Efè benefis nan Cistanche Tubulosa ekstrè sou amelyore pèmeyabilite nan entesten ki ba nan Echinacoside (ECH) ak Acteoside (ACT).
Mar 25, 2022
Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com
Tadatoshi Taninoa, Noriaki Nagaib ak Yoshinori Funakamib
* Fakilte Syans famasetik, Tokushima Bunri University, Tokushima ak b Fakilte Famasi, Kinki University, Osaka, Japon
Résumé
ObjektifObjektif etid sa a se te adrese efè benefisyeCistanchetubulosaekstrèsou amelyore pèmeyabilite nan entesten ki ba nan echinacoside (ECH) ak acteoside (ACT).MetòdAbsòpsyon ECH ak ACT nan ekstrè C. tubulosa te karakterize lè l sèvi avèk monokouch selil entesten moun Caco-2 ak konpoze entak. Transpò glikoz depandan absòpsyon nan ECH ak ACT te konfime pa yon teknik perfusion entesten in-situ.Konklizyon kle yoPèmeyabilite aparan (Papp) pa t 'siyifikativman diferan ant entak ECH ak entak ACT. Nan prezans phloridzin, Papp nan ECH la ak ACT nan yon dòz segondè te redwi a 20 pousan nan respektif ki pa tretman an, men li pa te chanje pa phloretin ak verapamil. C. tubulosa ekstrè nan dòz ki ba ak segondè amelyore Papp nan ECH ak ACT (tou de pa twa fwa), sa ki lakòz gwo patisipasyon yo nan absòpsyon sodyòm-depandan glikoz transpòtè-endepandan. Nan yon konsantrasyon ki ba, nivo ECH ak ACT nan san pòtal yo te siyifikativman siprime pa phloridzin.KonklizyonDyetetik ak medsin C.tubulosaekstrèamelyore absòpsyon nan entesten nan ECH ak ACT ka sèvi pi byen jere sante moun, byenke patisipasyon nan transpò phloridzin-sansib yo ta dwe redwi.
Mo kleacteoside; Kako-2 monokouch selil;Cistanchetubulosaekstrè; echinakozid; transpòtè glikoz phloridzin-sansib
Entwodiksyon
Rasin yo nanCistanchetubulosatradisyonèlman yo te itilize pou medikaman ak manje. Ekstrè C. tubulosa li te ye genyen efè famasi nan divès maladi nan sèvo, fonksyon anti-aje, metabolis grès, ak kwasans cheve.[1–4] Dènyèman, iridoids, monoterpenoids, glikozid phenylethanoid, ak lignan yo te izole nan C. tubulosa. . [5,6] Glikozid feniletanoid, yon klas konpoze polifenolik, se engredyan chimik prensipal yo nanCistancheespès,[7] byenke kantite yo varye pami diferan espès. Echinacoside (ECH; Figi 1) se youn nan pi gwo glikozid phenylethanoid nan Herba Cistanchis. Anzim ki gen orijin bakteri nan gwo trip la idrolize ak akteozid (ACT; yo rele tou verbascoside).[8,9] ECH ak ACT posede aktivite benefik epatopwoteksyon[10] ak anti-enflamasyon[11] nan bèt wonjè yo. Etonan, ECH trè idrosolubl amelyore konpòtman ak rezilta nerochimik nan yon modèl sourit nan maladi Parkinson la ak inibit kaspas-3 ak kaspas-8 aktivasyon nan newòn granules serebeleux.[9] Li se byen li te ye ke baryè a san-sèvo estrikteman limite antre ak distribisyon ksenobiotik nan sèvo a soti nan san an. Wu et al. [12] te montre tou ke ACT idrosolubl te rapidman distribye nan tisi sèvo rat yo. Se poutèt sa, ECH ak ACT ka transpòte nan sèvo a, entesten, ak fwa pa sistèm espesifik (yo).
Figi 1 estrikti chimik nan echinacoside ak acteoside.
Malgre ke gen gwo prèv ki sijere ke konsomasyon nan C. tubulosa ekstrè benefisye nan sante moun, pèmeyabilite nan ECH pi bon kalite atravè monokouch selil Caco {{{0}} nan yon konsantrasyon apical nan 8.4 ± 1.6 ug / ml se. egal a oswa pi ba pase mannitol makè transpò paraselilè a.[13] Lè ECH pi bon kalite yo administre oralman nan rat (dòz, 1{{10}}{0 mg/kg), absòpsyon trè vit (Tmax, 15 min), epi konsantrasyon maksimòm nan serom se trè. ba (Cmax, 0.61 ± 0.32 ug/ml).[14] Byodisponibilite absoli ECH se sèlman 0.83 pousan. Menm jan an tou, lè selil Caco-2 yo enkube ak yon fraksyon fenolik ki pasyèlman pirifye nan dlo ize moulen oliv, absòpsyon ACT pi rapid rapid ak akimilasyon pik ki fèt apre 30 min ak yon efikasite akimilasyon total de 0.1 pousan, ki bay. nivo entraselilè 130 pmol/mg pwoteyin selil yo.[15] Nan rat, konsantrasyon maksimòm (0.13 ± 0.03 ug/ml) nan ACT pi bon kalite te rive nan 30 minit apre dòz oral ak 100 mg/kg,[12] ki vle di absòpsyon rapid entesten. Byodisponibilite oral la nan ACT, osi byen ke ECH, se byen ba (0.12 ± 0.04 pousan), sijere posiblite pou efè premye pas nan aparèy la entesten ak fwa. Nan kòlè rat, metilasyon ak glucuronidation konjige nan ECH yo se metabolit pi gwo, [16] byenke limit nan metabolis epatik rete klè. Nou te jwenn preliminèman ke ECH ak ACT yo te byen estab nan omojene yo nan mukoza entesten rat ak asid gastric atifisyèl (done yo pa montre). Najar et al. [17] te demontre ke ACT inibit P-glycoprotein (P-GP)-ATPase aktivite nan yon fason ki sanble ak verapamil (yon reprezantan P-gp inibitè), ki vle di yon modulator P-gp; sepandan, li pa sèten si ACT disponib kòm yon substra P-gp. Enteresan, rezilta ki sot pase yo nan flavonoid-D-glikozid dyetetik yo te montre ke pwoteyin rezistans multidrog (MRP2) maske transpòtè glikoz ki depann de sodyòm (SGLT) 1- medyatè absòpsyon quercetin 4′-O- -glikoz, [18,19] ki responsab pou absòpsyon trè pòv. Sepandan, yo konnen anpil ti kras sou sansiblite glikozid polifenolik nan transpòtè absòpsyon, ki gen ladan transpòtè glikoz. Enfòmasyon sou karakteristik absòpsyon nan quercetin 4′-glucoside ak rapidman san-sèvo baryè-pèmeyab ECH te pouse nou mennen ankèt sou absorption nan transpòtè-sansib nan glikozid phenylethanoid nan dyetetik C. tubulosa ekstrè.
Nan etid sa a, nou te mennen ankèt sou absòpsyon ECH ak ACT entak ki te fè ak transpòtè glikoz lè l sèvi avèk monokouch selil entesten moun Caco-2. Ansanm, transpò a absòpsyon nan ECH ak ACT koncomitan nan dyetetik C. tubulosa ekstrè te karakterize pa yon modèl in-vitro ak in-situ sistèm perfusion entesten ak echantiyon san pòtal, ki ka byen fasil distenge ant limit la nan absòpsyon ak evite epatik an premye. -pase dispozisyon.
Materyèl ak Metòd
Materyèl
Intact ECH ak ACT te kado jenere nan men Eishin Trading Co., Ltd (Osaka, Japon). Phloridzin ak phloretin te achte nan men Tokyo Kasei Co, Ltd (Tokyo, Japon). Verapamil ak asid p-koumarik, yo itilize kòm estanda entèn pou tès segondè-pèfòmans likid kromatografi (HPLC), yo te jwenn nan Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA). Tout lòt pwodwi chimik yo te itilize yo te nan klas analyse ak komèsyal disponib.
Materyèl plant ak preparasyon ekstrè metanolik la
C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) se yon plant parazit kontinuèl k ap grandi sou rasin espès Salvadora oswa Calotropis, epi li distribye nan peyi Afrik di Nò, Arabi ak Azyatik. Tij sèk nan C. tubulosa yo te an poud ak ekstrè twa fwa ak metanol anba rflu pou 3 èdtan. Evaporasyon sòlvan an anba presyon redwi bay ekstrè metanolik la. Ekstrè metanolik la (klas komèsyal, pakèt nimewo 20070130;
enskri non komès, Sabaku Ninnjinn Kanka) se te yon kado jenere soti nan Eishin Trading Co, Ltd atravè Muraoka ak Morikawa (Kinki University, Japon), ak yon idantifikasyon botanik te antreprann pa Pwofesè Jia Xiaoguang nan Enstiti Xinjiang nan Chinwa Tradisyonèl ak Medikaman etnolojik.
Analiz ekstrè plant: kwomatografi
Nou detèmine kontni ECH ak ACT nan ekstrè C. tubulosa (pakèt nimewo 20070130) pa yon analiz HPLC ki dekri anba a. Done yo jwenn yo montre nan Tablo 1.
Kilti selilè
Selil Caco{{0}}, ki te achte nan American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA), yo te itilize nan pasaj 38–53. Yo te grandi nan yon mwayen kilti ki fòme ak Dulbecco a modifye mwayen Eagle (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kyoto, Japon) complétée ak 0.1 mM asid amine ki pa esansyèl, 10 pousan chalè-inaktive serom fetis bovine, 100 U / ml penisilin G, ak 0.1 mg / ml silfat streptomycin.
Etid transpò
Selil Caco-2 yo te plake nan yon dansite 6.4 × 103 selil/cm2 sou filtè polikarbonat. Monokouch yo te itilize pou eksperyans transpò 21-25 jou apre simen. Entak ECH ak ACT ki te ekivalan ak sa yo nanCistanchetubulosa ekstrè(4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (fifinal concentration, 1 mM) and verapamil (fifinal concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (fifinal concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.
In-situ perfusion entesten
Rat Wistar gason (23{{20}}-250 g) yo te jwenn nan SLC Japon (Hamamatsu, Japon). Bèt yo te loje nan yon chanm lè-kondisyone anba yon sik limyè / fè nwa 12 èdtan pou 1 semèn anvan yo itilize. Rat yo te manje estanda manje laboratwa (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Japon) ak dlo ad libitum epi yo te jèn lannwit lan anvan tès la. Etid perfusion recirculation in-situ te fèt dapre pwosedi modifye ki dekri pa Mihara et al. [20] Yon ti tan, rat yo te anestezi ak 25 pousan solisyon urethane (1 mg / kg) pou fè pou evite diminye nan san presyon. Yo te fè yon ensizyon nan vant midline epi ti trip la te ekspoze. Kannal bile a te ligated pou evite sekresyon kòlè nan perfusate la. Tout ti trip la kòm yon sèl segman (soti nan duodenum nan ileum a) te rense ak saline nòmal nan 37 degre pou 10 min jiskaske lave a parèt klè. Lè sa a, tib an vè ki konekte ak tib silikon yo te canulated nan tou de bout ti trip la epi yo te garanti ak fil suture. Lè sa a, ti trip la te ranplase nan vant la, epi kanul yo te konekte ak yon ponp peristaltik. Te venn pòtal la canulated ak tib polyethylene (PE10). C. tubulosa ekstrè ki disponib komèsyalman te sispann nan tanpon bikabonat Krebs-Henseleit (pH 7.4) pou bay yon konsantrasyon fifinal 4.5 mg/ml epi yo te santrifuje pou 10 minit nan 8000 rpm pou retire eleman ensolubl. Supernatant nan absans oswa prezans phloridzin (1 mM) te kolekte nan yon rezèvwa, ki te kenbe nan yon tanperati 37 ± 0.5 degre pandan tout kou a nan eksperyans la. Nan moman ki endike yo, yo te pran san nan kanul venn pòtal la. Apre santrifuje echantiyon san yo, yo te deproteinize plasma ki lakòz ak asetonitrile ki gen estanda entèn la epi yo te santrifuje a 3000 rpm. Supernatant yo te evapore, epi rezidi a te rezoud ak yon faz mobil ki fòme ak asetonitrile ak 0.5 pousan asid acetic. Solisyon melanje a te chaje sou yon kolòn HPLC. Rat yo te itilize an akò ak pwosedi etik swiv Gid pou Swen ak Itilizasyon Bèt Laboratwa yo pibliye pa gouvènman Japonè a ak Kinki University.
Analiz HPLC
Analiz HPLC te fèt sou yon sistèm ki te ekipe ak yon Shimadzu SPD{{0}}A, UV detektè, Shimadzu LC-10Yon ponp, ak Shimadzu C-R4A chronotopic entegrateur (Kyoto, Japon). ECH ak ACT yo te separe lè l sèvi avèk yon kolòn Inertsil ODS (5 μm, 4.6 × 15 0 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japon). Yon faz mobil nan asetonitrile ak 0.5 pousan asid acetic nan yon rapò 15:85 (v / v) te itilize nan yon pousantaj koule nan 1.0 ml / min. Deteksyon te fèt nan 334 nm.
Analiz sinetik
Koefisyan pèmeyabilite aparan (Papp) yo te estime apati pant pòsyon lineyè kou tan transpò konpoze atravè monokouch selil Caco-2, jan sa a:
Papp{{0}} （dQ/dt）/A1C0)
kote dQ/dt se pousantaj pèmeyabilite, C0 se konsantrasyon inisyal solut la nan chanm donatè a, ak A se sifas manbràn an (4.7 cm2).
Nan etid perfusion entesten nan rat la, zòn ki anba koub konsantrasyon-tan plasma (AUC0-90) nan venn pòtal la soti nan tan zewo jiska dènye mezi yo te kalkile dapre règ lineyè trapezoidal la.
Pwopriyete fizikochimik
Yo te kalkile zòn sifas polè a ak sifas ki pa polè nan konpoze lè l sèvi avèk pwogram SAS (vèsyon 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Administrasyon Sentèz ak Estrikti, 1997-2001, AstraZeneca, Cary. , NC, USA). Yo te jwenn valè log P ak pKa ki te detèmine eksperimantalman nan literati a.
Analiz estatistik
Done yo te analize pa yon sèl-fason analiz de divèjans ki te swiv pa tès posthoc Tukey a. Valè pwobabilite mwens pase 5 pousan te konsidere kòm enpòtan.
Rezilta yo
Transpò absòpsyon echinacoside ak acteoside atravè monokouch selil Caco-2
Nan sourit ak rat, ECH[1{{20}},14] ak ACT[12,21] entak yo administre oralman nan dòz 100–1{{ 39}}00 mg/kg. Ekstrè C. tubulosa yo itilize a te genyen apeprè 30 pousan ECH ak 15 pousan ACT pou chak dòz. Depi ekstrè a chanje presyon osmotik ak pH nan mwayen enkubasyon an, yo te detèmine konsantrasyon 4.5 ak 13.5 mg/ml ki baze sou dòz oral la (konpoze entak: 2-20 mg/20 g kò). pwa) nan sourit. Ekstrè a nan dòz ki ba (4.5 mg/ml) ak segondè (13.5 mg/ml) te genyen 2.0 ak 6.1 mg pou ECH ak 1.0 ak 3.0 mg pou ACT, respektivman. Nou aplike kantite ekstrè C. tubulosa ki te pi ba anpil pase dòz oral ECH ak ACT rapòte nan imen (rekòmande alokasyon dyetetik ekstrè: 150 mg ki gen apeprè 45 mg pou ECH ak 22.5 mg pou ACT). Nan dòz ki ba ak segondè nan konpoze entak, pwofil absòpsyon (Figi 2) ak Papp pa t 'siyifikativman diferan ant ECH ak ACT kòm yon ekivalan ECH (Tablo 2). Lè yo te chaje C. tubulosa ekstrè nan yon dòz segondè nan 13.5 mg / ml nan mwayen an, valè Papp (1.27 ± 0.13 ak 0.34 ± 0.03 × 10-6 cm / s, respektivman) nan ECH ak ACT koncomitan yo te twa fwa pi wo pase sa yo. (0.38 ± 0.09 ak 0.10 ± 0.03 × 10-6 cm / s, respektivman) nan ECH entak ak ACT (Tablo 2). Ekstrè a, kontrèman ak konpoze entak, siyifikativman amelyore transpò absòpsyon ECH ak ACT.
Figi 2 Transpò absòpsyon echinacoside ak acteoside atravè monokouch selil Caco-2 nan yon sistèm transwell. Yo te kontwole transpò apikal nan basolateral. Senbòl fèmen yo se echinacoside (sèk) ak acteoside (kare) soti nanCistanchetubulosaekstrè dòz nan konsantrasyon ki ba ak segondè nan 4.5 (a) ak 13.5 mg / ml (b). Senbòl ouvè yo se echinakozid entak (sèk) ak aktozid entak (kare) ki koresponn ak sa ki nan echinakozid ak acteoside nanCistanchetubulosaekstrèdòz, respektivman. Acteoside entak (triyang louvri) te chaje tou nan mwayen an kòm yon dòz ekivalan a echinacoside entak (sèk louvri). Yo bay rezilta ak devyasyon estanda (n=3).
Efè inhibition nan phloridzin, phloretin, ak verapamil
To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3 mM) nan phloretin pa t 'kapab itilize akòz toksisite selil aparan. Anplis de sa, P-gp te idantifye kòm yon jwè enpòtan ki responsab pou entèraksyon ki genyen ant medikaman èrbal ak substrats P-gp ki enpòtan klinikman. Verapamil pa t amelyore transpò absòpsyon konpoze entak (Figi 3).
Transpò absòpsyon ECH ak ACT nan ekstrè a (dòz ki ba) te siyifikativman anpeche pa phloridzin (Tablo 2 ak Figi 4). Ekstrè a nan dòz segondè siprime anpèchman phloridzin-sansib, byenke transpò a nan ECH entak ak ACT te pi sansib a phloridzin (Tablo 2).
Figi 3 Efè phloretin ak verapamil sou transpò absòpsyon echinacoside entak ak acteoside. Apical pou transpò basolateral yo te kontwole apre aplike echinacoside entak ki koresponn ak kontni echinacoside nan yon ekstrè 13.5 mg / ml sou bò apical (n=3). Acteoside (fèmen kare) te ekivalan nan dòz echinacoside entak (fèmen sèk) nan absans inhibiteurs (n=3). Diamonds louvri ak fèmen montre transpò nan prezans 0.2 mM verapamil ak 0.3 mM phloretin, respektivman. Eksperyans anpèchman yo te fèt an kopi.
Etid la perfusion entesten an plas
Nan yon etid in-situ, nou teste si ECH ak ACT nan ekstrè C. tubulosa te transpòte pa SGLT1 ki sitiye sou bò apical nan ti trip la. Lè ekstrè dyetetik la nan dòz la ki ba (4.5 mg / ml) te perfused, ECH ak ACT byen vit parèt nan san pòtal (Figi 5). AUC a te detèmine kòm 2702.8 ± 384.1 μm·min pou ECH ak 698.3 ± 197.2 μm·min pou ACT la. Apre AUC la te nòmalize ak kontni ki soti nan C. tubulosa ekstrè, kantite lajan an absòbe pa t 'siyifikativman diferan ant ECH ak ACT. SGLT1-sansib phloridzin, kontrèman ak phloretin, siyifikativman siprime transpò a absòpsyon nan koncomitan ECH (AUC, 649.4 ± 248.2 μm·min) ak ACT (pa detekte).
Diskisyon
Gen kèk engredyan èrbal yo se substrats nan P-gp trè eksprime nan fwa a, trip, sèvo, ak ren. P-gp se yon faktè detèminan pou byodisponibilite in-vivo, dispozisyon, ak distribisyon remèd fèy, tankou plan St John, kurkumin, echinase, jinsang, jenkgo, ak jenjanm.[22,23] Byodisponibilite genistein{{5} }glucoside, yon dérivés flavonoid, te limite tou pa entesten MRP2 transpòtè a.[24] Se poutèt sa, etid sa a te fèt pou mennen ankèt sou pwopriyete absòpsyon nan ECH ak ACT koncomitan nan dyetetik ak medsin C. tubulosa ekstrè.
Polarized Caco{{0}} monokouch selil, osi byen ke trip la,[25], eksprime gwo transpòtè efflux dwòg entesten, tankou P-gp, MRPs, ak pwoteyin rezistans kansè nan tete.[26] Flavonoid dyetetik nan quercetin [27] ak myricetin [28] yo te montre yo anpeche efflux P-gp-medyatè tou de nan liy selil yo ak modèl bèt. Verapamil, yon inibitè P-gp, pa t chanje pèmeyabilite ACT ak ECH atravè monokouch selil Caco-2 (Figi 3), ki endike ke ECH entak ak ACT pa te limite pa ponp efflux P-gp la. Etid anvan nou yo te montre pwoteyin MRP2 yo pa te eksprime nan monokouch selil Caco-2.[29] P-gp ak MRP2-efflux medyatè ta ka eskli nan transpò ECH ak ACT. Gen kèk glikozid quercetin ki gen lipofilisite ki ba yo te absòbe pi efikas pase quercetin li menm.[30] Li enpòtan tou pou sonje ke ACT ak yon moyete sik rapidman distribye nan tisi nan sèvo. Atansyon nou an te konsantre sou aksyon konbine de transpòtè glikoz nan enterosit: SGLT nan manbràn bwòs-fwontyè a ak transpò fasil difizyon glikoz (GLUT) nan manbràn basolateral la. Kako-2 kilti selil yo ka itilize kòm yon modèl pou etidye GLUT2 phloretin-sansib, ak phloridzin-sansib SGLT1 and 2 transporters.[31–34] Glikoz transpòte soti nan apik la nan bò basolateral nan Caco{{27 }} monokouch nan yon vitès ki wo ak yon Papp 36.8 ± 1.1×10−6 cm/s.[35] Li posede yon Papp ki pi wo pase propanolol transselilè makè transpò (23.4 ± 2.8 × 10-6 cm/s). Jan yo montre nan Tablo 2, ECH entak ak ACT te gen Papp pi ba anpil pase sa ki te rapòte nan glikoz ak propranolol pasif. Nou kalkile logaritm koyefisyan patisyon an (oktanol-dlo), log P, yo te kalkile yo dwe -2.32 ak 0.077 pou ECH ak ACT, respektivman. Yo kwè ke konpoze polè oswa idrofil yo transpòte atravè yon chemen paraselilè (nan junctions sere). De glikozid feniletanoid yo, tankou mannitol, sanble yo transpòte atravè yon wout paraselilè. Sepandan, phloridzin redwi dramatikman pèmeyabilite absòpsyon nan ECH entak ak ACT (Tablo 2), sijere ke apical SGLT1 jwe yon gwo wòl nan absòpsyon nan entesten nan ECH entak ak ACT. Nan yon dòz ekivalan, pi wo pèmeyabilite ACT idrofob te tou pre pèmeyabilite ECH (Figi 2 ak Tablo 2). Yoshikawa et al. [36] te demontre ke transpòtè fasilite (GLUT 1 ak 2), osi byen ke SGLT1 phloridzin-sansib, yo eksprime entansif nan ti trip la. Piske kantite konpoze absòbe yo baze sou balans mas ant absorption ak eliminasyon, nou evalye patisipasyon GLUT2. Glikoz travèse manbràn apical nan enterosit pa SGLT1 ak gwo afinite ak kapasite ki ba epi sòti atravè manbràn basolateral la atravè GLUT2 ak afinite ki ba ak gwo kapasite. Phloretin (yon inibitè espesifik nan GLUT2) pa t 'aboli transpò a nan ECH entak ak ACT (Figi 3). Funes et al. [37] te demontre ke ACT fòtman kominike avèk gwoup fosfat nan manbràn fosfolipid yo. Kòm gwoup idroksil yo abondan nan estrikti ACT la, lyezon idwojèn ant gwoup sa yo ak tèt polè glycerol oswa gwoup fosfat fosfolipid yo se entèraksyon ki gen plis chans pou pran plas. Lè yo te enkube ECH entak ak ACT ekivalan li yo ak monokouch Caco-2 pou 11 èdtan, akimilasyon selilè ACT (0.24 ± 0.04 nmol/cm2) te twa fwa pi gran pase ECH (0.07 ± 0.01 nmol/cm2). Nou te panse ke SGLT1- sansib ECH ak ACT yo te deplase tou dousman soti nan enterocytes nan san an, petèt ki mennen nan Papp ki ba a obsève. Konpare ak ECH trè idrofil, pèmeyabilite ki ba nan ACT ka akòz entèkalasyon nan manbràn selilè.
Konpoze polifenolik yo konsome nan melanj èrbal pandan aplikasyon klinik yo epi yo disponib nan komèsyal kòm sipleman dyetetik. Nan yon etid in-vitro, li te montre ke absòpsyon nan epicatechin fenolik pa te enfliyanse pa konpozisyon engredyan nan materyèl bwason manje.[38] Kontrèman, matris pwodwi Hypericum perforatum L. afekte transpò glukozid quercetin (rutin ak isoquercitrin) ak hyperoside atravè selil Caco-2 akòz diferans ki genyen nan konpozisyon fitochimik matris ak karakteristik transpò, sa vle di transfè paraselilè ak transpòtè medyatè oswa aktif. transpò.[39] Nan etid sa a, C. tubulosa te bay yon transpò transepitelial twa fwa pi wo pase ECH entak ak ACT (Figi 2 ak Tablo 2). Nou espekile ke eleman nan ekstrè C. tubulosa aktive transpòtè a phloridzin-sansib ak / oswa akselere eliminasyon an nan ECH intraselilè ak ACT. C. tubulosa ekstrè nan dòz la segondè te sanble yo maske anpil puisans nan transpò phloridzin-sansib (Tablo 2). Glusid dyetetik [40] ak pwoteyin [41] kominike avèk kèk polifenol nan aparèy gastwoentestinal yo. Morikawa et al. [10] te demontre ke senk iridoid, kankanosid AD, ak kankanol, yon glikozid monoterpene, kankanoside E, de oligoglycosides phenylethanoid, kankanosides F ak G, ak yon sik oligo acylated, kankanose, ta ka izole nan ekstrè C. tubulosa yo itilize kounye a. Lòt engredyan, ki gen ladan pwoteyin nan ekstrè C. tubulosa, rete klè. Ansanm ak espekilasyon ki anwo a, nou fèt pou egzamine si lòt konpozan kominike avèk SGLT1 epi anpeche absòpsyon ECH ak ACT.
In-vivo experiments cannot easily distinguish between the extent of absorption and avoidance of first-pass disposition through the liver. The in-situ intestinal perfusion model has an advantage over in-vivo and in-vitro models due to the easy control of experiment parameters exclusion of the impact of other organs and maintenance of an intact intestinal blood supply.[22] The involvement of the phloridzin-sensitive glucose transporter was evaluated in an in-situ intestinal perfusion system. As shown in Figure 5, absorbed amounts of ECH and ACT concomitants in C. tubulosa extract (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10-6 cm / s konplètman absòbe nan imen, pandan y ap mal absòbe dwòg ak peptides (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10-6 cm / s (Tablo 2), sijere segondè byodisponibilite oral nan bèt ak imen. Crespy et al. [43] te demontre ke effflux nan yon etid perfusion entesten an plas pa t 'siyifikativman diferan ant phloridzin ak phloretin. Yo [44] te montre tou ke byodisponibilite oral nan phloridzin ak gwo sansiblite nan SGLT1 te sèlman 10 pousan nan rat. Etid nan lavni yo bezwen evalye byodisponibilite ak efè premye pas epatik nan koncomitan ECH la apre administrasyon oral ekstrè dyetetik la nan gwo dòz la. Rezilta nan plas yo vle di ke konsomasyon nan ekstrè C. tubulosa ka amelyore absòpsyon oral ki ba nan ECH entak ak ACT.
Figi 4 Efè inhibition nan phloridzin sou transpò a absòpsyon nan echinacoside ak acteoside nanCistanchetubulosaekstrè. Yo te kontwole transpò apikal nan basolateral. Ti sèk fèmen ak kare yo se echinacoside (a) ak acteoside (b) nan ekstrè a 4.5 mg / ml san yo pa phloridzin, respektivman. Diamonds fèmen montre tretman an ak 4.5 mg / ml ekstrè ki gen ladan 1 mM phloridzin. Yo bay rezilta ak devyasyon estanda (n=3).
Figi 5 Tan kou nan konsantrasyon echinacoside ak acteoside nan san pòtal pandan perfusion entesten rat recirculation in situ. Senbòl sèk ak kare yo se echinacoside ak acteoside, respektivman.Cistanchetubulosaekstrènan yon konsantrasyon nan 4.5 mg / ml te perfused nan absans la (senbòl fèmen) oswa prezans (senbòl louvri) nan 1 mM phloridzin nan 37 degre. Yo bay rezilta ak devyasyon estanda (n=3–4). *P < 0.05="" vs="" ekstrè="" dyetetik="" la="" nan="" prezans="">
Konklizyon
Ekstrè dyetetik ak medsin C. tubulosa ki amelyore absòpsyon entesten ECH ak ACT ka sèvi pou pi byen jere sante moun, byenke patisipasyon transpò ki sansib pou phloridzin yo ta dwe redwi.
Deklarasyon Konfli enterè yo
Otè a (yo) deklare (yo) ke yo pa gen okenn konfli enterè yo divilge.
Finansman
Travay sa a te sipòte an pati pa High-Tech Research Center nan Kinki University.
Rekonesans
Otè yo vle remèsye Osamu Muraoka (Kinki University, Osaka, Japon) ak Toshio Morikawa (Kinki University, Osaka, Japon) pou rezèv la nanCistanchetubulosaekstrèak pi bon constituants. Nou trè rekonesan anvè Masahiro Iwaki (Kinki University) pou sipò etid yo.
Referans
1. Tanaka J et al. Efè aCistanchetubulosa ekstrèsou divès maladi nan sèvo. Style Manje 21 2008; 12:24–26.
2. Tanaka J et al. Fonksyon anti-aje nanCistanchetubulosa ekstrè. Style Manje 21 2008; 12:27–29.
3. Tanaka J et al. Bote ak fonksyon kwasans cheve nanCistanchetubulosaekstrè. Style Manje 21 2008; 12:29–32.
4. Tanaka J et al. Efè metabolize grès nanCistanchetubulosaekstrè. Style Manje 21 2008; 12:30–33.
5. Yoshizawa F et al. Konstitiyan yo nanCistanchetubulosaSchrenk (Hook) f.II. izolasyon ak estrikti yon nouvo glikozid fenilethanoid ak yon nouvo glikozid neolignan. Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M et al. Aminoglikozid feniletanoid ak oligosik acylate ak aktivite vazorelaxant soti nanCistanchetubulosa. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF et al. Analiz de glikozid phenylethanoid Herba cistanche pa RP-HPLC. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294–300.
8. Lei L et al. Règleman metabolik nan glikozid phenylethanoid soti nan Herbasistanchnan gastwoentestinal chen an. Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432–435.
9. Geng X et al. Efè neropwotektif echinakozid nan modèl MPTP sourit maladi Parkinson la. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66–74.
10. Morikawa T et al. Acylated phenylethanoid aminoglycosides ak aktivite epatoprotective soti nan plant dezè aCistanchetubulosa. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882–1890.
11. Paola RD et al. Efè verbascoside, biotechnologically pirifye pa syringa Vulgaris plant selil kilti, nan yon modèl wonjè nan parodontit. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 707–717.
12. Wu YT et al. Detèminasyon acteoside nanCistanchedeserticola ak Boschniakia rossica ak farmakokinetik li yo nan rat k ap deplase lib lè l sèvi avèk LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89–95.
13. Matthias A et al. Etid pèmeyabilite alkilamid ak konjige asid kafeyik ki soti nan echinase lè l sèvi avèk yon modèl monokouch selil kako-2. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29:7–13.
14. Jia C et al. Detèminasyon echinacoside nan serom rat pa ranvèse-faz segondè-pèfòmans likid chromatografi ak deteksyon iltravyolèt ak aplikasyon li nan farmakokinetik ak byodisponibilite. J Chromatogr 2006; 844: 308–313.
15. Cardinali A et al. Verbaskozid ki soti nan dlo moulen oliv: evalyasyon bioaksesiblite yo ak absorption entesten yo lè l sèvi avèk yon sistèm modèl in vitro dijesyon/kako-2. J Food Sci 2011; 176: H48–H54.
16. Jia C et al. Metabolis echinacoside, yon bon antioksidan, nan rat: izolasyon ak idantifikasyon metabolit bilyè li yo. Drug Metab Dispos 2009; 37: 431–438.
17. Najar IA et al. Modilasyon nan aktivite P-glycoprotein ATPaz pa kèk fitokonstitiyan. Phytother Res 2009; 24: 454–458.
18. Walgren RA et al. Flux flavonoid dyetetik quercetin 4′-beta-glukozid atravè monokouch selil kako-2 entesten imen an pa pwoteyin ki asosye ak rezistans nan plizyè dwòg -2. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830–836.
19. Walgren RA et al. Absorption selilè flavonoid quercetin 4′-beta-glucosidase pa transpòtè glikoz sodyòm-depandan SGLT1. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837–843.
20. Mihara K et al. Entestinal premye pas metabolis eperisone nan rat la. Pharm Res 2001; 18: 1131–1137.
21. Isacchi B et al. Aktivite antihyperalgesic nan verbascoside nan de modèl nan doulè neropatik. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 594–601.
22. Cook TJ et al. Pèmeyabilite entesten nan chlorpyrifos lè l sèvi avèk metòd la perfusion entesten sèl-pase nan rat la. Toksikoloji 2003; 184: 125–133.23. Kumar YS et al. P-glycoprotein- ak cytochrome P-450-medyatè entèraksyon dwòg èrbal. Dwòg Metabol Dwòg Interact 2010; 25:3–16.
24. Walle UK et al. Transpò genistein- 7-glukozid pa selil entesten CACO-2 imen yo: yon wòl potansyèl pou MRP2. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45–56.
25. Ito K et al. Ekspresyon sifas apik/bazolateral transpòtè dwòg ak wòl li nan transpò vektè dwòg. Pharm Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L et al. Kilti selil kako-2 nan evalyasyon absòpsyon entesten: efè kèk dwòg yo administre ansanm ak konpoze natirèl nan matris byolojik. (University of Helsinki, Fenlann, 2006) Tèz akademik, pp 1–66.
27. Scambia G et al. Quercetin potansye efè adriamycin nan yon liy selil kansè nan tete imen MCF -7 ki reziste plizyè dwòg: P-glycoprotein kòm yon sib posib. Kansè Chemother Pharmacol 1994; 34: 459–464.
28. Choi DH et al. Efè myricetin, yon antioksidan, sou farmakokinetik losartan ak metabolit aktif li, EXP-3174, nan rat: wòl posib nan cytochrome P450 3A4, cytochrome P450 2C9 ak P- anpèchman glikoprotein pa myricetin. J Pharm Pharmacol 2010; 62: 908–914.
29. Tanino T et al. Paclitaxel-2′- ethyl carbonate prodrog ka kontourne P-glycoprotein-medyatè selilè ekoulman ogmante cytotoxicity dwòg. Pharm Res 2007; 24: 555–565.
30. Hollman PC et al. Absòpsyon nan glikozid quercetin dyetetik ak quercetin nan volontè ileostomi ki an sante. Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276–1282.
31. Kellett GL et al. Se eleman difizyon nan absòpsyon glikoz entesten medyatè pa rekritman nan glikoz-induit nan GLUT2 nan manbràn nan tablo bwòs. Biochem J 2000; 350: 155–162.
32. Matter K et al. Triye pwoteyin endojèn plasma-manbràn fèt nan de sit nan selil epitelyal entesten moun kiltive (Caco-2). Selil 1990; 60: 429–437.
33. Mahraoui L et al. Prezans ak ekspresyon diferansye SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3, ak GLUT5 hexose transporter mRNAs nan klon selil Caco-2 an relasyon ak kwasans selil ak konsomasyon glikoz. Biochem J 1994; 298: 629–633.
34. Mesonero J et al. Ekspresyon ki depann de sik nan transpòtè fruktoz GLUT 5 nan selil Cac-2. Biochem J 1995; 312: 757–762.
35. Walgren RA et al. Transpò quercetin ak glikozid li yo atravè selil epitelyal Caco-2 entesten imen yo. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721–1727.
36. Yoshikawa T et al. Ekspresyon konparatif transpòtè hexose (SGLT1, GLUT1, GLUT2, ak GLUT5) nan tout aparèy gastwoentestinal sourit la. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183–194.
37. Funes L et al. Efè verbascoside, yon phenylpropanoid glycoside soti nan sitwon verbena, sou fosfolipid manbràn modèl. Chem Phys Lipid 2010; 163: 190–199.
38. Neilson AP et al. Enfliyans nan konpozisyon matris chokola sou kakawo flavan-3-ol bioaksesiblite nan vitro ak byodisponibilite nan imen. J Agric Food Chem 2009; 57: 9418–9426.
39. Gao S et al. Sa ki trè varyab nan fenolik nan St. John's wort pwodwi afekte transpò yo nan entesten imen an Caco-2 modèl selil: pharmaceutique ak byopharmaceutique rezon pou normalisation pwodwi. J Agric Food Chem 2010; 58: 6650–6659.
40. Schramm DD et al. Efè manje sou absòpsyon ak farmakokinetik flavanol kakawo. Lavi Sci 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C et al. Etanol ak matris diven gratis polifenolik ankouraje diferansyasyon selil kako-2 entesten imen yo. Enfliyans nan asosyasyon yo ak yon ekstrè grenn rezen ki rich ak procyanidin. J Agric Food Chem 2005; 53: 5541–5548.
42. Artursson P et al. Korelasyon ant absòpsyon dwòg oral nan imen ak koyefisyan pèmeyabilite dwòg nan selil entèn epitelyal imen (Caco-2). Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880–885.
43. Crespy V et al. Konparezon absòpsyon entesten nan quercetin, phloretin, ak glikozid yo nan rat. J Nutr 2001a; 131: 2109–2114.
44. Crespy V et al. Byodisponibilite phloretin ak phloridzin nan rat. J Nutr 2001b; 131: 3227–3230.