Efè Pwoteksyon Cistanche Tubulosa kont H2O2/UVB-induit Derm Fibroblast Kolagen Degradasyon atravè Hsa-microRNA -4535-medyatè TGF / Smad Signaling

REZIME

Etid sa a te vize mennen ankèt sou mekanis ki kache efè pwoteksyon cistanche kont domaj H2O2 / UVB-pwovoke lè l sèvi avèk modèl in vitro ak in vivo nan fotodomaj. Anplis, nou idantifye patisipasyon règleman miRNA nan pwosesis sa a. H2O2/UVB-trete HS68 imen fibroblasts po ak UVB-induit C57BL/6J toutouni sourit yo te itilize kòm modèl in vitro ak in vivo nan photodamage. Rezilta yo te montre satretman cistanchesoulaje rediksyon H2O2/UVB-pwovoke nan viabilite selil, andikap siyal TGF/Smad, ak aje po. Dapre rezilta analiz microRNA etalaj ak rechèch baz done, yo te idantifye has-miR-4535 kòm yon kandida potansyèl miRNA ki vize Smad4. In vitro,tretman cistancheaktive Smad2/3/4 konplèks ak inibit ekspresyon hsa-miR-4535 nan selil H2O2/UVB ki ekspoze yo. Nan vivo, aplikasyon aktualite nan dòz ki ba (12 mg / kg) ak segondè (24 mg / kg) nan cistanche nan po a dorsal nan sourit toutouni C57BL / 6J siyifikativman soulaje UVB-pwovoke foto domaj po pa fè pwomosyon TGF / Smad siyal kolagen sentèz, diminyeipèdèm hyperplasia, fòmasyon rid, aksenesans po, osi byen keanpeche ekspresyon hsa-miR-4535. Ansanm, rezilta nou yo endike yon lyen ant hsa-miR-4535 ak siyal sentèz kolagen TGF/Smad.epi sijere faktè sa yo dwe patisipe nan lafoto-pwoteksyon mekanis nansistanchnan fibroblasts po yokont H2O2/UVB-pwovoke aje. Prèv la te endike sasistanchakpwopriyete anti-ajekapabkonsidere kòm yon sipleman nan pwodwi swen pou po.

Klike la a pou jwenn pwodwi anti-aje Cistanche

ENTWODIKSYON

Siy klinik yo nan aje po imen gen ladan ogmante ondilasyon, laksite, ak pigmantasyon iregilye [1]. Pwosesis la nan aje po konplike epi yo ka divize an de kalite: aje intrinsèques ak aje ekstèn. Aje intrinsèques se akòz pasaj tan ak faktè jenetik, pandan y ap aje extrinsèques, ki rele tou photoaging, sitou rezilta nan ekspoze a radyasyon iltravyolèt [2, 3]. Etid anvan yo te montre ke espès oksijèn reyaktif abondan (ROS) yo pwodwi pandan tou de aje intrinsèques ak ekstèn. Akimilasyon ROS ka pwovoke siyal mitogen-aktive pwoteyin kinaz (MAPK) epi aktive faktè transcription en li yo, pwoteyin activator -1 (AP-1). AP aktive -1 ka transloke nan nwayo ak mare nan rejyon pwomotè nan metaloproteinaz matris (MMPs) [4]. MMP yo se yon gwo gwoup endopeptidase zenk-depandan, ki kontribye nan degradasyon po dèrm matris ekstraselilè (ECM). Patikilyèman, MMP-1, yon kolagenaz, patisipe nan klivaj nan kolagen tip I ak III [5]. Kalite Kolagen I ak III, pi gwo konpozan ECM, yo kapab bay sipò ak fòs nan dèrm po a epi dezaranjman yo mennen nan ondilasyon karakteristik ak laksite po aje [6]. Transfòmasyon kwasans faktè-beta (TGF) se yon cytokin omniprésente ak pisan ak twa izoform diferan, TGF 1, TGF 2, ak TGF 3, ki ka kontwole pozitivman sentèz kolagen an nan dèrm po moun [2]. TGF yo kòmanse siyal yo lè yo kominike avèk espesifik selil sifas serin / treonin kinaz reseptè konplèks, ki gen ladan TGF reseptè kalite I (T RI) ak II (T RII). Fosforilasyon T RI deklannche fosforilasyon R-Smads (Smad2 ak Smad3). Aktive R-Smads kominike avèk Smad4 pou kontwole translokasyon nwayo li yo ak transkripsyon aktive kolagen tip I ak III atravè lyezon ak pwomotè Smad-binding elements (SBE) [7, 8]. Prèv monte endike ke jenerasyon ROS ki wo, pwovoke pa intrinsèque oswa fotoaging, kontribye nan andikap siyal TGF / Smad, ki an vire rezilta nan sentèz kolagen an redwi nan po moun fibroblasts po [9, 10].

cistanche (3,5,7-trihydroxyflavone), yon manm natirèl nan fanmi flavonoid, abondan nan Alpinia officinarum ak propoli. cistanche se yon kandida potansyèl pou trete konjesyon serebral ischemik, dyabèt, ak diferan kalite kansè [11-13]. Anplis de sa, cistanche posede radikal scavenging ak aktivite anti-enflamatwa [14, 15]. Nou te deja montre ke cistanche redwi H2O2-enflamasyon pwovoke ak ankouraje fòmasyon kolagen an atravè reseptè faktè kwasans ensilin 1 (IGFI-R) / ERK1/2 siyal nan selil HS68 [16, 17]. Anplis de sa, yon etid te endike ke cistanche te idantifye kòm konpoze de Alpinia officinarum epi li posede efè inhibition kolagenaz nan selil fibroblast po [18]. Sepandan, yon mekanis molekilè plis detay ki gen rapò ak ki jan cistanche kontwole aje po po se enkoni.

MicroRNAs (miRNAs) se yon gwoup ti, yon sèl stranded, ki pa kode molekil RNA ak yon longè mwayèn de 22 nukleotid. MiRNA ki gen matirite yo transkri nan sekans ADN. Nan pifò ka yo, miRNA ki gen matirite mare nan rejyon 3'-untranslated (UTR) nan mRNA sib yo pou silans tradiksyon mRNA [19]. Nan po moun, miRNA jwe yon wòl enpòtan nan règleman metabolis selil, kansè, senesans ak fòmasyon kolagen an [20-23]. Pou egzanp, miR -377 ka pwovoke senesans fibroblast po nan anpeche ekspresyon ADN methyltransferase 1 (DNMT1), ki imedyatman mennen nan mwens metilation nan pwomotè p53 ak senesans fibroblast po [22]. Pwofil miRNA nan domaj UVB-pwovoke nan po imen

selil papil yo (nHDPs) te deja envestige [24]. Sepandan, ki jan UVB-induit po fibroblast senesans atravè règleman miRNA, espesyalman nan patisipasyon nan konpoze natirèl se lajman enkoni. Etid sa a te vize pou mennen ankèt sou efè pwoteksyon cistanche kont domaj po H2O2 / UVB-induit ak wòl nan degradasyon kolagen microRNA-medyatè nan pwosesis sa a. Nou vize plis pou idantifye microRNA yo ki enplike nan reglemante sentèz kolagen an.

REZILTA

cistanche inibit UVB/H2O2-sitotoksisite nan fibroblasts po imen HS68.

Pou mennen ankèt sou sitotoksisite cistanche (Figi 1A) an vitro, selil HS68 yo te trete ak diferan dòz cistanche (0, 10, 20, 30, 40, 50 μM) pou 24 h. Rezilta tès MTT te montre ke cistanche pa t 'sitotoksik nan selil HS68 (Figi 1B). Apre sa, nou ekspoze selil HS68 a diferan dòz H2O2 (0, 100, 150, 200, 250, 300 μM) ak UVB (0, 25, 30, 40, 50, 60 mJ/cm²) pou 24 èdtan. H2O2 ak UVB tretman diminye viabilite selil la nan yon fason ki depann de dòz (Figi 1C, 1D). Pou evalye pwopriyete cytoprotective cistanche apre ekspoze H2O2 ak UVB, nou trete selil HS68 ak diferan konsantrasyon cistanche (10, 20, 30 μM) apre H2O2- (200 μM) ak UVB-induit (40 mJ/cm²). ) domaj. H2O2 oswa UVB tretman pou kont li

efè nan selil HS68.

Pou detèmine si diminisyon nan viabilite selil yo te akòz lanmò selil oswa anpèchman kwasans, nou tcheke ekspresyon plizyè apoptoz ak makè siviv pa Western blotting nan selil HS68 ekspoze a diferan dòz H2O2 (50, 100, 200, 300, 400 μM) pou 24 h. Nou te jwenn siyifikativman diminye ekspresyon de makè siviv, tankou p-Akt, ak ogmante ekspresyon de

Figi 1. cistanche inibit UVB/H2O2-sitotoksisite pwovoke nan fibroblasts po imen HS68. (A) Estrikti chimik cistanche. (B) Viabilite selil selil HS68 yo trete ak diferan konsantrasyon cistanche (10, 20, 30, 40, 50 µM ) pou 24 h. (C ak D) Vitabilite selil HS68 selil yo ekspoze a diferan dòz H2O2 (100, 150, 200, 250, 300 µM) oswa iradyasyon ak UVB (25, 30, 40, 50, 60 J/cm2) pou 24 èdtan. (E ak F) Selil viabilite selil HS68 ki ekspoze a H2O2 (200 µM) oswa iradyasyon ak UVB (40 J/cm2) pou 1 èdtan epi trete ak cistanche (10, 20, 30 µM) pou 23 èdtan. Efè cytoprotective cistanche yo te detèmine pa tès MTT la. Selil kontwòl yo te asiyen 100 pousan viabilite. Valè yo montre kòm mwayen ± SE. Kantifikasyon rezilta yo montre (n=3) *P <0.05, **P <0.01, ***P <0.001 vs selil kontwòl ki pa trete; ##P <0.01, ###P <0.001 kont selil H2O2 oswa UVB trete.

Figi 5. Hsa-miR-4535 vize Smad4. (A) ekspresyon MicroRNA nan selil HS68 trete ak cistanche te evalye lè l sèvi avèk microarrays. (B) Dyagram Venn ki dekri kandida potansyèl mRNA ki ka kontwole pa hsa-miR-4535 ki baze sou baz done miRDB ak TargetScanHuman. Analiz sekans sit ki gen miRNA-obligatwa nan Smad4-3′-UTR mRNA pou hsa-miR-4535. Match yo endike pa liy dwat. (C) Selil HS68 yo te ko-transfekte ak Smad4-3′-UTR-WT (tip sovaj; 0.5 µg/mL) plis hsa-miR-4535 imite (2{ {25}} nM) oswa Smad4-3′-UTR MT (mutant; 0.5 µg/mL) plis hsa-miR-4535 imite (20 nM) pou 24 èdtan. Aktivite lisiferaz te detèmine ak nòmalize ak sa yo ki nan Renilla. Kantifikasyon rezilta yo montre (n=3); ***P <0.001, kont gwoup imite Smad4-3′-UTR-MT plis hsa-miR-4535. G1=kontwòl, G{2=cistanche (10 μM), G3=cistanche (30 μM)