Résumé
Objektif: Etid sa a te fèt pou konfime aplikab yon ekstrè èrbal melanje (MHE) kòm yonkosmetik anti-ajeengredyan pa mennen ankèt sou lipo anti-ajeaktivite an vitro ak nan vivo. Metòd: Nan etid sa a, nou te prepare MHE lè l sèvi avèk yon ekstraksyon ultrasons ki gen Forsythiae fructus, Tribuli fructus, sele Salomon, Siberian ginseng, Ponciri Fructus ak Ginseng. Nou te envestige aefè anti-aje MHE a pou po nan fibroblasts po. Laaktivite anti-ajete detèmine pa nivo yo sentèz kolagen tip I. Matris metaloproteinaz -1 (MMP1) ak inibitè tisi nan metalloproteinases 1 (TIMP1) nivo mRNA yo te mezire pa qRT-PCR. Nivo pwoteyin MMP1 yo te evalye pa analiz blotting. Tès klinik pou imidite po, elastisite, teksti, ak ondilasyon yo te fèt lè l sèvi avèk pwodui kosmetik ki gen 1 pousan MHE. Rezilta: MHE a pwovoke upregulation nan sentèz pro-kolagen tip I ak ekspresyon mRNA TIMP1. MHE a te mennen nan downregulation nan nivo MMP1 mRNA ak nivo pwoteyin. Anplis de sa, apre aplikasyon po kosmetik ki gen 1 pousan MHE, idratasyon po, elastisite, teksti, ak pye kòk yo te amelyore 4 semèn apre tretman an. Konklizyon: MHE gen yon efè anti-aje pa ankouraje sentèz kolagen an ak siprime ekspresyon jèn MMP1 nan vitro, epi li gen yon efè amelyorasyon po nan vivo. Se poutèt sa, MHE a te montre gen valè kòm yon engredyan kosmetik fonksyonèl.
Mo kle:Swen po, Anti-aje, Anti-rid, Kosmetik natirèl, Medikaman èrbal
Sipleman èrbal Cistanche pou ANTI-AJING
Entwodiksyon
Po a se yon ògàn ki antre an kontak ak anviwònman ekstèn lan e ki enpòtan anpil pou siviv nou, aji kòm baryè prensipal la.kont atak ekstèntankou ajan enfektye ak blesi fizik; Anplis de sa, li ranpli plizyè wòl fizyolojik enpòtan (Slominski et al., 2004; Vollmer et al., 2018). Kòm nou laj,fonksyon pogradyèlman deteryore ak chanjman atrofik akòz reyon iltravyolèt (UV), polisyon, ak estrès ak pa aje po ki rive kòm kantite selil po ak epesè po diminye (Farage et al., 2013).
Aje poka divize an aje andojèn ak aje ekzojèn. Aje andojèn po rive natirèlman sou tan kèlkeswa enfliyans ekstèn. La po-epidermjunction (DEJ) jwenti febli, epi ak diferansyasyon annan keratinosit, fòmasyon lipid diminye (Makrantonakiet al., 2007). Nan lòt men an, ekstèn aje ki te koze pa ekstènfaktè tankou reyon UV, reyon enfrawouj (IR), fimen, amannpousyè, ak fòm. Pami sa yo, fotoaging ki te koze pa UVreyon pénétrer po a ak domaje kolagen an ak elastinnan dèrm la. Nan pwosesis sa a, fib yo elastik ak kolagen anfib nan po a defòme, sa ki lakòz Elastisite diminyeak afesman. Kolagen se yon eleman enpòtan nan ekstraselilè amatris epi li gen yon wòl enpòtan nan detèmine fonksyon tisi yo.
Pami divès kalite kolagen an, kolagen tip 1 reprezante apeprè 75-80 pousan nan kolagen an total (Landau, 2007; Lovell et al., 1987; Mays et al., 1988). Lè po a ekspoze aReyon UV pou yon tan long, radikal gratis yo pwodui. Sa yo gratisradikal yo ankouraje ekspresyon metaloproteinaz matris la -1(MMP1) ki ankouraje degradasyon kolagen an ak inibit kolagen ansentèz ki diminye elastisite po ak rezilta nan ondilasyon.Se poutèt sa, yo anpeche ak amelyore ondilasyon po ki te koze paaje, li nesesè yo devlope yon engredyan ki ankourajepwodiksyon kolagen an ak inibit ekspresyon an ak aktivite nanMMP1 (Wlascheket al., 2001).
Aje pogen rapò sere ak kalite lavi. Paske po a se ògàn ki pi vizib, li fè nou konsyan de pwosesis la aje (Binic et al., 2013). Divès efò yo ap kontinye nan domèn medikaman, pharmaceutique, ak pwodui kosmetikanpeche ak amelyore aje po. Ladevlopman nan engredyan anti-ajese youn nan estrateji anti-aje ki pi enpòtan.
Nou te prepare ekstrè èrbal lè l sèvi avèk ekstraksyon ultrasons yo devlope nouvo engredyan anti-aje ki gen Forsythiae fructus, Tribuli fructus, sele Salomon, Siberian ginseng, Ponciri fructus, ak Ginseng.
Sis medikaman èrbal yo te chwazi nan plant ak divès kalite efè medikal ak po. Forsythiae fructus, fwi sèk nan Forsythia sispens (fanmi Oleaceae), ke yo rekonèt kòm Lian Qiao.nan Lachin, te premye anrejistre nan Shennong Bencao Jing, amonografi prestijye sou medikaman tradisyonèl Chinwa (TCM)(Donget al., 2017). Li te itilize kòm yon chalè-clearing akdezentoksikasyon TCM pou tretman maladi enfeksyon, tankounefrit egi, erizipel, ak maladi ilsè (Wanget al., 2018). Li selajman itilize nan klinik kòm yon sèl dwòg oswa preskripsyon konpoze.Farmakoloji modèn te montre li gen yon varyete debyoaktivite, ki gen ladan anti-enflamatwa, anti-bakteri, antiviral, antioksidan, antitumoral, anti-dyabetik, antihyperlipidemic,alopesi antiandrojenik, anti-vomisman, anti-aje, ak anti-aktivite obezite ak neuroprotective, epato-pwotektif, akefè vasorelaxant (Donget al., 2017). Anplis de sa, li terapòte saForsythiae fructusgen blanchiman po, anti-dèrmatoz atopik, ak efè anti-aje. Dapre Taiwan anbaz done preskripsyon nan tout peyi a,Forsythia Fructuste yeenkli nan 10 remèd fèy ki pi souvan itilize pou trete atopikdèrmatoz (15.9 pousan), urtikèr (11.49-13.4 pousan), ak akne (22.3 pousan)(Donget al., 2017). Forsythiae fructusgen saponin,flavonoid,ak alkalwa ak asid oleanolik ki gen yon itilaksyon famasi. Anplis de sa, li gen arctigenin akmatairesinol. Kòm engredyan po fizyolojik aktif, yose inibitè tirozinaz ki aji sou metabolis melaninchemen pwovoke pa - òmòn eksitan melanosit ( -MSH)epi yo atire atansyon kòm materyèl blanchi kosmetik(Yang & Choe, 2011).Tribuli fructus, ki se fwi a sèk nanTribulus terrestrisL, yo te rapòte ke yo gen famasiaktivite amelyore fonksyon seksyèl, anpeche ak tretemaladi kadyovaskilè, ak amelyore neuroprotection akmemwa. Li gen tou anti-dyabetik, anti-enflamatwa, akefè antioksidan (Chhatreet al., 2014). Tribuli fructusekstrè gen gwo kantite diosgenin, tigogein, divès kalitesaponin, elatriye. Saponin sa yo se bioaktif ki pi enpòtankonpozan ki responsab divès efè byolojik tankouefè a afrodizyak, efè antihypertensive ak pwoteksyonefè kont aksidan ischemi-repèfizyon ak antikansè a,aktivite anti-bakteri ak antifonjik (Chhatreet al., 2014).
Lòt engredyan yo enkli furostanol ak spirostanol saponin, polisakarid, glikozid flavonoid, alkaloid, ak amid. Anplis de sa, li efikas kont dèrmatoz atopik nan rat epi li gen efè anti-enflamatwa (Chhatre et al., 2014). Li te rapòte ke efè a anti-aje nan ekstrè Tribuli fructus ogmante pwodiksyon an nan tip I pro-kolagen ak Elastin nan selil HS68, ankouraje akimilasyon nan lipid nan adiposit, epi finalman amelyore ondilasyon po ak elastisite (Kim et al., 2016). ). Siberian ginseng (Acanthopanax senticosus) se yon ti pyebwa kaduk ki fè pati fanmi Oga ansanm ak jinsang ak jinsang sovaj. Ginseng Siberian gen anpil resanblans ak jinsang epi li itilize kòm yon medikaman èrbal pou konjesyon serebral, tansyon wo, ak dyabèt. Siberian ginseng ekstrè yo te itilize nan medikaman oriental pou yon tan long, ak rezilta famasi ak fizyolojik yo te rapòte nan divès etid jiska dènyèman. Konpozan ginseng Siberian ki te idantifye jiskaprezan gen ladan kote eleuthero A, B, C, D, E, I, K, L, ak M, ak sesamin, chiisanoside, asid kafeyik, asid klorojenik, campesterol, vitamin, ak mineral (Park et al., 2010).
Li gen saponin triterpenoid, lignans, koumarins, akflavonoid, pami ki konpoze fenolik yo konsidere kòm eleman ki pi aktif (Huang et al., 2011). Gen anpil rapò sou efikasite nan ekstrè ginseng Siberian sou po an.Efè a anti-rid,efè antioksidan,sentèz kolagen an, ak aktivite inhibition kolagenaz kont fotoaging yo te rapòte (Park et al., 2010). Li te rapòte ke ekstrè ginseng Siberian kontwole sentèz Kalite IV kolagen an, ki afekte kapasite proliferatif selil souch epidèm ak epesman epidèm la (Choi et al., 2016). Fok Salomon se yon rizòm Polygonatum odoratum (sinonim: P.officinale) ki gen yon efè tonik epi li itilize pou trete ensifizans kadyak ak dyabèt nan medikaman oryantal. So Salomon an se anti-sik ak antitussive; li soulaje tansyon kè, epi li se yon dyurèz, dinamize, ipoglisemi, sedatif, ak tonik; li itilize pou trete maladi nan poumon, tankou tibèkiloz ak maladi gastwoentestinal (Haroon et al., 2012). Anplis de sa, li se lajman ki itilize nan tretman an nan maladi san; li gen efè benefik sou kanal ren yo epi li anpeche cheve gri, pwoblèm vizyon, vètij, ak peny. Li se yon tonik nervin epi li itilize nan tretman dyabèt (Haroon et al., 2012). So Salomon an gen yon gwo kontni fenol ak aktivite antioksidan. Homoisoflavanones soti nan sele Salomon an anpeche fòmasyon nan avanse glycosylation pwodwi fen. So Salomon te montre yon gwo aktivite regilasyon sistèm iminitè entesten ak kapasite pou pwovoke diferansyasyon osteoclast ak apoptoz lectin-induit. Nan ka ekstrè fèy P. odoratum, fonksyon geri blesi a rapòte kòm yon egzanp (Fathi et al., 2014). Ponciri fructus immatures se fwi ki pa mi nan Poncirus trifoliata Rafinesque, ki fè pati fanmi Rutaceae (Jung et al., 2016). Dènyèman, efè anti-enflamatwa ak anti-ipèrsansibilite yo te rapòte, ak efè ekstrè nan limon grès yo te rapòte pwovoke apoptoz nan selil kansè (Lee et al., 2008). Ponciri fructus se konnen yo dwe efikas nan trete dèrmatoz atopik. Atravè aplikasyon an nan po a nan Ponciri fructus ekstrè, efè li yo kont dèrmatid atopik, tankou hyperkeratosis epidèm, èdèm po, ak sitokin, yo te rapòte. An patikilye, yo te rapòte diminisyon enpòtan nan gratèl, kantite selil mast, pwodiksyon IgE, ak ekspresyon faktè kwasans nè. Ekstrè Ponciri fructus yo te montre yon efè efikas anti-enflamatwa kont dèrmatoz atopik ak efikasite antipruritic pa reglemante mekanis iminitè. Anplis de sa, yo rekonèt administrasyon oral Ponciri fructus ekstrè yo itil pou tretman ak prevansyon maladi alèjik (Hwang et al., 1997). Ginseng se yon medikaman tradisyonèl èrbal lajman itilize ak aktivite milti-fonksyonèl. Ginseng yo te itilize pou aktivite anti-enflamatwa, antioksidan, antitumoral ak anti-aje (Choi, 2008; Kim & Ko, 2020). Anpil etid yo te fèt sou efikasite ginseng sou po a (He et al., 2018). Pami yo, gen anpil rapò sou saponin ak ginsenosides, ki se engredyan reprezantan jinsang. Saponin yo se konpoze yo jwenn anpil nan pifò plant epi yo egziste nan divès fòm. Saponin ka akselere divès aktivite byolojik tankou emoliz, ak fonksyon anti-bakteri, antiviral ak antioksidan. Anplis de sa, saponin gen pwopriyete anti-enflamatwa ki ka diminye anfle ak enflamasyon po. Ginsenosides ogmante interleukin (IL)-1, youn nan sitokin enflamatwa yo konnen pou ankouraje anjyogenesis ak pwovoke faktè kwasans andotelyal vaskilè ak akimilasyon.nan sit boule po nan sourit. Yo te rapòte tou efè yo nan retire makrofaj nan blesi po ak ankouraje geri blesi (Kim et al., 2011).
Objektif etid sa a se te elicide efè anti-aje po a nan yon ekstrè èrbal melanje (MHE) nan vitro ak nan vivo.
Metòd
1. Evalyasyon efikasite vitro
1) Preparasyon MHE a
Fwi sèk nan Forsythia sispens, fwi sèk nan Tribulus Terrestris L., jinsang Siberian (Acanthopanax senticosus (Eleuthero) Rasin), sele Salomon an (Rhizome ak rasin Polygonatum Officinale), fwi Poncirus Trifoliata Rafinesque a, ak jinsang (Panax) achte nan yon mache lokal. Ki baze sou teyori "Yin-Yang" ak "Senk Eleman" nan Medsin Tradisyonèl Chinwa (TCM), Forsythia suspensa, Tribulus terrestris L., ak Poncirus trifoliata Rafinesque ki koresponn ak "Yang" ak Siberian jinsang, jinsang, ak sele Salomon ki koresponn ak "Yin" te chwazi. Sis remèd fèy medsin yo te ankò divize an karakteristik ki koresponn ak senk eleman yo (bwa, dife, dlo, metal oswa lò, ak Latè oswa tè). Remèd fèy medsin sa yo te melanje nan menm rapò a pou balans chak eleman, epi Poncirus trifoliata ak ginseng ki koresponn ak Latè yo te konbine avèk lòt eleman yo matche ak pwopòsyon yo (Tablo 1). Sis plant medsin yo te ekstrè nan etanòl 30 pousan pa ultra-sonication (20 kHz, 2 h). Apre konsantre ak yon evaporator rotary, yo te ajoute 30 pousan (v/v) butylene glycol, epi solisyon an te dilye pou prepare yon ekstrè ki gen 1 pousan kontni solid.
Tablo 1. Konpozisyon remèd fèy melanje
2) Kilti selil ak reyaktif
Selil fibroblast prensipal imen yo (HDFn) yo te jwenn nan PromoCell (Fibroblasts po moun nòmal pou timoun, C-12300; PromoCell, Almay). Kilti selilè ak Dulbecco amodifye glikoz mwayen segondè Eagle a (DMEM glikoz segondè, SH30243.01, Hyclone, Cytiva) ki gen 10 pousan (v/v) serom fetal bovine (FBS, SH30084.03, Hyclone) ak 1 pousan antibyotik.ajan antimikotik (Anti-anti, 15240-062, Gibco, USA) yo te kiltive a 37 degre nan yon enkibatè 5 pousan CO2.
3) tès viabilite selil (MTT tès)
Egzamen MTT la te mezire viabilite selil la epi li te detèmine sitotoksisite MHE a. Selil yo te simen nan 5 × 103 selil/byen sou yon plak 96-byen epi yo te kiltive pou 24 èdtan anba kilti selil.kondisyon. Apre sa, nou jete mwayen an, nou lave selil yo ak yon solisyon saline ki gen tanpon fosfat (PBS, 21-040-CV; Corning, USA), nou mete selil yo nan nouvo medya san serom, epitrete selil yo ak konsantrasyon {{0}}.01, 0.025, {{10}}.05. 0.10, 0.25, 0.50, 0.75, ak 1.00 pousan echantiyon yo, epi enkube selil yo pou 24 ak 48 èdtan. Lè sa a, nou te ajoute 100 μL nan solisyon MTT(0.5 pousan, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl-2H tetrazolyom bromur) pou chak byen epi enkube selil yo pou yon lòt 2 èdtan. Apre yo fin retire medya kilti yo, nou te ajoute 100 μL nan 100 pousan dimethyl sulfoxide (DMSO), souke selil yo pou 10 minit, epi mezire absòbe a nan 590 nm ak yon lektè microplate (Epoch 2 microplate reader, BioTek, USA).
4) Mezi jenerasyon pro-kolagen tip I
Konsantrasyon pro-kolagen tip I nan mwayen kilti selilè a te mezire lè l sèvi avèk yon twous ELISA ki disponib nan komès (Procollagen tip I C-peptide EIA Kit, MK101, TaKaRaBio, Japon) dapre enstriksyon manifakti a. Chak echantiyon te analize nan twa kopi.
5) Mezi nivo ekspresyon mRNA lè l sèvi avèk Quantitative
Reyaksyon chèn polymerase an tan reyèl (qRT PCR) Selil yo te simen nan 1 × 105 selil/byen sou 6-plak byen yo. Selil HDFn yo te kiltive pou 24 èdtan; Lè sa a, selil yo te senkronize ak DMEM glikoz segondè san FBS pou 24 èdtan. Mwayen an te ranplase ak medya san serom epi trete ak konsantrasyon 0.05, 0.10, 0.25, 0.5, ak 0.75 pousan echantiyon yo. pou 24 ak 48 èdtan. Fè ekstraksyon RNA ak selil HDFn yo lè l sèvi avèk yon twous ekstraksyon RNA (TaKaRa MiniBEST Universal RNA ekstraksyon twous, 9767A, Takara Bio, USA), epi echantiyon yo te pirifye swiv pwotokòl manifakti a. RNA izole a (1 ug) te sentèz nan cDNA lè l sèvi avèk yon twous reyaktif TR (PrimeScriptTM RT reagent Twous ak gDNA Eraser, RR047A, Takara Bio, USA). Sèvi ak yon SYRB Green Realtime PCR Master Mix (Power SYBRTM Green PCR Master Mix, 4367659, Applied BiosystemsTM, USA) ak QuantStudioTM 3 (QuanStudioTM 3 Real-Time PCR instrument, A28132, Thermo Fisher Scientific, USA) machin PCR an tan reyèl, la Nivo ekspresyon jèn yo te estandadize nan menaj glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH). Jadendanfan yo itilize nan etid sa a yo prezante nan Tablo 2. Eksperyans yo te fèt an kopi pou twa repete endepandan. Analiz koub k ap fonnte fèt pou chak seri Jadendanfan.
6) analiz Western blot
Lysates pwoteyin ki soti nan selil fibroblast yo te ekstrè ak yon tanpon liz (EzRIPA Lysis Kit, WSE-7420; ATTO Corporation, Japon). Metòd Bradford te itilize pou quantifier protéines yo.Kantite egal pwoteyin yo te melanje ak 5X echantiyon tanpon (TLP-102-01, TransLab, Kore) epi yo te denatire a 99 degre pou 10 minit. Pwoteyin yo te separe pa 10 pousan SDS-PAGE nan 150 V pou 150 min epi yo te transfere nan manbràn PVDF (Clear Blot Membrane, 3322546, ATTO Corporation, Japon). Manbràn yo te bloke ak 0.5 pousan albumin serom bovin (BSA, A4503-10G; Sigma) pou 1 èdtan epi lave ak saline Tris-tampon ki gen ladan Tween-20 (10X TBS ak Tween 30, TR{{ {17}}; Biosesang, Kore) twa fwa; Lè sa a, manbràn yo te enkube ak antikò prensipal kont MMP-1 (antikò Anti-MMP1 recombinant [EP1249Y], ab134184, Abcam, USA), -Actin (Anti- -Actin (N-tern) ak PA0207 (Abfrontier) , Kore) nan 4 degre lannwit lan. Apre rense, manbràn yo te trete ak anti-lapen IgG-refor peroksidaz (HRP) (Anti-lapen IgG, HRP-lye Antibody, #7074; Cell Signaling Technology, USA) kòm antikò segondè. pou 1 èdtan. Yo te fè deteksyon chimiluminesans lè l sèvi avèk reyaktif deteksyon ECL Prime Western blotting (GE Healthcare, USA) ak ATTO WSE-6100 LuminoGraph (ATTO Corporation, Japon). Pou analiz quantitative, imaj ki te kaptire yo te analize ak Imaj. lojisyèl (CS analyzer 4, ATTO Corporation, Japon).
7) Analiz estatistik
Analiz estatistik yo te fèt lè l sèvi avèk GraphPad Prism vèsyon 3.03 pou Windows (GraphPad Software, USA). Rezilta yo prezante kòm mwayen ± SD nan 3 eksperyans. Yon depaireYo te itilize tès t Elèv la, ak valè p<0.05 were considered statistically significant.
2. Evalyasyon efikasite nan vivo
1) reyaktif ak pwodui kosmetik
Pwodwi tès yo te losyon po, krèm sans, ak krèm pou je; krèm sa yo te genyen 1 pousan nan MHE kòm engredyan aktif yo montre nan Tablo 3.
2) Patisipan moun
Tout volontè yo te dakò ak objektif ak kontni tès la epi yo te siyen fòm konsantman enfòme alekri anvan yo te kòmanse tès la. Yo pa te pèmèt yo sèvi ak nenpòt lòt pwodwi swen pou po, ak pwodwi tès yo te aplike nan figi a nan lòd la nan krèm po-je (sèlman sou pye kòk la)-esans krèm-losyon krèm. Etid la te fèt dapre direktiv yo nan Deklarasyon èlenki ak apwouve pa Komisyon Konsèy Revizyon Enstitisyonèl nan Kore di Enstiti Nasyonal pou Règleman Bioetik (#P01-202108-13-001).
3) Tès efikasite
Vennyon sijè fi ki gen laj ant 45 ak 55 (mwayèn ± SD 50.81±2.86) ane ki gen po nòmal te patisipe nan etid sa a. Pwodwi tès yo te aplike de fwa chak jou (maten ak aswè) pou 4 semèn. Patisipan yo te vizite sant rechèch la chak 2 semèn, ak sit tès yo te mezire nan laboratwa a, kote tanperati anbyen ak imidite relatif yo te kenbe nan 22±2 degre ak 50±5 pousan, respektivman. Patisipan yo aklimate pou 20 minit nan laboratwa a apre yo fin lave figi yo epi yo te evalye pou idratasyon po, elastisite, teksti, ak pye kòk. Yo te mezire idratasyon po lè l sèvi avèk yon Corneometer® CM825 (C plis K elektwonik GmbH, Kolòy, Almay); yo te mezire elastisite lè l sèvi avèk yon Cutometer® MPA 580 (C plis K elektwonik GmbH, Kolòy, Almay), ak teksti an ak pye kòk yo te mezire lè l sèvi avèk yon DermaTOP 3D-HE (EOTECH SAS, franse).
4) Evalyasyon nan reyaksyon negatif nan po a
Reyaksyon negatif yo te tcheke chak vizit pa kesyonè ak obsèvasyon. Nan evalyasyon an, paramèt subjectif yo te klase kòm demanjezon, pike, pikotman, boule, pike,rèd, ak pi sere, ak paramèt objektif yo te klase kòm eritem, èdèm, echèl, ak papul.
5) Analiz estatistik
Done yo te analize lè l sèvi avèk lojisyèl SPSS® la. Siyifikasyon estatistik diferans ki genyen ant pwen tan yo te detèmine lè l sèvi avèk analiz mezi repete; yon p-valè<0.05 te konsidere kòm estatistik enpòtan. Yo te kalkile pousantaj chanjman an (pousan) nan valè debaz la jan sa a:
Chanjman pousantaj=((apre tretman-debaz)/debaz)×100 pousan
