Résumé:Objektif prensipal etid la se estime, atravè analiz diferans, divès aktivite byolojik nan kontni fenolik total nan ekstrè alkòl nan twa varyete palmis dat ki sansib oswa rezistan nan Fusarium oxysporum. sp Albidinis. Isit la, pwodwi stilbene ak kapasite antioksidan ak byoaktif yo te pwouve nan varyete rezistan Taabdount (TAAR). Anplis de sa, fraksyon metanolik nan varyete palmis dat ki reziste TAAR a gen yon pwodwi enpòtan, ki detèmine pa LCMS/MS ak 1H, 13C NMR, ki fè pati fanmi idroksi stilben, ki montre kapasite antioksidan, anpeche aktivite tirozinaz djondjon, ak aktive. ak egzèse yon efè pwoteksyon sou domaj ipoklorit-induit nan 20S proteasome nan selil fibroblast moun ki gen laj po. Ansanm, rezilta prezan yo endike ke idroksitoluèn prezan nan rezistan Phoenix dactylifera L. ta dwe etidye pou konprann fason stilbene a ta ka egzèse kapasite anti-aje.

Glycoside nan cistanche ka ogmante tou aktivite SOD nan kè ak tisi fwa, ak siyifikativman redwi kontni an nan lipofuscin ak MDA nan chak tisi, efektivman scavenging divès kalite radikal oksijèn reyaktif (OH-, H₂O₂, elatriye) ak pwoteje kont domaj ADN ki te koze. pa OH-radikal. Cistanche phenylethanoid glikozid gen yon gwo kapasite scavenging nan radikal gratis, yon pi wo kapasite diminye pase vitamin C, amelyore aktivite a nan SOD nan sispansyon espèm, redwi kontni an nan MDA, epi yo gen yon sèten efè pwoteksyon sou fonksyon manbràn espèm. Cistanche polisakarid ka amelyore aktivite SOD ak GSH-Px nan eritrosit ak tisi nan poumon sourit eksperimantal senesan ki te koze pa D-galaktoz, osi byen ke diminye kontni an nan MDA ak kolagen an nan poumon ak plasma, ak ogmante kontni an nan elastin, gen yon bon efè scavenging sou DPPH, pwolonje tan an nan ipoksi nan sourit senesan, amelyore aktivite a nan SOD nan serom, ak retade koripsyon fizyolojik nan poumon nan sourit senesan eksperimantal Avèk koripsyon selilè mòfolojik, eksperyans yo te montre ke Cistanche gen bon kapasite antioksidan. epi li gen potansyèl pou yo dwe yon dwòg pou anpeche ak trete maladi po aje. An menm tan an, echinacoside nan Cistanche gen yon kapasite enpòtan pou elimine radikal gratis DPPH epi li gen kapasite pou elimine espès oksijèn reyaktif epi anpeche degradasyon kolagen an radikal gratis, epi tou li gen yon efè reparasyon bon sou domaj anyon radikal gratis timin.

Klike sou benefis rou cong rong

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Mo kle:Phoenix dactylifera L.; Fusarium oxysporum. sp Albidinis (FoA); aktivite antioksidan; aktivite anti-tirozinaz; aktivasyon proteazòm; LC-MS/MS analiz; dérivés stilbene

1. Entwodiksyon

Dat palmis (Phoenix dactylifera L.) se yon monokot kontinuèl ki soti nan fanmi Arecaceae. Pye bwa sa a gen anpil enpòtans nan lavi popilasyon Sahara nan Sid ak Sidès Maròk, tou de ekonomikman ak sosyalman. Bayoud maladi, ki te pote sou tè a chanpiyon Fusarium oxysporum f. sp Albidinis (FoA) [1], te siyifikativman redwi sede a nan palmis dat Maròk nan dènye ane yo [2]. Yo estime ke FoA te disparèt nan de tyè nan eritaj fenicikòl Maròk men li kontinye detwi ant 4.5 pousan a 12 pousan nan pi bon kalite cultivar komèsyal nan palmis dat [2]. Yo te fè anpil efò pou konbat maladi sa a epi eksplike kèk mekanis defans palmis dat [3]. Premye etid yo sou mekanis defans posib palmis dat yo te mete aksan sou wòl konpoze fenolik ak kapasite antioksidan nan tolerans FoA [4,5]. Analiz byochimik nan kiltirèl konpoze fenolik rasin ki reziste ak sansib se te premye etid byochimik ki elisid benefis nan mekanis defans nan palmis dat la. Vreman vre, literati a endike cultivar rasin rezistan yo pi rich nan 5-kafeoyl asid shikimic ak izomè pozisyon li yo pase cultivar rasin sansib yo [5]. Konpoze sa yo te montre efektivman yon potansyèl aktivite antifonjik nan vitro kont FoA [6].

Gwo kapasite antioksidan natirèl yo pou elimine radikal gratis yo se sa k ap ogmante popilarite yo nan manje ak etid medikal [7–10].

Pou egzanp, espès oksijèn reyaktif yo se faktè agrave nan blesi selilè ak pwosesis aje [11] e konsa yo konekte ak anpil maladi. Kòm yon rezilta, molekil antioksidan ka ede sante moun nan anpeche maladi dejeneratif ak ralanti konsekans aje [12]. Nan etid sa a, nou enterese nan kapasite antioksidan pou ankouraje deklanchman 20S-proteasome la ak pwoteje kont domaj oksidatif nan li. Proteazòm nan tout bon kontribye nan antretyen an nan omeyostazi selilè lè li pèmèt pwosesis selil la nan clearance nan pwoteyin domaje ak destriksyon kontwole nan pwoteyin ki dire kout [13]. Se poutèt sa, aktive proteazòm nan ak antioksidan ka pwouve ke yo dwe yon nouvo estrateji anti-aje [14]. Anplis de sa, travay sa a gen entansyon eksplore potansyèl kontni fenolik nan rasin ki reziste FoA kòm konpoze byolojik aktif.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Egzanp Plant

Etid la te fèt pou chak echantiyon ak materyèl ki soti nan 10 cultivar palmis dat granmoun (Phoenix dactylifera L.) ki te grandi nan swa tè ki kontamine oswa ki pa kontamine ki sitiye nan Palmaria Figuig, Sidès Maròk. Rasin prensipal yo (ki gen ladan rasin lè-respire yo) kouri an dyamèt soti nan 0.5 a 2 cm nan varyete sansib, tankou charas Bouffegous ki enfekte (BI) oswa sa yo ki pa enfekte (BNI). Anplis de sa, yo te kolekte cultivar ki reziste FoA nan Taabdount (TAAR), epi yo te itilize fèy yo nan de plant medsin lokalman kòm yon tretman filaktik kont FoA. Anplis de sa, Rosemary (R, Rosmarinus officinalis) ak grenad (G, Punica granatum L.) [15] yo te kolekte tou nan menm pasèl ki pa kontamine kote yo te analize ak itilize kòm kontwòl la. Echantiyon yo te pran pandan de peryòd nan ane a, nan mwa septanm nan ak fen mwa janvye (ant 2013 ak 2015), epi yo estoke hermetically nan tanperati chanm. Kòm echantiyon yo te akeri nan men yon palmer, yo kòmsadwa sètifye (idantifikasyon ak klasifikasyon) pa Minis agrikilti Maròk la [16].

2.2. Preparasyon Ekstrè yo

Apre yon lave anpil ak dlo, rasin yo oswa fèy yo te cheche nan lonbraj la, Lè sa a, tè moute nan yon blenndè. Pou chak echantiyon (BI, BNI, TAAR, R, ak G), yo te ajoute 10 mL metanol nan 1 g nan materyèl sèk ak Lè sa a, kite brase pou 4 èdtan nan tanperati chanm. Lè sa a, yo te filtre ak evapore nan 37 ◦C pa yon rotary-vap. Ekstrè sèk la te mete nan solisyon metanol nan yon konsantrasyon final 10 mg / mL oswa 50 mg / mL (pita itilize pou fè tès aktivite byolojik nan vitro). Yo te fè twa ekstraksyon endepandan pou chak echantiyon pou analiz aktivite byolojik yo.

2.3. Aktivite byolojik

2.3.1. Kontni fenolik ak aktivite antioksidan

Pwosedi a dekri pa Nacoulma et al. yo te aplike pou evalye fenolik total ak kontni total flavonoid nan chak ekstrè [17], ak yon adaptasyon final nan volim nan 200 µL yo dwe itilize sou yon lektè microplate. Yo te detèmine absorbans nan 760 nm ak 510 nm, respektivman, kont yon vid metanol. Koub kalibrasyon estanda asid galik (0-300 mg/L) (y=0.0083x plis 0.9106, r2=0.978) ak quercetin (0-100 mg/L) (y {{14 }}.0008x plis 0.0597, r2=0.994), respektivman, yo te itilize.

Sèvi ak 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil lib radikal, aktivite antioxydant scavenging yo te envestige (DPPH). Lè l sèvi avèk yon adaptasyon final nan volim nan 300 µL ak 275 µL, respektivman, pou anplwaye yon lektè mikroplak, yo te evalye kapasite ekstrè yo pou diminye fè (III), jan sa dekri pa Nacoulma et al. [17]. An konparezon ak yon vid metanol, yo te mezire absorbans nan 517 nm ak 700 nm, respektivman. Lè sa a, lè l sèvi avèk ekwasyon sa a, yo te estime aktivite gratis radikal-scavenging nan chak solisyon kòm yon pousantaj nan anpèchman:

Yo te jwenn yon koub kalibrasyon estanda lè l sèvi avèk asid ascorbic ({{0}}-100 mg/L) kòm estanda antioksidan (y=0.0014x plis 0.0875, r2=0.998).

2.3.2. FoAMyc elyòm Kwasans Inhibitory Analyse

Avèk yon ti modifikasyon, metòd ki dekri pa Neri et al. [18] te itilize pou detèmine degre nan ki pi bon kalite pwodwi chimik yo anpeche kwasans miscelyòm FoA. Yon 7-kilti FoA ki gen yon jou te gen senk milimèt disk miselial yo mete sou plat Petri ak mwayen PDA ki te ajoute ak pwodwi chimik pi bon kalite ki nan lis pi wo a nan 50, 75, ak 100 µg/mL. Plak yo te enkube pou 5 jou nan 28 ◦C. Dyamèt mwayèn koloni ki mezire nan de ang dwat yo te itilize pou evalye anpèchman kwasans miscelyòm FoA. Chak tretman konsiste de twa tès ki sèvi ak twa diferan tansyon FoA: FoA 41818, FoA 41814 (BCCM, Bèljik), ak FoA lokal (Palemeraie of Figuig, Maròk), osi byen ke yon kontwòl negatif lè l sèvi avèk yon mwayen ki pa te ajoute.

2.3.3. Selil Viabilite ak Aktivite Proteasome 20S

Yo te itilize fibroblast po imen nòmal ki soti nan yon nonm {{{0}}ane (NHDF) (Promocell, Heidelberg, Almay) kote selil yo te plase nan yon dansite 100,{{3 }} selil/mL nan RPMI 10 pousan konplete ak 10 pousan (w/v) FBS, 1 pousan (w/v) L-glutamin, 100 inite/mL penisilin, ak 100 µg/mL streptomycin. Yo te kenbe yo nan plak 96-microwell blan oswa transparan pou 24 èdtan nan 37 ◦C nan yon enkibatè ak yon anviwònman imidite 5 pousan CO2. Pou tès aktivite proteazòm yo, ansanm ak evalyasyon efè pwoteksyon sou domaj ipoklorit pwovoke, yo te trete selil yo ak materyèl tès (yon konpoze pi bon kalite ant 5 a 50 µg/mL, kontwòl pozitif nan 0.5 ak/oswa 1 µM, ak ekstrè plant metanolik soti nan 15 a 50 µg/mL) pou 24 èdtan ak yon maksimòm 0.3 pousan nan DMSO nan konsantrasyon final la, ansanm, san chanjman, konsènan kontwòl negatif la. Envestigasyon efè pwoteksyon ekstrè TAAR oswa konpoze pi bon kalite sou aktivite proteazòm te vle di ke selil fibroblast yo te sibi pita a 50 µM OCl- pou 35 min (chwazi kòm pi bon, san toksisite selil, oksidan-inhibiteur nan kondisyon an proteasome 20S) [19]. Etap eksperimantal sa yo te konplete pa metodoloji founisè a (Proteasome-Glo Chymotrypsin-Like Cell-Based Assay, Promega Corporation, USA): Premyèman, yon eksperyans selil viabilite konkouran te anplwaye kristal vyolèt kolorimetri oswa MTT ki te fèt nan kondisyon absoliman menm jan an. yo te itilize nòmalize tès selil-bioluminesans sa a. Devyasyon estanda yo ak fliyoresans mwayèn nan echantiyon triple nan de tès separe (n=6) yo parèt. Tout mezi ak eksperyans endepandan (n=2) te fèt de fwa.

2.3.4. Efè inhibition sou Tirozinaz djondjon san selil

Pou mennen ankèt sou efè a sou aktivite anzim yo, materyèl tès yo (antioksidan pi bon kalite oswa ekstrè plant metanolik) te pre-enkube ak anzim nan tanpon fosfat nan tanperati chanm. Nan yon ti bout tan, yo te ajoute 300 mL yon solisyon 5 mM L-DOPA nan 50 mM tanpon fosfat (pH 6.5) avèk oswa san materyèl tès nan divès konsantrasyon. 96-byen microplate ansanm ak 100 mL yon solisyon akeuz tirozinaz djondjon (20 inite). Pou 40 min, melanj tès la te enkube nan 25 ◦C. Apre enkubasyon, yo te mezire nivo pwodiksyon dopachrome melanj reyaksyon an nan espektrofotometrik nan 492 nm [20]. Yo te trase yon koub kalibrasyon estanda lè l sèvi avèk asid galik (0–1000 µg/mL) (y=-0.087 × plis 0.45; r2=0.97). Chak mezi endepandan ak eksperyans (n ​​= 2) te fèt de fwa.

2.4. Analiz, Izolasyon, ak Pwosedi elisidasyon estrikti

Rasin tè a (20 g) te ekstrè ak 200 mL metanol, ajite pou 24 èdtan nan tanperati anbyen, filtre, santrifuje nan 10, 000 × g pou 15 min, ak Lè sa a, evapore nan 35 ◦C lè l sèvi avèk yon rotary. aparèy evaporasyon vakyòm. Ekstrè brit la te dilye ak 20 mL dlo distile, re-extrait pa 2 × 20 mL acetate etil, ak Lè sa a, konsantre lè l sèvi avèk yon sistèm evaporasyon vakyòm rotary nan 35 ◦C. Pwodwi prensipal la te pirifye pa preparasyon HPLC lè l sèvi avèk yon kolòn Waters C18 (SymmetryPrep 150 × 19 mm, 7 µm gwosè patikil) ak menm kondisyon yo gradyan LC yo itilize pi wo a ak yon pousantaj koule nan 5 mL / min. Pik la nan RT te ant 38.8 ak 40.8 min, kolekte ant 39.2 ak 40.2 min; koleksyon volim total la te lyofilize pou bay 27 mg konpoze an. MS ak RMN 1H ak 13C Lè sa a, idantifye li.

Analiz yo te fèt ak yon sistèm seri LC 1200 rezolisyon rapid lè l sèvi avèk yon detektè etalaj dyod (DAD) yo itilize pou kontwole spectre UV nan 320 nm (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). Separasyon konpoze yo te fèt sou yon kolòn Beckman C18 (ULTRASPHERE 250 mm × 4.6 mm, 5 µm gwosè patikil) lè l sèvi avèk yon gradyan 47 min nan acetate amonyòm 10 mM / 0.2 pousan asid fòmik nan dlo (v / v), pH 2.9 ({{ 13}}sòlvan A), ak 30/70 acetonitrile/methanol melanj (=sòlvan B). Pousantaj koule a te 0.8 mL / min, ak sòlvan B te ogmante soti nan 5 a 35 pousan nan 45 min ak re-ekilibre pou 2 min. Nan yon seri ak DAD, yo te itilize yon seri ESI-QTOF 6520 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) pou analiz MS wo rezolisyon ak viz tandem MS (MS/MS). Spectra yo te akeri nan mòd akizisyon negatif ak wo rezolisyon (4 GHz).

1H NMR ak 13C NMR spectre yo te anrejistre sou yon espektromèt Bruker Avance 300 opere nan 300 MHz. Dekonpozisyon gratis endiksyon yo te trete ak MestreNova 5.3.2 NMR suite nan MestreLab Research SL.

2.5. Analiz estatistik

Tout eksperyans endepandan yo te fèt an triple. Tout done yo te prezante kòm valè mwayèn ± SD. Lè l sèvi avèk vèsyon 6 nan pwogram GraphPad Prism, rezilta yo te analize ak tès nonparametric Kruskal-Wallis ansanm ak tès konparezon miltip Dunn la. p-Valè 0.05 ak pi ba yo konsidere kòm enpòtan.

3. Rezilta ak Diskisyon

3.1. Total Fenolik ak Flavonoid Sa ki nan Ekstrè Methanolic

Akòz pwopriyete redox yo, yo te jwenn konpoze fenolik plant yo gen yon varyete enpak byolojik, ki gen ladan aktivite antioksidan [21]. Tablo 1 montre kontni fenolik total nan ekstrè rasin metanol (500 µg/mL) nan varyete sansib ghagras Bouffegous ki enfekte (BI) ak ki pa enfekte (BNI) pa FoA oswa rezistan kòm Taabdount (TAAR). Konsantrasyon yo te varye ant 171 ± 14 a 253 ± 47 mg asid galik ekivalan/g. Yo te jwenn kantite lajan ki pi wo nan konpoze sa yo nan varyete BNI, pandan y ap konsantrasyon ki pi ba a soti nan ekstrè nan rasin metanol nan BI. Kantite flavonoid nan menm ekstrè sa yo (Tablo 1)) varye ant 240 ± 25 ak 406 ± 66 mg quercetin eq./g, epi, yon lòt fwa ankò, kantite lajan ki pi wo yo te atribiye a varyete BNI. Gen yon pèt apeprè 1/3 nan kantite total polifenol ak flavonoid ant varyete ki pa enfekte (BNI) ak varyete ki enfekte (BI) oswa ki reziste (TAAR) nan FoA la. Se poutèt sa, li se enpòtan pou tcheke ki jan pèt la nan konpoze, ki dekri kòm kritik nan kapasite nan antioksidan nan plant la, ka afekte aktivite yo byolojik nan ki nou enterese.

3.2. Potansyèl antioksidan nan ekstrè metanolik

Aktivite radikal DPPH scavenging se yon metòd lajman itilize pou tès aktivite antioksidan ekstrè plant [22]. Tès sa a detèmine si pwodui chimik antioksidan yo jwenn nan ekstrè yo kapab elimine espès radikal ki estab DPPH. Done eksperimantal yo (Figi 1) revele ke tout ekstrè metanolik yo (nan 100 oswa 500 µg/mL) gen anpil chans pou yo gen efè pou elimine radikal gratis ak pi gwo aktivite DPPH yo obsève nan rasin TAAR (87.0). pousan nan anpèchman DPPH). Aktivite antioksidan sanble pa depann de prezans kantite total konpoze polifenolik oswa flavonoid. Sepandan, pi bon aktivite nan ekstrè methanoli rasin TAAR ta ka akòz plis eleman idwojèn ki genyen nan ekstrè a.

Se pouvwa a diminye evalye pa kapasite nan ekstrè nan metanolik transfòme Fe (III) nan Fe (II). Kapasite sa a pou diminye Fe (III) ka atribiye a kantite ak pozisyon gwoup idroksil ki prezan nan konpoze fenolik ak kapasite yo pou bay idwojèn [23]. Tablo 2 te montre aktivite yo diminye nan ekstrè metanolik nan echantiyon plant nou an konpare ak asid ascorbic kòm yon estanda. Ekstrè metanolik nan rasin TAAR gen gwo rediksyon (95 ± 1 mg nan asid ascorbic eq./g), pandan y ap kontni ki pi ba a te jwenn nan ekstrè rasin BNI (27 ± 2 mg nan asid ascorbic eq./g).

Yo te fè yon analiz regresyon pou korel rezilta yo jwenn yo (koyefisyan korelasyon (R)). Yo te jwenn korelasyon lineyè enpòtan ant kontni total fenolik ak flavonoid (R {{0}}.849, p <0}.05) ak ant DPPH ak rediksyon pouvwa tès (R {= 0. 816, p <0.05), men pa te gen okenn ant sa ki fenolik oswa flavonoid nan ekstrè metanolik yo ak aktivite antioksidan yo. Finalman, tout ekstrè metanolik yo montre aktivite antioksidan enpòtan kont aktivite DPPH radikal ak diminye tès pouvwa, men aktivite antioksidan sa yo sanble pa gen rapò ak kontni total fenolik oswa flavonoid. Se poutèt sa, konklizyon sa yo vle di ke yon kalite patikilye nan pwodui chimik, olye ke kantite a nan konpoze fenolik oswa flavonoid yo te jwenn nan ekstrè divès nou yo, ki gen plis chans responsab pou aktivite a antioksidan nan ekstrè plant yo anba revizyon. Kèk konpozan fenolik ki te deja dekri epi ki trè aktif moun ka gen tou yon enpak sou aktivite antioksidan ekstrè plant yo: Endepandan de konsantrasyon yo, konpoze fenolik yo jwenn nan diven wouj ki gen laj ka montre divès kalite pwopriyete antiradikal ki konekte ak aspè estriktirèl yo. 24].

Varyete ki reziste TAAR FoA montre aktivite antioksidan ki pi wo nan mitan diferan varyete palmis dat. An referans a literati a, devlopman rezistans nan palmis dat patikilye sa yo ka atribiye a yon ogmantasyon nan kantite diferan izomè pozisyon nan asid kafeoyl shikimic [5].

3.3. Aktivite Tirozinaz Chanpiyon

Aktivite difenolaz tirozinaz djondjon katalize oksidasyon de dérivés dopaquinone ki mennen nan sentèz melanin. Rezilta yo prezante nan Tablo 3 montre kapasite konpoze ki prezan nan ekstrè metanolik TAAR, BI, ak BNI pou entèfere ak idroksidasyon l-DOPA atravè anpèchman aktivite tirozinaz djondjon. Anplis de sa, rezilta sa yo montre ke ekstrè metanolik TAAR la estatistik pi aktif pase ekstrè BI (p <{2}}.05) ak BNI (p <0.05) sou aktivite tirozinaz djondjon. Se konsa, kapasite nan ekstrè rasin dat palmis anpéché aktivite tirozinaz sanble yo swiv tandans nan menm jan ak pou kapasite yo antioksidan.

Tyrosinas yo prensipalman asosye ak po, je, ak pigmantasyon cheve. Vreman vre, tirozinaz yo se anzim melanogenesis ki enplike nan premye etap yo nan biosentèz melanin, ak melanin ki asosye ak pwoteksyon kont iltravyolèt (UV), solè, oswa radyasyon gama, redwi sansiblite selilè, ak rezistans nan miray selil kont anzim idrolitik [20]. Kontrèman, yon twòp pwodiksyon melanin ka jwe yon wòl nan anomali po oswa maladi ki pi grav tankou kansè (egzanp, Melanoma), ak yon depase dopaquinone ka mennen nan maladi neurodegenerative (egzanp, maladi Parkinson la) [20,25]. Anplis, yo te rapòte melanogenesis pwodwi oksijene idwojèn ak lòt ROS, ekspoze melanosit imen nan nivo segondè nan estrès oksidatif [26]. Plizyè konpoze natirèl antioksidan (fenolik, flavonoid, ak lòt moun) yo jwenn nan plant yo anpeche aktivite tirozinaz fenolaz [27,28]. Isit la, ekstrè TAAR sanble gen yon konpoze (yo) sansib pou anpeche aje po ak melanogenesis.

3.4. Aktivite Proteasome nan Rasin Methanolic Dat Palm Ekstrè

Yo te rapòte ke nivo wo nan 20S proteazom nan mennen nan ogmante tolerans nan estrès oksidatif [13]. Se poutèt sa, yo te envestige règleman nan aktivite proteazòm pa ekstrè rasin nan BI, BNI, ak TAAR, cultivar. Aktivite proteazòm 20S mezire a gen rapò ak aktivite ki sanble ak chimotripsin (CT-L) nan selil NHDF ki gen laj (gade Materyèl ak Metòd). Kòm ilistre nan Figi 2A, selil trete ak 50 µg / mL nan ekstrè metanolik pou 24 èdtan montre yon aktivasyon enpòtan nan CT-L pou ekstrè BI ak TAAR ak yon anpèchman pou BNI san yo pa jenere plis pase 30 pousan nan toksisite selil. Ekstrè rasin TAAR te montre deklanchman pwoteazòm yo konpare ak sa ki nan 1µM nan asid lipoik (Ct plis) (212 pousan ak 248 pousan, respektivman). Proteazom nan se yon konplèks proteinaz silendrik ki gen yon nwayo kat bag anpile ki responsab pou retire pwoteyin ki anòmal degrade (26S) ak oksidatif (20S proteolytic nwayo konplèks) pwoteyin domaje (Ciechanover, 1998). Jan yo prezante nan travay Hwang a [29], malfonksyònman proteazòm ka yon kontribitè nan aje po imen an. Vreman vre, yo te montre selil ki aje ak repwodiksyon senesan yo te diminye aktivite proteazòm ak nivo pwoteyin nan subinite proteazòm yo. Lefèt ke tou de oksidize ak / oswa domaje pwoteyin selilè akimile pi souvan nan selil sa yo sijere ke wout la ubiquitin-proteasome nan degradasyon pwoteyin enplike nan pwosesis aje intrinsèques. Figi 2B, ak C montre kapasite ekstrè metanolik TAAR pou pwoteje selil NHDF ki gen laj kont anpèchman aktivite proteazòm 20S pa oksidan OCl-. Vreman vre, OCl− oksidan inibit nan 50 pousan aktivite proteazòm nan selil kontwòl yo (Ct), pandan y ap pi wo 20S-proteasome activateur (asid lipoik nan 1 µM, Ct plis) ak plis pase 50 pousan nan aktivite anpèchman echwe pou ranvèse anpèchman an. nan aktivite proteazòm 20S la pa OCl-, tandiske tout lòt konsantrasyon yo teste (15, 50, ak 75 µg/mL) nan ekstrè methanolic TAAR sanble ranvèse anpèchman sa a (0 a 19 pousan nan anpèchman). Rezilta sa yo sijere ke ekstrè rasin TAAR ta ka gen ladan molekil ki ta ka retade aje po pa sèlman nan ranfòse aktivite proteazòm, men tou pa kontrekare efè yo anpèchman nan ajan oksidan. Pami molekil sa yo, asid caffeoyl shikimic gen plis chans pou yo prezan, osi byen ke lòt konpoze. Pli lwen, analiz LC-DAD-MS (MS) ak NMR yo te fèt pou idantifye pi gwo konpoze ekstrè yo epi yo diskite nan pwochen seksyon an.

3.5. Spectrometrik analiz

3.5.1. LC-DAD-MS analiz de ekstrè metanolik

Etid la konparatif nan rasin palmis dat revele pa gen okenn diferans kalitatif, men, olye de sa, diferans semi-kantitatif (nan DAD ak MS kwomatogram) ant cultivar yo (Figi 3A, D) yo te note nan yon sèten degre. Vreman vre, rezilta prezan yo pa pèmèt yon lyen ant rezistans nan palmis dat ak yon ogmantasyon nan kantite diferan izomè pozisyon nan asid caffeoyl shikimic paske cultivar rezistan (TAAR) montre abondans relatif ki pi ba nan konpoze sa yo (Figi 3C). Tout twa izomè pozisyon nan asid sikimik kafeoyl (m/z=335.0768 ak yon erè nan 1.2 ppm) te idantifye pa MS/MS spectre yo (Figi S6) ak yon fragman nan m/z. 179.0340, ki koresponn ak yon fragman asid kafeyik A (C9H7O4) ak yon fragman nan m/z 135.0443, ki koresponn ak dekarboxylation asid kafeik (C8H7O2). Sepandan, yon lòt konpoze ki pa koresponn ak asid kafeoyl shikimic (Figi 3C) epi ki gen tan retansyon se 29 min ak m/z=259.0607 (oswa 373.0543 pou adduct TFA), sanble yo byen distenge ant diferan cultivar. (Figi 3D). Diferans nan akimilasyon konpoze sa a nan rasin cultivar sansib ak rezistan (0.135 pousan), ak yon rapò alantou 1:35 (soti nan m/z=259.06, done MS), te kapab eksplike enpòtan byolojik la. aktivite yo obsève pou ekstrè metanolik rasin sa a.

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】