Repons byochimik ak istopatolojik Biomphalaria Alexandrina pou RIPEX (regilatè kwasans plant)Ⅰ

Résumé

Jan nou koumanse

Regilatè kwasans plant yo lajman itilize nan agrikilti pou ogmante kwasans ak matrité plant yo, men yo mete an danje ekosistèm akwatik la. Etid aktyèl la evalye efè ekspoze subletal nan RIPEX 48 pousan konsantrasyon EC (8 ak 16 µL/L) sou paramèt estrès oksidatif, òmòn sèks, anzim potansyèl iminitè, kantite emosit diferan, ak istopatoloji glann dijestif ak ovotestis nan. Biomphalaria alexandrina Molisk.

Klike sou cistanche herba pou testostewòn

Rezilta yo

Ekspozisyon RIPEX te lakòz yon ogmantasyon jeneral nan aktivite Superoxide dismutase ak Glutathione-S-Transferase nan B. Alexandrina. Sepandan, ekstrèm ekspoze RIPEX inibit aktivite SOD nan Molisk. Aktivite Malondialdehyde te montre yon ogmantasyon nan B. Alexandrina ekspoze a tou de konsantrasyon apre tout peryòd ekspoze. RIPEX te lakòz tou yon ogmantasyon siyifikatif nan testostewòn nan Molisk ekspoze a 16 µL / L, li te fè, sepandan, diminye nivo òmòn nan Molisk ekspoze a 8 µL / L nan 7 jou. Konsènan estradiol, te gen yon ogmantasyon enpòtan apre 3 jou ekspoze a 16 µl/L ak 7 jou ekspoze a 8 µL/L. Ekspozisyon RIPEX te ogmante tou aktivite anzim Myeloperoxidase ak Adenosine deaminase nan glann dijestif Molisk yo. Li te ogmante kantite total emosit nan Molisk ekspoze ak kantite granulosit. Glann dijestif kalmason ak ovotestis te montre chanjman patolojik apre 7 jou ekspoze RIPEX.

Konklizyon

Konklizyon sa yo sijere ke RIPEX se toksik pou B. Alexandrina e ke kalmason sa a ka itilize kòm yon bioindicator pou kontaminasyon anviwònman an ak regilatè kwasans plant yo.

Mo kle

Biomphalaria alexandrina, RIPEX, Testostewòn, Estradiol, Myeloperoxidase, Adenosine deaminase, Istopatoloji

1 background

Polisyon agrochimik nan dlo sifas yo se yon enkyetid anviwònman mondyal k ap grandi, patikilyèman nan zòn kote agrikilti ap grandi ak entansifye rapidman. Plizyè pwodui chimik sentetik, tankou pestisid oswa angrè, yo itilize pou modifye kantite ak kalite rekòt pou satisfè bezwen kliyan yo [7, 40]. Pwomotè kwasans plant yo se agrochimik komen nan anpil peyi [18].

Lè pwodui chimik sa yo rale dirèkteman oswa konsome ak legim ki kontamine, yo fè mal sante moun [39]. Pestisid organofosfò a, etefon (2-chlorethyl phosphonic acid) se yon pwodui chimik sentetik ki bay ethylene ki souvan itilize kòm yon regilatè kwasans plant (PGR) pou ankouraje endiksyon fower, matrité fwi, ak lòt reyaksyon fizyolojik. Li apwouve pou itilize sou yon varyete manje, manje, ki pa manje, stock pepinyè lakòz efè tèmik, ak plant dekoratif grandi deyò [3, 50]. Evalyasyon laboratwa sou toksisite ethephon te demontre ke ethephon pwovoke malformasyon mòfometrik dezyèm antèn, pwal sansoryèl, kolòn vètebral ke, ak podium Daphnia magna ki te mennen nan pèt fonksyon ak lanmò [54].

Abd-El Azeem [1] te anrejistre yon rediksyon nan to kwasans, domaj ADN, ak efè apoptotik nan selil glann dijestif nan paresseux Deroceras reticulatum apre ekspoze a etefon. Anpil otè apwouve toksisite Ethephon sou rat ak zwazo [2, 17, 55]. Anplis de sa, ekspoze etefon te lakòz jenotoksisite, estrès oksidatif, ak toksisite repwodiktif nan sourit [16]. Teratogenicity ak malfonksyònman sistèm gonadal nan sourit yo te lye tou ak ekspoze ethephon [2, 16]. Ethephon te montre tou yo dwe imunotoksik, gen efè mutagenic [26], ogmante estrès oksidatif, ak pi ba konsantrasyon deoxyribonukleik ak asid ribonukleik [4].

Ethephon nan kò dlo yo ka mete an danje fon akwatik; sepandan, done sou enpak li sou òganis akwatik yo ra. Plizyè espès akwatik yo te itilize pou detekte òmòn kwasans plant nan sistèm akwatik. Sepandan, kèk nan òganis sa yo difisil pou manipile ak kenbe nan laboratwa a, sa ki fè yo pi difisil pou itilize nan evalyasyon ekotoksikolojik [54]. Molusk akwatik, ki gen ladan Molisk, dènyèman te genyen atansyon kòm òganis tès akòz bezwen an pou devlope modèl envètebre pou siveyans anviwònman an nan kontaminan akwatik [21, 45]. Molisk yo se gwoup molisk ki pi abondan nan sistèm akwatik yo. Molisk yo prezante yon altènativ mwens eksplwatasyon nan vertebre ki pi wo kòm bioindicators paske yo ka itilize nan yon varyete eksperyans san yo pa chèche apwobasyon etik, ak akizisyon yo ak antretyen yo pa chè [13].

Nan respè sa a, kalmason Biomphalaria alexandrina te lajman itilize kòm yon òganis endikatè nan polisyon dlo dous ak pestisid [29, 30]. Pi lwen pase potansyèl li kòm yon bioindicator, kalmason sa a aji kòm yon lame entèmedyè pou transmisyon Schistosoma mansoni [35]. Se poutèt sa, konsantrasyon agrochimik nan anviwònman an ka enfliyanse transmisyon schistosomiasis atravè efè dirèk ak endirèk sou lame entèmedyè ak dansite parazit [27]. Ankèt aktyèl la te vize pou mennen ankèt sou enpak ekspoze subletal nan regilatè kwasans plant la, RIPEX 48 pousan EC (non komès ethephon, 2-chlorethyl phosphonic acid) sou divès aspè byochimik, iminolojik, ak histolojik nan B. alexandrina. Molisk kòm yon òganis bioindicator.

2 Metòd

2.1 Òganis tès la

Molisk Biomphalaria alexandrina yo te ranmase nan Lake Manzalah ki sitiye nan El-Matareya, Gouvènè Dakahlia, peyi Lejip (31 degre 11′ N 32 degre 2′ E) epi konsève nan dlo tiyo ki byen aere nan yon tanperati konstan 20 degre. Yo te manje fèy leti fre chak jou. Apre antretyen pou 4 semèn nan kondisyon laboratwa yo, an sante Molisk matirite (10-12 mm an dyamèt koki) yo te itilize nan eksperyans ki vin apre yo.

2.2 Materyèl eksperimantal ak kondisyon ekspoze

Regilatè kwasans plant la, RIPEX (yon fòm solisyon ki gen 48 pousan ethephon [2- chloroethyl phosphonic acid (C2H6ClO3P)] ak 52 pousan engredyan inaktif) te achte nan men Chema Industries (New Nubaria vil, Behira, peyi Lejip; lisans rejis Non). . 1840). Yo te prepare yon seri de konsantrasyon. Replik pye bwa ak dis Molisk yo chak te ekspoze. Apre 1-jou ekspoze, kalmason ki mouri yo te konte, epi retire LC50 ak LC90 pa lojisyèl estatistik syans sosyal (SPSS; IBM Corp. Armonk, NY, USA).

2.3 Konsepsyon eksperimantal

Yo te itilize de konsantrasyon subletal ki reprezante LC10 ak LC20 (8 ak 16 µL/L). 90 Molisk te divize an twa gwoup, chak gwoup ak twa replike (dis Molisk/replike): gwoup kontwòl la, gwoup 8 µL/L-ekspoze, ak gwoup 16 µL/L-ekspoze. Nan 1-, 3-, ak 7-entèval jou yo, yo te evalye biomaketè estrès oksidatif ak anzim potansyèl iminitè nan glann dijestif la. òmòn esteroyid yo te evalye nan Ovotestis. Konte diferan emosit, ak istoloji nan glann dijestif yo ak ovotestis yo te evalye. Pou envestigasyon byochimik, yo te omojeneize 0.5 g tisi (glann dijestif oswa ovotestis) ki soti nan chak gwoup nan 0.5 mL tanpon fosfat (pH 6.5) lè l sèvi avèk yon omojenize vè ak santrifuje nan 10, 000 × g, 4 degre pou 10 min. . Supernatant yo te itilize pou analiz ki vin apre yo.

2.4 Detèminasyon makè estrès oksidatif

2.4.1 Superoxide dismutase (SOD, EC 1.15.1.1)

Aktivite SOD yo te detèmine lè l sèvi avèk EnzyChrom™ Superoxide Dismutase Assay Twous (Cat. No: ESOD{{0}}; BioAssay Systems, Hayward, CA, USA) dapre enstriksyon manifakti a. Omojene tisi a lè l sèvi avèk tanpon lysis frèt (50 mM fosfat potasyòm, 0.1 mM EDTA, ak 0.5 pousan Triton X-100) te santrifuje nan 12,000 g pou 5 min nan 4 degre. , epi yo te kolekte supernatant la pou detèminasyon SOD [43]. Aktivite SOD a te mezire nan dansite optik (OD) nan 440 nm.

2.4.2 Glutathione-S-Transferase (GST, EC 2.5.1.18)

Anzim sa a katalize konjigezon GSH ak {{0}}kloro-2,4-dinitrobenzèn (CDNB). Li mezire spectrophotometrically nan 340 nm. Melanj reyaksyon an gen tanpon fosfat potasyòm 0.1 M, pH 6.5, GSH ki fonn nan tanpon fosfat potasyòm (140 mg/100 mL), ak CDNB 4 mg/ml nan alkòl etilik. Yon inite aktivite anzim defini kòm kantite anzim ki katalize fòmasyon 1 μmol S-konjige pou chak minit [11].

2.4.3 Malondialdehyde (MDA)

Malondialdehyde nan omojèn antye te detèmine kòm sibstans ki sou asid thiobarbituric reactive (TBARS) dapre metòd estanda Ohkawa et al. [37]. Melanj reyaksyon an enkli 0.1 mL omojene tisi a, yon volim egal nan solisyon sodyòm Dodecyl Sulfate, 0.75 mL asid acetic, 0.75 mL asid thiobarbituric, ak 0.3 mL dlo distile. Konpozan sa yo te melanje nan yon toubiyon epi yo te enkube nan yon beny dlo bouyi pou 1 èdtan apre sa yo refwadi nan tanperati chanm. Yo te ajoute dis 0.5 mL dlo distile ak 2.5 mL n-butanol nan chak tib ak kouray melanje ak yon toubiyon answit vire nan yon santrifijeur nan 2,500 × g pou 10 min. Absorbans te li nan 532 nm.

2.5 Detèminasyon òmòn yo

2.5.1 Testostewòn

Testostewòn yo te detèmine lè l sèvi avèk yon tès imunosorban lye ak anzim (ELISA) (Cat. No: ADI-900-065; Enzo Life Sciences, NY, USA), Testostewòn se androjèn prensipal la ki afekte devlopman seksyèl prensipal ak segondè kòm kondwi sèks. 100 µL diluan estanda (tanpon tès 3 oswa medya kilti tisi) yo te pipete nan pi li ki pa espesifik la ak maksimòm obligatwa (0 pg/mL estanda). Apre sa, 100 µL estanda #1 jiska #5 nan pwi ki apwopriye yo. Echantiyon an (100 µL) te pipete nan pi ki apwopriye yo ak 50 µL nan tanpon tès 3 nan pi ki pa espesifik obligatwa yo. Epitou, yo te ajoute 50 µL nan antikò jòn nan chak pi, eksepte vid la, aktivite total, ak ki pa espesifik pi obligatwa. Enkubasyon plak la nan tanperati chanm sou yon plak Shaker pou 1 èdtan nan 500 rpm. Apre sa, yo te ajoute 50 µL konjige ble a nan chak pi, eksepte pou aktivite total ak pwi vid yo. Apre yo fin vide pwi yo nan kontni an, lave yo te fè lè w ajoute 400 µL solisyon lave nan chak pi 3 fwa. Yo te ajoute konjige ble (5 µL) nan pwi total aktivite yo epi yo te ajoute 200 µL nan yon solisyon p-nitrophenyl fosfat nan chak pi epi yo te enkube a 37 degre pou 1 èdtan san yo pa souke. Lekti plak la nan 405 nm te fèt apre yo fin ajoute 50 µL solisyon sispann nan chak pi [12, 48].

2.5.2 Estradiol

Estradiol te detèmine lè l sèvi avèk yon twous estradiol ELIZA (Cat. No: 501890; Cayman Chemical, Michigan, USA) dapre pwotokòl manifakti a. Prensip reyaksyon sa a baze sou konsantrasyon estradiol acetylcholinesterase (AChE) se konstan, men konsantrasyon estradiol natif natal varye kidonk kantite estradiol acetylcholinesterase (AChE) traser ki mare nan antiserum estradiol se envès pwopòsyonèl ak konsantrasyon estradiol natif natal. nan pi a. Yo te ajoute 100 µL tanpon ELISA nan pri obligatwa ki pa espesifik ak pi obligatwa maksimòm. Ajoute 50 µL soti nan tib #8 nan toude pi ba estanda yo (Standa 8) ak 50 µL soti nan tib #7 nan chak nan pwochen pi estanda yo (Standa 7). Yo te ajoute yon echantiyon (50 µL) nan chak pi. Estradiol AChE Tracer (50 µL) te ajoute nan chak aktivite total ak pwi vid yo. Apre sa, yo te ajoute antiserum Estradiol ELISA (50 µL) nan chak pi eksepte pou aktivite total, lyezon ki pa espesifik, ak pwi vid yo. Apre enkubasyon shaker òbital (2 èdtan nan tanperati chanm), yo te mezire absorbans nan 414 nm [52].

2.6 Detèminasyon anzim potansyèl iminitè yo

2.6.1 Myeloperoxidase (MPO, EC 1.11.2.2)

Yon inite aktivite MPO defini kòm kantite anzim ki idrolize substra a epi ki jenere kloramin taurin pou konsome 1.0 μmol TNB pou chak minit a 25 degre. MPO te detèmine lè l sèvi avèk yon twous tès aktivite kolorimetrik myeloperoxidase (Cat. No: MAK068; Sigma-Aldrich, MO, USA). Absorbans la te mezire nan 412 nm.

2.6.2 Adenosine deaminase (ADA, EC 3.5.4.4)

ADA se yon anzim ki katalize konvèsyon adenosin ak 2'-deoxyadenosine nan inozin ak 2'-deoxyinosine. ADA te detèmine selon prensip bilten teknik adenosine deaminase aktivite tès kit (Cat. No: MAK400; Merck KGaA, Darmstadt, Almay). Yon inite adenozin deaminaz se kantite anzim ki idrolize adenozin pou bay 1.0 μmol inozin pou chak minit a 37 degre. Réactifs yo se 1 × ADA tanpon tès (41 μL), ADA Converter (2 μL), ADA devlope (2 μL), ak ADA substrate (5 μL).

2.7 Konte emosit diferans

Yo te kolekte emolinf nan kalmason an (kontwòl, ekspoze) dapre Sminia [47]. Apre yo te fin manyen tèt-pye a pa yon pipèt Pasteur, kalmason an te fòse yo retire pwofondman nan koki li yo ak ekstrè emolinf, ki te kolekte pou yon konte emosit diferans. Yo te pase emolinf sou glisad mikwoskòp la pou gaye. Apre fikse nan 99.8 pousan metanol pou 5 min, glise a te vire nan yon ang 45 degre pou siye nan tanperati chanm ak tache ak tach Giemsa pou 20 min. Yo te detèmine diferansyasyon emosit yo pwopòsyonèl ak konte 100.

2.8 Ankèt histolojik

Egzamen istolojik yo te fèt apre 7 jou ekspoze a 8 ak 16 µL/L RIPEX. Glann dijestif yo ak ovotestis yo te diseke soti epi imedyatman fikse nan likid Bouin᾿. Apre 1 jou nan fiksasyon, echantiyon yo te Lè sa a, dezidrate atravè yon seri alkòl ak otorize nan xylene. Yo te fè blòk sir parafin [42]. Dis Sek. (5-7 μm epesè) yo te koupe ak tache ak ematoksilin ak eozin (Mayer a H ak E). Tach te swiv pa yon bon lave ak dlo tiyo. Seksyon istolojik yo te pran foto lè l sèvi avèk yon kamera foto-otomatik (Optika, Itali).

2.9 Analiz estatistik

Done yo te eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda ak analize pa lojisyèl estatistik nan syans sosyal (SPSS; IBM Corp. Armonk, NY, USA). De-fason analiz ANOVA nan divèjans yo te itilize pou idantifye diferans ki genyen ant gwoup kontwòl ak ekspoze, ant konsantrasyon diferan yo ak pwen tan yo nan ekspoze. Nivo siyifikasyon an te fikse nan p Mwens pase oswa egal a 0.05.

Mekanis nan Cistanche ranfòse efè a testostewòn

Cistanche yo te jwenn ranfòse nivo testostewòn nan plizyè fason. Premyèman, li gen konpoze ke yo rekonèt kòm echinacoside ak acteoside, ki te montre yo amelyore pwodiksyon an nan òmòn luteinizing (LH) nan glann pitwitè. LH stimul selil Leydig yo nan tèstikul yo pou pwodui testostewòn. Cistanche tou gen polisakarid ak glikozid phenylethanoid, ki te montre yo gen pwopriyete antioksidan ak anti-enflamatwa. Sa a ka ede diminye estrès oksidatif ak enflamasyon nan tèstikul yo, ki ka afekte pwodiksyon testostewòn Anplis de sa, yo jwenn Cistanche ogmante ekspresyon jèn ki enplike nan sentèz testostewòn epi redwi aktivite anzim ki kraze testostewòn, tankou {{1} }alfa-reduktaz. An jeneral, se konbinezon an nan mekanis sa yo te panse yo kontribye nan efè testostewòn-ranfòse Cistanche a.

Hoda H. Abdel‑Azeem1*, Azza H. Mohamed1 ak Mohamed R. Habib2