Efè anti-alèji ak anti-enflamatwa Neferine sou selil RBL-2H3
Jul 18, 2022
Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon
Résumé:Selil mast jwe yon wòl trè enpòtan nan alèji po ak enflamasyon, ki gen ladan dèrmatoz atopik ak psoriasis. Nan tan lontan an, li te jwenn ke referans gen efè anti-enflamatwa ak anti-aje sou po a, men efè li sou selil mast poko te etidye an detay. Nan etid sa a, nou te itilize selil mast (selil RBL-2H3) ak modèl sourit pou etidye efè anti-alèji ak enflamatwa referans yo. Premyèman, nou te jwenn ke referans inibit degranulasyon nan selil mast ak ekspresyon nan sitokin. Anplis de sa, nou te obsève ke lè selil mast yo te ankouraje pa A23187/phorbol 12-myristate-13- acetate (PMA), elevasyon nan kalsyòm intraselilè te inibit pa referans. Fosforilasyon chemen MAPK/NF-KB tou redwi pa pretreatman referans. Rezilta yo nan etid in vivo yo montre ke referans ka amelyore aparans nan dèrmatoz ak enfiltrasyon selil mast ki te koze pa dinitrochlorobenzene (DNCB). Anplis, ekspresyon yo nan pwoteyin baryè nan po a yo tou retabli.sistanchFinalman, li te jwenn ke referans ka diminye konpòtman an grate ki te koze pa konpoze 48/80. Ansanm, rezilta nou yo endike ke referans se yon trè bon pwodwi natirèl anti-alèji ak anti-enflamatwa. Efè li sou selil mast kontribye nan mekanis famasi li yo.
Mo kle:referans; pwodwi natirèl; selil mast; dèrmatoz; demanjezon
Tanpri klike isit la pou konnen plis
1. Entwodiksyon
Anpil etid te konfime ke maladi alèjik yo se rezilta pa sèlman deklanchman iminitè natirèl, men tou deklanchman adaptasyon. Pami yo, selil mast jwe yon wòl trè enpòtan nan yon varyete de maladi alèjik tankou rinit alèjik, opresyon, ak dèrmatoz alèjik. Mast selil yo eksprime reseptè IgE (FceRI) sou manbràn selilè yo, ak reseptè FceRI yo gen yon gwo afinite pou antikò IgE [1,2]. Lè antijèn espesifik IgE mare ak FceRI, yon entèraksyon rive ak yon reyaksyon alèjik rive. Agregasyon nan FceRI ka aktive reseptè tirozin kinaz, kòmanse reyaksyon en, ak ankouraje fosforilasyon nan divès pwoteyin kle (tankou mitogen-aktive pwoteyin kinaz; MAPKs), finalman mennen nan foul la nan iyon kalsyòm (Ca2 plis), ki se yon evènman kle nan degranulasyon selil mast [3].cistanche OstraliSelil mast aktive yo degranule epi lage medyatè chimik yo. Medyatè chimik sa yo itilize nan reyaksyon alèjik yo ka lakòz enflamasyon [4], kidonk tretman sentòm alèjik yo enplike nan inibitè degranulasyon selil mast. Se poutèt sa, anpèchman IgE-medyatè degranulation selil mast souvan itilize yo idantifye nouvo konpoze yo anpeche ak trete maladi alèjik. Li te etabli ke anti-dinitrophenyl (DNP) IgE antikò ak antijèn ka pwovoke reyaksyon pasif ipèrsansibilite po (PCA) kòm yon modèl tipik in vivo nan ipèsansibilite imedya ak kòm yon dwòg rechèch pou potansyèl alèji anti-antijenik [5,6]. ]. Anplis de sa, degranulasyon selil mast ka lakòz tou pa estimilan ki pa iminitè, tankou konpoze 48/80 ak A23187. A23187 ionofò kalsyòm, yo te konnen depi lontan ankouraje sekresyon mast selil ak liberasyon an nan medyatè prefòme, tankou histamine nan granules yo, sèvi kòm yon egzanp [4]Konpoze 48/80 se yon polymère melanje nan p-methoxy-N-methylphenethylamine. cross-linked pa fòmaldeyid, ki se lajman ki itilize pou-endepandan eksitasyon nan mast selil [7,8] Se poutèt sa, kantite apwopriye nan konpoze 48/80 ak A23187 yo te souvan itilize kòm reyaktif yo etidye mekanis nan reyaksyon alèjik. Dapre evalyasyon estatistik, apeprè 15-20 pousan nan popilasyon an soufri dèrmatit atopik. Kit se timoun oswa granmoun ki soufri maladi sa a, san tretman apwopriye, dèrmatit atopik ka lakòz detrès sikolojik pou pasyan yo epi chaje fanmi yo ak depans sante sosyal yo [9]. Malerezman, pa gen okenn metòd tretman apwopriye pou geri dèrmatoz alèjik. Opsyon tretman aktyèl yo toujou evite alèrjèn ki lakòz maladi, ak itilizasyon kontinyèl nan estewoyid se estanda an lò nan tretman an. Alèrjèn inevitab ak efè segondè dwòg yo te pouse devlopman ijan nouvo dwòg ki ka geri ou. Konpoze natirèl izole nan remèd fèy medsin ak plant yo se sous potansyèl ajan ki ka geri pou anpeche ak trete maladi enflamatwa ak amelyore kalite lavi pou pasyan ki gen maladi alèjik.
Cistanche ka anti-aje
Referans lan soti nan nwayo lotus (anbriyon grenn nan) plant Nelumbo nucifera e li se yon gwo alkaloid bisbenzylisoquinoline. Gen prèv ki montre referans gen yon pakèt pwopriyete famasi, tankou efè anti-kansè, antioksidan, anti-enflamatwa, ak efè neropwotektif, nan anpil maladi [10-15].benefis cistancheKhan et al. te jwenn ke referans pwodui efè anti-photoaging pa anpeche UV-medyatè ogmantasyon nan ROS ak malondialdehyde (MDA) nivo nan keratinosit imen ak fibroblasts [16,17] Dènyèman, nou te jwenn ke referans gen potansyèl kòm yon medikaman altènatif pou tretman atopik. dèrmatit oswa lòt maladi enflamatwa ki gen rapò ak po [18]. Sepandan, si referans jwe yon efè alèji anti-po nan selil mast toujou rete ensèten. Nan etid sa a, nou te vize pou mennen ankèt sou efè referans sou maladi alèjik mast selil medyatè, lè l sèvi avèk liy masto selil imen (RBL-2selil H3) ak yon konpoze 48/{80-ak anafilaktik DNCB-induit. modèl sourit.
La référence proviene del núcleo de loto (el embrión de la semilla) de la planta Nelumbo nucifera y se yon enpòtan alcaloide de bisbencilisoquinolina. Genyen prèv referans ki genyen yon gwo varyete pwopriyete farmacolojik, kòm efè antikanse, antioksidan, anti-enflamatwa ak neuroprotectores, nan anpil maladi [10-15]. Benefis de la cistanche Khan et al. te jwenn ke la référence pwodwi efè anti-fotoenvejecimiento al inhibir el aumento de los niveles de ROS y malondialdehído (MDA) mediado por UV en queratinocitos y fibroblastos humanos [16,17] Recientemente, discovermos that the reference has potential as medicina alternativa para el tratamiento. dèrmatoz atòpi ak lòt maladi enflamatwa ki asosye ak pèl la[18]. Sin embargo, sigue siendo incierto si la référence gen yon efè kont la alergia cutánea en los mastocitos. Nan etid sa a, objektif nou an te fè rechèch sou efè referans nan maladi alèjik medya yo pou mastocitos, itilize líneas de mastocitos humanos (células RBL-2H3) ak yon modèl ratons ak anafilaksya inducida pou konpoze 48/80 ak DNCB. .
2. Rezilta yo
2.1. Tès sitotoksisite Neferin sou selil mast rat yo (RBL-2H3)
Piske selil lesemi bazofil rat (RBL)-2H3, yon analòg selil mast ki bay histamine, se selil ki apwopriye pou egzamine efè enflamasyon mast selil medyatè [19], nou te itilize selil sa yo pou mennen ankèt sou anti-alèji a. efè referans. Premyèman, nou teste si referans lan ka pwodwi sitotoksisite nan selil mast. Lè selil yo pretrete ak referans soti nan 1 a 30 μM pou 24 èdtan, viabilite selil yo pa pral afekte pa tretman referans (Figi 1).
2.2.Neferine diminye efè degranulasyon RBL -2H3 ki ankouraje pa diferan aktivatè
Selil RBL-2H3 yo souvan itilize pou etid in vitro nan degranulasyon [20-22]Estimulasyon selil RBL-2H3 yo ak anti-dinitrophenol (DNP) IgE ak albumin serom imen DNP-konjige. (HSA) deklanche degranulasyon. Anplis de sa, selil mast yo konnen yo degranule an repons a konpoze sentetik, tankou konpoze 48/80 ak ionofò kalsyòm A23187, ak konpoze sa yo yo te itilize kòm reyaktif pratik pou etid dirèk nan mekanis yo nan repons alèji in vitro [23, 24]. Rezilta yo te montre ke sitoplasm RBL-2H3 ki pa aktive pa activateur a te genyen granules sekretè limite.kolestewòl cistancheTretman referans （10μM） pou kont li pa te afekte aktivite RBL -2H3 (Figi 2A, B). Sepandan, adisyon a nan aktivateur diferan, ki gen ladan konpoze 48/80, A23187, ak anti-DNP / IgE plis DNP / HSA, klèman plen sitoplasm nan ak granules sekretè. Anba mikwoskòp elèktron, li ka wè ke gen yon gwo kantite sekretè granules nan sitoplasm la, ak kèk granules sekretè menm fusion ak manbràn selilè a, ki mennen nan degranulation (Figi 2C-E). Apre pretretman ak referans 10 uM, granules sekretè yo nan sitoplasm la te siyifikativman redwi (Figi 2F-H). Rezilta sa yo endike ke referans ka efektivman anpeche deklanchman ak degranulasyon RBL-2H3 ankouraje pa activateur la.
2.3.Neferin anpeche PMA/A 23187-Elevasyon kalsyòm intraselilè pwovoke nan RBL-2H3
Iyon kalsyòm jwe wòl mesaje segondè nan pwosesis aktivasyon selilè. A23187 se fason ki pi efikas pou ogmante pénétration iyon kalsyòm nan manbràn selilè epi ankouraje deklanchman selil mast yo. Phorbol myristate acetate (PMA) ka aktive pwoteyin kinaz Cand ak ogmante iyon kalsyòm entraselilè pou amelyore efè A23187. Ogmantasyon nan iyon kalsyòm nan selil mast yo te konsidere tou kòm yon faktè enpòtan nan pwovoke deklanchman selil mast pou ke li afekte degranulasyon nan selil mast ak degaje plis sitokin enflamatwa ak chemokin.efè segondè cistanche deserticola,Se poutèt sa, etid sa a te chèche eksplore si referans lan ka anpeche konsantrasyon ion kalsyòm nan RBL-2H3 lè li anpeche enflamasyon. Gwoup eksperimantal la te divize an avèk oswa san referans pretreatman pou 20 min, epi yo te ajoute 1 mM CaClz ak PMA/A23187 pou ankouraje ak aktive RBL -2H3. Rezilta eksperimantal yo te montre ke tretman RBL-2H3 ak diferan konsantrasyon referans pou kont li pa te afekte ogmantasyon nan konsantrasyon iyon kalsyòm intraselilè. Nan gwoup aflu Ca2t PMA/A23187-pwovoke, konsantrasyon iyon kalsyòm intraselilè ogmante anpil. Selil RBL -2H3 yo te pre-trete pou 20 minit ak referans （3 μM ak 10 μM), epi konsantrasyon ion kalsyòm yo te siyifikativman redwi (Figi 3).
2.4.Neferine redwi ekspresyon mRNA nan Sitokin Pro-enflamatwa nan PMA/A23187 ki te ankouraje pa RBL -2H3
Repons iminitè a nan po a ap ogmante kantite selil mast nan kò a, ak selil mast yo pral Lè sa a, pwodwi pro-enflamatwa sitokin ak akselere pwogrè nan maladi a. Sitokin pro-enflamatwa, espesyalman TNF-a, IL-6, IL-1, ak IL{-8, pa sèlman pwovoke enflamasyon, men tou lakòz enfiltrasyon lekosit, fòmasyon granulom, ak fibwoz tisi. PMA/A23187 aji sou selil mast yo epi pouse yo pwodui IL-16, IL{-6, TSLP, ak TNF-, sa ki lakòz enflamasyon ki gen rapò ak alèji. Se poutèt sa, nou te pre-trete RBL-2H3 ak referans pou 20 minit epi ankouraje ak PMA/A23187 pou 6 èdtan pou detekte si referans lan ka desann-regleye ekspresyon mRNA IL-1, IL{{ 19}}, TSLP, ak TNF-a. Rezilta yo te montre ke nan gwoup la trete ak referans pou kont li, ekspresyon de mRNA cytokine pa te afekte, ak ekspresyon de mRNA nan gwoup la ki pwovoke enflamasyon pa PMA / A23187 ogmante siyifikativman. Nan gwoup la trete ak referans, yo te obsève ke nivo ekspresyon mRNA IL-1, IL{-6, TSLP, ak TNF-a te siyifikativman siprime (Figi 4).
2.5.Neferin Inibit PMA/A23187-Fosforilasyon pwovoke nan chemen MAPK nan RBL-2H3
Etid anvan yo te fè remake ke selil mast bezwen lage iyon kalsyòm entraselilè pou aktive MAPK.Anplis de sa, chemen siyal MAPK kontwole ekspresyon monosit, lenfosit T, lenfosit B, sitokin, ak chemokin, epi pwovoke otoiminite. Mekanis sa a sanble ak chemen deklanchman PMA/A23187. Nan etid sa a, nou te eksplore si referans lan ka patisipe nan règleman an nan chemen MAPK. Nou trete diferan konsantrasyon referans (1,3, ak 10 uM) nan RBL-2H3 pou 20 minit epi answit nou ankouraje ak PMA/A23187 pou 30 minit pou pwovoke enflamasyon. Rezilta yo te montre ke lè yo te trete RBL-2H3 ak diferan konsantrasyon referans pou kont li, deklanchman p38, JNK, ak pwoteyin ERK pa te afekte. Nan gwoup la trete ak PMA/A23187 pou kont li, nou te jwenn ke p38, JNK, ak ERK pwoteyin yo te aktive epi yo gen fosforilasyon enpòtan. Nan gwoup la pretreated ak referans, li te obsève ke pou pi gwo konsantrasyon nan referans, fosforilasyon nan p38, JNK, ak pwoteyin ERK te siyifikativman redwi (Figi 5A-C).
2.6.Neferin Inhibit PMA/A23187-Fosforilasyon pwovoke nan chemen NF-B nan RBL-2H3
Ekspresyon cytokin pro-enflamatwa depann de aktivasyon faktè transcription NF-kB nan selil mast yo. Lè yo te fosforilasyon pwoteyin IKB a ak degrade, NF-kB te lage ak imigre nan nwayo a, lye ak eleman ki koresponn ak ADN ki reponn ak pwomouvwa transkripsyon medyatè pro-enflamatwa. Anpil sitokin ak chemokin yo te pwodwi, ki kontwole repons iminitè, diferansyasyon, ak enflamasyon. Se poutèt sa, nou eksplore si pretreatman ak referans afekte fosforilasyon pwoteyin pwovoke pa PMA / A23187. Nou trete diferan konsantrasyon referans (1,3, ak 10 μM) nan RBL-2H3. Apre 20 minit, PMA/A23187 ankouraje RBL-2H3 pou 1 èdtan oswa 2 èdtan pou pwovoke enflamasyon. Rezilta yo te montre ke tretman RBL-2H3 ak diferan konsantrasyon referans pou kont li pa te afekte fosforilasyon IKBa ak NF-KB. Lè yo te itilize PMA/A23187 pou eksitasyon, yo te obsève yon ogmantasyon siyifikatif nan fosforilasyon IkBo ak NF-KB. Nan gwoup la pretrete ak referans, li te jwenn ke fosforilasyon nan IkBa (Figi 6A) ak NF-KB (Figi 6B) te siyifikativman redwi.
2.7.Efè Neferine a sou 2, 4-Dinitrochlorobenzene (DNCB)Dèrmatit atopik pwovoke
Yon modèl bèt pou rechèch maladi, DNCB se yon irite reprezantan ki lakòz dèrmatit atopik [25]. Eksperyans nou an sèvi ak 1 pousan dinitrochlorobenzene (DNCB) ki fonn nan 75 pousan alkòl pou pwovoke premye etap repons sansibilizasyon an. Referans (3mg/kg ak 10 mg/kg) ak dexamethasone (Dexa,{{10}}.2 mg/kg) ki fonn nan DMSO yo te administre intraperitoneally nan senkyèm jou a pandan dis jou. . Nan 8yèm, 1ye ak 14 jou, yo te aplike 0.5 pousan DNCB kòm dezyèm etap nan pwovoke enflamasyon. Sourit yo te divize an kat gwoup-gwoup kontwòl, gwoup DNCB, gwoup referans-trete, ak gwoup trete dexamethasone-ak Lè sa a, apre konparezon nan mitan gwoup yo, diferans yo te note. Nou te obsève ke DNCB pwovoke yon reyaksyon enflamasyon po atopik sou po sourit yo. Apre yo fin aplike DNCB, li te jwenn ke po a nan sourit yo ogmante woujè ak dekale. Tout sa yo se akòz pwopagasyon nòmal keratinosit, enfiltrasyon, ak agrégation selil iminitè yo. Gwoup la trete ak referans 3 mg / kg ak dexamethasone 0.2mg / kg pou kat jou te soulaje woujè. Nou te kontinye obsève kondisyon po dorsal sourit yo jiska jou 15. Konpare ak gwoup kontwòl la, gwoup DNCB te gen kondisyon po grav anpil wouj ak anfle, e te gen dander ak blesi ki te sanble yo te koze pa gratèl ak doulè. . Nou ka jwenn yon tandans nan degre diminye apre tretman referans ak dexamethasone (Figi 7A). Yo te itilize tach ble Toluidine pou obsève kantite selil mast ki te rasanble. Selil mast yo parèt koulè wouj violèt lè yo obsève anba yon mikwoskòp. Li ka montre quantitative ke anpil selil mast enfiltre ak akimile nan dèrm la nan gwoup la eksperimantal DNCB, siyifikativman ogmante konpare ak gwoup kontwòl la. Nan gwoup la trete ak referans ak dexamethasone, enfiltrasyon an, agrégation, ak kantite selil mast yo te diminye (Figi 7B, C).
2.8.Neferine amelyore ekspresyon mRNA molekil ki gen rapò ak baryè apre tretman DNCB.
Enflamasyon ki gen rapò ak po a ki te koze pa AD ka lakòz fonksyon baryè po nòmal. Si baryè po a defektye, li pi fasil pou antijèn oswa irite yo antre epidèm po a epi antre nan kò a pou pwovoke reyaksyon ki gen rapò ak iminitè. An menm tan an, pwodiksyon pwoteyin diferansyasyon, ki gen ladan filaggrin, loricrin, ak envolucrin, yo pral siprime. Se poutèt sa, retabli baryè po domaje a trè enpòtan pou anpeche ak trete AD [26]. Nan etid nou an, nou te itilize referans pou entèvni nan modèl bèt nan dèrmatoz atopik DNCB-induit. Apre sakrifye sourit, tisi po dorsal la te chita pou analiz RI-qPCR pou evalye si referans lan ka amelyore rediksyon ekspresyon mRNA nan filaggrin, loricrin, ak envolucrin apre tretman DNCB. Rezilta yo te montre ke gwoup la eksperimantal DNCB te siyifikativman redwi ekspresyon mRNA nan filaggrin, loricrin, ak envolucrin konpare ak gwoup kontwòl la. Ekspresyon mRNA nan filaggrin, loricrin, ak envolucrin te siyifikativman ogmante nan gwoup la trete ak referans ak dexamethasone konpare ak gwoup la DNCB (Figi 8).
Nou plis pwouve ke referans gen yon efè grate anti-alèji. Nou itilize yon ajan degranulasyon selil mast, konpoze 48/80, pou pwovoke konpòtman grate nan sourit BALB/c. Jan yo montre nan Figi 9, nou te jwenn ke tretman referans anpeche konpòtman grate ki te koze pa konpoze 48/80（50 ug/sit）. Administrasyon repete nan pi ba ak pi wo dòz referans (3 ak 10 mg / kg) pou 5 jou youn apre lòt siyifikativman redwi kantite reyur ki te koze pa konpoze 48/80.
