yon faktè enpòtan pou pwovoke nitrik oksid sentaz (iNOS) ekspresyon jèn nan plizyè liy selil. Aktivasyon iNOS mennen nan pwodiksyon oksid nitrique (NO) ki pa sèlman modile plizyè fonksyon fizyolojik tankou bakterisid ak vazodilatasyon, men tou lakòz enflamasyon. Apre blesi nan tisi, degradasyon fosfolipas nan fosfolipid manbràn selilè jenere asid arachidonik. Asid arachidonik se plis dekonpoze pa cyclooxygenase (COX) nan prostaglandin (PGs). Twòp kantite PGE2 ki te fòme pa COX-II pwovoke plizyè sitokin pou enflamasyon. Piske tou de NO ak PGE2 aji kòm pi gwo faktè pou enflamasyon ak endiksyon doulè, chemen TNF--NO ak COX-II-PGE2 se kouran prensipal yo nan pwosesis enflamatwa a, ki anpeche pa kortikoterapi ak ki pa esteroyid.dwòg anti-enflamatwa(NSAIDs), respektivman.

Menm si gen plizyè estewoyid ak NSAIDs pouterapi nan maladi enflamatwa, dwòg sa yo ka lakòz efè negatif sou sistèm iminitè a, aparèy gastwoentestinal, ren, fwa, sistèm nève santral, tansyon, ak sistèm kadyovaskilè. Se poutèt sa, li nesesè pou misyon pou minimize efè negatif nan terapetik chimik pa ranplase yo oswa lè l sèvi avèk yo nan konbinezon ak pwodwi natirèl.

Fucoidan, yon konplèks polisakarid silfat ki soti nan alg tankou Laminaria japonica ak Cladosiphon okamuranus lajman distribiye nan anpil peyi, yo te itilize kòm terapetik nan medikaman Oriental pou yon peryòd tan. Nan etid anvan yo, li te demontre ke fucoidan gen anti-oksidatif, anti-koagulatif, anti-kansè, akaktivite anti-enflamatwa. An konsekans, efè benefik fucoidan sou maladi enflamatwa, iskemi, malfonksyònman iminitè, ak timè yo atire atansyon envestigatè yo. Yon lòt bò,Cistanche tubulosa(CT) te tou lajman itilize kòm yon medikaman tradisyonèl nan Lachin. Yo te rapòte ke ekstrè CT diminye pwodiksyon TNF-á ak IL- 4 ki se pi gwo faktè pou pwodiksyon NO nan chemen enflamatwa [19].

Konklizyon anvan sa yo te mennen nou mennen ankèt sou efikasite konbinezon fucoidan ak ekstrè CT sou 2 gwo chemen enflamasyon yo. Pou elicide mekanis aksyon an, nou analize NO ak PGE2 nan exudates ki soti nan enflamasyon sak lè carrageenan-induit.

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOSA POU ANPECHEAKTIVITE ENFLAMASATÈPHGS75% ECH 30% ACT 12%

Materyèl ak Metòd

Materyèl

Semi-pirifye fucoidan ak ekstrè dlo nan CT yo te jwenn nan Misuba RTech Co, Ltd (Asan, Kore di). Fucoidan ak ekstrè CT yo te kenbe nan 4 degre, melanje (1:3) fonn nan dlo pirifye anvan ou itilize, epi yo te administre oralman nan yon volim 5 mL / kg.

Kilti selilè ak NO quantification

Liy selilè RAW 264.7 makrofaj murin yo te achte nan men American Type Culture Collection (Manassas, USA), epi yo te kiltive nan mwayen Eagle's modifye Dulbecco a (Sigma, St. Louis, USA) ki gen 10% serom fetis ak antibyotik [100 U/mL. penisilin (Sigma) ak 100 µg/mL streptomycin (Sigma)]. Selil yo te enkube nan yon atmosfè imidite 5% CO2 a 37 degre.

Pou evalye efè fucoidan ak ekstrè CT sou sekresyon NO, yo te enkube selil RAW 264.7 (1 × 106 selil/mL) ak fucoidan oswa ekstrè CT (1-320 µg/mL) pou 5 min. , ki te swiv pa entèferon- (IFN-, 10 U / mL) ak lipopolysaccharide (LPS, 10 µg / mL) pou 24 èdtan. Nan etid preliminè nou yo, li te konfime ke tretman ak IFN-plus LPS pou aktivasyon an nan selil RAW 264.7 pa te afekte viabilite nan selil yo jiska 24 èdtan e ke fucoidan ak ekstrè CT pa t 'sitotoksik jiska 1 mg / mL. Yo te mezire konsantrasyon nan nitrite (NO2 -), pwodwi oksidize NO, kòm yon endikatè NO. Mwayen kilti a te melanje ak yon volim egal nan reyaktif Griess (1% sulfanilamid, 0.1% naphthyl ethylenediamine nan 2.5% asid fosfò) [21], epi enkube nan tanperati chanm pou 10 min. Konsantrasyon nitrit te analize nan 540 nm, kote NaNO2 te itilize pou jenere yon koub estanda.

Bèt ak tretman

Sourit ICR gason (7 semèn) te achte nan men Daehan Biolink (Eumseong, Kore), epi yo te loje nan yon chanm ki gen kondisyon anviwònman konstan (22±2ºC; 40-70% imidite relatif; 12-èdtan limyè). -fè nwa sik; 150-300 luks klète). Manje granules ak dlo pirifye te disponib ad libitum. Tout eksperyans bèt yo te apwouve pa Komite Enstitisyonèl Swen ak Itilizasyon Animal (IACUC) nan Chungbuk National University (CBNU), Kore di, ak fèt dapre Pwosedi Operasyon Creole (SOP) nan Sant Rechèch Animal Laboratwa, CBNU.

Sourit yo (n{0}}/gwoup) yo te trete oralman ak fucoidan (18 oswa 54 mg/kg), ekstrè CT (54 oswa 162 mg/kg), oswa melanj yo (18+54, {{6 }} oswa 90+270 mg/kg) yon fwa pa jou pandan 7 jou. Dòz ki ba nan fucoidan (18 mg/kg) ak ekstrè CT (54 mg/kg) yo te soti nan dòz imen estime nan 100 mg / kò (70 kg) ak 300 mg / kò apre tradiksyon sifas sifas nan pwa kò (Km{14). }} pou moun/Km=3 pou sourit), respektivman. Dòz segondè nan fucoidan ak ekstrè CT yo te mete nan 3 pli, pou kont li oswa nan melanj, ak melanj ki pi wo a te fiks nan 5 pli pou evalye efè sinèrjetik maksimòm.

Sou 1ye jou nan tretman fucoidan ak ekstrè CT, sourit yo te enjekte anba lar ak 10 mL lè esteril nan bò dèyè pou fòme yon sak [22,23]. Apre 2 ak 5 jou, yo te re-enjekte sak la ak 5 mL lè. Yon èdtan apre tretman final la, yo te enjekte 1 mL carrageenan (1% nan saline; Sigma) oswa machin li (saline) nan sak la.

Analiz de exudats yo

Sak lè a te lave ak 1 mL saline frèt 6 èdtan apre piki carrageenan, epi yo te anrejistre volim nèt nan likid lavaj. Kantite total selil enflamatwa, netrofil, monosit, ak lenfosit, yo te detèmine lè l sèvi avèk yon kontwa coulter. Konsantrasyon NO ak PGE2 yo te detèmine pa reyaktif Griess (Sigma) ak imunoassay anzim (EIA) lè l sèvi avèk yon twous Correlate-EIA (Assay Designs, Ann Arbor, Ann ArboUSA), respektivman.

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOSA POU BLOKE AKSYON SOU CHEMOTAKS SELIL ENFLAMATWA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Egzamen istopatolojik

Yo te retire tisi pouch-pawa epi yo te fikse nan yon solisyon fòmalin net. Parafine-intègre glisad tisi yo te tache ak ematoksilin-eozin, epi yo te egzamine anba yon mikwoskòp limyè pou blesi yo enflamatwa.

Analiz estatistik

Rezilta yo prezante kòm mwayen ± SE. Konparezon gwoup eksperimantal yo te fè pa analiz yon sèl-fason nan divèjans ki te swiv pa yon koreksyon tès Tukey a. Valè AP<0.05 was considered statistically significant.

Rezilta yo

Nan vitro, kilti selil RAW 264.7, IFN-, ak tretman LPS ogmante anpil pwodiksyon NO (Figi 1). Pretretman ak fucoidan (1-320 µg/mL) pa t afekte lage NO nan liy selil makwofaj la (Figi 1A). An konparezon, ekstrè CT (32-320 µg / mL) siyifikativman siprime pwodiksyon NO, ki endike yon aktivite anti-enflamatwa (Figi 1B).

Piki carrageenan nan sak lè sourit la ogmante volim exudade nan sak la (Figi 2). Sa yo te ogmante exudation atenue pa tretman ak fucoidan (18 mg / kg) ak ekstrè CT (54 ak 162 mg / kg). Miyò, tretman an konbinezon nan fucoidan ak ekstrè CT te diminye plis volim exudates, konpare ak efè endividyèl yo, byenke konbinezon dòz ki pi wo (54+162 mg/kg ak 90+270 mg/kg) pa t montre plis efikasite. nan konbinezon dòz ki pi ba a (18+54 mg/kg) (Figi 2A). N degre ontant nan sak la tou drastikman ogmante apre piki carrageenan (Figi 2B). An konparezon ak efè a twò grav nan fucoidan, ekstrè CT ansibleman bese N degre oncentration. Tretman konbinasyonèl fucoidan ak ekstrè CT diminye nivo NO a nan yon fason ki depann de dòz la. Menm jan an tou, yo te ogmante kontni PGE2 a sinèrjetik pa terapi konbinezon nan fucoidan ak ekstrè CT (Figi 2C).

Nan paralèl ak medyatè enflamatwa yo nan sak la, kantite selil enflamatwa yo ogmante drastikman pa piki carrageenan: 37.8, 4.8, ak 24.1 pli nan nivo kontwòl pou netrofil, monosit, ak lenfosit, respektivman (Tablo 1). Sepandan, fucoidan ak ekstrè CT siyifikativman redwi enfiltrasyon selil enflamatwa a, nan ki fucoidan te yon ti jan siperyè ak ekstrè CT. San atann, pa gen okenn efè sinèrjetik nan enfiltrasyon selil enflamatwa a te rive nan ko-administrasyon nan fucoidan ak ekstrè CT.

Kòm dedui nan enfiltrasyon selil enflamatwa a nan exudates yo, tisi lar ki antoure sak lè yo te montre blesi enflamatwa grav (Figi 3). Yo te obsève anpil selil nan tisi lar ki epè ki te ekspoze a Carrageenan (Figi 3B), konpare ak karakteristik ki pre nòmal nan bèt kontwòl (Figi 3A). Sa yo blesi enflamatwa yo te konsiderableman atenye pa tretman ak fucoidan (Figi 3C ak 3D) oswa ekstrè CT (Figi 3E ak 3F).

Miyò, pi wo efè anti-enflamatwa yo te jwenn pa terapi konbinezon ak fucoidan ak ekstrè CT (Figi 3G -3 I).

Diskisyon

Lè l sèvi avèk yon modèl enflamasyon nan pòch lè pouch nan degre viv, piki lè nan do wonjè yo pwovoke pwopagasyon selil ki stratifye sou sifas kavite a pou fòme yon estrikti ki sanble ak sinovyòm lan. Nan modèl sa a, piki a nan enfiltrasyon selil enflamatwa carrageenan-induit ogmante exudate a, ki se indicative de flit vaskilè. Sak lè a sèvi kòm yon rezèvwa selil enflamatwa ak medyatè ki ka fasil pou mezire nan likid ki akimile lokalman.

Pami divès medyatè enflamatwa ki ka pwovoke pèmeyabilite vaskilè, li se byen li te ye ke NO ak PGE2 se pi gwo faktè ki enplike nan patojèn nan anpil maladi enflamatwa. Yo konnen tou kòm medyatè nan endiksyon doulè ak pèsepsyon. iNOS, ki eksprime ak aktive nan divès kalite selil pa eksitasyon ak TNF- ak / oswa LPS pandan enflamasyon, pwodui gwo, konsantrasyon ki pèsistan nan NO. NO se yon molekil regilasyon enpòtan nan divès fonksyon fizyolojik, tankou vazodilatasyon ki mennen nan flit vaskilè. PGE2, ki pwodui nan asid arachidonik atravè COXs, kontribye nan devlopman anpil maladi enflamatwa, ak twòp pwodiksyon PGE2 an repons a divès kalite eksitasyon enflamatwa ki asosye ak moute-règleman nan nivo COX-II ak pwogresyon nan enflamasyon. Se poutèt sa, TNF- - NO ak COX-II-PGE2 chemen yo te konsidere kòm de kouran prensipal nan pwosesis enflamatwa, ki bloke pa inibitè nan iNOS (corticosteroids) ak COX (NSAIDs), respektivman.

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOSA POU ENTÈDI MALADI ENFLAMASATÈ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Nan etid la prezan, ko-administrasyon fucoidan ak ekstrè CT redwi volim exudate nan sak la, sijere ke yo posede aktivite suppressive kont flit vaskilè (Figi 2A). An konparezon ak efè endividyèl yo nan chak ekstrè fucoidan ak CT, tretman an konbinezon ogmante plis, sa vle di ke de degre nan ompounds aksyon sinèrjetik. Efè sinèrji sa yo ant fucoidan ak ekstrè CT yo te sipòte pa aktivite yo sou nivo NO ak PGE2 nan exudates yo (Figi 3B ak 2C).

Enteresan, sepandan, li te konfime ke fucoidan pa dirèkteman anpeche aktivasyon an nan macrophages nan tès vitro (Figi 1A). Menm jan an tou, potansyèl inhibitor fucoidan sou akimilasyon NO ak PGE2 nan tès vivo te relativman pi ba pase ekstrè CT (Figi 2B ak 2C). Tankou yon mekanis aksyon nan fucoidan diferan de yon inaktivasyon dirèk nan selil yo pa ekstrè CT (Figi 1B). Nan konparezon, fucoidan te egzèse yon efikasite segondè sou anpèchman nan enfiltrasyon selil enflamatwa nan sak yo (Tablo 1). Fucoidan te siperyè CT ekstrè nan bloke migrasyon netrofil, monosit, ak lenfosit nan sit aksidan tisi yo ki te pwovoke carrageenan yo. Enteresan, pa te gen okenn efè sinèrjetik anti-migrasyon, ki endike diferan mekanis aksyon ant fucoidan ak ekstrè CT: sa vle di, fucoidan bloke enfiltrasyon nan selil enflamatwa, pandan y ap ekstrè CT inibit aktivasyon nan selil yo.

Selil polimorfonukleyè, espesyalman neutrophils, se eleman prensipal selilè yo rekrite nan sit enflamatwa egi pwovoke pa carrageenan. Anplis de sa, selil enflamatwa sa yo tankou makrofaj ak lenfosit jwe tou wòl santral nan pwosesis enflamatwa a lè yo sekrete sitokin. Lè yo te pretrete ak fucoidan oswa ekstrè CT, kantite globil blan ki te imigre nan sak lè carrageenan-enjekte yo te ansibleman siprime. Rezilta sa a te konsistan avèk yon efè ki ta ka jwenn pa kortikoterapi tankou dexamethasone, men se pa pa NSAIDs ki gen ladan endometacin. Se poutèt sa, li sipoze ke ekstrè a fucoidan ak CT gen an pati yon pwopriyete estewoyid.

Anplis de aksyon an bloke sou chemotaxis selil enflamatwa, ekstrè CT parèt yo siprime aktivasyon an nan macrophages. Sa a te konfime pa aksyon inhibition li yo sou NO nan vitro ak nan vivo, ki se pi gwo medyatè enflamatwa ki te pwodwi pa macrophages. Kidonk, efè ekstrè CT sou makrofaj yo ta ka akòz yon repwesyon nan ekspresyon mRNA ak / oswa yon anpèchman dirèk nan aktivite iNOS nan selil sa yo.

PGE2 se youn nan pi gwo medyatè enflamatwa yo tou. Li ogmante nan paralèl ak èdèm tisi, ki se siprime pa NSAIDs, inhibiteur nan COX. Carrageenan ka ogmante pwodiksyon PGE2 lè li pwovoke COX-II mRNA ak COX-II pwoteyin nan exudate nan sak. Nan modèl sa a, carrageenan siyifikativman ogmante kantite PGE2 epi li te siprime anpil pa ekstrè CT. Li se enteresan sonje ke rezilta sa a te konsistan avèk yon efè ki ta ka jwenn pa yon NSAID endometacin. Se poutèt sa, li se dedwi nan rezilta yo ke ekstrè CT gen pwopriyete adisyonèl nan NSAIDs. Ansanm, yo kwè ke ekstrè CT egzèse tou de efè kortikosteroid ak NSAID-tankou nan modèl la enflamasyon carrageenan-induit e ke fucoidan amelyore a.efè anti-enflamatwa ekstrè CTpa bloke enfiltrasyon selil enflamatwa.

Malgre ke defini mekanis egzak la nan aksyon mande pou plis etid, yon melanj de fucoidan ak ekstrè CT ansibleman atténue siy enflamatwa pa bloke chemen TNF--NO ak COX-II-PGE2 nan enflamasyon nan sak lè carrageenan-induit. Konklizyon sa yo bay prèv ke tretman konbinezon nan fucoidan ak ekstrè CT ta ka yon kandida pwomèt pou soulajman nan divès kalite enflamasyon ki reponn a kortikoterapi oswa NSAIDs.

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOSA POU ENTÈDI MALADI ENFLAMASATÈ PHGS75% ECH 30% ACT 12%