Ki jan pwoteyin reparasyon manbràn selilè kontwole transdiksyon siyal faktè transcription pou kontwole fibwoz ren

Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com

Haichang Li

renfibwoz asosye ak pwogresyon egirenblesi nan maladi ren kwonik. MG53, yon pwoteyin reparasyon manbràn selilè, yo te montre pou pwoteje kont blesi nan selil epitelyal ren ak blesi egi nan ren. Isit la, nou evalye wòl MG53 nan modulation derenfibwoz nan sourit ki aje ak nan sourit ki gen obstriksyon ureteral inilateral (UUO) yon modèl li te ye nan fibwoz ren pwogresif. Sourit ki gen ablasyon MG53 devlope plis fibwoz entèstisyèl ak laj pase sourit MG53-entak ki gen menm laj. Menm jan an tou, nan absans MG53,renfibwoz te egzajere konpare ak sourit ki gen intactMG53 nan ren ki obstrue a konpare ak ren ki pa obstrue kontlateral la oswa ren sourit ki te opere simulation. Ureteral la obstruerensoti nan sourit MG53deficient tou te montre siyifikativman plis enflamasyon pase ren ureteral obstrue soti nan sourit MG53 entak. Eksperyans vitro yo te demontre ke MG53 te kapab antre nan nwayo selil epitelyal proximal tubulaires ak dirèkteman kominike avèk eleman p65 nan faktè transcription NF-kB, bay yon eksplikasyon posib nan enflamasyon amelyore nan absans MG53. Pou teste sa a, yo te bay sourit ki sijè a UUO ekspresyon MG53 amelyore atravè selil enjenyè oswa livrezon dirèk pwoteyin recombinant. Sa a redwi deklanchman NF-kB ak enflamasyon ak fibwoz ren diminye. Kidonk, MG53 ka gen yon wòl terapetik nan trete enflamasyon ren kwonik epi kidonk bay pwoteksyon kontfibwozki mennen nan fenotip maladi ren kwonik.

Cistanche tubulosa anpeche maladi ren, klike la a pou jwenn echantiyon an

Deklarasyon tradiksyon Enflamasyon kwonik mennen nan renovasyon fibrotik ki ka kache tou tranzisyon soti nan aksidan ren egi nan maladi ren kwonik. Aktivasyon pwoteyin-enflamatwa transkripsyon faktè nikleyè kB (NF-kB) ki enplike nan patojèn nan enflamasyon ren. Isit la, nou bay prèv ke MG53, yon pwoteyin reparasyon manbràn selilè deja idantifye, dirèkteman reyaji ak NF-kB epi redwi aktivite transcriptional li yo. An menm tan, MG53 administre ekzogenously ka diminye renovasyon fibrotik nan ren an anflame. Konklizyon sa yo montre yon entèraksyon pwoteksyon ant MG53 ak NF-kB pou diminye devlopman fibwoz ren enflamasyon. Administrasyon farmakolojik nan MG53 ta ka yon apwòch pwomèt pou tretman fibwoz ren pwogresif.

Malfonksyònman ren, ki ka klase kòm blesi nan ren egi (AKI) oswa maladi ren kwonik (CKD), te grandi nan yon epidemi nan popilasyon ki pi gran. An 2017, prevalans CKD te rive nan 14.5 pousan moun ki gen laj 65 an oswa plis, sa ki lakòz depans Medicare plis pase 84 milya dola pou tretman.^1,2AKI ak CKD yo pi komen nan moun ki pi gran yo, sitou akòz ogmante sansiblite nan blesi plis yon kapasite diminye pou repare ren ki aje. Etid klinik yo montre ke CKD se yon gwo faktè risk pou AKI, epi, Kontrèman, epizòd AKI ka akselere pwogresyon CKD nan direksyon maladi ren nan etap final la. Kounye a, tretman AKI se sitou sipò, epi tretman CKD etabli konsantre sou ralanti pwogresyon atravè anpèchman sistèm renin-angiotensin-aldosterone e kounye a pètèt atravè anpèchman sodyòm-glikoz cotransporter-2.^3,4

Tou depan de gravite aksidan an, selil tubulèr proximal yo, pi gwo sib blesi egi a, ka sibi chanjman nan pwogresyon sik selilè,5,6 metabolis,7 sekresyon cytokin pwoteyin-enflamatwa ak pwofibrotik, oswa tranzisyon pasyèl epithelial-mesenchymal,8. ki pral detèmine si renovasyon/reparasyon yo pral reyisi oswa maladaptif ak rezilta nan fibwoz ren, yon karakteristik nan CKD.

diminye rezèv vaskilè, ak pwodiksyon an nan matris ekstraselilè (ECM) pwoteyin epi li gen ladan pèt nan selil epitelyal ak akimilasyon nan kolagen an, a-lis aktin nan misk, ak fibronectin; li tou gen yon gwo korelasyon ak deteryorasyon nan fonksyon ren.

Enflamasyon kwonik mennen nan renovasyon fibrotik ki ka tou anba tranzisyon an soti nan AKI a CKD.11–13 Rechèch kimilatif sijere patisipasyon nan faktè nikleyè-kB (NF-kB) transkripsyon faktè a nan patojèn nan enflamasyon nan ren ki te koze pa enfeksyon, blesi, oswa transplantasyon.11,12,14 Aktivasyon nan chemen NF-kB kanonik la kòmanse ak aktivasyon nan inibitè a nan NF-kB (IkB) kinaz, ki mennen nan fosforilasyon ak degradasyon nan IkBa ak translokasyon nikleyè nan eterodimè NF-kB.15 Aktivasyon siyal NF-kB nan selil epitelyal ren yo ak selil iminitè ki enfiltre yo ka pwovoke pa deklannche fizyolojik tankou ekspoze a lipopolisakarid (LPS) oswa aksidan ischemi-reperfusion.¹⁷Anplis selil tubulaires ren yo, selil iminitè natirèl tankou makrofaj ak selil dendritik kontribye tou nan aksidan ren, enflamasyon, ak renovasyon fibrotik.^13,18–20

cistanche efikas nan trete malfonksyònman ren

Prèv k ap grandi sijere ke faktè sekretè ki sòti nan misk (sa vle di, myokines) modile fizyoloji sistemik atravè diafonis tisi pou enfliyanse pwogresyon maladi ren yo.²¹MG53 (yo rele tou TRIM72) se yon pwoteyin triparti ki anrichi nan misk (TRIM) ki gen yon fonksyon kritik nan reparasyon manbràn selilè.22,23 Pwoteyin fanmi TRIM yo gen divès fonksyon ki sòti nan règleman siyal iminitè yo rive nan reparasyon tisi yo.²⁴Reparasyon manbràn MG53-medyatè enplike nan diminye blesi egi nan misk skelèt,²⁵ren,²⁶kè,²⁷ poumon, 28 sèvo,^29,30ak po.³¹Etid anvan nou yo te idantifye yon nivo ki ba nan ekspresyon MG53 nan ren an, ki se yon eleman kle nan pwoteksyon AKI, ak sourit ensufizant nan MG53 (mg53 / ) yo te pi sansib a estrès-induit AKI.²⁶Nou tou dènyèman demontre ke elevasyon soutni nan MG53 nan sikilasyon an amelyore reparasyon blesi tisi ak rejenerasyon.32 Wòl relatif yo nan ren-espesifik ak ekstrèm sikile MG53 nan modulation fibwoz ren pandan CKD pwogresif yo toujou enkoni.

Dènyèman, yon wòl émergentes nan MG53 nan modulation pwoteksyon tisi atravè anpèchman nan enflamasyon, espesyalman atravè modulasyon nan siyal NF-kB, te evolye. Pou egzanp, MG53 atenue nerotoksisite LPS-induit ak nero-enflamasyon pa anpeche chemen an TLR4 / NF-kB,33 ak kadyak MG53 kontwole ekspresyon KChIP2 kontwole renovasyon elektwofizyolojik pandan ipèrtrofi kadyo.34 Anplis de sa, nou demontre yon fonksyon doub nan MG53 nan anpeche yon repons ipènflamatwa maladaptive pandan yon enfeksyon viris grip A subletal, karakterize pa twòp pwodiksyon entèferon-b, atravè repwesyon IRF3/NF-kB deklanchman ak anpèchman siyal Ca2þ intraselilè aberan nan makrofaj.35 Anplis de sa, sou yon dòz letal nan grip A. enfeksyon viris la, MG53 te montre pou anpeche mòtalite ak domaj nan poumon, pa dirèkteman afekte tit viral per se men nan bese tanpèt cytokine (interferon-b, interleukin-6, ak interleukin-1b) atravè règleman negatif. nan NLRP3 inflammasome a ak prevansyon nan piroptoz nan poumon an.36 Anplis, gwo-dòz tretman kwonik nan ekzogenous MG53 te lye nan repwesyon nan NF-kB. – enflamasyon medyatè nan kè ki gen laj.37 Etid sa yo sijere MG53 ka modile siyal NF-kB aberan pandan enflamasyon, men si wi ou non sa rive nan yon kontèks enflamasyon ren pa te etidye.

Nou postule ke MG53 kontwole enflamasyon nan ren pa modulation aktivite transcriptional NF-kB ak nan fè sa ka diminye fibwoz nan ren ki rive kòm yon konsekans enflamasyon kwonik. Etid sa a te antreprann pou adrese ipotèz sa a.

cistanche efikas nan trete maladi ren

METÒD

Etid sou bèt

Tout eksperyans ak bèt yo te respekte Gid Enstiti Nasyonal Sante pou Swen ak Itilizasyon Bèt Laboratwa yo epi yo te swiv pwotokòl ki te apwouve pa Komite Enstitisyonèl Swen ak Itilizasyon bèt Ohio State University. Kalite sovaj ki matche ak laj (WT) oswa mg53^-/-nonlittermates souch 129S1/SvImJ yo te itilize22 pou etabli wòl MG53 nan modulation fibwoz ren ki depandan laj ak inilateral obstruction ureteric (UUO). Sourit C57B6/J (9-10 semèn) te achte nan men Jackson Labs.

Pou etid blesi ren, sourit (9-12 semèn) te sibi UUO pou pwovoke fibwoz ren. Sourit yo te anestezi atravè isoflurane (1.5 pousan -2.0 pousan) pou asire yon gwo plan anestezi. Pwosedi UUO a te fèt pa ligature uretè gòch la ak 5-0 swa chirijikal de fwa dapre pwotokòl pibliye.38 Sourit Sham sèlman te gen yon ensizyon po nan vant. Pou evalye efè rhMG53 sou blesi obstriktif nan ren, 1 gwoup sourit UUO te resevwa rhMG53 (2 mg/kg) atravè piki venn ke a kòmanse imedyatman apre operasyon UUO (jou 0) epi apre chak jou pandan 7 jou, ak 2. dòz adisyonèl nan jou 9 ak 11. Yon gwoup kontwòl sourit UUO te resevwa piki saline dapre menm orè a. Sourit yo te touye nan jou 12 apre operasyon UUO, ren yo te perfused in situ ak fosfat-tanpon saline, ak echantiyon tisi ki soti nan ren UUO a ak ren kontralateral yo te kolekte pou istoloji ak analiz Western blot.

Nan etid separe, WT ak mg53^-/-sourit yo te sibi UUO oswa operasyon simulation epi yo te touye nan jou 7 apre operasyon an. Yo te bay sourit MG53 lè l sèvi avèk yon apwòch terapi ki baze sou selil yo.39 RAW 264.7 makrofaj yo te enfekte ak patikil viral ki depann de doxycycline (DOX) tPA-MG53- Cherry pandan 24 èdtan. Selil ki enfekte yo (nan yon konsantrasyon {{10}} /10{0 ml saline pou chak sourit) yo te enjekte venn ke nan sourit imedyatman apre operasyon (jou 0 piki). Sourit yo te resevwa 4 piki Ad-tPA-MG53 transduced RAW selil yo nan jou 0, 1, 3, ak 6. Touswit apre piki selil jou 0 a, sourit yo te randomize nan yon gwoup ki te resevwa ak yon gwoup ki pa t resevwa DOX (2). mg/ml nan 5 pousan solisyon sikwoz) nan dlo pou bwè yo pou 7 jou epi yo touye. Yo te kolekte echantiyon tisi ki soti nan ren UUO ak nan ren kontralateral pou analiz histoloji, RNA ak pwoteyin.

Analiz estatistik Done yo eksprime kòm vle di -SD. Yo te fè yon konparezon nan gwoup lè l sèvi avèk tès t Elèv la lè w konpare 2 rechèch debaz eksperimantal H Li et al.: MG53 modulate NF-kB nan fibwoz ren 2 Kidney International (2021) -, ---groups ak 1-fason analiz divèjans pou plis pase 2 gwoup (Graphpad Prism 8.2; GraphPad) ki te swiv swa bonferroni oswa Holm-Sidak tès konparezon miltip ad hoc. Yon valè P <0.05 te="" konsidere="" kòm="" estatistik="">

Metòd siplemantè Metòd konplè ki gen ladan evalyasyon istolojik, mezi kreyatinin serik, konstriksyon plasmid, kilti selil ak izolasyon selil epitelyal prensipal tubulaires, preparasyon adenoviris ak enfeksyon selil, tès translokasyon nikleyè NF kB p65, imunoistochimi ak imaj konfokal, tès repòtè NF-kB, lucicytokin. Test imunosorban ki lye ak anzim, fraksyon tisi, imunoblotting, koimmunoprecipitation, reyaksyon chèn polymerase an tan reyèl quantitative (Tablo Siplemantè S1), ak pwodiksyon rhMG53 yo nan Metòd siplemantè yo.

cistanche tubulosa ekstrè: trete maladi ren

REZILTA

Sourit ak ablasyon MG53 devlope fibwoz ren ki depann de laj

Nou konpare efè aje sou fonksyon ren ak fibwoz nan mg53^-/-ak sourit WT. Nou konfime obsèvasyon anvan nou yo ke byenke nivo kreyatinin serik nan sourit jèn (2 mwa) ak ak san MG53 pa t 'siyifikativman diferan, ki pi gran (16-20 mwa) mg53.-/-sourit montre yon kreyatinin serik siyifikativman pi wo pase kontwòl WT ki gen laj (Figi 1a). Ki baze sou trikrom tach, nou te jwenn ke mg53-/-sourit yo te gen plis fibwoz ren konpare ak sourit WT yo, kòmanse nan laj 5 mwa epi kontinye jiska laj 20 mwa (Figi 1b ak c). Yo te itilize tach imunohistochimik pou evalye enpak ablasyon MG53 sou enfiltrasyon lekosit, monosit, ak makrofaj nan ren sourit 2-mwa ak 5-mwa (Figi 1d ak e). Ren ki soti nan jèn sourit WT ak mg53-/- te gen menm nivo leukosit intrarrenal, men yo te jwenn plis selil enflamatwa nan mg53 / ren pase ren WT nan sourit 5-mwa.

Anplis de sa, imunohistochimi pou aktin nan misk lis ak fibronectin, 2 pwoteyin matris ekstraselilè yo souvan jwenn nan zòn nan fibwoz ren, te montre amelyore (3- a 8-pliye) tach nan glomeruli yo ak tubulointerstitium nan ren soti nan {{ {4}}mwa ki gen mg53-/- sourit konpare ak 10- sourit WT ki gen yon mwa (figi siplemantè S1).

UUO pwovoke enflamasyon ren agrave ak fibwoz nan mg53-/- sourit Nivo MG53 nan ren detekte pa imunoblot ogmante siyifikativman 7 jou apre UUO (Figi 2a). Mg53- /- UUO ren yo te montre fibwoz ekzajere, ak yon zòn 30 pousan adisyonèl trichrome-tache, pase ren WT UUO (Figi 2b).

MG53 modile deklanchman NF-kB ak lokalizasyon nikleyè p65

Aktivite NF-kB (p65) te evalye nan modèl UUO. Kantite total p65 (t-p65) te ogmante siyifikativman nan ren UUO soti nan WT ak mg53 / sourit, men aktivasyon NF-kB, evalye kòm fosforilasyon p65, te pi gwo (16-pliye) nan mg53 / UUO la. ren pase ren WT UUO a (2-pliye) konpare ak bèt ki te opere simul (Figi 3a). Nou analize nivo RNA relatif transfòmasyon faktè kwasans b1 (TGF-b1), inibitè activateur plasminojèn -1 (PAI-1), ak kolagen tip I alfa 1 (Col1a1) nan ren ki obstrue.40 Nou detekte nivo ki ba nan ekspresyon jèn nan bèt simulation ak endiksyon menm jan an (TGF-b1, w10 pliye; PAI -1, w40 pliye; Col1a1, w40 pliye) nan ren UUO soti nan WT ak mg53 / (Figi 3b). Pou egzamine distribisyon espasyal MG53 nan cortical ren an nan kondisyon nòmal, yo te analize fraksyon tisi ren yo. Nou jwenn regilyèman 10-plis plis pwoteyin total cytosol pase total pwoteyin nikleyè ekstrè a. Nivo t-p65 yo te konparab nan fraksyon cytosolic ant WT ak mg53-/- sourit men yo te pi gwo nan fraksyon nikleyè mg53-/- sourit (Figi 3c). MG53 te detekte nan fraksyon cytosol (ak tubulin kòm yon makè cytosol). San atann, yo te detekte yon kantite siyifikatif nan MG53 nan fraksyon nikleyè (ak histon H3 kòm yon makè fraksyon nikleyè).

Pou konfime konklizyon sa a, nou te egzamine tou lokalizasyon MG53 nan fraksyon nan misk skelèt (figi siplemantè S2). Nou repwodui etid anvan nou yo kote MG53 lokalize nan sitosol la ak manbràn sarcolemmal (sodyòm-potasyòm adenosine triphosphatase kòm yon makè nan fraksyon manbràn) 22,23,25 men tou detekte MG53 nikleyè rich nan misk skelèt.

MG53 reyaji ak p65 pou kontwole aktivite transkripsyon faktè-a-pwovoke necrosis timè Pou konfime rezilta fraksyon tisi nou yo, nou te fè etid imunohistochimik sa yo. Nan kiltive WT selil epitelyal proximal tubulaires, p65 te jwenn sitou nan sitosol la men lokalize nan nwayo nan absans MG53 (Figi 4a). Lè selil sa yo te trete ak LPS (5 mg) pou 8 èdtan, sekresyon pro-enflamatwa sitokin te siyifikativman pi gwo nan mg53 / selil pase selil WT (Figi 4b).

Paske done sa yo sijere MG53 ka kominike avèk p65 pou kontwole ekspresyon cytokine enflamatwa, yo te evalye yon entèraksyon dirèk ant p65 ak MG53 pa tès coimmunoprecipitation lè l sèvi avèk selil HEK293 cotransfected ak Flag-p65 ak HA-MG53. Nou demontre yon entèraksyon fèb (Figi 4c). Kotransfeksyon nan plasmid GFP-p65 ak RFP-MG53 ak analiz konfokal konfime kolokizasyon p65 ak MG53 (Figi 4d). Lè sa a, nou mezire si MG53 afekte aktivite transcriptional NF-kB (p65) apre eksitasyon TNF lè nou mezire aktivite luciferase ki soti nan yon liy selilè repòtè transkripsyon NF-kB/293-GFP-Luc ki estab ki te transfekte tanporèman ak swa pHM6 vektè. oswa HA-MG53. Selil repòtè yo genyen yon repòtè lentiviris transduced ekspresyon koukouy luciferase kondwi pa yon pwomotè cytomegalovirus minim ansanm ak 4 kopi konsansis NF-kB eleman repons transcriptional (kob sit) en. Nan absans TNF-a, te gen trè ba aktivite lisiferaz intrinsèques detekte nan selil repòtè yo eksprime pwoteyin MG53. MG53 siprime TNF-a-elicite NF-kB (p65) aktivite transcriptional pa apeprè 40 pousan (Figi 4e).

Ekspresyon twòp nan MG53 te anpeche translokasyon nikleyè NF-kB p65 sou tretman TNF-a. sou TNF-a eksitasyon, nou twòp eksprime MG53 nan selil HKC-8 swa atravè transdiksyon viral Ad-tPA-MG53 ki depann de DOX oswa atravè tretman ak MG53 imen recombinant (rhMG53). Sèvi ak yon antikò monoklonal MG53-espesifik, apre yo fin detekte MG53 endiksyon depandan DOX pa imunoblot. MG53 te prezan nan yon nivo trè wo nan Ad-tPA-MG53 transduced HKC-8 selil yo,

ekivalan a 1 ng rhMG53/mg lysate selilè. Kontrèman, HKC-8 te pran ak eksprime yon kantite pi piti nan rhMG53 (Figi 5a). HKC -8 te konfime absòpsyon FL rhMG53 ki gen etikèt fliyoresan pa mikwoskopi konfokal (figi siplemantè S3). Apre tretman TNF-a, tan pou pik deklanchman p65 la te 15 a 30 minit (Figi 5b). Anba kondisyon fondamantal, NF-kB p65 abite sitou nan sitosol la, ak ekspresyon MG53 pa t chanje sa a (Figi 5c ak d). Sepandan, apre eksitasyon TNF-a, p65 transloke nan nwayo yo nan selil HKC-8 ki pa eksprime MG53. An konparezon, translokasyon nikleyè p65 tonbe nan 33 pousan (selil yo bay rhMG53) a 50 pousan (selil transduced bay DOX) nan selil overexpressing MG53 (Figi 5c ak d).

Transfè adoptif nan selil RAW enjenyè nan modèl UUOmouse a te fèt ak selil 1 - 106 yo te administre atravè piki venn ke imedyatman apre operasyon UUO. Sourit yo te owaza divize an yon gwoup ki te resevwa dlo pou bwè nòmal (-DOX) ak yon gwoup ki te resevwa DOX (2 mg/ml) nan dlo pou bwè. Sourit UUO te resevwa RAW chak lòt jou pou yon total de 4 piki. Yo te rekòlte ren 7 jou apre operasyon an.

Sourit enfuze ak enjenyè RAW ki te swiv pa DOX endiksyon parèt siyifikativman redwi (pa 30 pousan) fibwoz ren konpare ak moun ki pa te resevwa okenn selil oswa moun ki enfuze ak enjenyè selil RAW men san yo pa endiksyon Dox (66 pousan zòn fibrotik; Figi 6a ak b).

Se sèlman yon ti popilasyon RAW/Ad-tPA-MG53 ki te siviv siveyans sistèm reticuloendothelial la nan fen eksperyans yo. Immunohistochemistry tach konfime ke tretman DOX pwovoke RAW-medyatè ekspresyon MG53 nan ren an (Figi 6c). Enteresan, ren UUO ki soti nan sourit RAW-enfuze ak DOX-induit MG53 ekspoze yon pi ba p-65/t-p65 rapò (apeprè 40 pousan) pase moun ki swa pa t 'resevwa RAW oswa sa yo ki te bay RAW san DOX (Figi). 6d ak e). Nivo p-p65 redwi a te konfime ak tach imunohistochimik p-p65 (S536) nan ren UUO (Figi 6f). Nou panse sikile MG53 delivre pa Raw/Ad-tPA-MG53/þDOX ak absorption pa selil tubul proximal ren yo ta ka patisipe nan diminye p-p65 (S536) ak diminye enflamasyon ren UUO. Konpare ak ren UUO-sèlman, ekspresyon TGF-b1, PAI- 1, ak Col1a1 te ogmante anpil nan ren UUO ki soti nan sourit enfuze ak RAW san DOX (pa gen okenn endiksyon MG53). Elevasyon jèn profibrotic sa yo ta ka atribiye a endiksyon yon reyaksyon alogref fò nan selil enfuze nan sourit imunokonpetan. Sepandan, ren UUO soti nan sourit enfuze ak RAW epi yo bay DOX (MG53 endiksyon) eksprime siyifikativman pi ba (60 pousan -72 pousan rediksyon) PAI-1 ak nivo relativman pi ba nan TGF-b1 ak Col1a1 pase sourit san tretman DOX (Figi). 6g).

Administrasyon sistemik nan rhMG53 bese deklanchman NF-kB ak devlopman fibwoz nan sourit ki sibi UUO.

Nou teste si rhMG53 te montre yon efè antifibrotik menm jan ak terapi selil RAW ki te dekri pi bonè. Done farmakokinetik anvan nou yo te endike mwatye lavi ki kout, sikile (apeprè 90 minit nan rat) rhMG53.42 Sourit tolere administrasyon kwonik 2 a 6 mg/kg.

rhMG5326,37 byen, kidonk yo te itilize estrateji administrasyon yo montre nan Figi 7a. Sourit UUO yo te bay owaza swa veyikil (saline) oswa rhMG53 (2 mg/kg) chak jou pandan 7 premye jou apre operasyon yo epi apre yo chak jou chak jou jiskaske yo te touye yo nan jou 12. ren ren ak kontralateral yo te parèt apeprè ekivalan t-p65. ak nivo ekspresyon fibronectin, ak nivo p-p65 yo yon ti kras ogmante nan ren kontralateral konpare ak ren sham. Apre UUO, ren t-p65 ogmante. Konpare ak bèt ki te trete ak saline, rapò p-65/t-p65 nan ren UUO nan bèt trete rhMG{53-redui apeprè 37 pousan, tandiske IkBa te ogmante pa anviwon 27 pousan (Figi 7b ak c). Anplis de sa, fibronectin diminye pa apeprè 33 pousan (Figi 7b ak c). Immunohistochemistry konfime rhMG53 te prezan nan ren UUO apre tretman (Figi 7d). Fibwoz total te redwi nan ren UUO trete rhMG53-(Figi 7e). Sepandan, ekspresyon RNA nan TGF-b1, PAI -1, ak Col1a1 te menm jan an nan sourit trete ak swa saline oswa rhMG53 (Figi 7f).

cistanche efikas nan trete malfonksyònman ren

DISKISYON

MG53 se yon pwoteyin TRIM anrichi nan misk yo te idantifye okòmansman kòm yon eleman enpòtan nan machin reparasyon manbràn plasma. myokine.32 Nou te deja montre MG53 ka kontwole enflamasyon pandan domaj tisi nan ògàn aleka.27,29,33,35–37 Ankèt prezan an pwolonje sijè ki abòde pwoteksyon ògàn MG53-medyatè nan ren an. Nou konkli ke MG53 ka diminye enflamasyon intrarrenal ak fibwoz ren pa bloke deklanchman cytokine-induit nan proinflammatory ak profibrotic transkripsyon faktè a NF-kB. Konklizyon sa a baze sou obsèvasyon sa yo: (i) efase jenetik MG53 nan sourit nòmal.

te lakòz yon bès nan fonksyon ren kòm sourit yo ki gen laj ki te akonpaye pa yon ogmantasyon nan fibwoz ren ak enfiltrasyon nan ren pa lekosit ak makrofaj; (ii) nan yon modèl blesi ren UUO murin, ren ki obstrue sourit MG53-defisi yo te montre plis fibwoz ak enflamasyon pase sourit ki gen MG53-; (iii) TNF-a ak entèleukin-6pwodiksyon pa LPS-trete selil epithelial tubulaires proximal yo te atenue nan prezans MG53; (iv) tretman ak oswa ekspresyon MG53 nan yon liy selil epitelyal proximal tubulaires diminye aktivasyon NF-kB TNFa-induit pa bloke translokasyon nikleyè nan eleman p65 nan-kB (MG53 yo te jwenn mare dirèkteman nan p65, byenke fèb); ak (v) fosforilasyon p65, yon etap nesesè nan aktivasyon an nan NF-kB, te diminye nan ren yo obstrue nan sourit UUO trete ak MG53 recombinant pwovoke overexpress MG53 nan makrofaj. Anplis de sa, inibitè nan aktivasyon NF-kB, IkBa, te ogmante nan ren yo obstrue nan sourit UUO sou fòm piki ak recombinantMG53.

Suppression jenetik nan MG53 nan sourit nòmal yo te toleran nan efè negatif nan aje sou ren yo. Sa a sijere ke prezans nan andojèn MG53 bay yon nivo debaz pwoteksyon pandan aje. Menm jan an tou, pèt la nan andojèn MG53 te fè AKI akòz blokaj vin pi mal. Ren UUO akimile MG53, petèt reflete aktivite myokine aleka nan misk skelèt. Li rete klè ki jan misk MG53 ka rekrite nan ren an pandan aksidan; sepandan, yon ren domaje souvan devlope ipoksi ak sibi estrès oksidatif,^44,45siyal ki ta ka sèvi pou rekrite MG53. Si se konsa, aks "selil misk-ren-iminitè" sa a ta ka ogmante pou diminye domaj nan ren yo.46 Altènativman, selil ren yo eksprime nivo ki ba MG53 nan debaz,²⁶epi, pandan aksidan egi oswa kwonik, pwodiksyon MG53 ta ka ogmante.

NF-kB se yon chofè transkripsyon enpòtan nan enflamasyon ak fifibroz nan aksidan ren ak aje.^14,17,47,48Nou te pouse envestige si efè MG53 yo ta ka medyatè atravè NF-kB paske prezans MG53 nan lòj nikleyè omojene nan ren sijere potansyèl la pou entèferans transcription. Lokalizasyon nikleyè MG53 se pa san presedan. Nan yon modèl transjenik overexpressing myokad MG53, nikleyè MG53 reglemante ekspresyon de peroxisome proliferator-aktive reseptè-alfa nan nivo transkripsyon ak afekte metabolis lipid kadyak. atravè diminye sitokin pro-enflamatwa, apoptoz, ak estrès oksidatif nan kardyomyosit ki gen laj.³⁷

Mekanis molekilè ki jan MG53 modil p65 mobilizasyon nikleyè / sitoplasmik rete klè. MG53 pa gen okenn siyal lokalizasyon nikleyè, men li gen 3 siyal ekspòtasyon nikleyè N-terminal leucine ki rich, yon motif rekonèt pa ekspòte pwoteyin nikleyè.⁵⁰Entèaksyon dirèk ant MG53 ak p65 te pito fèb kòm efè a sèlman oswa prensipal deranje MG53 sou aktivasyon NF-kB. Malgre ke MG53 parèt afekte dinamik nucleocytoplasmic shuttling nan eleman kritik NF-kB, mekanis egzak yo rete yo dwe detèmine.

Rezilta kritik renopwoteksyon MG53-medyatè parèt se diminye renovasyon fibrotik atravè atenuasyon enflamasyon medyatè NF-kB. Fifibroz nan ren se yon pwosesis konplèks ki enplike nan depo patolojik nan divès kalite pwoteyin ECM.51 MG53 te sanble gen efè klè sou fibronectin nan pwoteyin ECM. Fibronektin ogmante nan ren UUO ensufizant nan MG53 ak diminye nan sourit UUO trete ak MG53. Ekspresyon lòt pwoteyin ECM nan prezans ak absans MG53 pi difisil pou konprann. Nou te deja demontre ke rhMG53 negatif kontwole siyal TGF-b1/Smad ak siprime sentèz la nan pwoteyin ECM nan yon etid in vitro. mg53 / bèt ki ensufizant. Transkripsyon sa yo te diminye nan bèt UUO ki te pwovoke yo twòp eksprime MG53 atravè administrasyon an nan sourit viralman pwovoke.

makrofaj, men lè yo te bay recombinant MG53, pa te wè okenn efè. Sa a ka tou senpleman yon ka nan dòz ase paske nivo intrarenal MG53 reyalize yo te byen lwen pi gwo nan bèt yo bay vektè a macrophage kòm opoze a MG53 recombinant. Anplis de sa, nivo pwoteyin yo pa te mezire, ak evènman pòs-transcriptional te kapab modifye ECM a nan UUO. Plis rechèch ki nesesè pou elicide wòl émergentes MG53 nan modulation espesifik ECM pwoteyin. An konklizyon, etid sa a te demontre ke yon myokine ka ede kontwole enflamasyon debaz nan yon ògàn aleka tankou ren an epi, nan anviwònman an nan aksidan ren, ka ede diminye ak kontwole enflamasyon. Figi 8 prezante yon modèl k ap travay nan wòl MG53 nan renoprotection. Pandan modèl molekilè domaj ki asosye (DAMP, tankou TNF-a) ak modèl molekilè ki asosye ak patojèn (PAMP, tankou LPS) eksitasyon ak estrès ischemik, siyalozòm NF-kB aktive nan ren an. MG53 pwoteje ren an pa anpeche fosforilasyon ak aktivasyon siyal NF-kB, estabilize IkBa, ak diminye mobilizasyon nikleyè p65, bloke aktivasyon pwogram pro-enflamatwa. Malgre ke andojèn MG53 ka medyatè efè sa yo, nou sijere plis pwoteksyon solid ka bay lè l sèvi avèk MG53 terapetik, ki se posib ki baze sou kapasite nan MG53 ekzojèn diminye aksidan nan UUO. Gen plis envestigasyon jistifye pou konprann ki jan myokine sa a ka eksplwate klinikman.

benefis nan cistanche: pwoteje fwa ak anti-fibwoz

DIVILAJ

JM gen yon enterè ekite nan TRIM-edicine, Inc., ki devlope rhMG53 pou tretman maladi imen. Patant sou itilizasyon MG53 se Rutgers University ak Inivèsite Leta Ohio. Tout lòt otè yo te deklare pa gen enterè konpetisyon.

REKONÈS

Travay sa a te sipòte pa Enstiti Nasyonal Sante (NIH) R01-DK106394 (JM, BHR, ak P-HL) ak NIH R01-AG062896 (P-HL ak BHR). Pwojè sa a te sipòte an pati tou pa yon fon Lockwood ki soti nan Inivèsite Leta Ohio (P-HL) ak yon prim nan Sant Nasyonal pou Avanse Syans Tradiksyon (NCATS; P-HL, nimewo prim UL1TR002733). Kontni an se responsablite sèlman otè yo epi li pa nesesèman reprezante opinyon ofisyèl NCATS oswa NIH.

KONTRIBYON OTÉ,

PD, P-HL, JM, ak BHR te vin ansent ak/oswa te fèt etid yo; HL, PD, P-HL, ZL, ak XZ fè eksperyans yo, akeri done, epi fè analiz done; PD, P-HL, ak BHR te entèprete rezilta yo; epi P-HL ak BHR te ekri, revize, epi apwouve maniskri a. Tout otè li ak apwouve vèsyon final la.

MATERYÈL siplemantè

Fichye Siplemantè (PDF) Metòd Siplemantè.

Tablo S1.Primer sekans. Figi S1. mg53-/- sourit montre depo pwoteyin ECM amelyore. Tisi ren ki te matche ak laj (10 mwa) sovaj (WT) ak mg53- /- yo te tache ak 40 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI; ble, panno gòch), a- aktin nan misk lis (SMA; vèt, dezyèm panno), fibronectin (wouj, twazyèm panno), ak fizyone (panno adwat). Ba ¼ 25 mm. Kantifikasyon zòn fibwoz ren (n ¼ 3 pou chak gwoup). Done yo prezante kòm vle di -SD. Tès elèv la. ***P <>

Figi S2.Distribisyon nan misk skelèt MG53 ant nwayo ak sitoplasm. Skelèt misk ki sòti nan kalite sovaj (WT) ormg53-/- sourit yo te fraksyon ak imunoblotted ak yon antikò anti-MG53 (3 mg lysates) ak makè lòj selil yo (20 mg lysates). Sodyòm-potasyòm adenosine trifosfataz yo itilize kòm yon makè manbràn selilè, histon H3 kòm yon makè nikleyè, ak tubulin kòm yon makè sitosol.

Figi S3.Selil tubul proximal HKC-8 ren yo espesyalman absòbe AlexaFluor 647 ki make rhMG53. rhMG53 (Trimedicine) ak albumin serom bovin (BSA; ThermoFisher Scientific) te make ak Alexa Fluor(AF) Antibody Labeling kits (Life Technologies) dapre pwotokòl manifakti a. Selil HKC-8 yo te kiltive sou plat Delta TPG an vè (Bioptechs Inc.) nan mwayen Eagle's modifye Dulbecco a (DMEM) ak 10 pousan serom fetal bovine (FBS) nan prezans pwoteyin ki make, BSA-AF647 (agòch). ) ak rhMG53-AF647 (adwat), pou 24 èdtan. Imaj Z-pile yo te pran nan yon mikwoskòp konfokal LSM780 (Zeiss). Imaj yo montre selil ki anba asyèt yo. Ba ¼ 25 mm.

Figi S4.Jeni selil RAW pou medyatè sekresyon MG53 inductible. (A) Selil RAW yo te enfekte ak Ad-tPA-MG53 pou 24 èdtan epi yo te trete san (doxycycline [Dox]) oswa avèk Dox (þDox, 1 mg/ml) pou yon lòt 24 èdtan pou pwovoke ekspresyon tPA-MG53. Imaj konfokal yo te montre endiksyon ekspresyon MG53 (antikò anti-MG53, wouj, pi ba yo) ki soti nan selil RAW ki sanble ak makrofaj yo (F4/80 tach, vèt, panno anwo yo). Ba ¼ 25 mm. (B, C) analiz Western blot nan lisat selil (nan kantite 0.6, 3, ak 6 mg) pou ekspresyon pwovoke tPA-MG53 ak MG53 soti nan selil RAW ki enfekte (B) ak kilti ki koresponn lan. medya konsantre (nan volim 2, 5, ak 10ml) (C). Plizyè kantite rhMG53 (nan kantite 0.2, 1, 0.05, and0.025 ng) te chaje kòm estanda. Mw, makè pwa molekilè.