Karakterizasyon potansyèl anpèchman anzim CYP3A4 nan flavonoid chwazi Pati 2

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

2.3. Tès anpèchman pseudo-irevokabl

Nan tès anpèchman pseudo-irevokabl, echantiyon yo te enkube ak flavonoid ak trete ak yon oksidan, apre sa yo te sibi dyaliz. Nan ka anpèchman pseudo-irevokabl, aktivite anzim yo ta dwe refè. Nan enkubasyon yo ak tout flavonoid yo teste, te gen yon anpèchman enpòtan nan aktivite anzim apre dyaliz ak ak san tretman ak yon oksidan (Figi 4). Nan tout ka yo, diferans ki genyen nan aktivite anzim rezidyèl ant echantiyon flavonoid la ak echantiyon potasyòm hexacyanoferrate la te estatistik ensiyifyan (p.<>

Menm jan ak eksperyans anvan yo, yo te obsève pi gwo rediksyon nan aktivite anzim lè yo te itilize chrysin kòm yon inibitè. Aktivite rezidyèl nan anzim la apre enkubasyon ak dyaliz ak chrysin te 0.57 pousan, epi apre enkubasyon ak dyaliz ak tretman anvan ak potasyòm hexacyanoferrate, li te 1.31 pousan (Figi 4).

Cistanche ka amelyore iminite

Nan ka anpèchman dirèk (revèsib), kalite eksperyans sa a ta montre rekiperasyon aktivite anzim apre dyaliz. Nan ka anpèchman pseudo-irevokabl, aktivite anzim yo ta refè apre tretman ak yon oksidan ak dyaliz. Kòm sa yo pa t 'ka a ak nenpòt nan flavonoid yo analize, li ka konkli ke tout flavonoid yo montre irevokabl anpèchman nan cytochrome P450 3A4.

3. Diskisyon

Yo te montre ke kèk flavonoid ka anpeche aktivite anzim cytochrome P450 yo. Saric-Mustapic et al. [28] ak Kondza et al. [29] te montre ke acacetin, apigenin, chrysin, ak pinocembrin anpeche anzim CYP3A4 nan tès la ak testostewòn kòm yon substra makè. Kòm anzim CYP3A4 la posede yon gwo sit aktif ki ka akomode substrats yon fason diferan, li rekòmande pou fè tès aktivite ak yon lòt substra makè tankou nifedipine ak midazolam [30]. Kontinwe, nou itilize oksidasyon nifedipine kòm reyaksyon makè nan aktivite CYP3A4 epi detèmine paramèt sinetik inaktivasyon yo. Valè yo nan efikasite anpèchman yo jwenn lè l sèvi avèk nifedipine kòm yon substra makè se nan menm lòd la nan grandè lè yo konpare ak tès la testostewòn pou apigenin, acacetin, ak pinocembrin. Se sèlman chrysin ki te montre yon valè kat fwa pi wo nan testostewòn [29] lè yo konpare ak tès nifedipine a, sa vle di, 0.108 min-1 uM{-1 kont 0.029 min-IμM-1. Resanblans yo obsève nan sinetik inaktivasyon yo an akò ak done literati ki konfime ke nifedipine ak testostewòn gen diferan sit obligatwa ki sipèpoze [31]. Cytochrome P4503A4 gen youn nan pi gwo sit yo aktif epi li ka akomode substra a ak inibitè a an menm tan, ak youn enfliyanse obligatwa nan lòt la, ki ta ka eksplike diferans ki genyen ant nifedipine ak testostewòn tès.

Tanpri klike la a pou w konnen plis

Enplikasyon klinik yo nan inibitè revèsib (sa vle di, entèraksyon manje-dwòg) ka evite si inibitè a sispann nan tretman an. Entèaksyon ki pi enpòtan yo se sa yo ki irevokabl, tandiske tou senpleman sispann itilize nan inibitè a pa pral rezoud pwoblèm yo entèraksyon. Nan etid sa a, chrysin te montre potansyèl anpèchman ki pi wo a, ak pi ba IC50 ak K; valè. Etid molekilè flavonoid ki te kole ak cytochrome P450 3A4 te montre yon pi gwo afinite lyezon nan krizin lè yo ekspoze bag B a nan fè ki nan sant aktif anzim la [28]. Etid relasyon estrikti-anpèchman te montre saidroksilGwoup nan bag A kontribye nan efè inhibition pwobableman akòz entèraksyon ion-ion, pandan y ap bag B la ka ki pa ranplase (pinocembrin, chrysin) oswa monosubstituted (acacetin, apigenin) pou efè a inhibition yo dwe obsève (Figi 1) [28]. Flavonoid ki pa ranplase (pinocembrin, chrysin) gen plis sansib a epoksidasyon ak jenerasyon entèmedyè reyaktif ki inaktive CYP3A4. Pi fò efè inhibition obsève ak chrysin se pwobableman akòz frigidité nan estrikti a ak prezans nan C2=C3 doub kosyon an lè yo konpare ak pinocembrin.

Yo ka obsève enpòtans sinetik anzim sa yo ki dekri nan kontèks entèraksyon manje-dwòg, kote administrasyon chrysin （20-100 μM） ogmante siyifikativman AUC ak pik konsantrasyon serik (Cmax) nitrofurantoin nan rat [32] .cistanche deserticola ma,Pou egzanp, inibitè relativman fèb ki baze sou mekanis nan anzim CYP3A4/5, erythromycin [33], te rapòte ki lakòz yon entèraksyon modere ak cerivastatin nan volontè ki an sante (21 pousan ogmantasyon nan AUC nan cerivastatin) [34]. Chrysin tou gen yon pi gwo potansyèl anpèchman pase mibefradil, yon dwòg antihypertensive ki te retire akòz entèraksyon enpòtan ak lòt medikaman. Rezilta etid sa a sijere ke chrysin ka yon inibitè ki pisan epi pètèt kominike avèk lòt medikaman yo itilize,cistanche deserticolachanje AUC ak Cmax medikaman sa yo. Chrysin abondan nan propoli (28 g / L), epi li se twazyèm flavonoid prensipal la nan siwo myèl 5.3 mg / kg [35]; Se poutèt sa, yon rejim alimantè ki rich nan manje sa yo gen potansyèl pou kominike avèk medikaman ki se substrats CYP3A4.

Pinocembrin, yon inibitè pwouve irevokabl nan anzim CYP3A4, te montre k ki pi ba a; valè mg 0.04 ± 0.01 min-1. Efikasite inaktivasyon li yo te menm jan ak akasetin ak apigenin （0.01 min-1 μM-1）. Pinocembrin se sitou jwenn nan manje tankou siwo myèl ak bwason (te ak diven wouj), prezante yon sous rich nan flavonoid sa a [29]. Dapre paramèt sinetik sa yo, yo ta dwe pran prekosyon nan konsome sous pinocembrin sa yo ansanm ak medikaman ki aji kòm substrats CYP3A4.

Acacetin te montre twa fwa pi wo valè IC50 pase chrysin ak senk fwa pi wo K; valè, pandan y ap kenbe valè enpak menm jan ak lòt flavonoid, ki endike yon pi ba efikasite inhibition. Akacetin ka sitou jwenn nan espès plant tankou Turnera diffusa, Robinia pseudoacacia, ak Betula pendula [36], men sèten manje prezante tou yon sous flavonoid sa a. Pou egzanp, ji kumquat se yon sous rich nan akasetin, ak akasetin ka jwenn nan konsantrasyon nan 0.1 mg / 100 g nan ji fre [37]. Konpoze paran an nan acacetin, apigenin te montre pi wo valè IC50 ak pi wo a K; valè nan mitan kat flavonoid yo teste. Potansyèl inhibition apigenin te konfime nan vivo lè tretman an konbinezon apigenin ak paclitaxel te mennen nan ogmantasyon nan byodisponibilite oral nan paclitaxel, ki te sitou atribiye a amelyore absòpsyon nan aparèy gastwoentestinal la nan anpèchman P-glycoprotein ak redwi premye pasaj. metabolis nan paclitaxel atravè anpèchman nan subfanmi CYP3A nan ti trip la ak / oswa nan fwa a pa apigenin [38]. Apigenin se yon flavonoid dominan nan seleri, pèsi, ak kamomiy. Yo te rapòte pèsi sèk gen kantite maksimòm apigenin, nan 45035ug/g. Sous adisyonèl apigenin yo jwenn nan remèd fèy tankou flè sèk kamomiy, ki gen 3000 a 5000 ug / g, ak grenn seleri, ki gen 786.5 ug / g [39].

Anpèchman revèsib nan cytochromes P450 3A4 gen rapò ak premye etap la nan cytochrome P450 sik katalitik la (Figi 5). Pi souvan, yo obsève konpetisyon ki genyen ant substra a ak inibitè a nan obligatwa nan sit la aktif (fè fer). Nan ka sa a, li rekòmande pou fè eksperyans obligatwa (titrasyon anzim) ak teste li ak plis pase yon substra, kòm CYP3A4 gen yon gwo sit aktif ki ka akomode plis pase yon molekil nan substra / inibitè [26,30. Nan etid sa a, nou te itilize nifedipine kòm yon substra, ak rezilta yo nan efikasite anpèchman yo te nan yon grandè konparab ak tès yo te deja rapòte ki fèt ak testostewòn kòm yon substra makè (Tablo 1).

Figi 5. Sik katalitik Cytochrome P450 konsiste de nèf etap. Premye etap la reprezante obligatwa nan substra a ak pwen an nan entèraksyon ak inibitè revèsib. Nan dezyèm etap la, fè heme redwi a yon fòm fèr ak inibitè pseudo-irevokabl mare.efè sistanchSi yo obsève yon anpèchman irevokabl, anjeneral li gen rapò ak fòm radikal substra a (ki te fòme nan etap 7) ak / oswa pwodwi (ki te fòme nan etap 8). Espès oksijèn reyaktif ki fòme nan initil cytochrome P450cycle (etap 3a ak 5a) ka lakòz destriksyon anzim, ki ka anpeche pa adisyon nan SOD ak CAT. Se deskripsyon etap ki pa gen rapò ak anpèchman omisyon. Prepare dapre referans [26].

Sepandan, jan nou te deja montre [28,29] ak konfime isit la nan eksperyans nou yo fè, tout flavonoid etidye montre yon anpèchman irevokabl. Kèlkeswa kalite anpèchman irevokabl (pseudo-irevokabl oswa kovalan obligatwa nan entèmedyè heme oswa apoprotein), anpèchman pral pi enpòtan si preinkubasyon, anvan adisyon a nan yon substra makè, fèt [26]. Nan yon preincubation, yon sik katalitik aktive pa adisyon nan sistèm nan jenerasyon pou pwodiksyon an nan coenzyme (NADPH), epi yo gen ase tan pèmèt yo obsève inaktivasyon anzim. Kidonk, tout kalite irevokabl nan anpèchman mande pou rediksyon nan anzim nan fòm nan fèr (Figi 5).

Kòm cytochromes P450 se emoprotein, nou te etidye lyezon nan flavonoid nan fòm nan fèr nan sit aktif la ak obligatwa nan yon entèmedyè posib reyaktif nan heme la [26]. Pou evalye posib fòmasyon heme aduct, yo te fè yon tès hemochromopyridine. Tout teste yoflavonoidsiyifikativman redwi konsantrasyon heme nan tou de tès yo, pa plis pase 50 pousan. Chrysin te, ankò, inibitè ki pi pisan, matche valè sinetik anpèchman yo obsève nan etid sa a. Heme konsantrasyon ak pinocembrin te senk fwa pi wo, epi, ak apigenin, li te prèske dis fwa pi wo pase youn nan ak chrysin (25.3±0.4 ak 45.1±1.7 pousan, respektivman). Rediksyon sa a nan konsantrasyon heme endike ke anpèchman irevokabl nan CYP3A4 pa flavonoid yo etidye ka atribiye a obligatwa nan kovalan nan yon entèmedyè reyaktif nan heme la. Li ta dwe remake ke hemes ka detwi pa espès oksijèn reyaktif, bese rezilta yo nan tès hemochromopyridine. Pou elimine posiblite sa a, yo te fè enkubasyon an prezans SOD ak CAT (Tablo 2), ki konfime konklizyon sa a.

Premye etap la nan sik katalitik anzim cytochrome P450 la se lyezon yon substra ak yon ion ferrik. Si inibitè a montre anpèchman konpetitif nan substra a, aktivite anzim la ka rekipere pa dyaliz, kòm eliminasyon inibitè a pèmèt rekiperasyon konplè aktivite anzim la [26]. Sepandan, si inibitè a mare nan fè a fè, itilize nan yon oksidan, tankou PCF, anvan dyaliz nesesè yo nan lòd yo rekipere aktivite anzim. Si aktivite anzim yo refè, anpèchman karakterize kòm pseudo-irevokabl [26]. Kòm aktivite anzim la pa t 'kapab refè apre dyaliz avèk oswa san PCF, pa youn nan flavonoid yo teste (nan konsantrasyon 25 uM) aji kòm inibitè revèsib oswa pseudo-irevokabl nan anzim CYP3A4 la. Sa a tou konfime ke yon anpèchman irevokabl pa obligatwa kovalan swa heme oswa apoprotein se kòz la pwobab nan inaktivasyon anzim.

Li ta dwe remake ke chrysin te lakòz prèske yon rediksyon konplè nan heme nan enkubasyon an: 97.1 pousan san ak 94.5 pousan ak SOD ak CAT (Tablo 2); pandan ke rezilta yo nan aktivite anzim rezidyèl nan kondisyon menm jan an te montre rediksyon nan aktivite anzim pa apeprè 99 pousan (Figi 4). Egzamen hemochromopyridine anrejistre hemes soti nan tout sous nan enkubasyon an, sa vle di, cytochrome P450, osi byen ke cytochrome b;. Rezilta yo pou chrysin endike ke yon entèmedyè reyaktif ki te pwodwi pa cytochrome P450 te reyaji ak heme soti nan cytochrome P450 osi byen ke cytochrome b5.

Pli lwen analiz LC-MS te fèt pou detèmine posib entèmedyè flavonoid reyaktif swa nan yon fòm adduct heme oswa bloke lè l sèvi avèk glutatyon kòm yon scavenger radikal (done yo pa montre). Sepandan, nou pa t 'kapab izole nenpòt nan adducts yo prevwa pwobableman akòz enstabilite nan entèmedyè flavonoid reyaktif ak / oswa heme / aduct glutathione. Konpòtman menm jan an te obsève ak mibefradil, yon antihypertensive, retire nan mache a akòz entèraksyon dwòg / dwòg. Malgre ke mibefradil te lakòz rediksyon nan heme, yon entèmedyè reyaktif pa te etabli [40].

4. Materyèl ak Metòd

4.1.Materyèl

Kat flavonoid (acacetin, apigenin, chrysin, ak pinocembrin) yo te itilize nan etid sa a (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA). Sitokrom recombinant P450 3A4 ki te eksprime ansanm ak nikotinamid-adenine-dinukleotid fosfat (NADPH) reduktaz ak cytochrome bs nan otozom yo te achte nan men Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA).

Ki baze sou cytochrome P450 monoksid kabòn [41], kontni an nan anzim CYP3A4 deklare pa manifakti a te konfime yo dwe 1 μuM. Glikoz -6-fosfat （G6P）, glikoz -6-phosphate dehydrogenase (G6PDH), ak -nicotinamide-dinucleotide fosfat disodium sèl (NADP plis) yo te achte nan men Sigma-Aldrich. Fosfat potasyòm (pa) ak dichloromethane (pa) te achte nan men Kemika dd (Zagrèb, Kwoasi), asid fòmik (85 pousan, pa) nan Semikem doo (Sarajevo, Bosni, ak Erzegovin), ak metanol yo itilize pou disolisyon reyaktif ak chromatografi soti nan Merck KGaA (Darmstadt, Almay). Dlo ultrapur te itilize nan melanj enkubasyon yo ak kwomatografi. Potasyòm diidwojèn fosfat (Kemika dd) te itilize pou prepare tanpon fosfat potasyòm pH 7.85; pH yo te ajiste lè l sèvi avèk idroksid sodyòm achte nan men Semikem doo Nifedipine (Sigma-Aldrich) ak nifedipine oksidize (Direksyon Ewopeyen an pou Kalite Medikaman, Farmakope, 10yèm edisyon, Estrasbou, Lafrans) yo te itilize nan etid la nan aktivite anzim rezidyèl, osi byen ke nan sinetik inaktivasyon. Testostewòn (Sigma-Aldrich) ak 6 -hydroxytestosterone (Kayman Ewòp, Tallinn, Estoni) yo te itilize pou tès nan anpèchman pseudo-irevokabl. Troleandomycin ak diltiazem yo te jwenn nan Ajans pou pwodwi medsin ak aparèy medikal (Zagrèb, Kwoasi). Pyridine (pa) (Semikem doo), hemin bovine (Sigma-Aldrich), ak dimethylsulfoxide (Semikem doo) yo te itilize nan tès hemochromopyridine la. Potasyòm hexacyanoferrate (Siegfried AG, Zofingen, Swis) te itilize nan etid la nan anpèchman revèsib ak pseudo-revèsib. Superoxide dismutase (SOD) (Sigma-Aldrich), katalaz (CAT) (Sigma-Aldrich), ak asid idroklorik (36 pousan, pa) (Semikem doo) yo te itilize nan tès espesifik obligatwa. Enkubasyon anzim yo te fèt nan yon beny dlo (Inkolab, Zagrèb, Kwoasi). Yo te fè tès aktivite rezidyèl anzim ak sinetik inaktivasyon flavonoid lè l sèvi avèk segondè-pèfòmans likid chromatografi makonnen ak UV-Vis deteksyon (HPLC UV-Vis, Agi-lent 1100, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). Yo te fè kalkil aktivite rezidyèl ak paramèt sinetik anpèchman lè l sèvi avèk pwogram R (Pwojè R pou Informatik estatistik, Vyèn, Otrich) ak Microsoft Excel (Microsoft, Redmond, WA, USA).

4.2.Metòd

4.2.1. Detèminasyon sinetik anzim ak aktivite rezidyèl

Enkubasyon anzim yo te fèt an triple, ak brase mekanik nan yon beny dlo a 37 degre. Aliquot nan flavonoid ak yon konsantrasyon final 1 μM yo te fonn nan metanol, transfere nan tib an vè, ak evapore nan sechrès, eksepte nan echantiyon kontwòl san yo pa inibitè a (flavonoid). Apre evaporasyon sòlvan an, yo te prepare yon melanj enkubasyon nan yon volim 100 μL, ki gen ladan 5pmol CYP3A4 anzim, 50 mM tanpon fosfat potasyòm (pH7.4) , ak dlo ultrapur. Yon sistèm génération NADPH ki konpoze de 0.1 M G6P:10 mg/mL NADP plis:1000 IU/mL G6PDH=50:25:1(v/v/v) te prepare imedyatman anvan ou itilize. Sistèm génération sa a gen glikoz-6-fosfat dehydrogenase ki rejenere NADP nan NADPH, ki kenbe konsantrasyon cytochrome P450 coenzyme (NADPH) konstan nan enkubasyon an. Anplis de sa nan sistèm nan génération (15 pousan nan volim nan enkubasyon final la, v / v) te kòmanse reyaksyon an. Nifedipine te itilize pou teste aktivite anzim rezidyèl la nan yon konsantrasyon final 200 μM. Reyaksyon an te sispann lè l sèvi avèk 1 mL nan glas-frèt solisyon 1 pousan nan asid fòmik nan dichloromethane. Echantiyon yo te melanje, Lè sa a, santrifuje pou 10 min sou 1900g (Rotofix32, Westfalia, Almay). Apre santrifijasyon, de kouch yo te fòme (dlo ak kouch òganik）.850 μL nan kouch òganik la te transfere nan kivèt ak evapore. Lè sa a, analit la te fonn nan 30 μL nan metanol. Yon kolòn Agilent Zorbax SB C18 (4.6 × 250 mm), 3 μm, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) te itilize pou analize echantiyon yo pa HPLC. Faz mobil lan te konpoze de metanol ak dlo nan yon rapò 64:36. Analiz la te izokratik. Koule a te fikse nan 1.0 mL min-.Te volim nan piki mete nan 10 μL. Nifedipine yo te itilize kòm yon substra makè. Reyaksyon an obsève se te oksidasyon nan nifedipine. Chromatogram yo te anrejistre nan 254 nm. Yo te dire a nan analiz la fikse nan 25 min. Retansyon an tan nan nifedipine se 7.1 min ak sa yo ki nan nifedipine oksidize se 10.8 min [42].Nan de ka yo, kantite pwodwi yo te jwenn yo te obsève kòm kantite zòn anba koub la (AUC) parapò ak echantiyon kontwòl la.Pou tout flavonoid yo. , demi-maksimòm konsantrasyon inhibitory (ICs0), konstan nan anpèchman (K;), konstan nan vitès inaktivasyon (Kinect), ak efikasite inaktivasyon (enpak / K;) yo te detèmine. Troleandomycin te itilize kòm yon kontwòl pozitif --yon inibitè irevokabl nan cytochrome P{450 3A4.25 uM konsantrasyon nan troleandomycin redwi aktivite anzim a 35±5 pousan.

4.2.2. Esè emokromopiridin

Yo te itilize tès hemochromopyridine pou evalye posib destriksyon heme pa fòm entèmedyè reyaktif nan sik cytochrome P450 epi yo te fè dapre metòd ki dekri pa Flink and Watson [43] ak Paul et al.[44], ak kèk modifikasyon. Yo te etabli yon koub kalibrasyon lè l sèvi avèk emin ki fonn nan dimethylsulfoxide (0.6 to 0.1 μM）. Spectra yo te anrejistre nan yon longèdonn 5{00 a 600 nm. Melanj enkubasyon ak 25 inibitè uM (flavonoid) yo te prepare nan yon volim 200 μL. Reyaksyon an te kòmanse pa adisyon nan yon sistèm NADPHgenerating (pou konpozisyon, gade Seksyon 4.2.1), ak enkubasyon yo te dire pou 30 minit. Reyaksyon an te sispann apre. mwatye yon èdtan pa adisyon nan piridin (konsantrasyon final 0.83 M) ak idroksid sodyòm (konsantrasyon final 0.06 M). Yo te anrejistre echantiyon yo sou yon espektrofotomètr (UV-1280, Shimadzu Corporation, Kyoto, Japon) nan 1 minit nan Anplis de sa a nan yon solisyon alkalin, akòz enstabilite nan emokromojèn piridin nan kondisyon debaz [44. Konsantrasyon heme nan echantiyon yo te kalkile baze sou koub kalibrasyon an prepare. Yo te fè tès sa a an twa fwa. Yo te repete enkubasyon yo lè l sèvi avèk katalaz ak superoksid. dismutase (5 IU chak) nan la melanj enkubasyon pou anpeche jenerasyon oksijene idwojèn atravè sik katalitik initil la.

4.2.3. Tès anpèchman pseudo-irevokabl

Objektif redaksyon sa a se teste fòmasyon konplèks kovalan ak fè fè (Fe-), lè w evalye rekiperasyon aktivite anzim apre dyaliz avèk oswa san adisyon yon oksidan. Twa kalite eksperyans yo te fèt pou chak flavonoid: melanj enkubasyon san flavonoid (kontwòl), melanj enkubasyon ak flavonoid, ak melanj enkubasyon ak flavonoid ki te ajoute oksidan apre enkubasyon. Chak enkubasyon ak inibitè a te fèt pou 30 minit lè l sèvi avèk menm anviwònman eksperimantal yo jan sa dekri pi wo a (Seksyon 4.2.1). Apre enkubasyon, echantiyon yo te transfere nan katouch dyaliz. Aa oksidan - 20 mM solisyon potasyòm hexacyanoferrate te ajoute nan youn nan enkubasyon yo anvan dyaliz [45]. Kasèt yo (Slide-A-Lvzer Dialysis Cassettes, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) yo te benyen nan 50 mM solisyon tanpon fosfat potasyòm (pH7.4) pou 30 minit (solisyon dyaliz te echanje twa fwa). Apre dyaliz, echantiyon yo te transfere soti nan kasèt la tounen nan tib an vè, ak aktivite anzim rezidyèl yo te evalye lè l sèvi avèk testostewòn kòm yon substra makè (200 μM konsantrasyon final). Kòm sistèm nan génération NADPH te tou dyalize, li te ankò ajoute nan enkubasyon yo kòmanse reyaksyon anzim. Yo te enkube echantiyon yo pou 30 minit ak menm paramèt yo (ki dekri anba Seksyon 4.2.1). Reyaksyon an te sispann pa adisyon a nan yon solisyon glas-frèt nan asid fòmik nan dichloromethane. Echantiyon yo te analize pa HPLC. Diltiazem, yon inibitè pseudo-irevokabl li te ye nan cytochrome P450 3A4, te itilize kòm yon kontwòl pozitif pou evalye oksidasyon nan yon fòm ferrik (yo te obsève yon rekiperasyon aktivite anzim konplè).

4.2.4.Traitement rezilta yo

Yo ta itilize yon tès t yon sèl pou evalye siyifikasyon estatistik diferans ki genyen ant echantiyon ak kontwòl, ki baze sou mezi aktivite rezidyèl yo. Yo te itilize yon ekwasyon ki pa lineyè pou kalkile valè IC50 la. Yo te itilize ekwasyon Michaelis-Menten pou detèmine konstan inaktivasyon an ak pousantaj inaktivasyon inibitè a. Pwosesis estatistik ak preparasyon graf yo te fè lè l sèvi avèk Pwogram R (The R Project for Statistical Computing, Vyèn, Otrich) ak Microsoft Excel (Microsoft, Redmond, WA, USA).

5. Konklizyon

Acacetin, apigenin, chrysin, ak pinocembrin anpeche aktivite anzim CYP3A4 nan vitro. Chrysin se inibitè anzim ki pi pisan, ak IC50 ki pi ba a, K; Kinect valè ak pi gwo efikasite inaktivasyon. Tout flavonoid redwi konsantrasyon heme nan anzim la, ki konfime ke sa a se yon anpèchman irevokabl pa entèmedyè reyaktif ki pa ka anpeche pa adisyon nan SOD ak CAT. Okenn nan flavonoid yo teste yo aji kòm inibitè revèsib oswa pseudo-irevokabl nan anzim CYP3A4 nan 25 μM konsantrasyon, kòm aktivite anzim la pa t 'kapab refè ak dyaliz ak ak san adisyon a nan hexacyanoferrate potasyòm. Kòm flavonoid sa yo ka jwenn anpil nan divès manje tankou fwi, legim, epis santi bon, ti, ak diven wouj, gen yon posibilite ke yo ka entèfere ak divès kalite ksenobiotik ki se CYP3A4 substrats. Pli lwen etid nan vivo yo bezwen pou konplètman envestige posiblite yo nan entèraksyon manje-dwòg sa yo, osi byen ke kontribisyon an posib nan lòt anzim ak transpòtè nan entèraksyon yo.

Atik sa a soti nan Molecules 2021, 26, 3018