Efè Cistanche Shenqiwan sou domaj ren, GRP78, ak faktè ki gen rapò ak otofaji nan rat Zucker dyabetik gra ak dyabèt tip 2.
Dec 28, 2022
Klike la a pou w konnen plis enfòmasyon sou pwodwi Cistanche pou tretman maladi ren dyabetik
MANDE POU PLIS DETAY:
wallence.suen@wecistanche.com 0015292862950
Maladi ren dyabetik(DKD) se yon konplikasyon mikrovaskilè enpòtan nandyabèt melitusak yon gwo kòz nanmaladi ren nan etap final la[1]. DKD se yon bagay enpòtankonplikasyon mikwovaskilè nan dyabètepiyon gwo kòz nan fen etap maladi ren[1]. Pasyan ki gen DKD ka prezante ak proteinuria ki pèsistan ak pèsistans redwipousantaj filtraj glomerulèr[2]. Lapatojèn nan DKDse konplèks, ak etid resan yo te montre ke estrès retikul andoplasmik (ERS) nan ren an se kòz ki pi komen nan fen etap maladi ren. （Estrès retikul endoplasmik (ERS) ak otofaji yo tou pre relasyon ak DKD, epi etid patojèn yo ka enpòtan pou tretman DKD. DKD se plis menm jan ak "pi ba a disparisyon" nan kategori a nan maladi swaf dlo nan medikaman Chinwa.
Sentòm yo tipik nan swaf dlo ak twòp bwè ak pipi yo anrejistre nan Jin Kui Yao a (Essentials of Golden Horoscope), ak la.Kidney Qi Grennse pwopoze kòm fòmil prensipal la terapetik. Jin Kui Yao (金匮要略) anrejistre sentòm tipik swaf dlo ak pipi twòp epi li pwopoze a.Kidney Qi Grennkòm fòmil tretman prensipal la. Tretman DKD ak TCM ka efektivman pwoteje fonksyon ren epi li gen karakteristik ki an sekirite ak serye [5-6]. Tretman DKD ak medikaman Chinwa ka efektivman pwoteje fonksyon ren epi li gen karakteristik ki an sekirite ak serye [5-6]. Efikasite Kidney Qi Pill nan tonifye ren an ak ede Yang te konfime nan etid ki gen rapò [7]. Etid anvan nou an tou Etid anvan nou an te montre tou ke ren qi grenn yo gen bon efè pwoteksyon sou estrikti a ak fonksyon nan tisi ren nan sourit dyabetik [8]. Nan etid la prezan, nou obsève efè ren qi grenn sou Nan etid la prezan, nou obsève efè ren qi grenn sou domaj tisi ren, ERS, ak faktè ki asosye ak otofaji nan Zucker dyabetik gra rat (ZDF). Nan etid sa a, nou te envestige mekanis posib domaj ren nan rat ZDF lè nou obsève efè ren qi grenn soudomaj nan tisi ren yo, ERS ak faktè ki gen rapò ak otofaji medyatè pa grenn ren qi.
1 Materyèl
1.1 Bèt eksperimantal
Ven 12-semèn SPF gason ZDF rat (mas kò 390-410 g, nouri manje 5C08 bon jan kalite wonjè pou 4 semèn pou konplete endiksyon dyabèt tip 2) ak sèt 12-semèn- fin vye granmoun SPF gason Zucker Lean (ZL) rat (mas kò 350-380 g) yo te achte nan Beijing Viton Lehua Laboratory Animal Technology Co. Tout rat yo te loje nan anviwònman an baryè nan Enstiti a nan Medsin klinik, Lachin-Japon Zanmitay Lopital. , nimewo lisans: SYXK (Beijing) 2016-0043, ak platfòm la te bay yon sistèm vantilasyon endepandan andedan baryè a, kenbe yon 12-h altènasyon limyè ak nwa, yon tanperati chanm nan 23-25 degre. , ak yon chanm imidite relatif 50 pousan -60 pousan . Tout rat yo te pèmèt yo bwè ak manje lib pandan peryòd la manje.
1.2 Revizyon etik
Eksperyans bèt yo te apwouve pa Sou-komite Etik Animal Eksperimantal Komite Akademik Beijing University of Traditional Chinese Medicine (BUCM) ak nimewo apwobasyon BUCM-4-2021102801-4034.
1.3 Pwensipal dwòg ak réactifs
Tablèt yo (Shu Di Huang, Shan Yu Fei, Shan Yao, Mudan Pi, Fu Ling,Cistanche, Ze Xie, Gunner's Fructus, Gui Zhi) pou dekoksyon nanQi renGrenn yo te achte nan men Beijing Tong Ren Tang co fizyolojik saline, spesifikasyon: 500 mL, ki ofri pa Shandong Hualu famasetik Co Silver tach solisyon (Beijing Regen Biotechnologie co, Ltd, anpil nimewo DG0090), Magic SYBR Melanj (Jiangsu Kangwei) Century Biotechnology co, Ltd.), mRNA Reverse Transcription Twous (Thermo Fisher Scientific, Inc.), RNA TRIzol reyaktif (RNA TRIzol reyaktif), RNA TRIzol reyaktif (RNA TRIzol reyaktif). RNA TRIzol reyaktif (Beijing Solabao Teknoloji co, Ltd), Rat pipi Microalbumin ELISA Twous (Jiangsu Kote Biotechnology co, Ltd, anpil nimewo KT8560-A), GRP78 BiP Antibody, LC3B Antibody ak Beclin{ {5}} Antikò (Abcam, UK) (nimewo pakèt: ab108613, ab192890, ab207612), antikò poliklonal lapen anti-GAPDH (Proteintech, USA), kabrit anti-lapen IgG (H&L) -HRP (Beijing Baiao Yijie Technology Co. Ltd.).
Mèt glikoz nan san, bann tès glikoz nan san (Shanghai Roche Dyagnostik Products Co Ltd), santrifujeur ki ba-tanperati gwo vitès (Eppendorf, Almay), fluoresans quantitative PCR enstriman, doub vètikal enstriman elektwoforèz ak transfè elèktroforèz enstriman (Burroughs Life Medical Products). Co Ltd), jèl imager (pwoteyin senp, USA), mikwoskòp limyè (Leica, Almay), mikwoskòp elèktron transmisyon (Leica, Almay), ak jèl imager. (Leica, Almay), mikwoskòp elèktron transmisyon (Hitachi, Japon).
2 Metòd
2.1 Preparasyon dwòg eksperimantal
Dekoksyon an nanKidney-Qi Grennte prepare pa konvèti dòz Kidney-Qi Grenn nan Jin Kui Yao [9] dapre rapò ansyen ak modèn sistèm Han nan metroloji nan premye edisyon "Etid sou Dòz la ak Pwopòsyon nan Preskripsyon Typhoid" [2015 ], ak dòz la nan dekoksyon ki nesesè pou eksperyans la te jan sa a: Shu Di Huang 24 g, Shan Yu Fei 12 g,Cistanche10 g, Shan Yao 12 g, Mudan Pi 9 g, Fu Ling 9 g, Ze Xie 9 g, Gunnera 3 g, ak Gui Zhi 3 g. Dwòg yo te tranpe nan dlo distile pou 2 èdtan. Lè sa a, dekoksyon an konsantre pou 30 minit ak filtre nan twal gaz esteril. Dekokte remèd fèy yo pou 30 minit, Lè sa a, ajoute dwòg ki rete yo ak dekokte pou 1 èdtan. Apre tanperati a nan solisyon an bese nan tanperati chanm, solisyon an konsantre epi filtre nan twal gaz esteril, epi filtraj la chaje ak estoke nan -20 degre. Dwòg la ta dwe estoke pou pa plis pase 1 semèn, epi solisyon an ta dwe pote nan tanperati chanm anvan administrasyon an.
2.2 Etablisman ak gwoupman modèl bèt
Rat ZDF yo te pwovoke ak 5C08 rejim alimantè ki gen anpil grès pou 4 semèn, epi yo te mezire glikoz nan san nan koleksyon san nan pwent ke a 12 semèn nan laj. Yo te bay rat yo nan gwoup grenn ren qi grenn kidney akeuz nan ren qi grenn, epi yo te kalkile dòz chak jou 8.12 g/kg pou chak rat dapre fòmil nan "Modèl maladi nan bèt eksperimantal" [10], ak konsantrasyon dòz la. te 0.812 g/mL, ak rat yo nan gwoup modèl ak kontwòl yo te bay saline nan volim ki koresponn lan pou 4 semèn.
2.3 Kondisyon jeneral ak tès glikoz nan san jèn (FBG) rat yo
Kondisyon jeneral rat yo te obsève ak anrejistre chak jou, ak mas kò yo te peze regilyèman. Nan fen 12 semèn ak 16 semèn ki gen laj, san yo te kolekte nan pwent ke rat apre 8 èdtan nan jèn, ak FBG te mezire pa Roche san glikoz mèt ak bann tès. 2.4 Yo te mezire 24-h mikroalbumin urin ({24-h U-mAlb) nan fen 16 semèn, epi konsantrasyon 24-h U-mAlb yo te mezire selon enstriksyon yo. nan twous LISA.
2.5 Koleksyon echantiyon tisi ren
Nan fen 16 semèn ki gen laj, tout rat fè jèn pou 8 èdtan. Apre anestezi, yo te louvri kavite nan vant epi ren bilateral yo te ekspoze, epi yo te retire peritoneum la entak epi detache. Cortical ren an te separe ak an pati fiks nan 4 pousan paraformaldehyde pou preparasyon an nan seksyon parafin 3 μm; an pati koupe an blòk tisi 1 mm3 ak fiks nan 2.5 pousan glutaraldehyde pou preparasyon an nan seksyon ultrathin. Tisi ren ki rete yo te estoke nan -80 degre pou Realtime PCR ak tès Western blotting.
2.6 Aplikasyon obsèvasyon mòfolojik nan tisi ren yo
Yo te itilize tach PAS, tach Masson, ak tach hexaammonium ajan-ematoksilin-eozin pou obsève la.chanjman istopatolojik ren yoanba yon mikwoskòp limyè ak jwenn imaj. Yo te aplike mikwoskopi elektwonik transmisyon pou obsève chanjman ultrastruktural nan tisi ren yo ak imaj yo te kolekte.
2.7 Analyse PCR an tan reyèl
Jeletisi ren yoyo te tè sou glas ak TRIzol reyaktif te ajoute ekstrè RNA total, ak santrifuje nan 4 degre ak yon reyon 9.5 cm. Sipènatant la te ekstrè pa santrifujasyon nan 12 000 r/min pou 10 min, epi answit santrifuje pou 15 min ak klowofòm. Supernatant la te santrifuje ankò pou 15 min nan tanperati chanm pou 10 min, epi yo te lave supernatant la ak 75 pousan etanòl. ekspresyon nan nivo mRNA. Jadendanfan yo te fèt lè l sèvi avèk lojisyèl Primer Premier 5.0 ak sentèz pa Shanghai Bioengineering Co Ltd. Sekans Jadendanfan yo jan sa a.
