Wòl Pwoteyin-Endepandan nan Fosfat nan Pwogresyon nan Maladi ren kwonik
Mar 20, 2022
Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com
Irene Faria Duayer1 et al
Résumé:Plizyè faktè kontribye nanfonksyon renn bès nan pasyan CKD, ak wòl nan kontni fosfat nan rejim alimantè a se toujou yon kesyon de deba. Etid sa a gen pou objaktif pou analize mekanis kote fosfat, endepandan de pwoteyin, asosye ak pwogresyon CKD. AdultMunich-Wistar rat yo te soumèt nan 5/6 nephrectomy (Nx), manje ak yon rejim alimantè ki ba-pwoteyin, epi divize an de gwoup. Sèlman kontni fosfat (ki ba fosfat, LoP, 0.2 pousan ; segondè fosfat, HiP, 0.95 pousan ) alimantasyon diferansye. Apre swasant jou, paramèt byochimik akrenistoloji yo te analize. Gwoup HiP la te prezante pi mal fonksyon ren, ak pi wo nivo PTH, FGF -23, ak eskresyon fraksyon nan fosfat. Nan analiz istolojik tisi ren yo, yo te montre tou yon pi gwo pousantaj fibwoz entèrstisyal, ekspresyon de -aktin, PCNA, akrenenfiltrasyon pa macrophages. Gwoup LoP a te prezante yon ekspresyon ki pi wo nan beclin-1 nan selil tubul ren yo, yon makè nan eflux otofajik lè yo konpare ak gwoup HiP la. Konklizyon nou yo mete aksan sou aksyon an nan fosfat nan endiksyon an nanrenenflamasyon entèrstisyèl ak fibwoz, kontribye nan pwogresyon nan maladi ren. Yon efè posib nan fosfat sou dysregulation nan mekanis nan otofaji selil ren bezwen plis envestigasyon ak etid klinik.
Mo kle:fosfat;rejim alimantè; CKDpwogresyon;renfibwoz; otofaji;apoptoz
Kontribisyon kle:Mekanis yo nan pwoteksyon ren, pa mete restriksyon sou rejim fosfat, yo poko detèmine. Nan etid sa a, surcharge fosfat te aji nan pwogresyon CKD pa aktivasyon nan chemen enflamatwa ak endiksyon nan.renfibwoz entèstisyèl. Efè hyperphosphatemia sou apoptoz selil ren ak parèy otofajik bezwen plis envestigasyon.
Cistanche tubulosa anpeche maladi ren, klike la a pou jwenn echantiyon an
1. Entwodiksyon
Kwonikrenmaladi (CKD) konsidere kòm yon pwoblèm sante piblik. Prévalence li ogmante ak laj epi li varye ant 11 ak 13 pousan atravè lemond [1]. Malgre ke CKD se jeneralman yon kondisyon irevokabl, plizyè apwòch ka itilize pou ralanti pwogresyon maladi a, tankou kontwòl nan san presyon, dislipidemi ak ipèglisemi, itilizasyon anjyotansin-konvèti inibitè anzim, ak yon rejim ki ba pwoteyin [2-7] . Pami estrateji sa yo, yon rejim alimantè ki ba-pwoteyin se pwopozisyon ki pi gwo konteste pou retarenn bès fonksyon, akòz enkyetid sou konfòmite li, sekirite, ak efikasite. Yon mank de konsansis sou benefis ki genyen nan diminye pwoteyin nan rejim alimantè a depann sou wòl nan sipèpoze nan pwoteyin ak kontni fosfat nan rejim alimantè a. Kòm sous pwoteyin yo rich nan fosfat, yo rekòmande yon rediksyon konsomasyon pwoteyin pou reyalize yon konsomasyon restriksyon fosfat. Li posib mete restriksyon sou pwoteyin san yo pa mete restriksyon sou fosfat, byenke opoze a se difisil.
Nan etid eksperimantal, efè yon rejim alimantè ki ba pwoteyin pwoteje modèl CKD kont domaj glomerulèr ak proteinuria [8], ankouraje pi gwo prezèvasyon pousantaj filtraj glomerulèr [9]. Li ta dwe remake ke pwoteyin dyetetik ak fosfat yo trè korelasyon. Se poutèt sa, byenke kèk etid eksperimantal yo te konsantre sou evalye efè izole nan restriksyon pwoteyin, yo ka tou yo te patipri akòz restriksyon inadvèrtan fosfat. Nan lòt men an, kontribisyon endividyèl nan yon rejim alimantè ki rich nan fosfat nan devlopman CKD te klèman demontre [10,11]. Yo te montre yon rejim ki gen anpil fosfat pwovoke plis entèrstisyèlrenfibwoz ak atrofi tubulaires, ak glomerulosclerosis minim, nan rat uremic. Enteresan, domaj la te bouche apre restriksyon fosfat [12]. Nan nòt, kontni an pwoteyin nan rejim alimantè a pa te mansyone nan etid sa a.
Nan senaryo klinik la, yon rejim alimantè ki ba pwoteyin redwi konsantrasyon toksin uremik ak konsève fonksyon ren rezidyèl, menm nan tranzisyon an soti nan swen konsèvatif nan rejim incrémentielle dyaliz [13].Dyetetikpwoteyinrestriksyon tou te retade pwogresyon CKD nan yon meta-analiz resan [14]. Sepandan, kòm restriksyon pwoteyin yo te korelasyon ak pi ba nivo fosfat serik, efè sa a benefisye nan rejim alimantè te kapab eksplike an pati pa restriksyon nan fosfat. Pi gwo etid potansyèl jiskaprezan, MDRD [15], te montre sèlman yon ti benefis nan yon rejim alimantè ki ba pwoteyin nan pasyan ki gen ensifizans ren modere, tandiske pwogresyon nan maladi ren pa te afekte nan pasyan ki gen ensifizans ren grav. Men, kontni an nan fosfat nan rejim alimantè a pa te adrese nan esè sa a ak enpak la nan kontribisyon endividyèl li yo nan ralanti.CKDpwogresyon rete enkoni.
Li konnen ke fosfat ka diminye ren ak sikile Klotho [16], yon pwoteyin anti-aje ki enplike nan cytoprotection ak antifibrosis, ak efè antioksidatif ak antiapoptotic [17]. Anplis de sa, otofaji defo nan selil ren yo akòz deficiency Klotho te deja demontre [18]. Autophagy se yon pwosesis katabolik ak fonksyon kritik nan kenbe omeyostazi selilè ak prezève viabilite selil nan kondisyon estrès. Gen kèk prèv sijere yon relasyon ant otofaji ak pwogresyon CKD atravè diferan chemen, ki gen ladan siyal TGF [19], yon faktè ki pisan fibrojenik pou devlopman fibwoz ren. TGF- afekte plizyè pwosesis byolojik, reglemante pwopagasyon selilè ak diferansyasyon, apoptoz, epi li aji nan reseptè transmembran espesifik ki pwovoke siyal entraselilè medyatè pa pwoteyin SMAD [20]. Apoptoz se yon mekanis nan lanmò selil pwograme ki diferan de nekwoz. Fosfat te dekri kòm yon medyatè nan apoptoz nan modèl eksperimantal nan endothelial [21], osteoblastic [22], ak peritoneal mesothelial selil [23]. Gen prèv ki montre patisipasyon lanmò selil apoptotik nan pwogresyon nanrenblesi [24], men efè a nan fosfat sou apoptoz selil ren pa gen ankò yo te elisid.
Depi mekanis kote yon rejim alimantè ki gen anpil fosfat akselere pwogresyon CKD poko klè nèt, nou te sipoze ke li ta ka asosye ak yon parèy otofaj ki pa fonksyone. Se poutèt sa, nan etid aktyèl la, nou evalye de gwoup rat Munich-Wistar selon kontni fosfat nan rejim yo (ba 0.2 pousan kont segondè 0.95 pousan) epi teste enpak yon rejim alimantè ki ba-fosfat sou laren' chanjman istolojik ak imunohistochimi, ki gen ladan yon makè otofaji, beclin-1.
2. Rezilta yo
Paramèt emodinamik, mòfolojik, ak byochimik yo jwenn nan gwoup rejim ki ba (LoP) ak ki gen anpil fosfat (HiP) yo bay nan Tablo 1. Jan nou espere, nefrektomi 5/6- te pwovoke yon rediksyon nan clearance kreyatinin ak yon ogmantasyon. nan ure serik ak kreyatinin nan tou de gwoup yo. Bèt ki soti nan gwoup HiP a te prezante pi ba fonksyon ren, jan yo pwouve pa pi wo kreyatinin ak pi ba clearance kreyatinin; yo menm tou yo te ekspoze pi ba ematokrit ak pi ba pwa final la. Gwoup HiP a te prezante yon ogmantasyon nan serik ak fraksyon fosfat, osi byen ke nan òmòn paratiwoyid (PTH) ak faktè kwasans fibroblast -23 (FGF-23). Nòt, presyon caudal, premye pwa, ak eskresyon albumin urin yo te menm jan an ant gwoup yo.
Yo montre rezilta histolojik yo nan Figi 1–3. Glomerulosclerosis (GS) te apèn jwenn nan tou de gwoup yo. Sepandan, pousantaj fibwoz entèrstisyèl te siyifikativman pi wo nan mitan rat nan gwoup HiP la. An konsekans, bèt sa yo tou te gen yon pousantaj ki pi wo nan - zòn ki tache aktin nan misk lis ak yon pi gwo enfiltrasyon ren pa macrophages, evalye pa ekspresyon ED-1, jan yo montre nan Tablo 2. Ekspresyon SMAD fosforil (p-SMAD), yon makè de activation chemen TGF-beta, pa t diferan ant gwoup yo.
Selil antijèn nikleyè selil pwoliferatif (PCNA)-pozitif yo te domine nan gwoup HiP, sa ki sijere ke surcharge fosfat ankouraje pwopagasyon selil ren plis entans. Kontrèman, kantite selil apoptotik yo te gen tandans yo dwe pi wo nan gwoup la LoP. Menm jan an tou, beclin 1-selil pozitif yo te siyifikativman pi wo nan blesi tubulointerstitis nan gwoup la LoP, ki endike yon efè posib nan pi wo fosfat nan anpeche pwosesis rejeneratif otofaj la sou.rentisi.
3. Diskisyon
Etid eksperimantal sa a te mennen ankèt sou si restriksyon sou fosfat dyetetik se yon etap efikas pou ralanti pwogresyon CKD, kèlkeswa restriksyon nan pwoteyin dyetetik. Nou te egzamine efè alimantasyon ki gen diferan kontni fosfat ({{0}}.2 kont 0.95 pousan) nan yon modèl bèt 5/6-nefrektomi, ak tout bèt ki te resevwa yon rejim ki pa gen anpil pwoteyin. (12 pousan). Konklizyon nou yo te montre ke yon rejim alimantè ki gen anpil fosfat te asosye ak ipèfosfatemi, malgre ogmantasyon nan PTH, FGF -23, epi, kidonk, nan eskresyon fraksyon nan fosfat. Anplis de sa, HiP te lakòz yon pwoblèm fonksyon ren ak yon ogmantasyon nan fibwoz entèrstisyèl, ki te asosye ak ekspresyon ki pi wo aktin, enfiltrasyon macrophage, ak pwopagasyon selilè, osi byen ke yon anpèchman nan otofaji.
Yon meta-analiz nan 12 etid kòwòt ki enplike 25,546 pasyan CKD ki pa dyaliz te demontre yon asosyasyon endepandan ant nivo fosfat serik,renechèk, ak mòtalite [25]. Anplis, yon etid kowòt retrospektiv nan 13,772 pasyan ensidan dyaliz te revele yon asosyasyon ant ipèfosfatemi ak lòt anomali nan maladi CKD-mineral ak -zo ak yon bès pi apik nan rezidyèl.renfonksyon [26]. Mekanis nan ki restriksyon fosfat reta pwogresyon CKD poko etabli. Nan yon etid eksperimantal, nou te montre ke yon rejim alimantè ki rich ak fosfat te asosye ak yon fonksyon ren ki gen plis pwoblèm, lè yo konpare ak yon rejim alimantè ki ba-fosfat nan rat Wistar ki te soumèt nan paratiroidektomi ak 5/6-nefrektomi, lè l sèvi avèk yon paratiwoyid fiks. sipleman òmòn (PTH) [11]. Kusano et al. [10] te montre ke pwoteksyon fonksyon ren yo te asosye ak yon rejim ki ba-fosfat (0.3 pousan), kèlkeswa kontni pwoteyin dyetetik nan rat uremik. Sepandan, rat ki gen alimantasyon nòmal fosfat (0.5 pousan) te bay benefis sa yo sèlman si yo te manje ak yon rejim ki pa gen anpil pwoteyin (8.4 pousan). Ansanm, rezilta sa yo vle di ke wòl nan fosfat dyetetik ta ka pi pwisan pase pwoteyin dyetetik. Sepandan, okenn nan etid ki mansyone anwo yo te eseye mennen ankèt sou wout potansyèl ki ta ka patisipe nan domaj ren ki gen rapò ak fosfat.
Aksyon an nan surcharge fosfat nan pwogresyon nan CKD te sijè a nan plizyè etid. Labels et al. premye sijere posiblite sa a nan yon modèl bèt, men pwoteyin nan dyetetik [27] pa te kontwole, ki pètèt maske efè a izole nan fosfat. Yon swadizan benefis nan yon restriksyon endepandan fosfat, olye ke restriksyon pwoteyin nan senaryo a CKD, se yon gwo enterè paske risk pou kontwole fosfat serik ansanm ak konsomasyon restriksyon nan pwoteyin ka mennen nan malnitrisyon ak lakòz pi wo mòtalite.
Kontni rejim alimantè fosfat pa nesesèman detèmine konsantrasyon serom fosfat nan pasyan CKD [28], mete aksan sou enpòtans ki genyen nan restriksyon rejim alimantè endepandan de konsantrasyon serom nan eleman sa a. Efè patolojik fosfat sou zo ak sistèm kadyovaskilè motive entèvansyon pou trete ipèfosfatemi. Nan pratik klinik, entèvansyon pou diminye nivo fosfat yo konpoze de restriksyon dyetetik ak atach fosfat. Malgre ke benefis apwòch sa a sou pwen final klinik yo te dout nan yon etid ti gwosè echantiyon [29], an fas a konesans ke depase fosfat ki responsab pou twòp pwodiksyon PTH ak FGF-23, li rezonab pou kenbe. nivo fosfat osi ba ke posib nan pasyan ki gen CKD [30].
Yon rejim alimantè ki ba pwoteyin pwovoke yon byodisponibilite ki ba nan fosfat ak diminye serik FGF -23 [31,32], yon medyatè nan reabsòpsyon fosfat sodyòm ki depann sou selil tubulaires ren yo. Sa a sijere ke mekanis nan règleman fosfat nan CKD avanse ka yon jan kanmenm enfliyanse pa konsomasyon fosfat nan yon fason totalman endepandan nan kontni rejim alimantè pwoteyin. Pou rezon sa a, nou te evalye efè kontni rejim alimantè fosfat sou pwogresyon CKD, nan yon modèl 5/6-nefrektomi. Yon etid eksperimantal anvan te deja demontre ke fosfat ka modifye repons antiproteinurik la nan yon rejim alimantè ki ba anpil pwoteyin (0.3 g/kg), ki montre yon korelasyon ant nivo fosfat serik ak fosfaturi ak repons antiproteinurik la nan yon rejim alimantè pwoteyin restriksyon, endepandan de fonksyon ren [33]. Nan yon etid kwazman ki enkli 11 pasyan ki gen CKD (eGFR 30-55 mL/min/m2), ritm sirkadyèn nan fosfat serik te chanje ak yon rejim alimantè ki gen anpil fosfat, ki pa te eksplike pa eskresyon fosfat pipi, PTH, oswa FGF. -23 [34]. Rezilta sa a ranfòse enpòtans ki genyen nan restriksyon rejim alimantè fosfat nan pasyan CKD kòm yon sib endepandan terapetik.
Estati emodinamik pa sanble yo patisipe nan vin pi grav nan fonksyon ren nan gwoup HiP a, kòm presyon atè yo te menm jan an nan tou de gwoup yo. Anplis de sa, nou pa t 'jwenn gwo domaj glomerulèr nan modèl nou an, ki ta ka eksplike pa restriksyon nan pwoteyin. Sepandan, nou te note plis fibwoz entèrstisyèl nan gwoup rejim HiP la.
Fibwoz entèrstisyal byen korelasyon ak pèt fonksyon ren nan imen ak rat.
Yon etid anvan te asosye devlopman nan fibwoz ren pwovoke pa yon rejim ki gen anpil fosfat atravè peptidyl-prolyl izomeraz Pin 1 [35], tandiske lòt papye yo te montre wòl danjere nan deficiency aKlotho sourenfibwoz tisi [36,37]. Sipresyon jenetik Klotho, nan modèl eksperimantal, lakòz aje, reta kwasans, ak kalsifikasyon [38]. FGF23-Klotho siyal inibit reabsòpsyon fosfat nan ren. Nan anviwònman CKD, ekspresyon Klotho redwi nan tib ren yo [39]. Anplis de sa, rejim alimantè ki gen anpil fosfat te vin agrave defisi a Klotho nan yon modèl blesi nan ren ischemi-reperfusion ak plis ankouraje ogmante.renfibwoz tisi, akselere pwogresyon CKD [18]. Enfliyans rejim alimantè fosfat sou ekspresyon ren Klotho te deja demontre nan modèl murin [40]. Li posib, pami lòt wout, surcharge fosfat vin pi mal fonksyon ren nan modil ekspresyon Klotho sou selil tubulaires; li ta dwe plis envestige nan etid nan lavni.
Apoptoz ak fibwoz yo medyatè pa sitokin, tankou TGF- [41,42]. Nou te dekri asosyasyon an nan hyperparathyroidism segondè ak konsekan pi wo ekspresyon TGF sou pwosesis la renovasyon kadyak [43]. Sipozeman, gen yon asosyasyon ant aktivasyon PTH ak siyal TGF ki ankouraje pwopagasyon fibroblast, sentèz kolagen an, ak fibwoz. Gen menm prèv eksperimantal nan yon aksyon entegre nan reseptè TGF- ak PTH sou selil zo yo, reglemante siyal zo-remodeling [44]. Wòl siyal TGF-/Smad nanrenmaladi a deja dekri. TGF- mare yon reseptè transmembran, deklanche fosforilasyon pwoteyin Smads, epi li ankouraje translokasyon yo nan nwayo a pou efè transcription. Se poutèt sa, yo esansyèl pou transdiksyon siyal manm fanmi TGF-. Vreman vre, yo te deja demontre twòp ekspresyon nan pwoteyin Smad2 ak Smad3 nan ren fibrotik nan modèl bèt ki gen CKD [45]. Enteresan, gen prèv deklanchman Smads pa lòt medyatè endepandan de TGF-, tankou pwodwi fen glikasyon avanse [46] ak angiotensin II [47]. Kòm efè ipèfosfatemi sou pwogresyon CKD pa te enfliyanse pa ranplasman PTH nan yon modèl eksperimantal [11], nou mande si fosfat ta gen yon wòl dirèk nan siyal Smad ren. Nan modèl nou an, pa te gen okenn enfliyans nan ipèfosfatemi sou ekspresyon p-Smad nan selil tubulaires ren yo.
Sepandan, sa a pa ekskli posibilite pou deklanchman TGF-chemen endepandan de fosforilasyon Smads. Plis etid yo nesesè pou mennen ankèt sou chemen altènatif sa a.
Nan evalyasyon an nan tisi zo yo, surcharge fosfat te pwovoke apoptoz nan selil ki tankou osteoblast [22]. Rojas et al. te demontre nan byopsi zo nan pasyan transplante'tèt ke kantite selil apoptotik te pi wo nan moun ki gen fosfat ki ba ak PTH ta gen yon efè nan ogmante osteoblast ak anpeche apoptoz [48]. Sa a efè inhibition nan PTH sou apoptoz selil zo yo te demontre deja [49]. Anplis efè yo sou tisi zo yo, chemen apoptotik yo tou gen rapò ak ensifizans renal egi [48] epi yo ta ka yon medyatè posib sou pwogresyon nan CKD. Nan modèl nou an, nou te obsève yon pwopòsyon siperyè nan selil ki sibi apoptoz nan gwoup LoP a, san enpòtans estatistik. Konsiderasyon sa yo sijere yon mekanis apoptoz ki gen pwoblèm ki te koze pa ipèfosfatemi. Sepandan, nou dwe kenbe nan tèt ou ke li pa te posib yo evalye efè a eksklizif nan fosfat sourenapoptoz tisi yon fwa bèt yo te devlope tou elevasyon PTH ak FGF-23.
Nan etid aktyèl la, nou te adrese yon lòt mekanis posib pou defisyans ren pa yon rejim ki gen anpil fosfat, malfonksyònman otofaji a, lè nou mezire pwoteyin beclin-1, yon pwoteyin regilasyon ki nesesè pou nikleyasyon manbràn otofagosomal [50]. Autophagy se yon chemen katabolik ki enplike degradasyon eleman selilè yo atravè lizozom yo [51,52]. Fosforilasyon Beclin-1 te konsidere kòm siyal otofagi-espesifik pou aktivasyon konplèks fosfatidilinositol-3-fosfat kinaz ak rekritman nan sit manbràn byogenesis otofagozom yo [53]. Knockdown beclin-1 siprime otofaji [54] ak ischemi-reperfusion ogmante nivo li yo [55]. Rediksyon nan beclin- 1 ak regilasyon an koncomitan nan mTOR diminye kwasans selil malfezan, mete aksan sou efè pro-siviv nan otofaji [52].
Efè antifibrotik Klotho yo te asosye tou ak yon pwosesis otofaji regilasyon, yon chemen kote aksidan ischemik te diminye nan modèl AKI a epi ki te afekte pa nivo segondè-fosfat [18]. Etid eksperimantal yo te montre ke flux autophagic bese enfiltrasyon makrofaj ak fosfat-induit fibwoz ren. Anplis de sa, yon anviwònman ki rich ak fosfat pwovoke mitofaji nan selil tubulaires nan vitro [56]. Done nou yo te montre ke kontni an fosfat nan rejim alimantè a tou modulation ekspresyon beclin -1 nan tubul ren nan vivo. Yon rejim HiP te asosye tou ak plis pwopagasyon selilè ak yon tandans nan direksyon pou yon pousantaj apoptotik ki pi ba, jan yo montre PCNA ak analiz TUNEL, respektivman. Sepandan, nan modèl nou an, li pa t posib pou idantifye si sa te rive kòm yon efè dirèk nan surcharge fosfat oswa akòz anomali nan nivo PTH ak FGF -23, pwovoke pa ipèfosfatemi. Konklizyon sa a bezwen konfime nan yon senaryo klinik.
Yon avantaj kle nan etid sa a se te evalye enpak la nan restriksyon fosfat nan yon rejim alimantè ki ba-pwoteyin sou pwogresyon CKD, ki enkli envestigasyon sou enfliyans li sou modèl istolojik ak fenotip molekilè nan.rentisi. Dapre nou konnen, sa a se premye etid ki demontre modulasyon ekspresyon beclin-1, yon makè otofaji sou selil tubulaires ren yo, pa rejim fosfat nan vivo. Limit prensipal la se enposib pou yo retire efè ipèfosfatemi ak lòt anomali ki gen rapò ak CKD-MBD, tankou elevasyon PTH ak FGF -23. Nou pa t kapab tou evalye yon rejim alimantè ki gen kontni fosfat entèmedyè oswa ekspresyon ren Klotho. Sepandan, modèl nou an repwodui kondisyon lavi reyèl la, kote yon rejim HiP anjeneral asosye ak hyperparathyroidism ak nivo segondè nan FGF-23.
4. Konklizyon
An rezime, etid sa a bay prèv ke rejim alimantè fosfat jwe yon wòl nan pwogresyon CKD, pètèt ogmante fibwoz entèrstisyèl. Anplis de sa, yon rejim alimantè ki rich ak fosfat ka modifyerenpwosesis otofaji. Idantifikasyon yon chemen endepandan pwoteyin kote fosfat vin pi mal fonksyon ren ka louvri yon avni enpòtan pou devlopman nouvo apwòch ki vize pou anpeche oswa diminye pwogresyon CKD nan yon anviwònman klinik.
5. Materyèl ak Metòd
Yo te enkli nan etid sa a granmoun gason rat Munich-Wistar yo te jwenn nan yon etablisman lokal. Rat yo te kenbe nan 23 ± 1 ◦C, ak imidite lè a nan 60 ± 5 pousan, anba yon sik limyè-fènwa 12:12-h. Tout bèt te gen aksè gratis nan dlo tiyo epi yo te manje yon rejim ki pa gen anpil pwoteyin (12 pousan pwoteyin). Bèt yo te sakrifye de mwa pita lè yo te analize san, pipi ak tisi ren yo. Yo te detèmine presyon ke-manchèt, clearance kreyatinin, ak ekskresyon albumin urin chak jou nan tout rat. Yo montre konsepsyon eksperimantal la nan Apendis A (Figi A1).
5.1. Teknik analitik
Swasant jou apre Nx, bèt yo te anestezi ak thiopental sodyòm (50 mg / kg BW), epi yo te kolekte echantiyon san. Konsantrasyon kreyatinin serik yo te evalye pa yon metòd kolorimetrik. Albumin serik, fosfat, ure, kalsyòm, ak ematokrit yo te mezire pa metòd estanda. PTH te mezire pa ELISA (Immutopics, San Clemente, CA, USA). FGF-23 yo te mezire lè l sèvi avèk yon twous ELISA (KAINOS, Japon) dapre pwotokòl manifakti a. Nou kalkile filtraj glomerulè pa clearance kreyatinin ki baze sou nivo kreyatinin serik ak pipi ak eksprime an ml / min, kalkile ak fòmil la: kreyatinin pipi (mg / dL) × parèy pipi (mL / min) / kreyatinin serik (mg / dL). Albumin urin te detèmine pa iminodifizyon radial.
-tyè nan bò gòch larenpa fèmen nan de oswa twa branch nan atè ren gòch la. Rat ki te opere ak simulation te sibi anestezi ak manipilasyon pedikil ren yo san yo pa diminye mas ren yo. Apre yo fin rekipere nan anestezi, bèt yo te retounen nan kaj orijinal yo, ki te chofe pandan 24 èdtan sa yo.
Ekskresyon fraksyon nan fosfat (FEP) yo te jwenn nan pipi ak fosfat serom (mg/dL), pipi ak kreyatinin serik (mg/dL), epi li eksprime an pousan, ak fòmil sa a: (pipi / fosfat serik) / (pipi / serom). kreyatinin) × 100.
5.2. Gwoup eksperimantal
Bèt yo te divize an de gwoup dapre kontni fosfat nan rejim alimantè, jan sa espesifye anba a: Rejim ki ba-fosfat (LoP): n=20; bèt yo te resevwa TD-90016, 12 pousan rejim alimantè pwoteyin, modifye pou yon konsantrasyon 0.2 pousan fosfat.Rejim segondè-fosfat (HiP): n=19; bèt yo te resevwa TD-90016, 12 pousan rejim alimantè pwoteyin, modifye pou yon konsantrasyon 0.95 pousan fosfat.
5.3. Teknik istolojik
Rès larente perfused in situ nan MAP la obsève ak solisyon saline ak Lè sa a, ak solisyon Duboscq-Brasil pou fikse. Apre yo te peze, de tranch ren midcoronal yo te postfixed nan fòmaldeyid 4 pousan tanpon. Lè sa a, tisi ren an te entegre nan parafine epi prepare pou istomorfometri, ak imunohistochimi jan sa dekri deja [57].
Tout evalyasyon mòfometrik yo te fè nan seksyon 4-µm epesè pa yon sèl obsèvatè avèg pou gwoup yo. Pou chak rat, severite glomerulosclerosis (GS) te estime, nan seksyon tache ak asid peryodik Schiff (PAS), lè yo bay chak glomerulus (yo te egzamine omwen 120 pou chak rat) yon nòt pou estime fraksyon sclerosed nan zòn touf la. , ak derive yon endèks GS (GSI) pou chak rat jan sa dekri anvan [58]. Pou evalye degre ekspansyon entèrstisyal la, yo te estime pousantaj nan zòn kortik ren ki te okipe pa fibwoz entèstitisyal (pousan IF) nan seksyon tache Masson pa yon teknik konte pwen [59].
5.4. Imunohistochimi
Kat µm-epè, seksyon ren parafine entegre yo te monte sou glisad an vè kouvwi ak 6 pousan silan. Seksyon yo te deparafinize, reyidrate, ak Lè sa a, chofe nan tanpon sitrat pou amelyore rekipere antijèn. Yo te preenkube ak 5 pousan nòmal lapen (pou ED-1) oswa serom cheval (pou -aktin) nan solisyon saline ki gen tanpon Tris (TBS) oswa solisyon Blòk Pwoteyin ki baze sou kazein (Protein Block; DAKO Corporation, Santa Clara, CA, USA (pou PCNA, pSmad, andBeclin)), pou anpeche obligatwa ki pa espesifik. Enkubasyon ak antikò prensipal la te fèt lannwit lan nan 4 ◦C. Kontwòl negatif yo te fèt pa omisyon antikò prensipal la.
Yo te itilize antikò prensipal sa yo: yon antikò monoklonal sourit anti-rat ED-1 (Serotec, Oxford, UK), pou deteksyon makrofaj; sourit monoklonal anti-alfa lis (Sigma-Aldrich, St. Louis, MI, USA), pou deteksyon -aktin; poliklonal anti-Beclin 1 antikò (Boster, Pleasanton, CA, USA), pou analiz otofaji. Apre yo fin lave, seksyon yo te enkube ak IgG anti-sourit biotinylate (H plis L), (Vector, Burlingame, CA, USA) pou 45 minit, ki te swiv pa VECTASTAIN® ABC-AP Kit, Vector® Wouj (Vector, Burlingame, CA). , USA) pou 30 min. Lè sa a, seksyon yo te devlope ak yon solisyon koloran vit-wouj.
Pou monoklonal sourit anti-proliferasyon selil nikleyè antijèn (Dako, Denmark) ak phosphor-smad2 (Ser465/467) antikò (Cell Signaling, Danvers, MA, USA), yo te fè anpèchman andojèn peroksidaz ak 3 pousan solisyon oksijene idwojèn ak metanol pou 30. min. Lè sa a, seksyon yo te enkube lannwit lan ak antikò prensipal la nan yon chanm imidite nan 4 ◦C. Nan denmen, seksyon yo te enkubate ak IgG anti-sourit biotinylated (H plis L) oswa IgG anti-rat biotinylated (H plis L) (Vector, Burlingame, CA, USA) pou 45 minit, ki te swiv pa enkubasyon ak VECTASTAIN® ABC- HRP Twous (Vektè, Burlingame, CA, USA) pou 30 min. Lè sa a, seksyon yo te devlope lè l sèvi avèk yon 3-amino-9- chromogen substrate carbazol etil (AEC) (Sigma Chemical, St. Louis, MO, USA). Tout seksyon yo te rense nan dlo distile, counterstained ak solisyon Hemalum Mayer a (Merck, Darmstadt, Almay) kouvri ak gliserin-jelatin Kaiser a (Merck, Darmstadt, Almay).
Pou estimasyon entèstisyal ren-dansite ED-1, p-Smad, Beclin, ak PCNA, yo te evalye kantite selil pozitif/mm2 nan yon fason avèg nan 400 × agrandisman. Pou evalye -aktin a, nou te itilize yon teknik konte pwen, lè l sèvi avèk yon mikwoskòp ak yon okilè 100-pwen ki konekte ak yon monitè videyo. Nou analize 25 jaden anba agrandisman 3200. Rezilta yo te eksprime nan pousantaj konsidere zòn total la.
5.5. Apoptoz
Apoptoz te detèmine nan selil tubulaires ren yo pa teknik TUNEL (TdT medyatè X-dUTP Nick fen etikèt) lè l sèvi avèk enstriksyon yo bay Apoptag plusPeroxidase in situ Apoptosis Detection Kit (S7101, Millipore Sigma, MA, USA). Selil apoptotik yo te analize nan 25 jaden, ak yon agrandisman de 1000 ×, yo jwenn valè final la eksprime nan selil / mm2.
5.6. Analiz estatistik
Diferans ant gwoup LoP ak HiP yo te teste lè l sèvi avèk yon tès elèv endepandan oswa yon tès Mann-Whitney kòmsadwa. Relasyon ant varyab yo te egzamine pa koyefisyan korelasyon Spearman. Done yo prezante kòm mwayen ± SE sof si yo endike otreman. Yon p-valè nan<0.05 was="" considered="" significant.="" analyses="" were="" performed="" using="" ibm="" spss="" statistics,="" version="" 20.0.1="" (ibm="" corp.,="" armonk,="" ny,="" usa)="" and="" graphpad="" prism9.1.2="" statistical="" software="" (graphpad,="" san="" diego,="" ca,="">
Finansman:Fondasyon Rechèch Sáo Paulo (FAPESP — Grant #. 2010/05409-6) te sipòte etid sa a. Moyses, Jorgetti, Zatz ak Elias gen sipò CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Scientific e Tecnol6gico), men sipò finansye sa a pa te gen okenn wòl nan ekri papye sa a.
Deklarasyon Komisyon Konsèy Revizyon Enstitisyonèl:Etid sa a te fèt an akò ak rekòmandasyon komite revizyon etik lokal la. Pwotokòl la te apwouve pa Comite detica em Pesquisa do Hospital das Clinicas da Faculdade de Medicina da USP (CEUA, pwosesis #090/10 ak dat apwobasyon 10 Out 2010). Tout pwosedi eksperimantal yo te swiv estanda entèdi entènasyonal pou manipilasyon ak swen bèt laboratwa yo.
Deklarasyon Disponibilite Done:Done yo prezante nan etid sa a disponib sou demann nan men otè ki koresponn lan.
Rekonesans:Otè yo remèsye Wagner Dominguez pou asistans teknik ekspè li. Konfli enterè: Otè yo pa deklare okenn konfli enterè.
Referans
1. Hill, NR; Fatoba, ST; Oke, JL; Hirst, JA; O'Callaghan, CA; Lasserson, DS; Hobbs, FD Prévalence mondyal kwonikrenmaladi-Yon revizyon sistematik ak meta-analiz. PLoS ONE 2016, 11, e0158765.
2. Wen, CP; Chang, CH; Tsai, MK; Lee, JH; Lu, PJ; Tsai, SP; Wen, C.; Chen, CH; Kao, CW; Tsao, CK; et al. Dyabèt ak bonèrenpatisipasyon ka diminye esperans lavi pa 16 ane. Kidney Int. 2017, 92, 388–396.
3. Kakinuma, Y.; Kawamura, T.; Bills, T.; Yoshioka, T.; Ichikawa, mwen; Fogo, A. Efè san presyon-endepandan anjyotansin anpèchman sou blesi vaskilè nan echèk ren kwonik.renEnt. 1992, 42, 46–55.
4. Fried, LF; Orchard, TJ; Kasiske, BL Efè rediksyon lipid sou pwogresyon maladi ren: Yon meta-analiz.renEnt. 2001, 59, 260–269.
5. Ishidoya, S.; Morrissey, J.; McCracken, R.; Reyes, A.; Klahr, S. Angiotensin II antagonist reseptè amelyore fibwoz tubulointerstitis ren ki te koze pa obstriksyon ureteral inilateral.renEnt. 1995, 47, 1285–1294.
6. Audigier, JC; Kanjanbuch, T.; Ma, LJ; Brown, NJ; Fogo, AB Regression glomerulosclerosis ki ekziste pa anpèchman aldosteron. J. Am. Soc. Nefròl. 2005, 16, 3306–3314.
7. Nath, KA; Kren, SM; Hostetter, TH Restriksyon pwoteyin dyetetik nan blesi ren etabli nan rat la. Wòl selektif presyon kapilè glomerulè a nan malfonksyònman glomerulè pwogresif. J. Clin. Investig. 1986, 78, 1199–1205.
8. Brenner, BM; Meyer, TW; Hostetter, TH Konsomasyon pwoteyin dyetetik ak nati a pwogresif nanrenmaladi: wòl nan blesi glomerulè ki gen mwayen emodinamik nan patojèn nan esklewoz glomerulè pwogresif nan aje, ablation ren, ak maladi ren intrinsèques. N. Engl. J. Med. 1982, 307, 652–659.
9. Bellizzi, V. rejim alimantè ki ba-pwoteyin oswa terapi nitrisyonèl nan kwonikrenmaladi? San purif. 2013, 36, 41–46.
10. Kusano, K.; Segawa, H.; Ohnishi, R.; Fukushima, N.; Miyamoto, K. Wòl nan pwoteyin ki ba ak rejim alimantè ki ba fosfò nan pwogresyon nan kwonikrenmaladi nan rat uremik. J. Nutr. Sci. Vitam. 2008, 54, 237–243.
11. Neves, KR; Graciolli, FG; dos Reis, LM; Pasqualucci, CA; Moyses, RM; Jorgetti, V. Efè negatif nan ipèfosfatemi sou ipètrofi myokad, fonksyon ren, ak zo nan rat ak ensifizans ren.renEnt. 2004, 66, 2237–2244. [CrossRef] [PubMed]
12. Finch, JL; Lee, DH; Liapis, H.; Ritter, C.; Zhang, S.; Suarez, E.; Ferder, L.; Slatopolsky, E. Fosfat restriksyon siyifikativman diminye mòtalite nan rat uremik ak etabli kalsifikasyon vaskilè. Kidney Int. 2013, 84, 1145–1153.
13. Cupisti, A.; Blasco, P.; D'Alessandro, C.; Giannese, D.; Sabatino, A.; Fiaccadori, E. Pwoteksyon nan fonksyon ren rezidyèl ak tretman nitrisyonèl: Premye etap estrateji pou rediksyon toksin uremik nan pasyan maladi ren fen etap. Toxines 2021, 13, 289.
14. Yan, B.; Su, X.; Xu, B.; Qiao, X.; Wang, L. Efè restriksyon pwoteyin dyetetik sou pwogresyon nan kwonikrenmaladi: Yon revizyon sistematik ak meta-analiz. PLoS ONE 2018, 13, e0206134. [CrossRef] [PubMed]
15. Klahr, S.; Levey, AS; Beck, GJ; Caggiula, AW; Hunsicker, L.; Kusek, JW; Striker, G. Efè restriksyon pwoteyin dyetetik ak kontwòl tansyon sou pwogresyon maladi ren kwonik. Modifikasyon rejim alimantè nan gwoup etid maladi ren. N. Engl.
J. Med. 1994, 330, 877–884. [CrossRef]
16. Hu, MC; Shi, M.; Cho, HJ; Adams-Huet, B.; Paek, J.; Hill, K.; Shelton, J.; Amaral, AP; Faul, C.; Taniguchi, M.; et al. Klotho ak fosfat se modulateur nan remodeling kadyak uremik patolojik. J. Am. Soc. Nefròl. 2015, 26, 1290–1302.
17. Hu, MC; Shi, M.; Cho, HJ; Zhang, J.; Pavlenco, A.; Liu, S.; Sidhu, S.; Huang, LJ; Moe, OW Reseptè erythropoietin la se yon efèktè en nan cytoprotection Klotho-induit. Kidney Int. 2013, 84, 468–481.
18. Shi, M.; Flores, B.; Gillings, N.; Bian, A.; Cho, HJ; Yan, S.; Liu, Y.; Levine, B.; Moe, OW; Hu, MC alphaKlotho bese pwogresyon nan AKI nan CKD atravè aktivasyon otofaji. J. Am. Soc. Nefròl. 2016, 27, 2331–2345.
19. Ding, Y.; Kim, S.; Lee, SY; Koo, JK; Wang, Z.; Choi, ME Autophagy kontwole ekspresyon TGF-beta ak siprimerenfibwoz pwovoke pa obstriksyon inilateral ureteral. J. Am. Soc. Nefròl. 2014, 25, 2835–2846.
20. Moustakas, A.; Souchelnytskyi, S.; Heldin, CH Règleman Smad nan transdiksyon siyal TGF-beta. J. Cell Sci. 2001, 114, 4359–4369.
