htLang
Kay / Konesans / Sanisfè

Konesans

Pasyan ki fè operasyon vaskilè ak rapò ki wo netrofil ak lenfosit yo gen ekspresyon RNA a konpleman netrofil yo te kontwole.

Nov 24, 2023

Elve rapò netrofil-a-lenfosit (NLR) nan pasyan ki sibi operasyon vaskilè ochwa (EVS) te ogmante mòtalite endepandan de rezilta chirijikal perioperatif. Pou konprann poukisa NLR segondè ki asosye ak pi wo mòtalite, nou te envestige ekspresyon transcriptom netrofil ak lenfosit nan pasyan ki sibi EVS. Yo te kolekte echantiyon san nan pasyan ki sibi EVS ak donatè ki an sante pou kalkil NLR. Echantiyon RNA yo te izole nan netrofil pasyan yo ak lenfosit yo epi divize an NLR_Ba (<3) and NLR_High (≥3) groups (n = 6 each). Paired samples with the highest RNA integrity number (mean = 9.8 ± 0.4) were sequenced and analyzed for differential expression. Normalized data were inputted for downstream analysis using iPathwayGuide (AdvaitaBio) and gene set enrichment analysis using GenePattern and MSigDB (Broad Institute). There was no clinical difference between the patient groups about clinical diagnosis, age, sex, history of hypertension, lipid abnormalities, diabetes mellitus, smoking, or statin use. The mean NLR was 4.37 ± 0.27 SEM in the NLR_High and 1.88 ± 0.16 for the NLR_Low groups. Significantly differentially expressed gene sets identified in the RNA sequence data were enriched highly (P = 1E-24) in the humoral immunity and complement systems. Neutrophils from NLR_High patients downregulated complement genes (C1QA, C1QB, C1QC, C1S, C2, CR2, C3AR1, C3, C8G, and C9 and complement regulatory genes CD59, SERPING1, C4BPA, CFH, and CFI). Downregulation of gene expressions of humoral immunity and complement within the neutrophils are associated with elevated NLR. It remains to be determined whether and how these changes contribute to increased late mortality previously observed in patients undergoing EVS.


Desert ginseng—Improve immunity (21)

benefis cistanche pou gason-ranfòse sistèm iminitè

Entwodiksyon

Maladi kadyovaskilè (CVD) se yon kòz prensipal lanmò atravè lemond. Li se akòz, an gwo pati, aterojenèz ak ateroskleroz ki, anplis jenetik endividyèl ak rejim alimantè, se medyatè pa mekanis enflamatwa ak iminitè.1-3 Dènyèman, konte lekosit diferans lan (netrofil ak lenfosit) te vin konsantre. pou predi rezilta kadyovaskilè (CV). Yo rekonèt rapò absoli netrofil ak lenfosit (NLR) kòm yon prediktè mòtalite total nan plizyè ti etid sou entèvansyon kardyovaskulèr egi, 4-6 tansyon wo,7,8, ak ensifizans kadyak.9

Tablo 1. Karakteristik klinik pasyan operasyon vaskilè ochwa egzamine pa RNA-seq

Table 1. Clinical characteristics of elective vascular surgery patients examined by RNA-seq


Ankèt anvan yo te montre tou ke NLR se yon predi rezilta alontèm nan pasyan ki gen maladi vaskilè periferik.10-13 Etid retrospektiv nou yo sou popilasyon pasyan operasyon vaskilè sipòte konklizyon sa a. Nan 1 etid sou 108 pasyan ki te gen reparasyon ochwa endovaskilè nan vant aortik anevrism, pa te gen okenn diferans nan 30-jou mòtalite apre operasyon an ant yon NLR nan<4 and an NLR of >4 (P = .507). However, the 1-year, 3-year, and 5-year mortality between the groups were 4.2% vs 28.1%, 15.1% vs 64.9%, and 24% vs 90%, respectively.14 In a second study of 290 asymptomatic patients undergoing prophylactic carotid endarterectomy, the risk for stroke was noted to be significantly higher (P < .0001) in patients with an NLR of >3 (n=116 pasyan, 42.6% risk konjesyon serebral) pase moun ki gen yon NLR nan<3 (n = 174 patients, 9.3% stroke risk).15 In a third study with 488 patients who underwent percutaneous interventions of femoropopliteal arteries, the 30-day mortality rates increased significantly (P = .005) with increasing NLR (1.4%, 4.3%, and 7.0% for low [<3], mid [3-4], and high [>4] Gwoup NLR yo, respektivman).16 Pasyan ki gen yon NLR preoperasyon ki pi ba yo te reyisi siviv san anpitasyon siyifikativman pi gwo nan 4-ane swivi (nLR ki ba 65.5%, NLR mitan, 37.5%, ak NLR segondè, 17.6). % [P <.0001]).16

Nan etid sa a, nou te fè sekans RNA (RNA-seq) nan netrofil ak lenfosit nan pasyan ki kalifye pou reparasyon ochwa operasyon vaskilè (EVS) pou detèmine mekanis potansyèl pou NLR ki wo. Etid yo te egzamine si gen yon baz molekilè pou NLR ki wo. Envestigasyon nou yo revele ke pasyan ki gen NLR ki wo ki te gen reparasyon EVS yo distenge pa regilasyon trè enpòtan nan imunoglobulin ak konpleman jèn nan netrofil yo.

Desert ginseng—Improve immunity (10)

cistanche benefis-ranfòse sistèm iminitè

Metòd

Pasyan yo

Blood samples were collected from candidate patients for EVS procedures and healthy volunteers for NLR calculation and RNA sequence studies of neutrophils and lymphocytes. In screening patients for participation, any individual with an active local or systemic infection or obvious inflammatory disease was excluded from participation. Peripheral blood collection was approved by the institutional review board of University Hospitals Cleveland Medical Center (#01-06-02). Informed consent was obtained from each patient and healthy volunteer. All patients for EVS seen in the outpatient department were eligible. Patients in the study were characterized for the type of vascular surgery, age, sex, hypertension (blood pressure >130/80 mm Hg), diabetes mellitus (fasting blood glucose >100 mg/dL), sitiyasyon fimen, tretman statin, yon istwa medikal nan maladi kwonik obstriktif poumon, kansè, maladi ren kwonik, maladi atè kowonè (CAD), maladi atè periferik, maladi serebwo vaskilè, ak ensifizans kè kwonik. Tout pasyan yo te gen yon konte san konplè ak diferan kantite globil blan. Pasyan yo te divize an NLR ki ba (NLR_Ba [<3]) and high NLR (NLR_High [≥3]) groups (n = 6 each) and healthy volunteers aged 18 to 71 years (n = 6). Eleven of 12 patients' blood was drawn before surgery. One patient had blood drawn 4 months after surgery. 

Separasyon san

Yo te kolekte san antye (20 mL pou chak pasyan) nan tib vacutainer 10 mL antikoagulasyon ak EDTA, epi yo te separe san an nan yon èdtan apre koleksyon an. Popilasyon selil netrofil ak lenfosit yo chak te izole nan 8 mL san lè l sèvi avèk twous izolasyon selil imen dirèk EasySep (STEMCELL Technologies, Vancouver, Kanada) ak Big EasySep Eman (STEMCELL Technologies, Vancouver, Kanada) dapre pwotokòl manifakti a. Te leman an frèt sou glas anvan, epi selil san yo ak reyaktif yo te dousman melanje pa envèse tib la kòm opoze a pipette. Yo te ajiste rapò reyaktif yo tou nan fason sa a pou optimize rekiperasyon an: yo te ajoute 400 mL melanj antikò, 400 mL pèl mayetik, ak 4 mL saline tanpon fosfat nan san an anvan premye separasyon an, ki te swiv pa 200 mL antikò. melanj ak 400 mL pèl anvan dezyèm separasyon an ak 200 mL pèl anvan twazyèm ak dènye separasyon an. Yo te pran yon ti aliquot 200 mL nan volim rekiperasyon final yo pou konte selil ak preparasyon glise. Rès volim rekiperasyon an te santrifuje nan 1000 revolisyon pou chak minit pou 7 minit pou boule selil yo.

Figure 1. Whole transcriptome of RNA from neutrophils and lymphocytes collected from patients with NLR, high (NLR_High), low (NLR_Low), or control (NLR_Control). The


Figi 1. Tout transcriptom RNA ki soti nan netrofil ak lenfosit yo kolekte nan pasyan ki gen NLR, segondè (NLR_Segondè), ba (NLR_Ba), oswa kontwòl (NLR_Kontwòl) . Kòd lèt "N" oswa "L" nan non echantiyon an vle di ke swa netrofil oswa lenfosit se te sous RNA a. Te gen 6 pasyan nan chak kategori. Ble=nivo ekspresyon redwi; wouj=wo nivo ekspresyon.

Konte selil ak preparasyon glise

Selil ki te resuspend nan saline tanpon fosfat yo te plis alikòt, melanje ak ble tripan, epi yo te konte manyèlman lè l sèvi avèk yon emositomèt. Tipikman, 9 × 106 a 15 × 106 netrofil ak 3 × 106 a 10 × 106 lenfosit yo te izole pou chak echantiyon. Glisad nan selil izole yo te prepare lè l sèvi avèk yon cytocentrifuge, file nan 600 revolisyon pou chak minit pou 3 minit, ak Lè sa a, tache ak Wright-Giemsa tach. Pite chak popilasyon selil yo te detèmine pa konte manyèl, nan ki omwen 1000 selil yo te distenge pou chak glisad. Pite mwayèn nan separasyon neutrofil ak lenfosit pa konte selil yo te 98.3% ak 96.2%, respektivman. Flow cytometry te fèt sou 1 echantiyon pè netrofil ak lenfosit epi li endike 90.6% ak 92.2% pite, respektivman. Lòt selil yo nan preparasyon netrofil yo te divize an lenfosit (4%), monosit (2%), eozinofil (2.3%), ak basofil (0.3%). Nan preparasyon lenfosit la, lòt selil yo te netrofil (1.2%), monosit (1.4%), eozinofil (1.2%), ak basofil (1.8%). Yo te itilize done RNA-seq ki soti nan tout echantiyon endividyèl yo tou pou detèmine nivo kontaminasyon monosit nan preparasyon selil yo lè yo te detèmine si netrofil oswa lenfosit ki soti nan NLR_Echantiyon NLR_Segondè oswa NLR_Ba te ogmante siyifikativman CD14. , CD68, CD83, oswa CD163. Poukont yo, done RNA-seq yo te antre nan estimasyon pwopòsyon selil iminitè ak kansè (EPIC), yon pwogram ki fèt pou estime pwopòsyon selil iminitè ak kansè nan done ekspresyon jèn an gwo.17 EPIC te bay pwofil referans yo itilize pou selil iminitè k ap sikile san epi li gen pwofil selil B, selil T CD4 ak CD8, monosit, netrofil ak selil ki touye natirèl. Yo bay pwodiksyon an kòm fraksyon selil pou chak echantiyon.

Figure 2. Significantly differentially expressed genes from neutrophils and lymphocytes. (A) The number of significantly differentially expressed genes in neutrophils (blue) and lymphocytes (orange). (B) The principal component analysis plot of significantly differentially expressed genes in neutrophils (green and purple) and lymphocytes (red and blue) in NLR_High (circles) and NLR_Low (squares). (C) A heat map of significantly differentially expressed genes from NLR_High vs NLR_Low neutrophil RNA. (D) A heat map of significantly differentially expressed genes from NLR_High vs NLR_Low lymphocyte RNA.


Figi 2. Siyifikativman diferansye jèn eksprime soti nan netrofil ak lenfosit. (A) Kantite jèn ki eksprime anpil diferans nan netrofil (ble) ak lenfosit (zoranj). (B) Trase analiz prensipal eleman nan jèn ki eksprime anpil diferans nan netrofil (vèt ak koulè wouj violèt) ak lenfosit (wouj ak ble) nan NLR_High (sèk) ak NLR_Ba (kare). (C) Yon kat jeyografik chalè ki gen anpil diferans ki eksprime nan NLR_High vs NLR_Ba neutrophil RNA. (D) Yon kat jeyografik chalè ki gen anpil diferans ki eksprime nan NLR_High vs NLR_Ba lenfosit RNA.

RNA-seq ak analiz estatistik

Metòd detaye pou fè ekstraksyon RNA ak sekans yo prezante nan Metòd siplemantè yo. Sekans lekti yo te evalye pou bon jan kalite, epi adaptè a te pran pare lè l sèvi avèk TrimGalore! (Babraham Institute), yon script wrapper pou FastQC ak CutAdapt. Lekti ki te pase kontwòl kalite yo te aliyen ak genòm referans imen GRCh38 lè l sèvi avèk lojisyèl STAR aliyman an. Lekti ki aliye yo te trete lè l sèvi avèk Cufflinks vèsyon 2.2.1 pou analiz ekspresyon diferans lè l sèvi avèk anotasyon jèn GENCODE pou GRCh38 ak done ekspresyon nan nivo jèn yo te rapòte an fragman pou chak transkripsyon kilobaz pou chak milyon lekti ki te trase. dekouvèt pousantaj koupe P valè nan<.05, after the Benjamini-Hochberg correction for multiple testing. Normalized fold-change and P values for all expressed genes were then used as input for downstream analysis using iPathwayGuide (AdvaitaBio) and gene set enrichment analysis (GSEA) using GenePattern and MSigDB (Broad Institute). Additional figures including heat maps and scatterplots were generated in R and ClustVis.

Rezilta yo

Karakteristik pasyan yo

Sis pè echantiyon pasyan yo te chwazi pami 7 NLR_Segondè ak 9 NLR_Ba ki baze sou pi gwo kalite RNA nan pè a jan yo evalye pa nimewo entegrite RNA (RIN) (Tablo 1). ). Sis kontwòl soti nan 8 donatè ki an sante yo te egzamine tou. Nan pasyan ki enkli nan etid la, mwayèn ± devyasyon estanda NLR pou NLR_Segondè a te 4.37 ± 0.66 kont pou NLR_Ba, 1.87 ± 0. 39 (P <.0001). Mwayèn ± devyasyon estanda laj pasyan yo te 61.0 ± 17.0 ane pou NLR_Segondè ak 64.5 ± 7.5 ane pou NLR_Ba (P= .68). Tout pasyan eksepte 1 te gen maladi aortik anevrism, 9 te thoracic/thoracoabdominal, ak 2 te nan vant. Tou de pasyan ki gen anevrism aortik nan vant yo te nan gwoup NLR_Ba. Onz sou 12 pasyan yo te gen yon istwa tansyon wo. Kat sou 6 pasyan nan gwoup NLR_Segondè oswa NLR_Ba te gen yon istwa medikal anomali lipid yo. Kat pasyan nan NLR_High ak 3 pasyan nan NLR_Gwoup ki ba yo te ansyen fimè. Yon pasyan nan gwoup NLR_Low te yon fimè aktif. Senk pasyan nan NLR_Segondè ak 4 nan gwoup NLR_Ba te sou statin. Se sèlman 3 pasyan nan tou de gwoup yo te dyabetik. Yon pasyan nan chak gwoup te gen yon istwa CAD, ak 2 pasyan nan gwoup NLR_Low te gen maladi atè periferik.

Figure 3. The RNA-seq data in this investigation were used as an independent means to determine other cell contamination in the neutrophil and lymphocyte preparations. Only data from the neutrophils are shown. An EPIC analysis was performed to estimate the proportion of immune and cancer cells in bulk gene expression data. This analysis yielded the percentage of neutrophils, monocytes, B cells, CD4 T cells, CD8 T cells, natural killer (NK) cells, and other cells in the neutrophil preparation.


Figi 3. Done RNA-seq nan ankèt sa a te itilize kòm yon mwayen endepandan pou detèmine lòt kontaminasyon selil nan preparasyon netrofil ak lenfosit yo. Se sèlman done ki soti nan netrofil yo montre. Yo te fè yon analiz EPIC pou estime pwopòsyon selil iminitè ak kansè nan done ekspresyon jèn yo. Analiz sa a bay pousantaj netrofil, monosit, selil B, selil T CD4, selil T CD8, selil asasen natirèl (NK), ak lòt selil nan preparasyon neutrofil.

Transcriptom antye

Nou te obsève diferans mondyal nan transcriptom antye lè n konpare pwofil ekspresyon jèn ant netrofil ak lenfosit (Figi 1). Konklizyon sa a pa t etone paske yo te deja karakterize ekspresyon jèn espesifik pou kalite selil yo kòm diferan.19 Nan seksyon netrofil la, atravè pasyan yo nan NLR_Segondè, NLR_Ba, ak NLR{{ 4}}Gwoup kontwòl yo, te gen anpil jèn ki te kontwole ki klèman pa t 'reglemante nan seksyon lenfosit la ak vis vèrsa. Nan nivo transkriptòm antye, diferans ki genyen ant netrofil ak lenfosit espesifik selil yo te diferan ak dominan kèlkeswa NLR la oswa si yon pasyan oswa yon kontwòl. Sepandan, sou yon egzamen pi pre, diferans yo te kòmanse parèt. Yon trase analiz prensipal eleman te montre ke NLR_Kontwòl swa pou netrofil oswa lenfosit sipèpoze ak NLR_Segondè ak NLR_Ba nan tou de selil yo (Figi Siplemantè 1). Apre envestigasyon yo te chèche jwenn diferans adisyonèl ant gwoup NLR_Segondè ak NLR_Ba nan jèn yo ki eksprime anpil diferans. Yo te obsève ke 900 (74.5%) siyifikativman diferan eksprime jèn yo te obsève nan neutrophils nan NLR _High vs NLR_Ba gwoup (Figi 2A). An konparezon, lenfosit te gen sèlman 190 (15.7%) siyifikativman diferansye jèn eksprime. Yon trase analiz prensipal eleman NLR_Jèn segondè kont NLR_Jèn ki ba nan netrofil ak lenfosit revele ke gwoup NLR_Segondè vs NLR_Jèn ki ba nan netrofil yo separe an 2 zòn diferan, tandiske jèn lenfosit NLR_Segondè ak NLR_Ba te sipèpoze (Figi 2B). Yon fwa ankò, menm jan ak done transkriptòm antye yo, NLR_Kontwòl sipèpoze ak NRL_Segondè ak NLR_Ba siyifikativman diferan eksprime jèn nan tou de netrofil ak lenfosit (Figi Siplemantè 2). Pifò nan jèn yo te eksprime anpil diferans nan NLR_Segondè netrofil yo te desann soti nan NLR_Ba (Figi 2C). Yon kantite jèn ki sanble, men ki pi ba anpil, te desann nan NLR_Segondè lenfosit pase sa ki nan netrofil (Figi 2D). Done sa yo sijere ke nivo NLR yo te sitou asosye ak ekspresyon jèn ki chanje nan netrofil yo. Anplis de sa, li te bezwen konpare ak pasyan ki soti nan gwoup maladi li a NLR_Ba, pa NLR-Kontwòl, paske ansyen gwoup la byen klè separe ak NLR_Segondè men pa NLR_Kontwòl ( Figi 2B; Figi siplemantè 2).

Desert ginseng—Improve immunity (2)

cistanche tubulosa-amelyore sistèm iminitè

Anvan yo te mennen ankèt sou ekspresyon diferans jèn yo ak anrichisman seri jèn yo, etid adisyonèl yo te karakterize degre kontaminasyon monosit nan preparasyon netrofil yo. Sèvi ak done RNA-seq yo, nou te obsève ke ekspresyon makè monosit CD14, CD68, CD83, ak CD163 nan NLR_Segondè vs NLR_Netrofil ki ba oswa preparasyon lenfosit yo pa t diferan anpil. Analiz EPIC nan done neutrophil RNA-seq yo te montre ke selil ki pa iminitè ("lòt selil") ak selil T CD4 yo te pi gwo kontaminan nan preparasyon neutrofil yo (Figi 3). Eksepte pou NLR{{10}}Selil T CD4 ki ba ak selil B yo, okenn nan lòt selil ki kontamine yo pa t siyifikativman diferan nan NLR_Netrofil ki ba ak NLR_Netrofil ki wo yo. . Nan preparasyon netrofil la, kontaminasyon monosit pa analiz EPIC te sèlman 0.17% ± 0.05% pou NLR_Ba vs 0.1% ± 0.033% pou NLR_Preparasyon segondè yo (P=.12). Valè sa a endike ke kontaminasyon monosit te yon lòd nan grandè pi ba lè yo detèmine pa analiz done RNA-seq kont sitometri koule.

Figure 4. Scatter bubble plot of significantly expressed GO gene set categories for biologic processes between NLR_High and NLR_Low. The ratio of k: K on the abscissa is the number of genes that are significantly differentially expressed (k) compared with the total number of genes in the category (K). The ordinate is the significance of the enrichment expressed as the log (P value). (A) GO gene sets derived from neutrophil RNA-seq comparing NLR_High to NLR_Low. (B) GO gene sets derived from lymphocyte RNA-seq. Gene sets in the lower left corner of both plots are the least significant. Gene sets in the upper right corner of both plots are the most significant.

Figi 4. Trase ti wonn gaye nan kategori seri GO jèn yo eksprime anpil pou pwosesis byolojik ant NLR_Segondè ak NLR_Ba. Rapò k: K sou absis la se kantite jèn ki eksprime anpil diferans (k) konpare ak kantite total jèn nan kategori (K). Òdone a se siyifikasyon anrichisman an eksprime kòm boutèy la (valè P). (A) Ansanm jèn GO ki sòti nan netrofil RNA-seq konpare NLR_Segondè ak NLR_Ba. (B) seri jèn GO ki sòti nan lenfosit RNA-seq. Ansanm jen ki nan kwen gòch anba nan tou de simityè yo se pi piti enpòtan an. Ansanm jèn nan kwen anwo dwat tou de simityè yo se pi enpòtan an.

Figure 4 (continued)


Figi 4 (kontinye)

Pou egzamine nati jèn yo eksprime diferan, nou te fè yon GSEA ak kategori Gene Ontology (GO) pou pwosesis byolojik lè l sèvi avèk seri jèn yo eksprime siyifikativman diferans ant NLR_Segondè ak NLR_Ba. Rezilta yo montre nan simit ti wonn yo gaye (Figi 4). Segregasyon nan seri jèn yo nan anwo dwa chak nan simityè yo montre (1) yon gwo pousantaj nan jèn yo nan seri jèn yo ki chanje anpil ak (2) yon wo degre de siyifikasyon pou anrichisman nan seri jèn yo. Nan echantiyon nou an, trase ti wonn yo gaye yo te montre anrichisman tou de konpleman ak repons umoral GO kategori poukont yo pou tou de netrofil ak lenfosit yo. Nan netrofil, seri jèn yo pou wout klasik aktivasyon konpleman, règleman kaskad aktivasyon pwoteyin, ak repons iminitè umoral ki te medyatè pa imunoglobulin sikile yo te pi enpòtan an ak pousantaj ki pi wo nan manm seri jèn yo te chanje anpil (Figi 4A). Poukont yo, yo te obsève seri jèn ki idantik nan lenfosit yo tou gen yon gwo rapò jèn ki chanje anpil ak yon degre siyifikasyon tankou nan etid netrofil yo (Figi 4B).

Tablo 2. Ansanm jèn iminoloji nan netrofil ak lenfosit

Table 2 lists the most significantly changed immunology gene sets in neutrophils (Table 2, Panel A) and lymphocytes (Table 2, Panel B). This study compared gene expression in neutrophils or lymphocytes between NLR_High samples and NLR_Low samples. Healthy NLR_Control samples were not compared as their expression levels overlapped with NLR_High and NLR_Low patient samples in both the whole transcriptome and significantly differentially expressed gene sets. In addition, the healthy NLR_Control samples were not matched in age, disease, and surgical condition (supplemental Figures 1 and 2). In both neutrophils (Table 2) and lymphocytes (Table 2), the data indicated that the expression of gene sets related to the immune system was highly significantly different when NLR_High was compared with NLR_Low. On RNA seq, each cell type has the same findings as the other cell type. In both panels, significance levels of the major gene sets maximized at P < 1E-24. These data were highly significant regardless of whether the neutrophil or lymphocyte was examined. To focus on the highly significant content area of this RNA-seq investigation, significantly differentially expressed immunoglobulin gene expression was examined. First, a principal component analysis plot of the neutrophil genes showed that for NLR_High vs NLR_Low, the significantly differentially expressed immunoglobulin genes were segregated into 2 groups (supplemental Figure 3A). Alternatively, the lymphocytes genes of NLR_High vs NLR_Low over lapped (supplemental Figure 3A). Next, a combined heat map of immune-related gene expression between NLR_High with NLR_Low was compared in neutrophils and lymphocytes (Figure 5). Overall, when the entire heat map is examined, there is obvious downregulation of the entire gene family of immunoglobulin genes in the neutrophil NLR_High group compared with that of NLR_Low. Most genes (69/156, 44%) were immunoglobulin related. Only 12 of 156 (7.7%) genes were complement-related: C1QA, C1QB, Serping1, C2, C2R, C4BPA, C3AR1, CR1, CR1L, CFH, CFD, and CD59. In the lymphocytes group, there was also downregulation of mostly immunoglobulin genes in the NLR_High category.


Tablo 2 bay lis seri jèn iminoloji ki pi chanje nan netrofil (Tablo 2, Panel A) ak lenfosit (Tablo 2, Panel B). Etid sa a konpare ekspresyon jèn nan netrofil oswa lenfosit ant echantiyon NLR_segondè ak echantiyon NLR_ki ba. Echantiyon NLR ki an sante_Kontwòl yo pa te konpare paske nivo ekspresyon yo te sipèpoze ak echantiyon NLR_Segondè ak NLR_Ba pasyan yo nan tou de transkriptòm antye ak nan seri jèn ki eksprime anpil diferans. Anplis de sa, echantiyon an sante NLR_kontwòl yo pa t matche nan laj, maladi, ak kondisyon chirijikal (figi siplemantè 1 ak 2). Nan tou de netrofil (Tablo 2) ak lenfosit (Tablo 2), done yo endike ke ekspresyon an nan seri jèn ki gen rapò ak sistèm iminitè a te trè siyifikativman diferan lè NLR_Segondè yo te konpare ak NLR_Ba. . Sou RNA seq, chak kalite selil gen menm rezilta ak lòt kalite selil la. Nan tou de panno yo, nivo siyifikasyon pi gwo jèn yo maksimize nan P < 1E-24. Done sa yo te trè enpòtan kèlkeswa si yo te egzamine netrofil oswa lenfosit la. Pou konsantre sou zòn kontni ki trè enpòtan nan envestigasyon RNA-seq sa a, yo te egzamine ekspresyon jèn imunoglobulin ki eksprime siyifikativman diferan. Premyèman, yon trase analiz prensipal eleman nan jèn netrofil yo te montre ke pou NLR_Segondè vs NLR{_Ba, jèn imunoglobulin yo te eksprime anpil diferans yo te separe an 2 gwoup (figi siplemantè 3A). Altènativman, jèn lenfosit NLR_High vs NLR_Ba sou lapped (figi siplemantè 3A). Apre sa, yo te konpare yon kat chalè konbine ekspresyon jèn ki gen rapò ak iminitè ant NLR_Segondè ak NLR_Ba nan netrofil ak lenfosit (Figi 5). An jeneral, lè tout kat chalè a egzamine, gen evidan downregulation nan tout fanmi jèn imunoglobulin nan gwoup netrofil NLR_High konpare ak sa ki nan NLR_Ba. Pifò jèn (69/156, 44%) te gen rapò ak imunoglobulin. Se sèlman 12 nan 156 (7.7%) jèn ki gen rapò ak konpleman: C1QA, C1QB, Serping1, C2, C2R, C4BPA, C3AR1, CR1, CR1L, CFH, CFD, ak CD59. Nan gwoup lenfosit la, te gen tou downregulation nan sitou jèn imunoglobulin nan kategori NLR_Segondè.

Ansanm jèn konpleman nan netrofil ak lenfosit yo detaye nan Tablo 3. Nan tou de netrofil (Tablo 3) ak lenfosit (Tablo 3), ekspresyon jèn nan 3 seri jèn ki gen rapò ak sistèm konpleman an te trè siyifikativman diferan (P < 1E{{ 5}}) lè NLR_Echantiyon segondè yo te konpare ak NLR_Echantiyon ki ba yo. Obsèvasyon sa a te menm si konparezon an te ant RNA soti nan netrofil oswa lenfosit. 3 seri jèn yo enkli aktivasyon konpleman, chemen klasik aktivasyon konpleman, ak règleman aktivasyon konpleman. Yon trase analiz prensipal eleman nan jèn netrofil yo te montre ankò ke pou NLR_Segondè vs NLR_Ba, yo te separe jèn konpleman yo te eksprime yon fason diferan nan 2 gwoup (figi siplemantè 3B). Altènativman, jèn lenfosit NLR_High vs NLR_Ba sipèpoze (figi 3B siplemantè).

Figure 5. Heat map of significantly differentially expressed genes in the immunoglobulin gene set in neutrophils (left) and lymphocytes (right). The genes listed on the right of each heat map are the members of the immunoglobulin


Figi 5. Kat jeyografik chalè a siyifikativman diferansye jèn eksprime nan jèn imunoglobulin mete nan netrofil (agòch) ak lenfosit (adwat). Jèn yo ki nan lis adwat chak kat chalè se manm imunoglobulin nan

Yon kat chalè nan netrofil ak ekspresyon lenfosit nan yon seri jèn ki gen rapò ak konpleman konpare NLR_Segondè ak NLR_Basse yo montre nan Figi 6. Nan netrofil yo, yon kantite menmen nan jèn yo te downregulated nan la. NLR_Gwo popilasyon. Nan seri jèn sa a, menm jan ak seri jèn imunoglobulin yo, pifò jèn (69/ 86, 80%) te gen rapò ak imunoglobulin. Se sèlman 12 nan 86 (14%) se eleman konpleman ak jèn regilasyon (C1QA, C1QB, SERPING1, C2, CR2, C4BPA, C3AR1, CR1, CR1L, CD59, CFH, ak CFD). Nan gwoup lenfosit la an jeneral, te gen mwens ekspresyon jèn konpleman, ak jèn imunoglobulin yo te yon ti kras plis downregulated nan gwoup NLR_High. Paske gen yon pi gwo konpreyansyon sou jèn yo nan sistèm konpleman an konpare ak jèn yo nan sistèm imunoglobulin yo, atansyon yo te konsantre sou sistèm nan konpleman kòm yon kandida potansyèl pou jèn sib ki gen rapò ak segondè ak ba NLR. Yo te prepare yon kat chalè konpoze ki konpare NLR_High ak NLR_Low ki montre ekspresyon sistèm konpleman ak jèn ki gen rapò ak tou de echantiyon netrofil ak lenfosit (Figi 7). Pou pati ki pi, lenfosit la se pa yon sistèm selil rezèvwa pou sistèm konpleman an. Pifò jèn konpleman yo pa regilasyon nan lenfosit yo. Sèlman C1S, CR2, C5, C8G, C5, ak CFB te prezan ak yon diferans nan ekspresyon ant NLR_High ak NLR_Ba lenfosit (Figi 7). CD81 nan lenfosit se yon tetraspanin selil B. Ekspresyon C1S ak C8G yo sanble pi wo nan lenfosit NLR_Segondè pase sa yo nan lenfosit NLR_Ba, menm jan ak KLKB1, jèn pou prekallikrein plasma.

Kontrèman, nan netrofil yo, NLR{0}High te montre regilasyon konpleman jèn eleman C1QA, C1QB, C1QC, SERPING1, C1R, C4BPA, C3, ak C3AR1, ak konpleman (enibitè) jèn CD59, CFB, ak CFI. . Se sèlman jèn C2 ak CFD yo te kontwole nan pasyan NLR_High_N yo. CD59 ak C9 yo relativman regilasyon nan netrofil NLR_Ba_N konpare ak sa yo ki nan NLR_Segondè_N. FGFR4 se yon reseptè faktè kwasans. CFH te prezan men li te parèt pa te enfliyanse pa netrofil NLR_Segondè oswa NLR_Ba. Li plis eksprime nan lenfosit.

Desert ginseng—Improve immunity (12)

benefis cistanche pou gason-ranfòse sistèm iminitè

Klike la a pou w wè pwodwi Cistanche Enhance Immunity

【Mande plis】 Imèl:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Diskisyon

NLR sou konte leukosit diferans lan vin tounen yon makè ki senp ki lajman itilize pou rekonèt rezilta potansyèl danjere nan yon pakèt maladi, ki gen ladan CVD, timè solid, ak maladi enflamatwa tankou lupus sistemik eritematos ak paralezit sistemik. Nan pwòp envestigasyon retrospektiv nou yo sou pasyan ki gen CVD ateroskleroz, nou te obsève ke pasyan ki gen yon NLR segondè gen yon pi gwo pousantaj mòtalite an reta apre reparasyon ochwa anevrism aortik, yon pi gwo pousantaj konjesyon serebral/lanmò apre endarterectomy karotid prophylactique, ak yon diminye siviv anpitasyon gratis apre yo fin. revaskularizasyon femoral-popliteyo ochwa si NLR yo wo.14-16 Ankèt prezan yo te inisye pou jwenn yon baz mekanis pou NLR segondè. lenfom, plizyè timè solid, ak maladi enflamatwa tankou lupus sistemik eritematos ak paralezis sistemik. Nan pwòp envestigasyon retrospektiv nou yo sou pasyan ki gen CVD ateroskleroz, nou te obsève ke pasyan ki gen yon NLR segondè gen yon pi gwo pousantaj mòtalite an reta apre reparasyon ochwa anevrism aortik, yon pi gwo pousantaj konjesyon serebral/lanmò apre endarterectomy karotid prophylactique, ak yon diminye siviv anpitasyon gratis apre yo fin. revaskularizasyon femoral-popliteyo ochwa si NLR yo wo.14-16 Ankèt prezan yo te inisye pou jwenn yon baz mekanis pou NLR segondè.

Tablo 3. Konpleman seri jèn nan netrofil ak lenfosit

Table 3. Complement gene sets in neutrophils and lymphocytes


Pou devlope yon apwòch san patipri kòm mekanis (yo) nan efè diferans nan NLR sou rezilta CV, nou fè RNA-seq sou tou de netrofil ak lenfosit ki soti nan menm pasyan yo. Pou etid sa a, yo te rasanble tout pasyan ki gen maladi aòtik epi yo te gwoupe yo nan kategori NLR pa rezilta yo. 6 dènye echantiyon yo nan chak nan 2 kalite selil yo te chwazi pa nivo ki pi wo nan RIN yo nan RNA prepare nan echantiyon netrofil ak lenfosit pè yo san konsiderasyon sèks, laj, oswa kondisyon medikal anvan yo. Jan nou ka wè nan Tablo 1, pasyan yo nan gwoup NLR_Segondè ak NLR_Ba yo te byen menm jan ak sèlman distenge pa NLR yo.

Kalite RNA yo itilize nan etid sa a montre nan RIN ak segregasyon konplè nan modèl ekspresyon jèn ant netrofil ak lenfosit nan tout gwoup pasyan yo kolekte (NLR segondè, NLR ki ba, ak kontwòl) (Figi 1). Yon trase analiz prensipal eleman montre ke NLR_Done Kontwòl yo pa t enpòtan nan ankèt sa a paske NLR pasyan yo te sipèpoze ak NLR_Segondè ak NLR_Ba nan popilasyon netrofil ak lenfosit pasyan yo. . Analiz GSEA a te bay gwo insight sou ki seri jèn yo te rich nan seri jèn GO nan pwosesis byolojik, ak trase ti wonn nan gaye klèman demontre sa a pa trase siyifikasyon nan boutèy demi lit kont rapò a nan kantite jèn ki chanje sou kantite total jèn yo. nan seri jèn yo. Lè yo te revize, seri jèn yo ki separe tèt yo ak tout lis la te sa yo ki nan iminite umoral (iminoglobulin) ak sistèm konpleman (Tablo 2 ak 3) ki baze sou rapò ak siyifikasyon estatistik nan yon apwòch dekouvèt san patipri.

Gwo kantite jèn imunoglobulin iminitè iminitè ki enplike yo difisil pou travay avèk yo paske yo pa konnen diferans enpòtan ant jèn sa yo. Altènativman, anpil plis konnen sou sistèm konpleman an, ak konsantre sou sistèm konpleman klasik ki aktive pa imunoglobulin se yon sib rekonèt pou enflamasyon ak maladi ki gen rapò ak imunoglobulin. Done nou yo sijere ke jèn eleman konpleman klasik C1QA, C1QB, C1R, CR1, C1S, SERPING1, C2, C4BPA, C3 C3AR1, C8G, C9, ak plizyè jèn regilasyon (CD59, CFB CFI, ak CFH) yo downregulated nan netrofil pasyan yo. ak NLR segondè (Figi 7). Konklizyon sa yo frape pou 3 rezon. Premyèman, jèn ki enplike yo se sitou nan chemen konpleman klasik la. Dezyèmman, nan pasyan NLR segondè, jèn konpleman sa yo, pou pati ki pi, downregulated konpare ak sa yo nan pasyan ki ba NLR. Anfen, plis F12 eksprime nan netrofil ki soti nan NLR_Segondè pase sa yo ki soti nan NLR_Echantiyon ki ba yo. Fòm anzimatik pwodwi pwoteyin F12 (faktè XII [FXII]) aktive chemen klasik konpleman ak netrofil yo.20 Kontrèman, PLG, jèn pou plasminojèn ak activateur FXII, se downregulated nan lenfosit ak netrofil nan pasyan ki nan NLR { {21}}Segondè, sigjere ke aktivasyon FXII tèt li ka yon regilatè nan aktivasyon konpleman.

Anplis de sa, li te montre ke sistèm konpleman klasik la patisipe nan CVD akselere. Eleman konpleman 1q (C1q) se faktè inisyal nan chemen konpleman an, ki gen yon wòl enpòtan nan tou de sistèm iminitè natirèl ak akeri.21 Yo te montre C1q gen wòl doub, efè pozitif ak negatif sou ateroskleroz.22 Nan ​​klasik la. chemen konpleman, C1q gen yon wòl pwoteksyon nan etap bonè ateroskleroz la lè li kontwole siyal molekilè makrofaj atravè yon chemen konpleman endepandan, modile absorption lipoprotein aterojenik, medyatè selil apoptotik, ak eliminasyon debri selilè.23,24 Yon etid resan pa Jia. et al23 endike ke redwi serik C1q asosye ak CAD. Yon lòt etid pa Guo et al24 endike ke ogmante aktivite C1q ki asosye ak CAD. Finalman, etid resan yo endike ke pasyan ki gen dyabèt ak redwi C1q te vin pi kout siviv.25 Done sa yo endike ke egzamen an nan sistèm nan konpleman ka enpòtan nan konprann patojèn nan enflamasyon-medyatè nan CVD.

Figure 6. Heat map of significantly differentially expressed genes in the complement gene set in neutrophils (left) and lymphocytes (right). The genes listed on the right of each heat map are the members of the complement gene set. The RNA is from neutrophils or lymphocytes collected from patients with high (NLR_High) or low (NLR_Low) NLR. Six individual samples from NLR_High are compared with 6 individual samples from NLR_Low from both neutrophils and lymphocytes.

Figi 6. Kat jeyografik chalè a siyifikativman diferansye jèn eksprime nan jèn konpleman mete nan netrofil (agòch) ak lenfosit (adwat). Jèn yo ki nan lis adwat chak kat chalè se manm seri jèn konpleman an. RNA a soti nan netrofil oswa lenfosit yo kolekte nan pasyan ki gen NLR segondè (NLR_Segondè) oswa ba (NLR_Ba). Yo konpare sis echantiyon endividyèl ki soti nan NLR_Segondè ak 6 echantiyon endividyèl ki soti nan NLR_Ba nan tou de netrofil ak lenfosit.

Figure 7. Composite heat map of complement and related genes from neutrophil or lymphocyte NLR_High or NLR_Low. In each category, the composite heat map was prepared from 6 individual RNA-seq samples from each cell type.


Figi 7. Kat chalè konpoze konpleman ak jèn ki gen rapò ak netrofil oswa lenfosit NLR_Segondè oswa NLR_Ba. Nan chak kategori, yo te prepare kat chalè konpoze a nan 6 echantiyon endividyèl RNA-seq ki soti nan chak kalite selil.

Recently, a retrospective investigation of the data from the CANTOS, JUPITER, SPIRE-1, SPIRE-2, and CIRT trials on 60 087 patients was conducted to determine whether NLR predicts major adverse CV events and is modified by anti-inflammatory therapy.26 NLR modestly correlated (ie, r 2 ≤ 0.26) with interleukin 6, C-reactive protein, and fibrinogen levels but minimally with lipids.25 In all 5 trials, NLR predicted incident CV events and death in patients with NLR >3.08.26 Malgre ke lipid bese pa te gen okenn enpak sou NLR, terapi anti-enflamatwa ak canakinumab, yon inibitè interleukin 1 bese NLR (P <.0001).26 Done sa yo sijere ke NLR ka yon makè pou CVD endepandan de lipid ak la. enfliyans nan statins. Analiz ad hoc sa a nan plizyè esè potansyèl randomized sijere ke NLR ka yon faktè risk endepandan pou mòtalite nan CVD.

Gen kèk limit nan etid sa a. Preparasyon neutrofil nou yo te gen 4% lenfosit ak 2% kontaminasyon monosit pa sikometri koule. Paske neutrophils yo pa konnen pou fè sentèz imunoglobulin, chanjman jèn iminoglobin netrofil yo ta ka soti nan kontamine selil B yo. Sou analiz EPIC la, te gen yon ogmantasyon siyifikatif nan kontaminasyon selil B nan echantiyon NLR-Low yo. Obsèvasyon sa a sijere ke yon ogmantasyon nan nivo jèn imunoglobulin nan NLR_echantiyon netrofil ki ba yo ka rive nan kontaminasyon selil B yo. Kidonk, jèn imunoglobulin redwi nan echantiyon NLR_segondè yo ka akòz ogmante selil B nan echantiyon NLR_Echantiyon ki ba yo epi yo pa nesesèman redwi nivo jèn imunoglobulin nan echantiyon NLR_segondè yo. Menm jan an tou, netrofil yo pa konnen yo dwe selil ki pwodui konpleman. De pousan kontaminasyon ak monosit ta ka sous jèn konpleman yo. Sepandan, lè nou itilize done RNA seq yo, nou te obsève ke pa gen okenn diferans enpòtan nan kontaminasyon monosit nan preparasyon netrofil yo ant NLR_Ba ak NLR_Segondè. Anplis de sa, fè yon analiz EPIC nan done RNA-seq yo montre ke kontaminasyon monosit te<0.1% (<1:1000) of the neutrophil preparations, indicating that the RNA-seq was unlikely influenced by contaminating monocytes (Figure 3). The contaminating B cells in the NLR_Low samples do not influence the complement data observed. Finally, even now, it is not known that the changes we observed in complement and immunoglobulin genes are specific to vascular surgery patients with high NLR or older patients in general. NLR and genetic studies need to be performed on healthy age- and sex-matched patients without CVD.

cistanche benefits for men-strengthen immune system

benefis cistanche pou gason-ranfòse sistèm iminitè

An rezime, konklizyon kadinal nan ankèt sa a se ke, nan eta NLR segondè, anpil jèn eleman konpleman ak kèk nan regilatè yo downregulated nan netrofil yo. Li pa klè sou siyifikasyon an jeneral ak eta deklanchman nan jèn konpleman yo idantifye anba reglemante yo. Paske seri jèn konpleman yo diminye anpil, nou espekile ke moun ki gen NLR_siviv apre operasyon ki wo ak pi kout gen yon pèt gwo mekanis pwoteksyon CV sistèm konpleman yo bay yo. Evalyasyon sa a bezwen egzamine prospectiveman nan envestigasyon klinik pou mekanis ki kache (yo) pou rezilta sa a.

Referans

1. Ross R. Ateroskleroz–yon maladi enflamatwa. N Engl J Med. 1999;340(2):115-126.

2. Getz GS. Seri revizyon tematik: sistèm iminitè a ak aterojenèz. Fonksyon iminitè nan aterojenèz. J Lipid Res. 2005;46(1):1-10.

3. Hansson GK, Hermansson A. Sistèm iminitè a nan ateroskleroz. Nat Immunol. 2011;12(3):204-212.

4. Duffy BK, Gurm HS, Rajagopal V, Gupta R, Ellis SG, Bhatt DL. Itilite yon rapò ki wo netrofil ak lenfosit nan predi mòtalite alontèm apre entèvansyon perkutanè kardyovaskulèr. Mwen J Cardiol. 2006;97(7):993-996.

5. Tamhane UU, Aneja S, Montgomery D, Rogers EK, Eagle KA, Gurm HS. Asosyasyon ant rapò admisyon netrofil ak lenfosit ak rezilta nan pasyan ki gen sendwòm kardyovaskulèr egi. Mwen J Cardiol. 2008;102(6):653-657.

6. Gibson PH, Croal BL, Cuthbertson BH, et al. Pwopòsyon netrofil-lenfosit preoperasyon ak rezilta nan grèf kontoune atè kowonè. Am Heart J. 2007;154(5):995-1002.

7. Fici F, Celik T, Balta S, et al. Efè konparatif nebivolol ak metoprolol sou lajè distribisyon selil wouj ak rapò neutrofil / lenfosit nan pasyan ki fèk dyagnostike tansyon wo esansyèl. J Cardiovasc Pharmacol. 2013;62(4):388-393.

8. Karaman M, Balta S, Ay SA, et al. Efè konparatif valsartan ak amlodipin sou nivo vWf ak rapò N/L nan pasyan ki fèk dyagnostike tansyon wo. Clin Exp Hypertens. 2013;35(7):516-522.

9. Uthamalingam S, Patvardhan EA, Subramanian S, et al. Itilite rapò netwofil ak lenfosit nan predi rezilta alontèm nan ensifizans kadyak egi dekonpanse. Mwen J Cardiol. 2011;107(3):433-438.

10. Bhat TM, Afari ME, Garcia LA. Rapò lenfosit netrofil nan maladi vaskilè periferik: yon revizyon. Ekspè Rev Cardiovasc Ther. 2016;14(7):871-875.

11. Bhutta H, Agha R, Wong J, Tang TY, Wilson YG, Walsh SR. Pwopòsyon netrofil-lenfosit predi siviv nan mwayen tèm apre yon gwo operasyon vaskilè ochwa: yon etid kwa-seksyonèl. Vasc Endovasc Surg. 2011;45(3):227-231.

12. Appleton ND, Bailey DM, Morris-Stiff G, Lewis MH. Rapò netrofil ak lenfosit predi mòtalite perioperativ apre reparasyon ochwa louvri nan anevrism aortik nan vant. Vasc Endovasc Surg. 2014;48(4):311-316.

13. Bath J, Smith JB, Kruse RL, Vogel TR. Rapò netwofil-lenfosit predi severite maladi ak rezilta apre pwosedi ekstremite pi ba yo. J Vasc Surg. 2020;72(2):622-631.

14. King AH, Schmaier AH, Harth KC, et al. Elve rapò netrofil-lenfosit predi mòtalite apre reparasyon ochwa anevrism andovaskilè. J Vasc Surg. 2020;72(1):129-137.

15. King AH, Kim AH, Kwan S, et al. Yon rapò ki wo netrofil-a-lenfosit ki asosye ak rezilta pi mal apre endarterectomy karotid nan pasyan ki asymptomatik. J Stroke Cerebrovasc Dis. 2021;30(12):106120.

16. King AH, Kwan S, Schmaier AH, et al. Yon rapò wo netrofil-a-lenfosit ki asosye ak diminye siviv san anpitasyon apre revaskularizasyon femoropopliteal perkutane. Int Angiol. 2021;40(5):442-449.

17. Racle J, de Jonge K, Baumgaertner P, Speiser DE, Gfeller D. Enimerasyon similtane nan kansè ak kalite selil iminitè soti nan done ekspresyon jèn timè en. Elife. 2017;6:e26476.

18. Trapnell C, Roberts A, Goff L, et al. Jèn diferans ak analiz ekspresyon transkripsyon eksperyans RNA-seq ak TopHat ak Cufflinks. Nat Protoc. 2012;7(3):562-578.

19. Palmer C, Diehn M, Alizadeh AA, Brown PO. Selil-kalite pwofil ekspresyon jèn espesifik nan leukosit nan san periferik imen. BMC Genomics. 2006;7:115.

20. Stavrou EX, Fang C, Bane KL, et al. Faktè XII ak uPAR kontwole fonksyon netrofil pou enfliyanse gerizon blesi. J Clin Invest. 2018;128(3): 944-959.

21. Dunkelberger JR, Song WC. Konpleman ak wòl li nan repons iminitè natirèl ak adaptasyon. Selil Res. 2010;20(1):34-50.

22. Speidl WS, Kastl SP, Huber K, Wojta J. Konpleman nan ateroskleroz: zanmi oswa lenmi? J Tromb Haemost. 2011;9(3):428-440.

23. Jia Y, Wen W, Yang Y, et al. Wòl nan klinik konbine C1q serom ak hsCRP nan predi maladi atè kowonè. Clin Biochem. 2021;93:50-58.

24. Guo S, Mao X, Li X, Ouyang H, Gao Y, Ming L. Serom konpleman aktivite C1q ki asosye ak maladi atè kowonè obstriktif. Avant Cardiovasc Med. 2021;8:618173.

25. Cavusoglu E, Kassotis JT, Anwar A, et al. Itilite konpleman C1q pou predi mòtalite 10-nan gason ki gen dyabèt melitus refere yo pou anjyografi kowonè. Mwen J Cardiol. 2018;122(1):33-38.

26. Adamstein NH, MacFadyen JG, Rose LM, et al. Rapò netwofil-lenfosit la ak evènman ateroskleroz ensidan: analiz soti nan senk esè owaza kontanporen. Eur Heart J. 2021;42(9):896-903.

Ou ka renmen tou