Rezistans apoptoz nan selil senesan se yon baryè intrinsèques pou senolysis pwovoke pa glikozid kadyak Pati 2

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

Twoub omeyostaz K*/Nat ki te koze pa ouabain mennen nan diferan reyaksyon fizyolojik nan kontwòl ak senesan A549 ak END-MSCs.

Lè w te etabli lefèt ke efè senolytic ouabain se depandan de kalite selil, plis nou te eseye elicide sa ki ka kache diferans ki genyen revele nan repons hMSCs ak A549.Pou sa ka fèt, nou analize senesans estrès oksidatif pwovoke nan END-MSCs ak etoposide. -induced senesans nan A549plis jisteman.benefis cynomoriumMekanis molekilè prensipal aksyon divès glikozid kadyak se anpèchman Nat/K plis -ATPase [44].Nat/K plis -ATPase se yon anzim manbràn plasma ki ponpe sodyòm soti nan selil la pandan y ap ponpe potasyòm nan selil la kont gradyan konsantrasyon. e konsa patisipe nan antretyen an nan K plis ak Na plis omeyostazi. Se poutèt sa, nou te mande si ta ka gen nenpòt diferans nan omeyostazi iyon fondamantal ak ouabain-induit ant kontwòl ak selil senesan nan de kalite.

Tanpri klike isit la pou konnen plis

Twoub nan K plis ak Na plis omeyostaz ki te koze pa ouabain ta dwe finalman mennen nan dissipation nan potansyèl manbràn plasma a. Se konsa, pi lwen, nou te itilize espesifik fliyoresan pwofonde DiBAC4 (3) pou mezire potansyèl transmembrane selil ki pa eksitan. Ogmantasyon fliyoresans lank sa a reflete depolarizasyon manbràn.jasent dezèNan chak kalite selil teste ouabain pwovoke depolarizasyon manbràn previzib, ki konfime dezekilib iyonik (figi 10a). Miyò, nou te obsève nivo konparab depolarize manbràn nan kontwòl ak senesan END-MSCs, pandan y ap senesan A549 te karakterize pa manbràn siyifikativman plis depolarize konpare ak kontwòl selil A549.

Lòt konsekans enpòtan nan déréglementation iyonik yo se chanjman nan potansyèl manbràn mitokondriyo (MP).

Kidonk, lè l sèvi avèk sond fliyoresan JC-1 nou evalye MMP nan selil kontwòl ak senesan sou tretman ouabain. Li ta dwe espesyalman mete aksan sou ke selil senesan yo souvan karakterize pa diminye MMP ki reflete fonksyone byen nan mitokondri, chanjman nan metabolis enèji, ak ogmante nivo espès oksijèn reyaktif entraselilè [45]. Kòm espere, MMP nan senesan END-MSCs ak selil A549 te pi ba pase nan selil kontwòl yo,

menm si diminisyon sa a pa t afekte viabilite selil senesan (figi. Id, 6a, 10b).metòd ekstraksyon flavonoid pdfMenm jan ak rezilta ki anwo yo, ouabain pwovoke pwononse depolarizasyon MMP nan senes-sant A549 konpare ak tokay proliferasyon yo, pandan y ap efè a sou MMP nan kontwòl ak senesan END-MSCs te minim (Fig.10b). Rezime rezilta yo dekri nan pati sa a, nou ka konkli ke bloke Na plis / K plis -ATPase pa ouabain mennen nan depolarize dramatik nan manbràn plasma ak gout nan MMP nan ka senesan A549, kontrèman ak senesan END-MSCS.

Chanjman nan mekanis K plis enpòte medyatè rezistans ouabain nan senesan END-MSCs

Pou klarifye mekanis medyatè chanjman ouabain pwovoke nan polarizasyon manbràn ak MMP ant senesan A549 ak END-MSCs, plis, nou te anplwaye yon apwòch bio-enfòmatik avanse. Objektif analiz la se te revele karakteristik transcriptomic posib ki medyatè kalite selil depann-ent ouabain-rezistans oswa -sansiblite nan selil senesan. Nan lòt mo, nou te poze kesyon an: ki jan senesans nan END-MSCs (selil ouabain ki reziste) diferan de senesans nan A549 (selil ouabain-sansib)? Pou reponn kesyon sa a, nou itilize twa sekans RNA endepandan (RNA-Seq). Premye a se te analiz RNA-Seq

Fig.6 Validasyon modèl senesans A549 pwovoke ak etoposid. Selil senesan A549 montre yon pèt pwopagasyon, b jwenn gwosè selil ki wo, c nivo otofluoresan, ak aktivite d SA-b-Gal konpare ak sa yo ki kontwole. e Nivo fosforilasyon p53 ak Rb ak nivo ekspresyon p21 ak pwoteyin HMGBI nan kontwòl ak senesan A549. Valè yo prezante yo vle di ± SD. Pou plizyè gwoup konparezon nan yon ANOVA yon sèl-fason yo te aplike, n=3, ns pa enpòtan,***p<0.001. for="" pair="" comparisons="" at="" b,c,="" and="" d="" welch's="" test="" was="" used,n="3" for="" b="" and="" c,n="50" for=""><0.001.>flavonoidBa echèl pou imaj yo se 500 μm. GAPDH te itilize kòm kontwòl chajman kontwòl ak senesan END-MSCs fèt pa nou. Dezyèm lan se te seri done pou kontwòl ak senesan A549 telechaje nan GEO [43]. Nan nòt, kondisyon senesans-induit kowenside ak sa yo aplike nan etid la prezan ak nan etid pilòt yo nan glikozid kadyak-induit seno-lysis. Ak twazyèm seri done a te pou kontwòl ak senesan IMR-90 ki te jwenn dirèkteman nan etid la sou glikozid kadyak kòm konpoze senolytic [25]. Sa ki enpòtan, yo te pwouve IMR-90 yo gen tandans fè analiz ouabain-induit. Li ta dwe remake ke konpare sèlman de seri done ki enpòtan pou END-MSCs ak A549 ta finalman mennen nan rezilta move, tankou nan analiz sa yo diferans ki te chache a ant pwosesis senesans nan END-MSCs ak A549 ta pa distenge ak varyasyon yo medyatè pa. divès efè pakèt teknik (ie kalite machin sekans, kondisyon echantiyon an kouri). Pou minimize nenpòt efè pakèt, nou konpare yon seri done pou selil ki reziste ouabain (END-MSCs) ak de pou selil ki sansib pou ouabain (A549, IMR-90). Pou valide enpòtans plis analiz konparatif la, nou te fè yon Analiz Prensipal Konpozan pou ti gwoup jèn ki gen rapò ak tèm GO "senesans selilè" (GO 0090398) ki baze sou done rezime ki gen echantiyon nan tout twa eksperyans ki dekri yo. Vreman vre, pou chak echantiyon kalite selil gwoupe nan de gwoup separe-kontwòl la ak sa yo senesan (Fig.10d).

cistanche ka anti-aje

Pou fè yon analiz de jèn ki eksprime diferansye (DEGs) pandan senesans nan selil ouabain ki reziste ak -sansib, nou te pwodwi modèl estatistik ki te adisyone de predi ak entèraksyon yo. Prezantasyon an schematic nan analiz la parèt nan Fig. 10c.An brèf, premye prediktè a nan modèl la divize tout echantiyon yo pa kontwòl ak sou-gwoup senesans, dezyèm lan-pa rezistans ouabain oswa sansiblite ouabain, ak dènye eleman nan modèl la reflete a. entèraksyon de prediktè yo. Rezilta tès ekspresyon diferansye pou dènye varyab la prezante nan Tablo Siplemantè 1.

Lè sa a, nou te fè analiz anrichisman seri jèn (GSEA) nan tèm Ontoloji Gene (GO) pou Pwosesis Byolojik (BP) (Tablo Siplemantè 2). Miyò, nan mitan pwosesis yo siyifikativman rich, nou te jwenn 'Potasyòm ion enpòte' ak 'Règleman pozitif nan transpò transmembran kasyon yo dwe moute-reglemante pandan senesans nan ouabain ki reziste END-MSCs konpare ak senesans nan ouabain-sansib selil (Fig. 10e). ). Lis nwayo anrichisman jèn ki gen rapò ak pwosesis sa yo enkli KCNJ2, KCNJ14, KCNJ8, SLC12A7, SLC12A8, WNK4 ki te siyifikativman regilasyon nan senesan END-MSCs (Fig. 10f). Pwoteyin ki kode pa jèn KCNJ yo se chanèl potasyòm kalite redresman anndan, ki gen yon pi gwo tandans pou pèmèt potasyòm koule nan yon selil olye ke soti nan yon selil.itilize hesperidinSLC12 yon fanmi transpòtè klori cation-you-pled. Jèn WNK4 kode pou serin / treonin kinaz ki aji kòm yon aktivateur nan kotransportè klori sodyòm-makonnen ak inibitè nan kotranspòtè klori potasyòm-makonnen. Ansanm, rezilta sa yo pèmèt sijere ke senes-sant END-MSCs ka retabli apovri K intraselilè plis nivo pi efikas pase senesan selil A549 e konsa ka jere ak dezekilib iyonik ouabain-induit.

Senescent END-MSCs ekspozisyon anlè

apoptoz-rezistans konpare ak sa yo kontwòl, pandan y ap senesan A549 pa fè sa

Wòl entraselilè K plis nan règleman lanmò selil yo byen etabli [46]. Revele diferans ki genyen ant senes-sant END-MSCs ak selil A549 nan kapasite nan kenbe entraselilè K plis omeyostazi te pouse nou konpare rezistans a estrès jeneral akeri pandan senesans nan tou de kalite selil yo. Li konnen ke estrès ekzojèn yo akonpaye pa twoub nan omeyostazi iyonik, ki mennen nan yon echanj rapid nan iyon divès kalite, ki gen ladan K plis ant selil la ak anviwònman li yo [46]. Rezilta enfliyans estrès yo depann lajman sou kapasite selil yo pou retabli balans iyonik ki apwopriye a nan selil yo. Jan yo montre nan Fig.10e, f, senesans nan END-MSCs te akonpaye pa upregulation nan K plis enpòte sijere ke pandan

Fig.10 Ouabain ki reziste END-MSCs senesan yo kapab retabli twoub nan K plis / Nat omeyostazi ki te koze pa ouabain atravè efikas K plis enpòte, pandan y ap ouabain-sansib selil senesan manke kapasite sa a. a Detèminasyon potansyèl manbràn kontwòl ak senesan END-MSCs ak selil A549 anvan ak 24 èdtan apre tretman ouabain, lè l sèvi avèk sond fliyoresan DiBAC4(3). b Evalyasyon potansyèl manbràn mitokondriyo kontwòl ak senesan END-MSCs ak selil A549 anvan ak 24 èdtan apre tretman ouabain, lè l sèvi avèk sond fliyoresan JC -1. c Konsepsyon analiz bioenfòmatik konparatif twa seri done endepandan RNA-Seq.d Analiz eleman prensipal pou sou-ansanm jèn ki gen rapò ak tèm GO "senesans selilè" (GO 0090398) ki baze sou done konbine ki soti nan twa seri done endepandan RNA-Seq. . e Rezilta GSEA pou jèn yo eksprime diferans ant selil ki reziste analiz ouabain-medyatè (END-MSCs) ak moun ki sansib nan analiz ouabain-medyatè (A549 ak IMR-90) pou 'Règleman pozitif nan transpò transmembran kation' ak 'Potasyòm ion enpòte pwosesis byolojik. f Heatmap ki reflete jèn anrichisman debaz yo pou 'Règleman pozitif transpò transmembran kasyon' ak pwosesis byolojik 'Potasyòm ion enpòte'. Valè yo vle di ± SD. Siyifikasyon estatistik te evalye pa t-tès Elèv la: ns pa enpòtan,*p<><><>

devlopman senesans END-MSCs amelyore kapasite yo pou retabli nivo K plis. Enteresan, nou pa t 'kapab revele yon tandans menm jan an pou senesans A549, kidonk, A549 te sanble pa jwenn okenn karakteristik espesifik ki gen rapò ak enpòte K * la pandan pwogresyon senesans. Dapre done literè yo, diminisyon estrès nan K * entraselilè ak enkapasite pou retabli nivo li yo favè aktivasyon caspases ak nucleases e konsa yo pwopoze yo dwe yon faktè pro-apoptotik [46].

Nan liy ak sijesyon sa a, lè l sèvi avèk analiz byoenfòmatik nan seri done RNA-seq ki anwo yo, nou revele siyifikatif desann-règleman nan pwosesis yo ki gen rapò ak apoptoz pandan senesans nan END-MSC yo konpare ak A549 ak IMR -90 (Fig. lla) . Anplis, senesans nan A549 ak IMR-90 karakterize pa siyifikatif moute-règleman nan jèn pro-apoptotik, ki gen ladan BAD, BAX, BOK, BAK-1, ak NOXA (Fig.11b). Done sa yo endike ke END-MSC yo jwenn fenotip apoptoz ki reziste pandan senesans, pandan y ap senesan IMR -90 ak A549 te vin gen tandans apoptoz (Fig.11b). Pou ranfòse obsèvasyon sa a, nou analize anplis done microarray pou kontwòl ak replikasyon AD-MSCs senesan ki tou pre-sèvi ouabain-rezistans pandan senesans jan sa endike anwo a (Fig.4g). Lè n ap analize nivo ekspresyon jèn ki gen rapò ak apoptoz yo, nou te obsève fenotip distenk ki reziste apoptoz nan AD-MSCs senesan ki sanble ak sa yo ki senesan END-MSCs (Fig. S8a, b siplemantè).

Pou verifye rezilta analiz transcriptomic, nou te estime nivo ekspresyon jèn ki gen rapò ak apoptoz ak K plis enpòte nan tou de kalite selil senesan-END-MSCs ak A549 pa RT-PCR (figi siplemantè S9). Anplis de sa, nou analize ekspresyon nan menm lis jèn la lè l sèvi avèk lòt modèl selilè ouabain ki reziste ak ouabain-sansib, DP-MSCs senesan trete doxorubicin, ak SK-Help senesan trete ak etoposid, respektivman (figi siplemantè S9). Jan yo montre nan Fig. S9 Siplemantè, tou de kalite ouabain ki reziste selil-senesan END-MSCs ak DP-MSC yo te montre modèl ekspresyon jèn ki sanble, espesyalman KCNJ2, SLC12A ak WNK4 k ap patisipe nan K plis restorasyon yo te upregulated, proapoptotic BAX te downregulated, pandan y ap. antiapoptotic MCL-I te upregulated. Anplis, modèl ekspresyon menm jèn yo diferan de sa yo obsève pou A549 ki sansib pou ouabain ak SK-Hep1. Rezilta sa yo konfime done transcriptomic nou yo ak ranfòse konklizyon an konsènan pwofil apoptoz varye akeri pandan senesans nan diferan kalite selil.

Apre sa, nou teste si distenksyon yo obsève nan background apoptoz pandan senesans nan END-MSCs ak A549 ka gen yon enpak sou rezistans nan estrès an jeneral nan selil senesan. Pou fè sa, nou evalye viabilite selil yo sou estrès oksidatif ak staurosporine, tipikman aplike pou pwovoke apoptoz. Vreman vre, senesan END-MSC yo te tounen siyifikativman pi rezistan a tou de estrès konpare ak tokay kontwòl yo (figi 1lc). Okontrè, selil A549 yo demontre yon sitiyasyon vise vèrsa, kòm selil senesan yo montre yon tandans pou yo pi sansib nan direksyon lanmò selil estrès (figi 11d). Obsèvasyon sa a chanje paradigm ki egziste deja ke rezistans lanmò amelyore se yon karakteristik komen nan nenpòt kalite selil senesan, demontre espesifik espesifik selil li yo.

Ki baze sou done ki anwo yo, nou sipoze ke diminye "defans" apoptoz nan senesan END-MSC yo ta dwe kreye kondisyon favorab pou plis analiz. Nan sans sa a, nou te konsantre sou yon manm antiapoptotik byen li te ye nan pwoteyin fanmi BCL-2—MCL-1, depi ekspresyon li te upregulated nan apoptoz ki reziste senesan END-MSCs (Fig. 1lb ak Fig siplemantè). S9a). Pou sa ka fèt, nou pretrete kontwòl ak senesan END-MSCs ak A-1210477 inibitè espesifik MCL-1, epi answit aplike glikozid kadyak pou pwovoke analiz. Nòt, A-1210477 tèt li pa te gen okenn efè sou kapasite pwopagasyon selil kontwòl yo ak sou rantabilite nan senesan yo jan sa endike sou koub kwasans yo (Fig. 1le). Aplikasyon ki vin apre nan glikozid kadyak mennen nan diminisyon nan kantite selil solid, ki jan-tout tan efè a te pi pwononse nan ESCs senesan (Fig.11f). Se poutèt sa, anpeche MCL-1 ak A-1210477 predispoze ESC senesan nan direksyon lanmò ouabain-induit ki endike pou analiz. Dènye prèv pou rezistans apoptoz akeri pandan senesans END-MSCs yo dwe yon baryè intrinsèques pou analiz efikas deklanche pa glikozid kadyak.

Diskisyon

Nan etid la prezan, nou teste efè senolytic nan glikozid kadyak, sètadi ouabain ak bufalin, sou hMSCs. Tou de konpoze yo te dènyèman idantifye yo gen efè selektif sitotoksik sou selil senesan (modèl onkogene-/ther-apy-induced senesans) ki gen orijin diferan, ki gen ladan selil prensipal IMR-90,HUVEC, ARPE-19,T/ C-28 ak selil kansè SK-Help,A549,SK-Mel-5,MCF7,HCT116, HaCat,H1299,U373-MG,H1755[25,26].San atann, nou pa t 'kapab revele okenn efè cytotoxik preferansyèl ni nan ouabain ni nan bufalin sou senesan END-MSCs konpare ak sa yo kontwòl. Sa ki enpòtan, yo te verifye absans analiz lè l sèvi avèk hMSC yo jwenn nan tisi adipoz, kaka dantè ak jele Warton, ak divès kalite modèl senesans. Lèt la te mennen nou nan sijesyon ke rezistans nan analiz kadyak glycoside-induit ta ka karakteristik komen nan hMSCs. An menm tan an, nou te kapab pwovoke apoptoz preferansyèlman nan senesan A549 ak SK-Help, kidonk repwodui efè senolytic nan glikozid kadyak ki dekri nan atik ki enpòtan yo [25,26]. Avèk selil ki reziste ak sansib nan analiz ouabain-induit (ouabain ki reziste / ouabain-sansib) ki disponib, nou te eseye elicide kòz fondamantal ki kache diferans sa a. Mekanis molekilè komen nan aksyon glikozid kadyak se obligatwa nan Nat/K plis -ATPase a ak bloke aktivite li yo. Lè yo idrolize ATP, anzim sa a asire ponpe Na plus soti nan selil la epi enpòte K plis nan selil yo e konsa kenbe gradyan fizyolojik elektwochimik, omeyostazi iyonik, pH selilè, ak volim selil ki esansyèl pou siviv selil ak fonksyone [47]. Se poutèt sa, nou te espekile ke kapasite senolytic nan ouabain ta ka depann sou gravite a nan dezekilib K plis / Nat nan selil yo trete. Nan liy ak sijesyon sa a, nou revele ke ouabain pwovoke depolarizasyon pi pwononse nan manbràn plasma ak gout nan MMP nan ouabain-sansib senesan A549.

Anjeneral pale, enpak Nat/K plis -ATPase inhibition sou siviv selil yo te montre yo dwe espesifik selil-kalite. Pou egzanp, ouabain yo te montre yo potensye apoptoz nan lenfosit, selil Jurkat, ak selil epitelyal kanin, pandan ke li echwe pou pou pwovoke lanmò nan selil epitelyal ki soti nan aorta rat, selil granules serebral rat, ak lenfosit ren proximal tubulaire LLC-PK1 malgre menm modulasyon. nan rapò kasyonik [48-54]. Youn nan mekanis yo pwopoze nan aksyon ouabain proapoptotic se rediksyon nan intraselilè ki favorize kontraksyon apoptotik, aktivasyon caspases, ak inisyasyon nan pwogram apoptotik [46, 47]. Konsidere konparab K plis pèt men efè opoze sou endiksyon lanmò jwenn pou modèl ouabain ki reziste ak ouabain-sansib, nou sijere diferans ki genyen nan sistèm konpansatwa kation yo. Gout nan nivo K plis intraselilè ta dwe esansyèlman mennen nan deklanchman K plis enpòte soti nan espas ekstraselilè pou konpanse mank de kasyon sa a. Se poutèt sa, efikasite nan K plis restorasyon ta ka kache predispozisyon apoptoz sou tretman ouabain. Pou teste sijesyon sa a, nou te aplike analiz bioenfòmatik konplèks konpare chanjman nan siyati transcriptomic pandan senesans nan selil ouabain ki reziste (END-MSCs) ak selil ouabain-sansib (A549 ak IMR-90). Nou te obsève gwo regilasyon nan pwosesis ki gen rapò ak enpòtasyon ion potasyòm pandan senesans END-MSCs, pandan y ap pandan senesans nan oua-bain-sansib A549 ak IMR-90 pwosesis sa yo rete san okenn chanjman oswa menm diminye. Ki baze sou sa nou ka espekile ke senesan END-MSCs ka efektivman fè fas ak ouabain-induit K plis rediksyon atravè sistèm enpòte kation aktif, ki anpeche endiksyon apoptoz. Okontrè, senesan A549 ak IMR-90 nou-sansib-bain-sansib yo gen mwens kapab simonte K plis pèt, epi konsa yo gen tandans apoptoz. selil A549 senesan, ki montre yon dezekilib iyonik pwononse tipik pou selil ki mouri yo.

Olye ke yo te karakteristik inik nan apoptoz ouabain pwovoke, yon gout nan kontni entraselilè K plis se pwobableman karakteristik komen nan lanmò apoptotik deklanche pa divès kalite estrès, egzanp tretman staurosporine ak estrès oksidatif [46]. An konsekans, diminye kapasite nan senesan A549 retabli sitoplasmik K plis ta dwe finalman mennen nan yon bès nan rezistans nan estrès jeneral. Sepandan, nosyon sa a kontredi definisyon modèn nan senesans selil, ki deklare ke selil senesan yo trè rezistan a apoptoz [16]. Li ta dwe espesyalman mete aksan sou ke rezistans apoptoz ranfòse te fòme baz pou devlopman analytics [16, 17].

Premye mansyone nan ogmante rezistans estrès selil senesan yo te retounen nan ane 1995 lè yo te jwenn fibroblasts repwodiktif senesan yo pi rezistan nan retrè serik konpare ak sa yo ki kontwole [55]. Premye etid sa a te swiv pa yon kantite limite nan envestigasyon ki endike ke selil senesan yo pi rezistan a UV-limyè, staurosporine, thapsigargin, ak lòt estrès pase tokay proliferasyon yo [56, 57]. Sepandan, nou lwen premye moun ki poze kesyon rezistans apoptoz amelyore kòm karakteristik jeneral selil senesan yo. Kidonk, nan revizyon ki te pibliye an 2003, li te rapòte ke "... rezistans apoptoz se pa yon karakteristik jeneral nan selil senesan, ki ka tou gen tandans apoptotik depann sou kalite selil ak stimuli apoptoz ..." [58]. Vreman vre, plizyè done demontre pi gwo sansiblite nan selil senesan nan apoptoz estrès pwovoke pase nan selil kontwòl [59-61]. Pou egzanp, senesan HUVEC yo te gen plis tandans fè apoptoz pwovoke pa oksidize LDL oswa TNFa konpare ak selil kontwòl [61]. Malgre konfli evidan an, dènye dout la te parèt an 2015 e li te sonnen jan sa a: "Li sanble endesi ke rezistans mondyal apoptoz se yon karakteristik jeneral nan selil senesans" [62]. Nan menm ane a, premye etid la te pibliye analiz [16]. ]. Nan etid sa a, otè yo te mete aksan sou ekspresyon an ogmante nan rezo jèn pro-siviv nan selil senesan ki kontribye nan rezistans amelyore yo nan apoptoz. Se konsa, okòmansman, senolytics reprezante dwòg yo vize pwoteyin ki pwoteje selil senesan soti nan apoptoz. Dekouvèt analytics ansanm ak rezilta enpresyonan nan retire selil senes-sant yo lè l sèvi avèk sourit transjenik INK-ATTAC te deklanche yon gwo syans k ap chèche nouvo com-pounds yo ak aktivite emolitik [16-26,63]. Pandan de dènye ane yo, yo te pibliye anpil revizyon sou analiz [13-15,64-66]. Sepandan, depi 2015 amelyore rezistans apoptoz nan selil senesan pa t 'yon kesyon de deba, menm si, an reyalite, li pa te teste nan etid sa yo.

Enteresan, lè nou konpare siyati transcriptomic selil ouabain ki reziste (END-MSCs) ak selil ouabain-sansib (A549 ak IMR-90), nou te jwenn ke sèlman senesans nan END-MSCs te akonpaye pa akizisyon de avi-kapab. pwofil anti-apoptotik. Okontrè, senesans A549 ak IMR-90 karakterize pa yon gwo regilasyon nan jèn pro-apoptotik, tankou BAD, BAX, BOK, BAK-1, NOXA, ak sou sa. Sa ki enpòtan, rezilta sa yo te pwolonje lè l sèvi avèk lòt selil ouabatin ki reziste DP-MSCs. Sou yon bò, rezilta sa yo bay yon eksplikasyon molekilè adisyonèl pou absans ouabain-induit analiz nan hMSCs, epi, nan lòt men an, klèman demontre ke A459 ak IMR-90 vin predispoze nan apoptoz pandan senesans. Nòt, done nou yo konsènan chanjman transcriptomic nan jèn ki gen rapò ak apoptoz nan IMR senesan-90 kowenside ak rezilta yo prezante, men yo pa diskite, nan atik ki te pibliye pa Guerrero et al., kòm done yo pou kontwòl ak senesan IMR{{ {19}} selil soti nan etid sa a [25]. Analiz egzak kat chalè yo bay nan etid sa a te revele regilasyon BAX, BAD, BAD, BAKI, ak NOXA nan senes-sant IMR-90 an konparezon ak selil kontwòl yo. Anplis de sa, Baar et al. tou te revele "inatandi" upregulation nan proapoptotic ak downregulation nan jèn antiapoptotic nan senesan IMR-90, mansyone ke senesan IMR-90 ta dwe prime pou sibi apoptoz [21].

Yo nan lòd yo ranfòse obsèvasyon nou an, nou konpare rezistans nan kontwòl ak senesan END-MSCs ak A459 ak apoptoz ki pi komen estrès stimuli-oksidatif ak staurosporine. Dapre rezilta analiz bioenfòmatik nou an, senesan END-MSC yo te vin pi plis reziste estrès pase selil kontwòl yo. An menm tan an, senesan A549 demontre reyaksyon opoze a ke yo te yon ti kras pi fasil pase selil kontwòl nan tou de kalite estimilis estrès. Se poutèt sa, aksyon senolytic nan glikozid kadyak, omwen pou A549, ta ka medyatè pa predispozisyon selil senesan ki gen orijin sa a nan apoptoz konpare ak tokay kontwòl yo, tandiske absans la nan senolysis ouabain-induit nan hMSC yo ta ka eksplike pa ogmantasyon nan. rezistans jeneral apoptotik pandan senesans selil sa yo. Anplis, febli "defans antiapoptotik" pa anpèchman MCL-1 predispoze END-MSCs nan senolysis pwovoke pa glikozid kadyak. Malgre ke nou te kapab reyalize senolysis vle a nan END-MSCs pa anpeche MCL-1, estrateji nan modile ekspresyon an nan jèn yo konkrè anti-apoptotik predispose hMSCs senesan nan senolysis pa sanble trè pwomèt, depi ekspresyon an. dinamik konkrè anti-oswa pro-apoptotik jèn yo ka diferan ant selil ki gen plizyè orijin. Nou kwè ke akizisyon de sa yo rele "anti-apoptotik" pwofil la pandan senesans selil, olye ke chanjman nan jèn yo anti-oswa pro-apoptotik konkrè, se responsab pou rezistans ouabain, nan sans sa a posiblite pou chanje pwofil la antye ta ka. sanble pi rezonab.

Konklizyon nou yo ki mete aksan sou rezistans apoptoz akeri pandan senesans hMSC yo dwe yon baryè intrinsèque pou analiz efikas ta ka pwolonje pi lwen pase glikozid kadyak. Miyò, yo te jwenn hMSC senesan yo rezistan a lòt konpoze senolytic. Vreman vre, lè nou analize prèv ki egziste deja yo, nou te jwenn ke divès konpoze ak aktivite senolytic deklare, tankou navitoclax, nikotinamid riboside, danazol geldanamycin, ganetespib, fisetin, inibitè BCL-XL, quercetin, etomoxir, antimycin A, FOXO{2}}DRI. ,17-DMAG te tounen inefikas pou retire vize nan preadiposit imen senesan (selil précurseur ki tankou fibroblast ki sòti nan tisi adipoz imen) ak hMSC nan mwèl zo [17-19, 36, 40). Done yo konsènan absans analiz nan hMSC yo yon ti jan kontredi rezilta enspire yo jwenn lè l sèvi avèk modèl sourit in vivo, ki demontre rezilta pozitif sou aplikasyon sistemik nan analytics [37, 38]. Pou egzanp, li te montre ke clearance nan selil souch glann saliv senesan lè l sèvi avèk ABT263 ka anpeche radyoterapi-pwovoke xerostomia [38]. Anplis de sa, retire MSC mwèl zo senesan pa quercetin amelyore fòmasyon mwèl zo [37]. Sa ki enpòtan, li te montre ke sourit senesan ak MSC rat kontrèman ak hMSC yo reponn a analytics. Pou egzanp, quercetin, quercetin-tin＋dasatinib, ak ABT263 siyifikativman retire MSC sourit senesan [16]. Epitou, yo montre 17-DMAG redwi anpil bmMSC senesan nan yon modèl sourit progeroid [19]. Se poutèt sa, amelyorasyon yo nan divès ògàn ak sistèm fonksyone ki dekri nan etid sa yo yo espekile yo dwe konsekans retire vize nan selil sourit senesan. Sepandan, analiz sa yo poko montre okenn rajenisman fonksyonèl nan hMSCs. Yon distenksyon evidan konsa ant reyaksyon sourit ak MSC imen anvè analiz sijere ke amelyorasyon nan terapi senolytic pa ka konsève atravè espès yo. Rezilta yo jwenn pou konpoze seno-lytic UBX0101 ka konsidere kòm yon bon ilistrasyon ki konfime dènye deklarasyon an. Yo te montre ajan sa a klè selil senesan nan yon modèl sourit nan artroz, ki siyifikativman redwi doulè ak ankouraje reparasyon nan Cartilage domaje a [20]. Malerezman, UBX0101 te echwe pou diminye pwogresyon maladi ak doulè nan pasyan ki gen ostoartrit douloure modere-a-sèvi pandan faz II esè klinik [67-69]. Enkyetid menm jan an leve sou konbinezon senolytic dasatinib+querce-tin[68].

An rezime, de konklizyon enpòtan soti nan done yo jwenn yo. Ansyen an te demontre ke glikozid kadyak yo pa kapab klè hMSC senesan. Absans analiz ta ka medyatè pa efikas K plis enpòte selilè ak ogmante rezistans apoptoz nan hMSC senesan. Lèt la se pi fondamantal epi li revele ke rezistans apoptoz se pa yon karakteristik jeneral nan selil senesan, tankou pandan senesans kèk selil jwenn yon fenotip 'apoptoz ki reziste', pandan ke lòt moun pa fè sa. Sa ki enpòtan, sèlman selil A549 senesan ki gen tandans apoptoz ta ka efektivman netwaye pa glikozid kadyak. Ki baze sou sa nou ka espekile ke efikasite nan lòt apwòch senolytic ta ka depann de si wi ou non selil senesan yo tout bon apoptoz-rezistan konpare ak tokay proliferasyon yo. Finalman, menm si 'analytics' se yon sijè ki cho ak yon anpil nan done enspire yo pibliye, konklizyon konsènan efikasite nan analiz yo ta dwe pran ak prekosyon kòm eterojenite nan senesans selil toujou rete yon 'devinèt'.

Atik sa a soti nan Cellular and Molecular Life Sciences (2021) 78:7757–7776 https://doi.org/10.1007/s00018-021-03980-x