Pwopriyete Fonksyonèl Pwoteyin Yo Ka Amelyore Atravè Idwoliz Pa Sèten Proteaz

Tanpri kontakteosar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

Résumé:Pou mennen ankèt sou metòd pou amelyore pwosesis dechè kochon, po kochon yo te idrolize lè l sèvi avèk diferan pwoteaz ki disponib nan komès (Alcalase, Flavorzyme, Neutrase, Bromelain, Protamex, ak Papain) nan plizyè kondisyon optimal. Apre idwoliz anzimatik, idroliz kolagen an (CHs) yo te fraksyon pa pwa molekilè (3 kDa) atravè ultrafiltrasyon manbràn. CHS yo te analize pou pwopriyete fizik (pH, rekiperasyon pwoteyin, kontni gwoup amine gratis, distribisyon pwa molekilè, ak konpozisyon amine) osi byen ke pou pwopriyete fonksyonèl (aktivite antioksidan ak aktivite anti-aje). Pami CH yo, CH yo idrolize pa Alcalase (CH-Alcalase) te montre pi wo degre nan idroliz konpare ak lòt CH yo. Tou de "CH-Alcalase" ak "CH-Alcalase".<3 kda"="" fractions="" showed="" a="" considerably="" high="" antioxidant="" activity="" and="" collagenase="" inhibition="" activity.="" therefore,="" resulting="" bioactive="" have="" the="" potential="" for="" development="" as="" antioxidants="" and="" anti-aging="" ingredients="" in="" the="" food,="" cosmetics,="" and="" pharmaceuticals,="" from="" animal="">

Mo kle:idroliz; pwoteaz komèsyal; kolagen idrolizat; antioksidan; anti-aje

KSL01

Tanpri klike isit la pou konnen plis

1. Entwodiksyon

Avèk ogmante esperans lavi, pwosedi anti-aje po yo ap resevwa anpil atansyon. Kolagen, yo itilize nan pwodwi swen pou po kòm yon engredyan kosmetik pou anti-aje, se lajman ki itilize nan mache a kosmetik. Kolagen se yon gwo pwa molekilè, pwoteyin fib ki gen orijin bèt, yo jwenn anpil nan tisi konjonktif, po, tandon, Cartilage, ligaman, dan, klou, ak cheve nan imen ak bèt. Bèt rete sous prensipal kolagen endistriyèl [1l. Chak ane, gwo kantite sous-pwodwi bèt yo jete atravè lemond, kòm fatra, pa endistri yo manje ak pwosesis vyann. Sepandan, sa yo ka itilize kòm resous pwoteyin enpòtan pou nouvo materyèl manje oswa konvèti nan pwodwi ki gen valè ajoute atravè idroliz, ki lajman aplike pou amelyore ak amelyore pwopriyete fonksyonèl ak nitrisyonèl pwoteyin [2,3].cistanche genghis khanKolagen tou de pli zan pli konsidere kòm yon sous peptides bioaktif, ki te montre pwomès kòm konpoze benefisye pou itilize nan aplikasyon nitrisyonèl oswa pharmaceutique. Se poutèt sa, idroliz nan kolagen an ka jwe yon wòl enpòtan nan amelyore byodisponibilite li yo ak konvnab pou itilize nan divès pwosesis komèsyal yo.

Aktivite fizyolojik peptides bioaktif, ki anjeneral gen 2-20 résidus asid amine (<6000 da),="" are="" based="" on="" the="" composition="" and="" sequence="" of="" their="" amino="" acids="" [2,4].="" due="" to="" their="" structural="" properties="" such="" as="" molecular="" weight,="" bioactive="" peptides="" may="" possess="" specific="" characteristics="" that="" affect="" numerous="" physiological="" processes="" related="" to="" antimicrobial,="" antioxidant,="" emulsifying,="" antihypertensive,="" antidiabetic,="" and="" immunomodulatory="" functions="" in="" organisms="" [1,5,6].="" generally,="" low="" molecular="" weight="" hydrolysates="" display="" lower="" viscosity,="" better="" dispersion,="" higher="" hydrophobicity,="" and="" smaller="" particle="" size="" [7].="" the="" degree="" of="" hydrolysis="" directly="" affects="" the="" molecular="" weight="" and="" amino="" acid="" composition="" of="" the="" hydrolysates="" [8].="" therefore,="" the="" hydrolysis="" process="" may="" be="" necessary="" for="" producing="" novel="" bioactive="">

KSL02

Cistanche ka anti-aje

Idwoliz pwoteyin, ki mennen nan klivaj lyezon peptides, ka fèt atravè pwosesis anzimatik oswa chimik [9]. Pwosesis chimik, ki gen ladan idroliz alkalin oswa asid lè l sèvi avèk ekstraksyon sòlvan, danjere pa sèlman nan anviwònman an, men tou pou moun ki konsome pwodwi yo ki kapab lakòz [4,10]. Pwosesis chimik, ki difisil pou kontwole, bay pwodwi ki gen asid amine modifye [9]. Kontrèman, idroliz anzimatik ka fèt nan kondisyon grav, kidonk evite anviwònman ekstrèm ki mande tretman chimik yo.ekstansyon lavi cistancheAnplis, pwosesis yo pa ni pwodui reyaksyon segondè ni diminye valè nitrisyonèl sous pwoteyin [8]. Plizyè proteaz, ki gen ladan Alcalase, pepsin, Protamex, trypsin, ak Neutrase, yo souvan itilize idrolize pwoteyin, sa ki lakòz divès kalite idroliz pwoteyin ak peptides ak yon varyete aktivite biyo-fonksyonèl. Yon etid rapòte pwodwi idroliz kolagen an ak aktivite antioksidan soti nan jelatin po porsin lè l sèvi avèk idroliz anzimatik pa pepsin ak pankreatin [11]. Sou-pwodwi somon yo te idrolize yo pwodwi idrolysat peptik lè l sèvi avèk divès kalite proteaz, kote peptides final yo te montre ekselan pwopriyete antioksidan ak anti-enflamatwa [12].

Objektif rechèch la se te: (a) idantifye idroliz kolagen an ki pi aktif ki te pwodwi pa idroliz anzimatik lè l sèvi avèk diferan pwoteaz ki disponib nan komès (Alcalase, Flavorzyme, Neutrase, Protamex, Bromelain, ak Papain); (b) konfime efè fraksyon nan Kolagen hydrolysates te jwenn nan hydrolyse enzymatique, ak (c) pou detèmine leur in vitro antioxydant ak aktivite anti-aje.

2. Rezilta ak Diskisyon

2.1. Efè anzimatik idwoliz sou Kolagen Hydrolysates

2.1.1.pH

Pwopriyete fonksyonèl pwoteyin yo ka amelyore atravè idroliz pa sèten proteaz. Nan etid sa a, yo te itilize sis proteaz diferan (Alcalase, Flavorzyme, Neutrase, Bromelain, Protamex, ak Papain) pou idrolize kolagen an nan po kochon yo pou yo ka jwenn idrolysat kolagen aktif ak pwa molekilè ki ba. Chanjman pH nan kolagen hydrolysates(CH) montre nan Figi 1. PH sispansyon kolagen an (5 pousan melanj po porsin) te okòmansman 6.39-6.55 (nan 0h). CH-Alcalase ak CH-Flavorzyme rive nan pi bon pH (pH 8.0) nan 12 èdtan nan enkubasyon. CH-Protamex, CH-Bromelain, ak CH-Papain te rive jwenn pH optimal (pH 7.0) nan 6h nan enkubasyon, tandiske CH-Flavorzyme kontinye diminye soti nan pH 6.39 a pH 5.69 pou 24 enkubasyon (Figi 1). ). PH yon idroliz pwoteyin se yon faktè enpòtan ki kontwole reyaksyon idroliz anzimatik [13].cistanche nzSe poutèt sa, jenerasyon idrolysat kolagen an nan kondisyon diferan pH ka akòz chanjman ki depann de pH nan konfòmasyon anzim, ki ka afekte pwopriyete biyo-aktivasyon yo ak pwopriyete fizikochimik yo.

2.1.2.Sodyòm Dodecyl Sulfate-Polyacrylamid Gel Electrophoresis (SDS-PAGE)

Sodyòm dodecyl sulfat-polyacrylamid gel electrophoresis (SDS-PAGE) pwofil CH yo trete ak divès kalite proteaz pou 24 èdtan yo montre (Figi 2). Pwofil peptide sispansyon kolagen an (nan 0 h) te montre yon bann vizib nan seri pwa molekilè ki ba a wo. Rezilta yo endike idroliz rapid nan CH-Alcalase, CH-Neutrase, CH-Bromelain, ak CH-Protamex, paske pa te gen okenn gwoup apre 3 h enkubasyon. Gwoup ranje pwa molekilè CH-Alcalase, CH-Neutrase, ak CH-Protamex diminye nan yon fason enkubasyon ki depann de tan. Sepandan, CH-Bromeline pa t varye ak tan enkubasyon paske li te konplètman idrolize apre jis 1 èdtan nan enkubasyon. Enteresan, CH yo konplètman disparèt lè echantiyon an te reyaji ak Alcalase oswa Neutrase pou 6h, ki endike ke kolagen an te aji kòm yon substrate apwopriye pou kèk nan lòt anzim yo teste. Sepandan, gwoup CH-Flavorzyme ak CH-Papain parèt nan seri pwa molekilè ki ba-wo-wo apre 24 èdtan. Pwoteyin yo ka an pati idrolize nan peptides oswa asid amine pa idroliz anzimatik, tou depann de kalite pwoteaz, tan enkubasyon, ak rapò a proteaz-a-substra (kantite pwoteyin) [14]. Pwosesis idwoliz anzimatik la sitou detèmine si kalite proteaz ki enplike se yon endopeptidase oswa yon exopeptidase [15,16]. Piske Alcalase, Neutrase, ak Protamex se andopeptidaz, yo ka espere pwosesis idroliz yo kraze lyezon peptide ki soti nan asid amine ki pa tèminal yo owaza, kidonk fasilite plis idroliz pwoteyin yo. Nan lòt men an, Flavorzyme se tou de yon endo-ak exopeptidase, ki kraze ki pa oswa N-tèminal nan chenn peptide. Nan etid sa a, pwoteyin kolagen an te genyen sit obligatwa, ki te pi fasil pou aktivite exopeptidase pase aktivite endopeptidase Flavorzyme. Kidonk, akòz aktivite exopeptidase, idroliz pwoteyin kolagen an pa Flavorzyme te enplike etap-pa-etap kraze lyezon peptide soti nan N-tèminal asid amine, ki te ralanti idroliz pwoteyin.

2.1.3. Rekiperasyon Pwoteyin ak kontni Gwoup Amino gratis

Yo montre rekiperasyon pwoteyin nan CH yo jwenn atravè diferan proteaz komèsyal yo (Figi 3A). Kontwòl la (sispansyon kolagen an) te gen yon kontni rekiperasyon pwoteyin nan 1.19 mg / mL. Rekiperasyon pwoteyin se yon paramèt nan efikasite nan idroliz anzimatik. Kontni rekiperasyon pwoteyin ki ba nan CH se endike ogmante dekonpozisyon pwoteyin. Anplis de sa, rekiperasyon pwoteyin korelasyon byen ak solubilite pwoteyin. Pi wo aktivite idrolitik ka koze pa yon ogmantasyon nan chèn bò ki ekspoze idrofob, ki mennen nan ogmante entèraksyon idrofob ant pwoteyin ak / oswa peptides.gwosè penis cistancheChèn bò idrofob sa yo ka mennen nan diminye solubilite pwoteyin, kidonk sa ki lakòz ogmante rekiperasyon pwoteyin nan idrolysat. Nan etid nou an, kontni rekiperasyon pwoteyin te byen korelasyon ak chanjman nan modèl SDS-PAGE yo. Nivo kontni rekiperasyon pwoteyin ki pi ba ak pi wo yo te anrejistre pou idroliz Alcalase ak Flavorzyme, respektivman. Pou efikasite idroliz ki gen rapò ak tan enkubasyon, CH-Alcalase, CH-Bromelain, ak CH-Protamex drastikman diminye nan yon èdtan nan enkubasyon konpare ak kontwòl la. Diminisyon nan kontni rekiperasyon pwoteyin ki soti nan idroliz pwoteyin te montre yon relasyon envès ak kontni an gwoup amine. Anplis de sa, pifò CH yo, eksepte CH-Neutrase, te montre kontni pwoteyin ki ba ant 3 è ak 12 èdtan. Apre 24 èdtan enkubasyon, kontni pwoteyin yo ogmante ankò nan CH-Alcalase, CH-Flavorzyme, CH-Neutrase, CH-Bromeline, CH-Protamex, ak CH-Papain jan sa a: 0.83 mg/mL, 1.29 mg/mL, 0.75 mg/mL,0.97 mg/mL, 0.77 mg/ml, ak 1.11 mg/mL, respektivman. Gen kèk rapò ki endike ke tan an pi gwo idrolyse depann de plizyè faktè tankou espès yo chwazi, materyèl la anvan tout koreksyon, anzim yo itilize a, materyèl la anvan tout koreksyon / pousantaj anzim, konsantrasyon nan anzim nan, ak degre nan idroliz pouswiv, elatriye [16]. ]. Gen kèk rapò ki endike ke idroliz anzimatik pwolonje (plis pase 24 èdtan) ka mennen nan yon rediksyon nan aktivite proteaz; konsa, idwoliz anzimatik ta dwe fèt nan lespas 24 èdtan apre idwoliz anzimatik [17,18].

KSL03

The free amino group content of CH, which is an indicator of enzymatic hydrolysis efficiency, was estimated (Figure 3B). The expected outcome of protein breakdown is that protein may be hydrolyzed into shorter peptide products. The free amino group content of the control was initially 0.14 mg/mL. The free amino group content of all CHs dramatically increased with increasing incubation time. After 24 h incubation, the free amino group content by descending order was: CH-Alcalase(1.00 mg/mL)> CH-Protamex(0.70 mg/mL)> CH-Neutrase(0.68 mg/mL)>CH-Bromeline (0.67 mg/mL)>CH-Flavorzyme(0.53mg/mL)>CH-Papain (0.40mg/mL).Kouman, diferans ki genyen nan total pwoteyin oswa kontni gwoup amine gratis nan echantiyon idrolize anzimatik yo ka gen rapò ak espesifik anzim. Li depann de pwopriyete yon anzim pandan pwosesis idroliz anzimatik [16,17].poud sistan,Pou egzanp, proteaz alkalin (tankou Alcalase) montre pi wo aktivite idrolitik konpare ak proteaz asid oswa net.

Figi 3. Chanjman nan rekiperasyon pwoteyin (A) ak gwoup amine gratis (B) nan idrolysat kolagen an (CH) depann sou tan enkubasyon. Done yo eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda (SD). Done ki endike pa diferan lèt (anons) montre diferans estatistik enpòtan depann de tan enkubasyon (p<>

KSL04