Yon wòl pou BATF3 nan diferansyasyon Tu9 ak T-selil-kondwi L Pathologies MuCOsal (Pati 1)

Pou aprann plis enfòmasyon tanpri kontaktedavid.wan@wecistanche.com

Selil T helper 9 (T,9) yo enpòtan pou devlopman maladi enflamatwa ak alèjik. Rezo transkripsyon TH9 la konvèje siyal ki soti nan sitokin ak prezantasyon antijèn men li pa fin konprann. Isit la, nou idantifye TL1A, yon manm nan superfamily TNF, kòm yon pwodiktè fò nan diferansyasyon sourit ak moun TH9.Mekanistikman, TL1A te pwovoke ekspresyon faktè transkripsyon BATF ak BATF3 epi li te fasilite lyezon yo ak pwomotè //9 ki mennen nan sekresyon amelyore I-9, BATF-ak BATF3-defisyans ki te afekte IL{{6} } sekresyon anba kondisyon Tμ9 ak Ty9-TL1A-polarizing. Nan vivo, lè l sèvi avèk yon modèl transfè selil T, nou demontre ke TL1A ankouraje IL-9-depandan, T,9 selil-pwovoke enflamasyon entesten ak nan poumon. Netralize antikò IL-9 atenue enflamasyon mukozal TL1A-kondwi. Selil Batf3-7T{_9-TL1A pwovoke enflamasyon redwi akekspresyon cytokinean vivo konpare ak selil WT yo. Rezilta nou yo demontre ke TL1A ankouraje diferansyasyon ak fonksyon selil T_9 epi li defini yon wòl pou BATF3 nan enflamasyon mukozal ki baze sou selil T.

Klike la a pou aprann plis sou Cistanche

ENTWODIKSYON

Sous-ansanm espesyalize nan selil T helper (T-) jwe yon wòl entegral nan kenbe omeyostazi tisi yo ak pandan devlopman nan maladi enflamatwa nan sifas mukozal yo. Dènyèman, selil TH9 yo te idantifye kòm yon sou-ansanm selil T endepandan ki pwodui sitou IL-9 men tou IL-10 ak IL{-21.12 selil Tμ9 yo te enplike nan plizyè maladi, ki gen ladan poumon alèjik. enflamasyon, eksperimantal otoiminitèansefalomielit(EAE), kolit, 3- Dènyèman, selil TH9 te gen enfeksyon vè parazit ak kansè. Yo rapòte ke yo jwe yon wòl nan maladi entesten enflamatwa (IBD).-9Pasyan kolit ilsè (UC) yo gen anpil kantite IL-9 mukozal plis selil T ak reseptè IL-9 (IL-9). -9R) se upregulated sou epithelium entesten an. Defisi IL-9 siprime devlopman egi ak kwonikkolit oxazolone-induit, yon modèl ki imite UC. Nan pasyan ki gen maladi Crohn a (CD), nivo segondè-8-10 IL-9 nan serik yo gen rapò ak maladi grav.

Fig.1 TL1A amelyore diferansyasyon selil TH9 murin ak imen. Nayif murin CD4 plis selil T yo te diferansye anba Ty0-oswa T9-kondisyon polarize avèk oswa san TL1A pou 3 jou, ak yon analiz ELJSA nan ]L-9, IL{{9} }, ak sekresyon IL-13. b Selil T CD4 moun nayif yo (CD4'CD45RACD45ROCD25) yo te izole nan PBMC donatè ki an sante yo epi yo te diferansye anba kondisyon TH9-polarize avèk oswa san TL1A pou 3 jou. Analiz ELISA nan sekresyon IL-9 imen nan 48 ak 72 èdtan. Trase bwat-moustach ki montre konsantrasyon IL-9 nan supernatant kilti pou selil trete TH9 ak TH9-TL1A. Bwat yo reprezante medyàn ak 25yèm ak 75yèm percentile, epi moustach yo reprezante valè minimòm ak maksimòm distribisyon an. N=7-9. Done yo reprezante mwayen± SD yon eksperyans endepandan sou kat (esperyans endepandan. *p< 0.05,***p=""><0.005 determined="" by="" student's="">

Selil TH9 yo diferan de selil nayif CD4 plis T an prezans TGF- 1 ak IL-4. Plizyè faktè transkripsyon en nan reseptè T-selil (TCR), TGF- 1, ak IL-4 reseptè yo obligatwa pou diferansyasyon selil TH9 ki gen ladan IRF4, STAT6, GATA3, PU.1, NF- kB, ak debaz leucine zip transkripsyon faktè ki tankou ATF (BATF.11-15 Sepandan, pwogram nan transcription ak deklannche enflamatwa ki kondwi diferansyasyon nan selil Tμ9 yo toujou pa byen konprann ak yon faktè ki defini liyaj ki asosye ak lL{{ 17}} ekspresyon pa te idantifye.

Fanmi faktè transkripsyon BATF konpoze deBATF, BATF2, epiBATF3epi li fè pati fanmi faktè transkripsyon AP-1 ki enkli JUN ak FOS. Faktè transkripsyon nan fanmi BATF yo konpoze de yon domèn ki konekte ADN ak motif zip leucine men yo manke yon domèn transaktivasyon epi yo te dekri okòmansman kòm regilatè negatif aktivite AP-1." Sepandan, etid resan yo te demontre manm fanmi BATF yo. kominike avèk faktè transkripsyon IRF ki gen ladan IRF4 ak IRF8, epi li mare ak sekans eleman konpoze AP-1-IRF pou kontwole jèn sib yo nan selil T ak selil dendritik. Yo montre ke BATF nesesè pou devlopman selil Ty9 tou. kòm TH2, TA17, ak Try cells.15,19BATF3 te dekri kontwole devlopman nan CD8a plis ak CD103 plis selil dendritik. "2' Kontrèman ak BATF, yon fonksyon nonredondant nan BATF3 nan devlopman nan selil Tu pa te demontre. Anplis de sa, estimilis ekstraselilè ki ka aktive chemen BATF3 nan selil CD4 plis Tu yo rete yo dwe klè.

Fig.2 TL1A upregulates ekspresyon BATF ak BATF3 pandan diferansyasyon T,9. Profile transkripsyon selil TH9 ak TH9-TL1A pa sekans RNA. Kat chalè ki montre done RNA-sekans lè l sèvi avèk 100 jèn ki pi gwo yo ak pi gwo IQR (ranje entèkwatil). Dendrogram yo sou bò gòch la ak pi wo a kat chalè a reprezante gwoupman jèn (ranje) ak echantiyon (kolòn). b Selil CD4 plis T nayif yo te diferansye nan diferan subsets TH ak Tregs pou 3 jou. Te ekspresyon relatif BATF mRNA analize pa PCR,c Naif CD4 plis selil T yo te diferansye anba kondisyon TH0- oswa TH9-polarize ak oswa san TL1A pou peryòd tan endike yo. Analiz PCR nan ekspresyon mRNA relatif BATF, d Ko-tach nan BATF ak IRF4 (anlè). Analiz kantitatif pousantaj selil BATFIRF4 (anba).e Ko-tach BATF ak IL-9. fg

TL1A. f Reprezantan tach intraselilè IL-9 ak BATF nan 48h.g Frekans nanBATFfIL-9 plis selil Tdiferansye anba kondisyon Ty9 ak T9-TL1A. Mwayen yo montre. Chak senbòl reprezante yon donatè endividyèl. N=4. h Ekspresyon mRNA relatif Batf3 nan diferan sou-ansanm Th murin ak Tregs te analize pa qPCR.I Ekspresyon mRNA relatif Batf3 nan pwen tan endike yo. j Ko-tach reprezantan BATF3 ak IL-9. k frekans nanBATF3IL-9 plis selil Tdiferansye anba kondisyon Ty9 ak TH9-TL1A. Mwayen yo montre. Chak senbòl reprezante yon eksperyans endividyèl. N=3. Im Naif imen CD4 plis selil T yo te diferansye anba kondisyon T,9-polarize avèk oswa san TL1A. I Reprezantan tach intraselilè IL-9 ak BATF3 nan 48 h. m Frekans BATF3L-9 plis selil T diferansye anba kondisyon TH9 ak TH9-TL1A. Mwayen yo montre. Chak senbòl reprezante yon donatè endividyèl. N=4. Done reprezante vle di ± SD nan yon eksperyans endepandan soti nan de (a) oswa omwen twa (bd. i. k) eksperyans endepandan.*n<0.05. n=""><0.01.***n <="" 0.005="" as="" determined="" by="" student's="">

Nou te fèk montre ke TL1A, yon manm superfamiy TNF ki jwe yon wòl enpòtan nan maladi iminitè ki gen ladan IBD, 25 pwovoke sekresyon IL-9 nan selil Tu17 yo. "Anplis de sa, yon piblikasyon resan demontre ke TL1A, atravè reseptè DR3 li yo, ankouraje diferansyasyon TA9 atravèIL-2-epiSTAT5-depandan men PU.1- ak STAT6-mekanism endepandan nan enflamasyon nan poumon alèjik.2' Sepandan, pwogram transkripsyon yo pwovoke pa TL1A ak patojèn nan selil TH9 TL1A-induit nan enflamasyon entesten ak IBD rete yo dwe. elisid.

Isit la, nou demontre ke TL1A ankouraje diferansyasyon nan selil TH9 imen ak murin atravè yon nouvo chemen siyal. Nou defini BATF3 kòm yon regilatè transkripsyon roman pou diferansyasyon selil Tp9 yo. TL1A mennen nan renovasyon kwomatin nan plas lI9 ak rekritman nan faktè transkripsyon pyonye IRF4, ak BATF, ki se eleman enpòtan pou IL-9 aktivasyon transcription, ak BATF3 nan rejyon konsève nan 9 pwomotè yo. Anplis de sa, TL1A kontwole ekspresyon BATF ak BATF3 nan yon fason ki depann de STAT. ) selil yo gen pwoblèm nan pwodiksyon IL-9 yo.TH9-TL1Aselil yo trè pro-enflamatwa nan vivo lè yo transfere adoptif nan Ragi-7-sourit kòm evidan pa gwo enflamasyon mukozal nan trip yo ak nan poumon, ki te atenye pa tretman ak netralize IL-9 antikò. Transfè adoptif selil Batf3-/TH{9-TL1A nan sourit1-7Rag mennen nan enflamasyon mukozal ak pwodiksyon sitokin siyifikativman redwi an konparezon ak selil WT TH9-TL1A. Done nou yo demontre yon nouvo wòl pou TL1A ak BATF3 nan devlope selil patojèn efèktè T,9 epi idantifye chemen siyal sa a kòm yon sib potansyèl terapetik nan patoloji T_9-ki gen ladan IBD ak maladi alèjik nan poumon.

REZILTA

TL1A amelyore diferansyasyon selil Tμ9 murin ak imen an vitro Pou detèmine efè TL1A sou diferansyasyon TH9, nou ankouraje selil T nayif CD4 nan kondisyon TH9 avèk oswa san TL1A. TL1A siyifikativman amelyore sekresyon IL-9 ak ekspresyon I/9 mRNA (Fig. 1a, Figi Siplemantè 1a). TL1A pou kont li pa t 'pwovoke sekresyon IL-9, sa ki sijere ke TL1A aji sinèrji ak TGF- 1 ak IL-4 pou ankouraje pwodiksyon IL-9. Sekresyon ak ekspresyon mRNA nan T-9-sitokin ki asosye L-10 ak IL{-13 te amelyore tou pa TL1A (Fig.1a, Figi Siplemantè 1a, b). Konfòm ak rapò anvan yo, eksperyans tan-kou tach intraselilè IL-9 revele ekspresyon IL-9 pasajè ak yon endiksyon maksimòm nan kondisyon T{-9 nan jou 3 ak yon bès tounen nan debaz nan jounen an. 5 (Figi Siplemantè 1b).28,2TL1A pwovoke yon pousantaj siyifikativman pi wo nan IL-9-pwodwi selil pandan tout tan eksperyans yo ak yon chanjman nan sinetik nan direksyon yon endiksyon IL-9 pi bonè ak pi fò ki menm nan yon pwen tan bonè depase maksimòm pwodiksyon IL -9 pwovoke anba kondisyon TH9 (figi siplemantè 1b). Nou te obsève tou yon ogmantasyon nan IL-9 plis IL{-10 plis selil nan prezans TL1A (figi siplemantè 1b). Nou pa t obsève okenn chanjman nan direksyon lòt sou-ansanm Tu (figi siplemantè 1c). Amelyorasyon diferansyasyon TH9 pa TL1A te konplètman depann sou reseptè DR3 li yo (figi siplemantè 1d). Ansanm, done sa yo sijere ke TL1A fè sinèrji ak TGF- 1 ak IL{-4 nan diferansyasyon TA9 ak pwodiksyon IL{-9.

TL1A tou siyifikativman amelyore diferansyasyon TH9 nan yon anviwònman espesifik antijèn lè l sèvi avèk selil OVA-espesifik OT-ll (figi siplemantè 1e, f). TL1A pa t 'afekte pwopagasyon selil pandan diferansyasyon TH9 (figi siplemantè 1g), jan yo te demontre pou memwa CD4 plis selil T. "Done sa yo sijere ke TL1A amelyore diferansyasyon TH9 san yo pa afekte pwopagasyon. Anplis de sa, nou te egzamine pwodiksyon IL-9 nan selil ki te diferansye nan kondisyon Ty9 ak TH{9-TL1A pou 3 jou ak restimulated ak anti-CD3s/ CD28. Nou te obsève ogmante pwodiksyon IL-9 nan selil TH{9-TL1A konpare ak selil TH9 apre eksitasyon segondè ki te ogmante plis nan prezans TL1A (figi siplemantè 1h, i). Done sa yo sijere ke TL1A tou amelyore pwodiksyon IL-9 soti nan selil TH9 diferansye yo. Apre sa, nou detèmine efè TL1A sou diferansyasyon selil Tu9 imen yo. Selil CD4 plis T nayif yo te izole nan PBMC ki soti nan donatè ki an sante epi yo te ankouraje anba kondisyon Tu9 an prezans. Nan TL1A imen an, ki konsistan avèk done nou yo ki soti nan selil TH9 sourit yo, adisyon TL1A a ogmante anpil sekresyon IL-9 nan kilti selil TH9 imen (figi 1b).

TL1A pwovoke ekspresyon faktè transkripsyon BATF ak BATF3 Pou eksplike chemen siyal TL1A pwovoke, nou itilize sekans RNA pou evalye pwofil transcriptomik nan selil TH9 ak TH{4}}TL1A. TL1A pa t chanje anpil pwofil transkripsyon TH9 a ki endike ke TL1A pa t gen diferansyasyon globalman TH9 (done yo pa montre). Sepandan, 219 jèn yo te eksprime diferan nan selil TH9-TL1A (Fig. 2a, Tablo siplemantè 1 ak 2). Analiz anrichisman chemen idantifye chanjman enpòtan nan jèn ki enplike nan reseptè sitokin-sitokin ak chemen siyal JAK-STAT nan kondisyon T, 9-TL1A (Tablo siplemantè 1 ak 2, done yo pa montre). BATF3 ak plizyè jèn ki reglemante BATF yo te siyifikativman kontwole anba kondisyon T,9-TL1A (Tablo Siplemantè 3) ki sijere ke faktè transkripsyon BATF3 ak BATF ta ka patisipe nan diferansyasyon selil TH9-TL1A yo. Yo dekri BATF kòm obligatwa Pou detèmine devlopman selil Tp17 ak TA9.15,31-34 -si TL1A aktive manm fanmi BATF, nou te premye evalye nivo ekspresyon BATF nan diferan sous-ansanm Tu epi detekte ekspresyon mRNA BATF fò nan Selil TH9 ak TH2 (figi 2b). TL1A plis amelyore ekspresyon BATF anba kondisyon Tu9, patikilyèman nan jou 1 lè kondisyon TH9 pou kont yo pa ase pou pwovoke mRNA BATF (Fig.2c). TL1A pou kont li pwovoke BATF mRNA nan yon degre menm jan ak kondisyon Tp9 (Fig. 2c). Tach intraselilè pou BATF konfime ke Ty 9- TL1A eksitasyon ogmante siyifikativman pousantaj nan BATF plis selil (figi 2d). Anplis de sa, TL1A pou kont li te ogmante pousantaj nan BATF plis selil ak pi enpòtan pousantaj nan BATF * IRF4 plis selil konpare ak kondisyon TH9 sijere ke TL1A ta ka amelyore fòmasyon nan IRF 4- BATF konplèks koperativ (figi 2d). Eksitasyon TH9-TL1A te ogmante tou pousantaj BATF plis IL-9 plis selil (figi 2e).

Anplis de sa, selil TH9 imen yo te gen yon pousantaj siyifikativman pi wo nan IL-9-pwodwi selil lè yo ankouraje ak TL1A (figi 2f, g). Miyò, majorite selil ki pwodui IL-9-ko-eksprime BATF. Ko-tach nan BATF ak IRF4 te montre ke adisyon a nan TL1A ogmante pousantaj la nan BATF * IRF4 plis selil pandan diferansyasyon nan T-9 imen (done yo pa montre), sijere ke amelyorasyon nan pwodiksyon IL-9. atravè chemen siyal BATF pa TL1A konsève ant selil TH9 sourit ak imen. Kontrèman ak BATF, wòl BATF3 nan diferansyasyon selil TH yo mwens defini. Pou konfime done RNA-seq nou yo, nou te detèmine nivo ekspresyon Batf3 nan selil T-9 ak lòt sous-ansanm TH epi nou te jwenn ekspresyon mRNA Batf3 ki pi wo nan T-9, T,1, ak TH2. selil (figi 2h). TL1A amelyore ekspresyon Batf3 nan kondisyon T-9 (Fig.2i). Tach intraselilè pou BATF3 konfime ke T, 9- TL1A eksitasyon siyifikativman ogmante pousantaj nan BATF3 plis IL-9 plis selil (Fig.2j, k).Nan selil T9 imen, TL1A siyifikativman amelyore ekspresyon de BATF3. plis IL-9 plis selil(Fig.2l, m). Menm jan ak BATF, majorite selil ki pwodui IL-9-koeksprime BATF3.

Fig, 3 TL1A amelyore lyezon BATE IRF4, ak BATF3 ak pwomotè //9 pandan diferansyasyon Ty9, a, b Naif murin CD4 plis T selil yo te diferansye anba kondisyon TH0- oswa Tμ9-polarize ak oswa san TL1A pou 2（BATF, IRF4, ak AcH3）, oswa 3（BATF3） jou. ChP tès yo te fè pou BATF, IRF4, BATF3, oswa AcH3 obligatwa nan sekans ki pa kode konsève (CNS) 1 (a) ak CNS 0 (b) nan //9. Done yo reprezante mwayen ±SD yon eksperyans endepandan sou de eksperyans endepandan.*p<><>< 0.005="" as="" determined="" by="" student's="">

BATF ak BATF3 se faktè transkripsyon kritik nan diferansyasyon T_9 TL1A-induit.

Pou plis defini wòl nan BATF ak BATF3, nou te fè chromatin immunoprecipitation (ChIP) tès yo detèmine obligatwa nan de Il9 konsève noncoding sekans (Il9 CNS1, CNSO). ak TH9-TL1A plis ranfòse obligatwa BATF (Fig.3a). Nan plis en I/9 CNS 0, TL1A tou amelyore BATF obligatwa anba kondisyon T,9 pandan y ap TL1A pou kont li pa te gen okenn efè (Fig.3b). TL1A amelyore IRF4 obligatwa nan kondisyon Ty9 nan CNS1 ak CNS 0 (Fig.3a, b). Enteresan, obligatwa acetylated hisstone 3 (AcH3) nan CNS1 ak CNSO ki te deja dekri pou fasilite renovasyon chromatin nan Il9 locus la pandan diferansyasyon TH9 te amelyore tou anba kondisyon Ty 9- TL1A (Fig.3a, b). Liaison BATF3 pou CNS1 te upregulated nan TH9 cellules Et Liaison a te vin pi plis amelyore anba kondisyon TH9-TL1A pandan ke BATF3 pa mare ak CNS0 (Fig.3a, done pa montre). Done sa yo sijere ke TL1A amelyore BATF, BATF3, ak IFR4 obligatwa nan pwomotè //9 nan kondisyon TH9 pou pwovoke ekspresyon ll9. Pou konfime wòl BATF ak BATF3 nan selil T ki depann de TL1A ak Batf3-7-. IL-9, IL-Ty9 diferansyasyon, nou te itilize Batf{7- a 10, epi pwodiksyon IL{-13 te andikape anpil nan BATF-/-selil anba kondisyon Tμ9 （Fig. 4a-d). Sepandan, eksitasyon TL1A omwen pasyèlman simonte egzijans pou BATF pou pwodiksyon IL-9 ak IL{-13 pandan diferansyasyon Ty9 (Fig.4a, b, d). Nan absans BATF3, endiksyon IL-9 te siyifikativman redwi, patikilyèman anba kondisyon Tμ{9-TL1A (Fig.4e,f, Figi Siplemantè 2a). Kontrèman ak BATF, BATF3 pa te obligatwa. pou ekspresyon -10 oswa IL-13 (Fig.4g, h, Figi Siplemantè 2b, c). Pou defini chemen siyal ki mennen nan BATF ak BATF3 regilasyon an prezans TL1A, nou itilize Stat{ {79}}ak p50-/selil. Selil p50-/TH9 yo te redwi pousantaj BATF plis selil IRF4t ak ogmantasyon nan pousantaj BATF plis IRF4 plis selil anba eksitasyon TL1A te prèske nèt aboli (figi siplemantè 3a, b). Regilasyon BATF ak Batf3 mRNA anba kondisyon T.9 te p50-endepandan, pandan ke amelyorasyon ekspresyon BATF ak Batf3 anba kondisyon TH{9-TL1A te konplètman p50-depandan (figi siplemantè 3c , d). Selil Stat6-/T9 yo te redwi pousantaj selil BATFIRF4 plis ak ogmantasyon yo anba eksitasyon Tμ{9-TL1A te konplètman aboli (figi siplemantè 4a, b). Menm jan an tou, regilasyon BATF ak Batf3 mRNA te konplètman depann sou STAT6 anba kondisyon TH9 ak TH9-TL1A (Figi siplemantè 4c, d). Nou pa obsève okenn efè enpòtan nan deficiency BATF oswa BATF3 sou ekspresyon Batf3 ak BATF, respektivman, ki sijere ke pa gen okenn konpansasyon ant de faktè transkripsyon yo (figi siplemantè 5). Ansanm, done sa yo sijere ke BATF ak BATF3 jwe wòl enpòtan ak diferan pandan diferansyasyon T_9 nan prezans TL1A e ke ogmante ekspresyon BATF ak BATF3 anba eksitasyon TL1A depann de STAT6 ak chemen kanonik NF-KB la. Apre sa, nou te fè sekans RNA sou selil WT ak Batf{3-/-Tμ{9-TL1A. Totalman, 139 jèn yo te eksprime diferan nan selil WT ak Batf3-7Ty9- TL1A (Fig.4i, Tablo Siplemantè 4). Analiz anrichisman chemen ontoloji jen yo te idantifye chanjman enpòtan nan jèn ki enplike nan règleman transkripsyon, pwopagasyon selilè, ak transdiksyon siyal entraselilè (Tablo siplemantè 5 ak 6). Rezilta sa yo revele yon wòl pou BATF3 nan diferansyasyon selil Ty9-TL1A yo. Selil T-9-TL1A yo trè patojèn nan vivo Pou detèmine potansyèl patojèn nan selil TH{9-TL1A nan vivo, nou te transfere adoptif ansyen CD45.1 ki diferansye ak Tμ9 oswa TA9-TL1A. selil yo nan Rag1-'-sourit. Sourit ki te resevwa selil Ty9 pa t 'devlope pèdi pwa enpòtan (figi 5a). Sepandan, sourit ki te resevwa selil TH9-TL1A te pèdi pwa epi yo te devlope enflamasyon entesten pi grav, sitou nan ti trip la (figi 5a-c). Nou te obsève tou enflamasyon grav nan poumon, ki karakterize pa enfiltrasyon selilè peribronchial ak perivaskilè nan selil enflamatwa nan benefisyè TA9-TL1A. Tach ak Alcian Blue peryodik asid-Schiff (AB-PAS) te montre ipèproliferasyon selil ki pwodui mucin nan epithelium Airway moun k ap resevwa Ty 9-TL1A (figi siplemantè 6a, b). Nou te obsève pi gwo selilè nan larat ak selil mononikleyè lamin pwòp (LPMC), ak pi gwo pousantaj ak nimewo absoli nan selil larat, MLN, ak LPMC CD4 plis nan moun k ap resevwa TH9-TL1A (figi 5d, e) ki sijere ke Ty. 9-Selil TL1A yo gen yon pi gwo potansyèl proliferasyon an vivo. Tach Ki67 konfime ke selil ki soti nan MLN, larat ak LPMC ki soti nan moun k ap resevwa TH9-TL1A yo gen plis proliferasyon menm 6 semèn apre transfè selil T (figi 5f). Siyifikativman pi wo sekresyon IL-13 ak IL{-17 nan selil MLN anti-CD3/anti-CD{28-restimulé nan men moun k ap resevwa TH9-TL1A yo (figi 5g), ak siyifikativman pi wo sekresyon IL-9 ak IL{-13 nan anti-CD3/anti-CD{28-restimulé LPMC nan men moun ki resevwa Ty{9-TL1A (figi 5h). Nou te obsève yon kantite absoli ki pi wo nan selil lasèn ak MLN IL{-9 plis, IL{-13 plis, ak IL{-17 plis ak yon kantite absoli ki pi wo nan MLN, las, ak LPMC CCR6 plis ak CD103 plis selil T nan benefisyè TH9-TL1A ki konsistan avèk yon wòl selil sa yo nan sifas mukozal yo (Fig.5i, j). IL-9 obligatwa pou enflamasyon in vivo ki kondwi pa selil T#9-TL1A Pou egzamine si ogmante pwodiksyon IL{-9 pa selil TH{9-TL1A kontribye nan enflamasyon entesten ak nan poumon, nou te trete sourit ki te resevwa selil TH9-TL1A ak IL-9 netralize oswa antikò kontwole pandan tout tan eksperyans transfè selil T yo. Analiz istopatolojik te montre siyifikativman redwi enflamasyon entesten nan sourit trete anti-lL-9-konpare ak kontwòl izotip (figi 6a, b). Nou te obsève tou enflamasyon nan poumon atenue ak diminye enfiltre peribronchial ak yon rediksyon nan selil ki pwodui larim nan sourit ki trete anti-lL-9- (figi siplemantè 6c). Nimewo selil total ak total CD4tCD45.1 plis selil T nan MLN yo te redwi nan sourit ki te trete anti-IL-9-konpare ak kontwòl izotip (figi 6c). Tretman anti-IL-9 te redwi tou pwodiksyon IL{-13 ak IL{-17 nan MLN ak larat, pandan ke pwodiksyon IFN-y pa t chanje (figi 6d, done yo pa montre). Ansanm, done sa yo demontre ke selil T{-9-TL1A yo te selil efèktè ki pisan epi ki te lakòz enflamasyon entesten ak nan poumon an vivo e ke efè patojèn te depann de IL-9-.

Fig.4 Efè BATF ak BATF3 defisyans sou diferansyasyon TH9. ad Selil T CD4 nayif ki soti nan sourit Batf7or WT yo te diferansye anba kondisyon TH0- oswa TH9-polarize avèk oswa san TL1A pou 3 jou. Tach intraselilè IL-9 ak IL-10.b ELISA analiz de IL-9 pwodiksyon.c ELISA analiz de IL-10 pwodiksyon.d ELISA analiz de IL{{14} } pwodiksyon. eh Naif CD4 plis T selil ki soti nan Batf3-7-oswa sourit WT yo te diferansye anba kondisyon T,9-polarize avèk oswa san TL1A pou 3 jou. e Tach intraselilè IL-9 ak IL{-10.f ELISA analiz pwodiksyon IL{-9. g analiz ELSA sou pwodiksyon IL-10. h ELISA analiz pwodiksyon IL-13. I Profile transkripsyon selil WT ak Batf3′TH9-TL1A pa sekans RNA. Kat chalè ki montre done RNA-sekans jèn yo eksprime diferan ak p<0.01. the="" dendrograms="" to="" the="" left="" and="" above="" the="" heat="" map="" represent="" the="" clustering="" of="" genes="" (rows)="" and="" samples="" (columns).="" data="" represent="" means±="" sd="" of="" one="" independent="" experiment="" out="" of="" two="" (i)="" or="" three="" (a-h)="" independent=""><0.05,**p <="" 0.01,="" ***p=""><0.005 determined="" by="" student's="">

BATF3 kontribye nan enflamasyon in vivo kondwi pa selil TH9-TL1A Pou detèmine si BATF3 jwe yon wòl nan Tu9-patoloji ki kondwi nan vivo, nou te transfere adoptif ansyen WT oswa Batf3- /-TA9-TL1A nan Rag1-/-sourit. Sourit ki te resevwa Batf3-'-TA{9-selil TL1A devlope siyifikativman mwens poumon (Fig. 7a, b, Figi Siplemantè 6e) ak yon tandans nan direksyon redwi enflamasyon entesten (Histoscore: 3.6 vs 1.2)( Fig. 7a). Nou te obsève selilè redwi nan poumon ak LPMC, ak pi ba pousantaj nan MLN ak nan poumon CD4 plis selil T nan moun k ap resevwa Batf37′-TL1A konpare ak moun k ap resevwa WT TH 9- TL1A (figi 7c, Figi siplemantè 6d). Siyifikativman, pi ba pousantaj IL-13 plis ak IL{-17 plis selil nan larat, MLN, ak nan poumon ki soti nan moun k ap resevwa Batf3-'-Ty{9-TL1A (Fig. 7d). Ansanm, done nou yo endike ke BATF3 jwe yon wòl nan pwodiksyon IL-9 ak devlopman T#9 nan vitro ak nan Tp9-TL1A-kondwi enflamasyon mukozal in vivo.

Fig.6 IL-9 obligatwa pou enflamasyon mukozal in vivo kondwi pa selil Ty9-TL1A. Selil T,9 oswa Ty9-TL1A yo te enjekte nan sourit Rgg1-7, epi sourit yo te trete twa fwa pa semèn ak anti-IL-9 antikò oswa kontwòl izotip, yon tach reprezantan H&E nan duodenum la, Echèl ba; 200 μm. b Nòt istoloji pou trip la.c Kantite total selil MLN (agòch), frekans selil CD45.1 plis (midwayen), ak konte selil total CD45.1 plis selil (adwat).d Analiz ELISA IL{{15} }, IL-17, ak IL-13 pwodiksyon soti nan MLN apre restimulation ex vivo ak anti-CD3 ak anti-CD28. Done reprezante vle di ± SD nan yon eksperyans endepandan soti nan de eksperyans endepandan. n=4-5/gwoup.*p<><0.01, as="" determined="" by="" student's="" t-test="" (b)="" or="" mann-whitney="" u="" test="" (c,="">