Résumé:Quercetin te etidye anpil pou maladi anti-alzayme a (AD) ak efè anti-aje. Etid anvan nou yo te jwenn kercetin ak nan fòm glikozid li yo, rutin, ka modile fonksyon an proteazòm nan selil neuroblastom. Nou vize pou eksplore efè quercetin ak rutin sou omeyostazi redox entraselilè nan sèvo a (redwi glutatyon / oksidize glutatyon, GSH / GSSG), korelasyon li yo ak aktivite anzim 1 (BACE1) k ap fennen APP, ak pwoteyin précurseur amiloid (APP) ekspresyon nan sourit transjenik TgAPP (ki gen mitasyon imen Swedish APP transgene, APPswe). Sou baz ke BACE1 pwoteyin ak pwosesis APP yo reglemante pa chemen ubiquitin-proteasome e ke sipleman ak GSH pwoteje newòn kont anpèchman proteazom, nou te envestige si yon rejim alimantè ki gen quercetin oswa rutin (30 mg / kg / jou, 4 semèn) diminye plizyè premye siy AD. Genotype analiz bèt yo te pote pa PCR. Pou detèmine omeyostazi redox intraselilè, yo te adopte metòd espektrofluorometrik pou quantifier nivo GSH ak GSSG lè l sèvi avèk o-phthalaldehyde, epi yo te detèmine rapò GSH/GSSG. Nivo TBARS yo te detèmine kòm yon makè peroksidasyon lipid. Aktivite anzim nan SOD, CAT, GR, ak GPx yo te detèmine nan cortical a ak ipokanp. Aktivite BACE1 te mezire pa yon substra sekretaz espesifik konjige ak de molekil repòtè (EDANS ak DABCYL). Ekspresyon jèn prensipal anzim antioksidan yo: APP, BACE1, yon Disintegrin ak yon domèn metaloproteinaz ki gen pwoteyin 10 (ADAM10), caspase-3, caspase-6, ak cytokin enflamatwa yo te detèmine pa RT-PCR. Premyèman, ekspresyon APPswe nan sourit TgAPP diminye rapò GSH / GSSG, ogmante nivo malonaldehyde (MDA), epi, an jeneral, diminye aktivite prensipal anzim antioksidan an konparezon ak sourit sovaj (WT). Tretman sourit TgAPP ak quercetin oswa rutin ogmante GSH / GSSG, diminye nivo MDA, ak favorize kapasite antioksidan anzim, patikilyèman ak rutin. Dezyèmman, tou de ekspresyon APP ak aktivite BACE1 yo te diminye ak quercetin oswa rutin nan sourit TgAPP. Konsènan ADAM10, li te gen tandans ogmante nan sourit TgAPP ak tretman rutin. Kòm pou ekspresyon kaspas-3, TgAPP te montre yon ogmantasyon ki te opoze ak rutin. Finalman, ogmantasyon nan ekspresyon makè enflamatwa IL-1 ak IFN- nan sourit TgAPP te bese pa tou de quercetin ak rutin. Ansanm, rezilta sa yo sijere ke, nan de flavonoid yo, rutin ka enkli nan yon rejim chak jou kòm yon fòm terapi adjuvant nan AD.

Klike sou Antioksidan Cistanche Chemist Warehouse

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Mo kle:quercetin; rutin; glutatyon; APPswe; BACE1; Maladi alzayme a

1. Entwodiksyon

N bès nan fonksyon mantal se yon sentòm fondamantal neurodegeneration klinik ki gen rapò ak laj [1]. Enpak nitrisyon sou n bès koyitif ki asosye ak laj se yon sijè de pli zan pli k ap grandi, paske li se yon faktè enpòtan ki ka fasilman modifye. Chanjman patolojik nan sèvo yo obsève pandan n bès mantal yo pran plas byen anvan nenpòt manifestasyon klinik, ki sitou rive nan laj fin vye granmoun. Sa a bay yon peryòd pi long pou etabli estrateji prevansyon konsènan n bès kognitif ki gen rapò ak laj ak demans, ki se yon gwo enkyetid sante piblik [2]. Pandan plizyè ane, rechèch entansif sou konpoze ki gen orijin natirèl, yo jwenn nan rejim chak jou, te fèt sou terapi amelyore kognitif [3].

Youn nan maladi neurodegenerative ki pi komen ki gen rapò ak laj se maladi alzayme a (AD), ki karakterize pa de karakteristik neropatolojik: plak amiloid-(A) ak tangle neurofibrillary. An tèm de rechèch sou bèt, modèl bèt yo ka simulation faz nan senptomatik nan AD pa modifye A precursor pwoteyin (APP), pou egzanp [4,5].

Remakab, plizyè fitochimik byoaktif ki sòti nan plant ki asosye ak divès kalite benefis sante ak diminye risk pou anpil maladi yo te tès depistaj pou fòme konplèks ki pa kovalan ak amiloid-(A) peptide [3].

Malgre ke anpil medikaman tradisyonèl ak pwodwi dyetetik natirèl yo te montre gwo pwogrè nan alèjman patoloji AD, nou konplètman okouran de limit yo nan modèl bèt AD, paske efè pwomèt sibstans sa yo pa toujou repwodwi nan etid imen [6]. Sepandan, akòz difikilte pou analize tisi nan sèvo nan imen, espesyalman nan etap trè bonè nan pwogresyon, etid nan modèl wonjè yo nesesè. Kòm yon rezilta, modèl eksperimantal sa yo ka sipòte devlopman ajan itilizatè ki soti nan medikaman tradisyonèl ak konpoze natirèl ki an sekirite pou retade pwogresyon maladi neurodegenerative. Kidonk, tès konpoze natirèl yo, yo jwenn nan rejim chak jou, pou prevansyon maladi ak pwoteksyon kont risk AD, ta dwe yon priyorite.

Pami sa yo enpòtan ajan dyetetik natirèl se quercetin, ki se prensipal flavonoid polifenolik nan plizyè fwi ak legim [7]. Quercetin se sitou prezan nan fòm glikozid li yo, sa vle di, rutin. Pou pati li, rutin (quercetin-3-O-rutinoside) te montre efè pwofon sou divès fonksyon selilè yo ki soutni plizyè kondisyon patolojik, sètadi antimikwòb, antikanserojèn, antitronbotik, kadyopwotektif, ak neuroprotective. Efè famasi sa yo sitou asosye ak aktivite anti-enflamatwa ak antioksidan rutin. Akòz kapasite li nan travèse baryè san-sèvo, ak / oswa metabolit li yo, li te demontre ke rutin ka chanje tou de sentòm mantal ak konpòtman nan maladi neurodegenerative [8].

Etid anvan nou yo te jwenn ke tou de flavonoid, quercetin, ak rutin, afekte divès chemen siyal ak rezo molekilè ki asosye ak modulasyon nan fonksyon proteazòm nan selil neuroblastom [9]. Anplis de sa, li te demontre ke ekspresyon BACE1 ak pwosesis APP yo reglemante pa chemen ubiquitin-proteasome [10] e ke sipleman ak glutatyon redwi (GSH) pwoteje newòn kont anpèchman proteasome [11]. Rediksyon GSH nan sèvo a se yon rezilta komen nan pasyan ki gen maladi neurodegenerative, tankou AD, epi li ka lakòz neurodegeneration anvan maladi aparisyon [12]. Ubiquitination nan BACE1 ak bloke wout la ubiquitin-proteasome inibit degradasyon BACE1 epi, kidonk, mennen nan ogmante pwodiksyon aktivite anzimatik BACE1 [10].

Dapre rezilta sa yo, e ke abitid dyetetik ak sipleman ka afekte estati redox selilè a, nou vize eksplore efè yon rejim alimantè ki gen quercetin oswa rutin sou omeyostazi redox entraselilè nan sèvo a (GSH/GSSG), korelasyon li yo ak aktivite BACE1, ak ekspresyon APP nan modèl sourit nan AD (pote moun Swedish mitasyon Amyloid Precursor Protein APP transgene, APPswe).

Finalman, kòm gen prèv konvenkan nan efè a nan sipleman flavonoid nan amelyore domèn espesifik mantal ak / oswa rezilta MRI [13], nou te eseye imite, nan bèt, yon entèvansyon lè nou bay yon rejim alimantè ki an sante ki gen kantite modere nan yon potansyèl aktif patikilye. engredyan (quercetin oswa rutin) kòm yon estrateji efikas pou anpeche ekspresyon makè AD yo.

2. Rezilta yo

2.1. Genotype nan sourit

Koloni sourit TgAPP te devlope nan laboratwa nou an soti nan gason eterozigòt Tg2576 ak fi sovaj. Genotype sourit yo te fèt pou detekte moun transjenik. Nan tout sourit yo teste, apeprè 40 pousan yo te jwenn transjenik (TgAPP).

Pwodwi PCR yo te jwenn yo te separe pa elektwoforèz nan 1.5 pousan jèl agaroz nan 0.5X TBE (Tris-Borate-EDTA) tanpon nan 70 V (vòltaj konstan) ak Lè sa a, imaj pa tach ak GelRed (Millipore). Pwofil anplifikasyon pou sourit transjenik ak sourit WT yo montre nan Figi 1.

2.2. Glutatyon

Pou evalye omeyostazi redox intraselilè nan newòn nan sourit TgAPP, yo te quantifye nivo GSH ak GSSG, epi yo te detèmine rapò GSH / GSSG kòm yon makè pouvwa rediksyon selilè nan tou de gason ak fi (Figi 2).

Nan evalyasyon efè transjèn yo sou sistèm glutatyon an, yo te obsève yon bès nan pouvwa rediksyon selilè (GSH/GSSG) nan sourit TgAPP yo konsènan bèt WT yo, nan tou de gason ak fi ak tou de zòn nan sèvo a (Figi. 2C3, H3), espesyalman nan ipokanp la. Nan tou de sourit WT ak TgAPP, rapò GSH / GSSG te siyifikativman pi ba nan gason pase nan fi (Figi 2C3, H3; p <{7}}.05). Pandan ke nan fi TgAPP n bès sa a se rezilta pi ba nivo GSH (Figi 2C1, H1), nan gason TgAPP li sitou atribiye a yon ogmantasyon nan nivo GSSG (Figi 2C2, H2).

Chanjman nan nivo GSH ak GSSG sourit TgAPP yo, respektivman, sou tretman quercetin oswa rutin, pi enpòtan nan gason pase nan fi. Li sanble ke quercetin gen tandans ogmante nivo GSH (Figi 2C1, H1; p <{3}}.0 5) ak rutin pou pi ba nivo GSSG (Figi 2C2, H2; p <0.05).

Tretman quercetin ak rutin, nan tou de gason ak fi, yo te kapab ranvèse sezon otòn la nan rapò a GSH / GSSG nan ipokanp la (Figi 2H3) kote rekiperasyon an nan pouvwa redox te enpòtan kont sourit yo TgAPP ki pa trete. Nan gason, endèks sa a reyalize menm valè ak sa yo ki nan sourit WT nan ipokanp la (H3). Nan fi, byenke rapò sa a pa ogmante nan sourit WT yo, tretman ak quercetin ak rutin amelyore li anpil an konparezon ak sourit TgAPP yo nan ipokanpi yo (H3: quercetin, p < 0.{{ 6}}01; rutin, p <0.05).

2.3. Sibstans reyaktif asid tiobarbiturik (TBAR)

Nivo TBAR yo te detèmine kòm yon makè peroksidasyon lipid. Sèvi ak koub kalibrasyon, rezilta yo te eksprime kòm konsantrasyon malondialdehyde (MDA) (Figi 3).

Apre twòp ekspresyon APP, yo te obsève yon ogmantasyon siyifikatif nan nivo MDA lè yo konpare ak sourit WT nan tou de cortical a (Figi 3C) ak ipokanp la (Figi 3H), ak nan tou de gason ak fi (p < 0.001) .

Nan fi TgAPP, tou de tretman quercetin ak rutin prèske retabli nivo MDA yo menm jan ak sourit WT yo (Figi 3C, H). Nan gason TgAPP, menm jan an tou, tou de tretman quercetin ak rutin retabli nivo MDA yo menm jan ak sourit WT nan cortical a (Figi 3C) epi yo diminye menm pi lwen nan ipokanp la (Figi 3H). Nan tou de sourit WT ak TgAPP, ki pa trete ak rejim alimantè flavonoid ki te trete, nivo MDA yo te depann de sèks (Figi 3C, H; p <0.05), eksepte pou sourit TgAPP yo trete quercetin nan ipokanp la.

2.4. Aktivite anzim ak ekspresyon de anzim antioksidan

Pou adrese si règleman aktivite anzimatik la oswa ekspresyon jèn prensipal anzim antioksidan yo, oswa toude, rive sou yon rejim quercetin oswa rutin, yo te fè detèminasyon aktivite anzimatik ak nivo mRNA.

Figi 4 montre aktivite anzim SOD, CAT, GR, ak GPx, detèmine nan sourit fi ak gason, nan cortical serebral la (Figi 4a) ak ipokanp la (Figi 4b).

Kòm yon konsekans APP twòp ekspresyon, sèlman yon diminisyon enpòtan nan aktivite CAT yo te obsève nan sourit TgAPP konpare ak sourit WT nan tou de cortical a (Figi 4a (C2); p <0.05) ak ipokanp la (Figi 4b (H2); p <0.05).

Tretman quercetin pa t 'pwodwi okenn varyasyon enpòtan nan aktivite anzim yo an konparezon ak sourit TgAPP, nan gason oswa fi, nan zòn nan sèvo etidye. Kontrèman, bèt trete ak rutin te fè eksperyans yon ogmantasyon nan aktivite CAT nan cortical a (Figi 4a (C2)) ak nan aktivite GR nan ipokanp la (Figi 4b (H3)) nan tou de gason ak fi (p < 0 .05). Anplis, rutin ogmante aktivite ipokanp CAT nan gason TgAPP (Figi 4b (H2)) ak aktivite GPx nan fi (Figi 4b (H4)).

Figi 5 montre ekspresyon jèn prensipal anzim antioksidan yo, SOD, CAT, GR, ak GPx, detèmine nan sourit fi ak gason, nan cortical serebral la (Figi 5a) ak ipokanp la (Figi 5b).

Pa gen diferans nan ekspresyon jèn ant sourit TgAPP ak WT yo obsève pou anzim antioksidan prensipal yo (Figi 5a, b). Gason TgAPP trete ak rutin te montre yon ogmantasyon siyifikatif nan ekspresyon CAT nan ipokanp la (Figi 5b (H2)). Kòm pou GPx ipokanp la, yo te obsève yon modèl ki sanble ak CAT, byenke ogmantasyon an pa t 'siyifikatif (Figi 5b (H4)).

2.5. Pwosesis APP: BACE1 ak ADAM10

Rezilta yo nan aktivite anzim BACE1 nan tou de cortical serebral la ak ipokanp nan gason ak fi yo montre nan Figi 6, eksprime kòm pousantaj nan aktivite konsènan sourit TgAPP ki pa trete.

Nan Figi 6, yo te jwenn aktivite anzim BACE1 nan sourit TgAPP ogmante pa anviwon 10 pousan lè yo konpare ak sourit WT yo, nan tou de zòn nan sèvo ki anba envestigasyon yo ak nan tou de sèks yo, epi yo te jwenn ke yo te estatistik enpòtan (p. <0.05).

Ogmantasyon nan aktivite yo obsève nan sourit transjenik yo te bese pa tou de tretman quercetin ak rutin, tou de nan cortical a ak nan ipokanp la. Men, li ta ka toujou remake ke efè a rutin te yon ti kras pi gran pase sa yo ki nan quercetin nan gason.

Yon fwa yo te konnen aktivite BACE1, nou deside pote etid ekspresyon jèn nan APP, karakteristik prensipal la nan modèl bèt transjenik la, ak anzim prensipal pwosesis li yo: BACE1 ak ADAM10. Figi 7 montre rezilta yo jwenn nan sourit fi ak gason, tou de nan cortical a ak ipokanp la.

Nan tou de sèks, yo te obsève yon ogmantasyon siyifikatif nan ekspresyon APP ki pi gran pase 85 pousan konsènan sourit WT, sa ki montre twòp ekspresyon jèn nan tou de nan cortical serebral la (Figi 7C1; p < 0.05) ak nan ipokanp la (Figi 7H1; p < 0.05). Tretman ak quercetin ak rutin yo te kapab redwi ekspresyon sa a pa plis pase 45 pousan (p <0.05) pou tou de sourit gason ak fi nan tou de zòn nan sèvo anba envestigasyon (Figi 7C1, H1), ak efè yo te pi enpòtan nan ipokanp la. Figi 7H1).

Kòm pou ekspresyon nan pwoteyin BACE1, menm si aktivite BACE1 te chanje, pa te gen okenn diferans enpòtan ant sourit transjenik ak sourit ki pa transjenik kèlkeswa sèks ak tretman flavonoid egzamine.

Kidonk, nou evalye ekspresyon ADAM10 ki enplike nan pwosesis ki pa amyloidogenic nan APP. Malgre ke chanjman yo nan ekspresyon ADAM10 nan sourit TgAPP an konparezon ak sourit WT pa t 'estatistik enpòtan, yo te obsève yon diminisyon ti tay. Konsènan tretman flavonoid yo, rutin montre yon tandans ogmante nan ekspresyon ADAM10, tou de nan gason ak fi ak nan tou de zòn nan sèvo a (Figi 7C3, H3).

【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】