Anpil etid te konfime ke Maladi alèjik se rezilta pa sèlman aktivasyon iminitè natirèl 2

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

3. Diskisyon

Patojèn nan dèrmatoz atopik (AD) pa konprann konplètman, men maladi a se medyatè pa yon repons iminitè nòmal iminitè globilin E (IgE) nan malfonksyònman baryè po. Pami yo, selil mast (MC) ka lakòz maladi alèjik IgE-medyatè, ki gen ladan AD. Lè selil mast yo aktive, yo lage patikil sitoplasmik manbràn yo, ki mennen ale nan liberasyon an nan yon varyete de molekil. Molekil sa yo jwe yon wòl enpòtan nan patojèn nan AD ak defans lame [27]. Paske anpeche aktivasyon selil mast oswa degranulasyon ede kontwole divès reyaksyon ipèsansiblite IgE-medyatè, selil mast yo se youn nan objektif ideyal pou eksplore dwòg anti-alèji. Nan etid nou an, selil mast yo degranulasyon an repons a konpoze 48/80 ak ionofò kalsyòm A23187, ak anti-DNP/IgE plis DNP/HSA. Nou te jwenn ke referans efektivman inibit efè a degranulasyon nan selil mast, ki montre reyaksyon anti-alèjik li yo. Anplis, ogmantasyon nan kalsyòm intraselilè ak aktivasyon MAPK te anpeche pa referans. Anplis de sa, enfiltrasyon selil po a ki te koze pa DNCB ak konpòtman grate ki te koze pa konpoze 48/80 yo te redwi tou. Se poutèt sa, mekanis nan dèrmatoz anti-atopik neferin gen yon efè miltiplikatè sou keratinosit ak selil mast.

La patogenia de la dermatitis atópica (DA) no se comprende por completo, pero la enfermedad está mediada por una respuesta inmunitaria anormal de la inmunoglobulina E (IgE) nan disfunción de la barrera cutánea. Antre yo, mastocitos (MC) kapab lakòz maladi alèjik medya yo pa IgE, enkli EA. Lè mastocitos yo aktive, yo libere tout patikil citoplasmik yo nan manbràn yo, yo ka pran liberasyon yon varyete de molekil yo. Estas moléculas juegan un papel importante en la patogénesis de la EA ak la defans del huésped [27]. Debido a ke la inhibición de la activación ou desgranulación de los mastocitos ede yon regilye plizyè reacciones de hypersensibilidad mediadas por IgE, yo mastocitos son uno de los objetivos ideales para explorar fármacos antialérgicos. Nan estudio nou an, mastocitos se desgranulan en repons al konpoze 48/80 ak al ionòforo de calcio A23187, ak anti-DNP/IgE plis DNP/HSA. Encontramos ke la référence inhibió efektivman el effet de desgranulación de los mastocitos, montre sou reyaksyon antialérgica. Anplis de sa, ogmantasyon nan calcio intracelular ak aktivasyon MAPK yo te anpeche referans. Anplis de sa, tou se redujeron la enfiltrasyon nan mastocitos nan la piel causada pa DNCB ak konpòtman de rascado causado pa el composé 48/80. Por lo tanto, el mecanismo de la dermatitis antiatópica de la neferina gen yon efè miltiplikasyon sou los queratinocitos ak los mastocitos.

Tanpri klike isit la pou konnen plis

Sitoplasm selil mast yo te jwenn nan tisi yo plen ak gwo patikil dans medyatè enflamatwa ki te deja fòme [28]. Pwosesis lage medyatè sa yo soti nan granules sekretè nan selil mast yo rele degranulasyon. Depi anpeche degranulasyon selil mast ka kontwole divès reyaksyon ipèsansibilite IgE-medyatè, selil mast yo se youn nan objektif ideyal pou eksplore dwòg anti-alèjik [29,30]. Rezilta nou yo montre ke referans gen yon efè trè bon sou degranulation nan selil mast kèlkeswa itilizasyon antijèn, stimulateur reseptè, oswa ionofò. Sa montre ke referans se yon potansyèl ajan anti-alèji (Figi 2).

Tout granules pre-estoke, medyatè ki fèk sentèz, e menm granules ak konpozan yo ka itilize kòm endikatè deklanchman MC [31]. Anplis de sa, metòd estanda a se mezi konsantrasyon entraselilè Ca4t. Pifò nan sekretagòg MC yo (egzanp, antijèn, konpoze 48/80) ki te jeneralman itilize nan laboratwa a te lakòz yon ogmantasyon nan Ca2 plis konsantrasyon entraselilè. An reyalite, ogmantasyon nan entraselilè Ca2 plis konsantrasyon kapab tou deklanche degranulasyon MC. Anjeneral, ogmantasyon nan entraselilè Ca4t pwovoke pa aktive MC ak konpoze, tankou thapsigargin (espesyalman bloke Sarco/endoplasmic Ca2 plis ATPase, SERCA) ponp ak ionofòr (sa vle di, ionomycin ak A23187) [32,33]. Se poutèt sa, nan aktivasyon an MC depandan Ca2t, se mezi a nan foul Ca2t tou konsidere kòm yon metòd detèmine kondisyon deklanchman MC. Nan rechèch MC, Fura-2 se lajman itilize pou detèminasyon nan entraselilè Ca2 plis chanjman. Nan eksperyans nou yo, nou te jwenn ke entansite fluoresans nan selil mast aktive te siyifikativman siprime apre yo te fin trete ak referans (Figi 3). Rapò anvan yo te endike ke ogmantasyon nan konsantrasyon entraselilè Ca4t te an akò ak liberasyon histamine [34]. Se poutèt sa, nou dedwi ke liberasyon an nan histamine pral tou inibe pa tretman an nan referans. Plis eksperyans yo garanti pou verifye ipotèz sa a.

Selil mast gen siyifikativman diferan rezilta fonksyonèl.cistanche dosage redditMen sa yo enkli degranulasyon, fòmasyon précurseurs asid arachidonik, chemotaxis, ak pwodiksyon sitokin, epi yo tout depann sou siyal kalsyòm yo nan yon sèten mezi, kèlkeswa estimilan [32] MC aktive degaje sitokin, ki se medyatè prensipal yo nan alèji ak maladi enflamatwa [32]. 35]. Pwodiksyon cytokines pa selil mast aktive se rezilta endiksyon transkripsyon jèn cytokine nan selil sa yo. Eksitasyon mast selil yo mennen nan aktivasyon NF-kB ak AP-1 ak pwodiksyon anpil cytokines [36].MAPK kaskad-siyal chemen jwe yon wòl esansyèl nan règleman an nan ekspresyon cytokines. Aktivasyon nan chemen sa yo atravè aktivasyon PKC a pa PI rezilta nan aktivasyon an nan divès jèn, ki gen ladan jèn cytokine enflamatwa tankou IL-1, IL-6, ak TNF [37]. Etid resan nou yo te montre ke referans ka anpeche sitokin yo pibliye pa aktivasyon keratinosit yo. An menm tan an, nou te jwenn tou ke deklanchman chemen MAPK a pral tou anpeche tretman referans [18]. Nan etid aktyèl nou an, nou te montre ke referans ka diminye ekspresyon sitokin tou atravè anpèchman deklanchman MAPK nan selil mast (Figi 4 ak 5). Aktivasyon NFkB tou redwi akòz anpèchman deklanchman MAPK (Figi 6).

Cistanche ka anti-aje

Yon kantite etid rapòte ke yon varyete de sitokin nan pasyan AD yo elve, ki mennen nan malfonksyònman baryè po, ki gen ladan sitokin sekrete pa keratinosit ak Th2-sitokin ki sòti [38,39]. Anplis de sa, yo rapòte ke cytokin sekrete sa yo kapab tou desann-regleye ekspresyon yo nan junction sere (T]) pwoteyin ak jèn tèminal diferansyasyon, ki gen ladan filaggrin (FLG), loricrin (LOR), ak envolucrin (IVL) [39,40]. ]Ekspresyon (Pro)filaggrin diminye nan AD epi li asosye envers ak MC tryptase ak IL-6[41]. IL-1 medyatè enflamasyon kwonik nan sourit ki gen yon baryè po ki gen pwoblèm [35]. Nan yon etid anvan, yo te rapòte ke ekspresyon yo nan FLG, IVL, ak LOR yo te downregulated apre aplikasyon an nan DNCB sou po dorsal sourit NC/Nga [42,43]. Nan etid la prezan, ekspresyon FLG, IVL, ak LOR yo te redwi konsiderableman nan po dorsal gwoup kontwòl la, ki te endike ke baryè epidèm la te andikape. Administrasyon referans la te refè anpil ekspresyon FLG, IVL ak LOR apre tretman DNCB, pandan ke administrasyon referans te ogmante yon ti kras ekspresyon IVL ak LOR konpare ak gwoup kontwòl la (Figi 8). Li konnen ke konpoze 48/80 se yon activator efikas nan selil mast po. Repons po a ankouraje pa konpoze 48/80 ka pwovoke konpòtman grate pa lage histamine nan selil mast [44]. Histamine lage nan selil mast aktive jwe yon wòl enpòtan nan ogmantasyon nan pèmeyabilite vaskilè ki te koze pa konpoze 48/80. Pandan prurit imen, histamine lage nan selil mast atravè stimuli divès kalite konsidere tou. te vin yon medyatè enpòtan. Se poutèt sa, anpeche degranulasyon nan selil mast se yon etap enpòtan nan reglemante lage histamine pandan konpòtman grate. Nan konpoze etid sa a, 48/80 te lakòz aktivasyon efikas nan selil po mast. Sepandan, pretreatment ak referans siyifikativman redwi nivo degranulation nan selil mast (Figi 2).benefis extrait cistancheRezilta sa yo endike ke efè a konpòtman anti-grafouyen nan referans ka akòz rediksyon nan pèmeyabilite vaskilè pa reglemante degranulasyon selil mast (Figi 9).

Li se jeneralman etabli ke pasyan AD soufri nan malfonksyònman baryè po, enflamasyon po, oswa toude, kidonk li difisil pou jwenn yon metòd tretman apwopriye. Se poutèt sa, anjeneral yo rekòmande terapi konbinezon. Rechèch resan nou an te pwouve ke pa janm gen fonksyon imunomodulateur ak kapasite reparasyon baryè. Se poutèt sa, yon karakteristik enpòtan nan referans nan tretman AD nan lavni an se antretyen nan fonksyon po ak amelyorasyon nan idratasyon po ak reparasyon baryè. Referans kapab tou redwi konpòtman grate pwovoke pa alèrjèn ak irite. Anplis, mach atopik la se yon maladi ki gen rapò ak fenomèn ki rive ak pwogrese etap pa etap. Dèrmatit atopik souvan wè nan timoun piti. Alèji manje souvan rive apre 1-2zan. Rinit alèjik ka kòmanse souvan anvan ak apre lekòl. Sentòm opresyon parèt nan diferan moman, men pifò nan yo se apre rinit alèjik. Apre anfans, dèrmatoz atopik ak sèten alèji manje ka amelyore oswa disparèt. Rinit alèjik ak opresyon pa fasil pou geri [45,46]. Se poutèt sa, yo se fenomèn komorbid nan maladi. Pwodwi natirèl ki gen ladan referans yo gen potansyèl terapetik nan komorbidite, ak efikasite yo nan maladi ki gen rapò se vo etidye nan lavni an.

4. Materyèl ak Metòd

4.1.Rat Basophilic Lesemi Selil

Selil lesemi ras basofil (RBL{0}}H3) se te yon kado nan men TLHwang, Chang Gung University, Taoyuan, Taiwan. Selil RBL-2H3 yo se selil mast mukozal yo itilize pou etidye antijèn oswa degranulasyon ionofò kalsyòm, Ca4t intraselilè, ak transdiksyon siyal [29]. Selil yo te kiltive nan EMEM ki gen 10 pousan FBS, ak penisilin ak streptomycin nan 37 degre, 5 pousan CO2. Mwayen Dulbecco modifye Iscove a (IM) ak serom fetal bovine (FBS) te achte nan men Thermo Fisher Scientific (GIBCOTM, New York, NY, USA).

4.2.MTT essai

3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolyom bromur (MTT) yo itilize tès pou mezire aktivite metabolik selil yo. Selil RBL-2H3 yo te simen nan yon 24-plak kilti byen nan 5 × 10 plis /pi. Apre 24 èdtan nan tretman dwòg, yo te ajoute 30 μL MTI pou chak byen epi yo mete yo nan yon enkibatè selil 37 degre pou 2-4 èdtan, Lè sa a, kristal formazan koulè wouj violèt yo te fonn ak DMSO. Yo te itilize yon lektè ELISA pou mezire entansite absòbe a nan yon longèdonn 550 nm kòm yon tès viabilite selil.

4.3.Measurement nan Entracellular Ca2 plis Nivo

[Ca2t] Yo te mezire mwen ak fura-2 jan sa dekri anvan[47].RBL-2Selil H3 yo te resuspend nan IMDM ki gen 5 uM Fura 2-AM ak 1.2 mM CaClz nan 37 degre pou 30 min. Apre Fura-2 chaje, keratinosit yo te granules epi yo te resispann nan DMEM fre. Yo te transfere yon alikòt (2 mL) nan yon kivèt brase ki gen 1.2mM CaClz.Fura-2-Fiyoresans Ca yo te teste nan longèdonn eksitasyon 340 ak 380 nm (longèdonn emisyon, 505 nm) nan yon PerkinElmer LS{{19} }} spectrofluorometer (PerkinElmer Life and Analytical Sciences). Done yo te anrejistre nan entèval 5s [47].

4.4. Reyaksyon chèn polymère Quantitative (qPCR)

Selil RBL{{0}}H3 yo te plante nan yon plat kilti 3.5 cm. Apre selil yo te grandi a 90 pousan plen, selil yo te grandi nan yon eta estatik pou 24 èdtan. Apre selil yo te pretrete ak referans pou 20 min, yo te ankouraje ak TNF-a/IFN-y pou 1 oswa 24h, respektivman. Selil yo te grate, santrifuje (16,000×g,10 min,4 degre), epi yo te ekstrè supernatant la. RNA te pirifye lè l sèvi avèk yon twous izolasyon RNA total (GeneDirex@, Vegas, NV, USA). Dapre pwosedi fonksyònman script cDNA Synthesis Kit (BIO-RAD), yo te ajoute reyaktif yo nan lòd epi yo te opere dapre kondisyon ki endike yo pou konvèti RNA nan cDNA. Anplis de sa, yo te itilize PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix (Applied BiosystemsTM). Yo te ajoute yon total de 7.5 uL nan ddH20,2 uL nan cDNA, 0.25 μLof anvan ak ranvèse primè, ak 10 uL nan SYBR GREEN yo te ajoute ak melanje inifòm. Yo montre sekans primè yo nan Tablo 1 ak 2. Lè sa a, yo te mezire RNA lè l sèvi avèk Sistèm PCR an tan reyèl ABI StepOnePlusTM.

4.5. Esè Western Blot

Western blotting yo itilize pou analize chanjman divès kalite pwoteyin nan selil yo. Selil RBL{{0}}H3 yo te simen nan yon plat kilti 3.5 cm. Apre selil yo te grandi a 90 pousan plen epi yo te grangou pou 24 èdtan, yo te pretreated ak referans pou 20 min, ak Lè sa a, ankouraje ak TNF-a oswa IFN-y pou 30 min oswa 1 èdtan, respektivman. Apre grate, yo te pulverize pa ultrason ak santrifuje (13,200 rpm, 10 min, 4 degre). Apre santrifujasyon, yo te pran supernatant la epi yo te quantifye pwoteyin nan ak yon twous tès pwoteyin Pierce (Pierce, Rockford, IL, USA). Li te electrophoresed sou 10 pousan SDS-polyacrylamid gel ak Lè sa a, electroporated ak manbràn PVDF. Apre transfè a te fini, yo te mete manbràn PVDF nan TBS-T (Tris-buffered saline/0.05 pousan tween 20) solisyon ki gen 5 pousan poud lèt ekreme epi souke pou 1 èdtan pou fè pou evite obligatwa ki pa espesifik. Lè sa a, TBS-T te itilize pou lave 3 fwa, 10 min chak fwa. Lè sa a, antikò prensipal yo (1:1000 dilution) yo te ajoute epi mete yo nan 4 degre lannwit lan epi yo te lave 3 fwa ak TBS-T chak 10 minit. Apre yo fin ajoute antikò segondè (dilye 1:1000) pou 1 èdtan, yo te lave manbràn PVDF la 3 fwa ak TBS-T pou 10 minit chak fwa. Finalman, yo te ajoute pwomotè a, epi yo te mete manbràn lan nan yon sistèm ekstraksyon chimik luminesans (BIOSTEP Celvin) pou tire.

4.6.Dinitrochlorobenzene(2,4-Dinitrochloroben2ene, DNCB)Dinitrochlorobenzene, DNCB)Dinitrochlorobenzene (Dinitrochloroben2ene, DNCB) Enflamasyon po atopik ki tankou dèrmatit nan sourit

Premyèman, sourit yo te divize an kat gwoup: gwoup kontwòl, gwoup DNCB (gwoup negatif), referans (3 mg/kg ak 10 mg/kg) ak gwoup DNCB, ak dexamethasone (0.2 mg/kg) ak Gwoup DNCB (gwoup pozitif). Dexamethasone se yon òmòn kortikoterapi ki ka diminye anflamasyon ak reyaksyon alèjik. Nan eksperyans sa a nan vivo, tou de referans ak dexamethasone yo te fonn nan DMSO, pandan y ap DNCB te fonn nan 75 pousan etanòl pa chòk ultrasons. Ansyen an te bay pa piki intraperitoneal, ak pou lèt la, 100 uL te aplike nan po a tounen ak 20 μL te aplike nan zòrèy dwat la. Twa jou anvan eksperyans lan, sourit yo te anestezi ak cheve nan do yo te retire, epi yo te yon ti leman mezire (SCT-MAG-TF) entegre sou do a nan pye dèyè sourit la.cistanche genghis khanApre yo fin repoze pou twa jou, li te konfime ke sourit yo te nan bon kondisyon fizik la ak po a sou zòn nan epilasyon dorsal la te nòmal, ak eksperyans la te kòmanse. Pandan eksperyans la, yo te pran foto pou anrejistre chanjman aparans po a. Premye etap la ({{0}} jou) se peryòd dèrmatoz atopik alèjik. Apre yo fin mezire valè debaz sourit yo nan gwoup DNCB, referans (3 ak 10 mg/kg) ak gwoup eksperimantal DNCB, ak gwoup eksperimantal dexamethasone 0.2mg/kg ak gwoup eksperimantal DNCB, 1 pousan DNCB te aplike respire sou po do a ak zòrèy dwat. Sou senkyèm jou a, referans dwòg yo ak dexamethasone yo te enjekte intraperitoneally. Dezyèm etap la (jou 5 rive jou 14) se te re-endiksyon dèrmatoz atopik.ekstansyon lavi cistancheNan 3 gwoup eksperimantal yo, 0.5 pousan DNCB te gaye egalman sou po dèyè ak zòrèy dwat sourit yo. Nan denmen, valè fizyolojik po a ak foto yo te pran epi anrejistre. Apre sourit yo te elimine ak twòp diyoksid kabòn (CO2) nan 15yèm jou a, yo te retire tisi po dorsal la pou analiz eksperimantal ki vin apre.

4.7.Konpoze 48/80-Konpòtman grate pwovoke nan sourit BALB/c

Yo te koupe cheve nan po a sou do sourit la, epi yo te enjekte 20 μL nan konpoze 48/80 solisyon entrakutane. Sourit kontwòl yo te resevwa piki saline pito. Touswit apre piki a, yo te mete bèt la nan yon kaj obsèvasyon (dyamèt 11 cm, MicroAct, Neuroscience, Tokyo, Japon), ak konpòtman grate sourit la te otomatikman ak objektivman detekte ak evalye. Yo te mezire konpòtman grate a pou 60 min. MicroAct itilize paramèt analiz sa yo pou detekte vag ki koresponn ak konpòtman grate kontinyèl sourit yo: papòt, 0.05 V; diferans evènman, 0.05 s; dire minimòm, 0.25 s; frekans maksimòm, 30 Hz; frekans minimòm, 5Hz. 4.8.Estatistik analiz

Yo te itilize lojisyèl Sigma-Plot (Vèsyon 10.0) pou analiz estatistik la.cistanche nzDone yo eksprime kòm mwayen ± SEM, ak (*) ak (#) kòm nòt. Siyifikasyon estatistik done yo te analize pa valè Student t-tests.p ki pa pè, de keu ki te mwens pase 0.05 ak 0.01 yo te konsidere kòm enpòtan.

5. Konklizyon

Nan etid sa a, nou te detèmine ke referans efektivman inibit degranulation nan selil mast ak diminye ekspresyon de pro-enflamatwa cytokines, ki ka diminye sentòm dèrmatit atopik ki tankou, retabli baryè po a, epi redwi po grate. Nou te plis pwouve ke referans ka pa sèlman aji sou keratinosit yo nan po a, men tou afekte aktivasyon an nan selil mast. Li gen plis potansyèl pou aplikasyon nan maladi po alèjik ak enflamatwa.

Atik sa a extrait de Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 10994. https://doi.org/10.3390/ijms222010994 https://www.mdpi.com/journal/ijms