Cistanche Rb1 atenye andikap vaskilè ki asosye ak laj pa modil chemen Gas6 la.

Rezilta Rb1 soulaje senesans nan aorta yo nan sourit ki aje

Pou idantifye efè antisenesans Rb1, nou premye envestige senesans selilè, ki karakterize pa ekspresyon pwoteyin ki enplike nan anpèchman sik selilè ak arè kwasans irevokabl (Yang et al. 2019). Kòm rezilta imunohistochimi yo montre nan Figi 1 (A, B), konpare ak sa yo ki nan gwoup la Young, Old þ Vehicle gwoup sourit te montre ke aje akselere regilasyon nan p21Cip1 ak p16INK4a nan selil aorta thoracic. Sepandan, tretman Rb1 soulaje senesans selilè nan veso sangen, espesyalman nan Old þ Rb1-20 gwoup la. Anplis de sa, rezilta Western blot yo te an akò ak larezilta imunohistochimi. Jan yo montre nan Figi 1(C), ekspresyon pwoteyin p21Cip1 ak p16INK4a te ogmante siyifikativman pa apeprè 2-pliye nan aorta thoracic sourit ki gen laj konpare ak jèn sourit yo. Apre tretman ak 20 mg/kg Rb1, nivo pwoteyin p21Cip1 ak p16INK4a te jis ogmante pa 41.92 pousan ak 37.52 pousan konpare ak sa yo nan gwoup la Young, ki te siyifikativman pi ba pase sa yo nan gwoup la Old plis Veyikil. Anplis de sa, pa te gen okenn diferans enpòtan nan ekspresyon p21Cip1 oswa p16INK4a ant jèn sourit ak ak san tretman Rb1.

Figi 1. Efè Rb1 sou senesans aorta thoracic. Imaj tach imunohistochimik (400) p21Cip1 (A) ak p16INK4a (B) nan koup transvèsal aorta thoracic sourit. (C) analiz Western blot nan sourit thoracic aortic ekspresyon p21Cip1 ak p16INK4a. Done yo eksprime kòm mwayen ± SD. p <0.01 kont gwoup Young la; # p < 0.05 kont gwoup Veyikil Oldþ la.

Rb1 amelyore reyaksyon vaskilè nan sourit ki gen laj

Yo te itilize yon eksperyans bag vaskilè pou evalye vazodilatasyon andotelyo-depandan. Jan yo montre nan Figi 2, nan tout bag aortik thoracic sourit, administrasyon Ach te lakòz vasorelaxation. Nan konsantrasyon maksimòm (10-5 mol / L), Ach pwovoke apeprè 88.84 pousan ± 1.20 pousan ak 58.35 pousan ± 2.50 pousan vasorelaxation nan gwoup la Young ak gwoup la Old þ Vehicle, respektivman, ki montre ke aje asosye ak andikap vaskilè reyaksyon. Sepandan, 10 ak 20 mg/kg Rb1 tretman a nan apeprè 70.48 pousan ± 2.20 pousan ak 80.90 pousan ± 3.24 pousan detant, respektivman, nan aje sourit thoracic aortic bag an repons a 10 5 mol/L Ach.

Klike La a Pou Jwenn Cistanche Pou Anti-Aging

Rb1 redwi ekspresyon molekil adezyon selilè nan aorta thoracic sourit ki aje.

Nou egzamine ekspresyon pwoteyin sèten molekil adezyon selilè pou detèmineenflamatwaepiefè anti-enflamatwanan Rb1 sou sourit ki gen laj. Rezilta yo te montre ekspresyon pwoteyin ICAM-1, VCAM-1, ak PAI-1 te ogmante siyifikativman pa apeprè 2-4 pliye nan aorta thoracic sourit ki gen laj konpare ak sa yo. nan gwoup Young (Figi 3). Nan contrast, tretman Rb1 siyifikativman inibit chanjman sa yo nan aorta thoracic sourit ki gen laj men pa te gen okenn efè sou gwoup yo sourit Young. Analiz quantitative a te endike ke tretman 20 mg/kg Rb1 te lakòz apeprè 36.58 pousan, 46.66 pousan, ak 49.34 pousan downregulation nan ekspresyon pwoteyin ICAM-1, VCAM{-1 ak PAI-1, respektivman, nan aje tisi aortik thoracic, konpare ak sourit Old plis Vehicle gwoup.

Rb1 anpeche kalsifikasyon vaskilè ki gen rapò ak laj ak fibwoz

Nou te fè tach HE ak alizarin wouj S tach pou evalye estrikti tisi aortik ak kalsifikasyon medyòm vaskilè nan sourit ki aje respektivman. HE tach te montre ke aje-pwovoke mi epè nan aorta thoracic la ak dezorganizasyon nan matris la extracellular aortic, yo ta ka soulaje pa tretman Rb1 (Figi 4 (A)). Jan yo montre nan Figi 4 (B), sourit ki aje yo devlope pi grav kalsifikasyon medyal (zòn tache wouj) pase sourit jèn, pandan y ap entèvansyon Rb1 redwi chanjman patolojik sa a. Lè sa a, nou te egzamine koup transvèsal aorta thoracique pa tach trikrom Masson pou evalye fibwoz medyòm vaskilè nan sourit ki aje. Rezilta yo te montre ke te gen yon ogmantasyon aparan nan depo kolagen an (zòn ble-tache) nan gwoup la Old þ Vehicle konpare ak gwoup la Young (Figi 4 (C)), ak efè sa a te siyifikativman inibit pa entèvansyon Rb1. Anplis, Western blotting te montre ekspresyon Kolagen I ak Kolagen III siyifikativman ogmante pa 4.34- ak 2.62-pliye nan Old þ Vehicle group sourit konpare ak jèn sourit; sepandan, tretman Rb1 downregulated ekspresyon kolagen an I ak kolagen an III nan sourit ki gen laj (Figi 4 (D)). Anplis, tretman ak Rb1 pa te gen okenn enfliyans sou degre kalsifikasyon aorta thoracic ak fibwoz nan sourit jèn (Figi 4 (A-D)).

Rb1 reglemante chemen siyal Gas6 la

Nou te envestige plis si Rb1 te fonksyone atravè chemen siyal Gas6/Axl pou amelyore andikap aorta thoracic ki asosye ak laj nan sourit yo. Downregulation nan ekspresyon pwoteyin Gas6 pa 41.72 pousan ak ekspresyon mRNA pa 52.73 pousan nan sourit ki gen laj konpare ak jèn sourit yo te anile pa tretman Rb1 (Figi 5 (A, B)). Nou te detèmine tou ekspresyon pwoteyin Axl pa Western blotting. Enteresan, pa te gen okenn diferans enpòtan nan ekspresyon pwoteyin Axl nan mitan senk gwoup eksperimantal yo (Figi 5 (A)). Nou menm tou nou pa t 'detekte yon diferans enpòtan nan nivo mRNA Axl nan mitan gwoup yo (Figi 5 (B)).

Figi 2. Tretman Rb1 atenue andotelyo-depandan vazorelaxation andikap nan bag vaskilè thoracic aorta. Chif ki montre rezilta analiz yo. Done yo eksprime kòm mwayen ± SD. p < 0.05, p < 0.01 kont gwoup Young la; # p < 0.05, ##p < 0.01 kont Old þ gwoup Veyikil la.

Figi 3. Rb1 redwi ekspresyon molekil adezyon selilè nan aorta thoracic sourit ki gen laj. Analiz Western blot nan ekspresyon ICAM-1, VCAM-1 ak PAI-1 nan tisi aorta thoracic. Done yo eksprime kòm mwayen ± SD. p < 0.01 kont gwoup Young la; # p < 0.05, ##p < 0.01 kont gwoup Veyikil Oldþ la.

Diskisyon

Nan etid prezan an, nou te demontre ke Rb1 te amelyoreandikap vaskilè ki gen rapò ak lajpa siprime kalsifikasyon ak fibwoz atravè règleman an nan ekspresyon Gas6 men pa ekspresyon Axl, ki bay yon estrateji potansyèl terapetik pou anpeche maladi vaskilè ki gen rapò ak laj. Li byen aksepte ke senesans selil vaskilè, ki karakterize pa malfonksyònman endothelial ak tranzisyon fenotip nan selil misk lis, ka lakòz ogmante rèd vaskilè ak ogmante epesè nan mi vaskilè (Liu et al. 2019). Senesans selil vaskilè se yon karakteristik komen nan divès kalite maladi konplèks, ki gen rapò ak laj, patikilyèman maladi kadyovaskilè (O'Rourke et al. 2010). Avèk devlopman nan senesans selil vaskilè, fonksyon vaskilè gen pwoblèm (Gong et al. 2014). Se malfonksyònman vaskilè ki gen rapò ak laj egzanp pa chanjman fizyopatoloji, ki gen ladan yon bès pwogresif nan vazodilatasyon endothe lium-depandan (Herrera et al. 2010; Gong et al. 2014). Nan etid nou an, nou konfime senesans selilè nan aorta thoracic nan sourit ki gen laj, ki te endike pa ogmante ekspresyon nan pwoteyin ki gen rapò ak laj p21Cip1 ak p16INK4a, osi byen ke yon bès nan vazodilatasyon andotelyo-depandan. Konsistans nan rezilta nou yo ak etid yo mansyone anwo a sijere ke te gen kèk mekanis molekilè enpòtan ki asosye ak chanjman ki fèt nan fizyoloji selil vaskilè pandan aje. Ajan ki aji sou mekanis sa yo ta pwobableman redwi anpil epi retade senesans selil vaskilè.

Figi 4. Tretman Rb1 amelyore kalsifikasyon vaskilè aje-induit ak fibwoz. (A) Tach ematoksilin ak eozin (HE) (400), (B) Tach wouj S alizarin (4{00), ak (C) Tach trikrom Masson a (400 ) nan seksyon aorta thoracic reprezantan nan chak gwoup. (D) analiz Western blot nan ekspresyon kolagen I ak kolagen III nan tisi aorta thoracic. Done yo eksprime kòm mwayen ± SD. p <0.01 kont gwoup Young la; # p <0.05, ##p <0.01 kont Gwoup Veyikil Oldþ

Figi 5. Enfliyans Rb1 sou chemen siyal Gas6/Axl. (A) Western blotting te fèt pou egzamine ekspresyon pwoteyin Gas6 ak Axl. (B) qPCR te fèt pou egzamine ekspresyon mRNA Gas6 ak Axl. Done yo eksprime kòm mwayen ± SD. p < 0.05, p < 0.01 kont gwoup Young la; # p < 0.05 kont gwoup la Old þ Veyikil.

Prèv akimile te revele ke Rb1 konsidere kòm yon dwòg pwomèt pou anpeche domaj vaskilè (Zhou et al. 2017, 2019a, 2019b; Zheng et al. 2020). Etid anvan yo te revele ke Rb1 anpeche senesans selil vaskilè ak anpeche kalsifikasyon vaskilè (Nanao-Hamai et al. 2019; Zhou et al. 2019b; Zheng et al. 2020). Sepandan, li toujou ensèten si Rb1 ka pwoteje fonksyon atè kont aje ak mekanis molekilè ki enpòtan an. Isit la, nou te jwenn ke Rb1 redwi ak reta senesans atè nan sourit ki gen laj, jan yo demontre pa ekspresyon diminye nan pwoteyin ki gen rapò ak amelyore vazodilatasyon vaskilè, ki endike ke Rb1 ka avèk efikasite bloke senesans twòp nan aorta torasik sourit ki aje epi yo ka itilize kòm yon ajan efikas pou trete oswa anpeche andikap atè ki gen rapò ak laj.

Prèv anvan yo te demontre akimilasyon nan enflamasyon kwonik ba-klas atè ak laj avanse, ki kontribye nan laj ki asosye ak chanjman estriktirèl ak fonksyonèl vaskilè (Wang et al. 2014). Etid adisyonèl yo te endike ke yon mikwo-anviwònman anrichi nan pwofil enflamatwa pwovoke yon chanjman fenotip nan VSMCs soti nan kontraktil la nan kalite sentetik la. Chanjman fenotip sa a karakterize pa ekspresyon atenue nan SMC-espesifik pwoteyin kontraksyon ak sekresyon nan plis cytokin proinflammatory, chemokines, pwoteyin ECM, ak molekil adezyon selil, tankou kolagen an, ICAM-1, VCAM-1 , ak PAI-1 (Wang et al. 2011; Lacolley et al. 2018). Anplis, molekil adezyon kontribye nan enflamasyon-pwovoke renovasyon nan atè yo, patikilyèman pa reòganize entèraksyon ECM-VSMC ak enfliyanse modulation fenotip nan VSMCs (Intengan et al. 1999). Anplis de sa, etid yo te montre ke Rb1 gen efè anti-enflamatwa nan vivo ak nan vitro (Miao et al. 2017; Zhou et al. 2017). Nan etid la prezan, nou te jwenn ke tretman Rb1 ta ka siyifikativman diminye nivo ekspresyon nan molekil Adhesion selil ki gen rapò ak pwosesis enflamatwa nan sourit ki gen laj, sijere ke Rb1 ta ka aji kòm yon dwòg anti-enflamatwa ak pwoteje vaskilè a pandan aje.

Anplis de sa nan domaj enflamatwa, remodeling nan miray la atè ki karakterize pa kalsifikasyon ak fibwoz se lòt prensipal chanjman fizyolojik nan modifikasyon vaskilè ki gen rapò ak laj ak lakòz rèd vaskilè ki kontribye nan yon bès nan vasodilatation (McEniery et al. 2005; Iyemere et al. 2006; Kovacic et al. .2011). Etid gwo-echèl yo te demontre ke kalsifikasyon ateroskleroz kowonè ogmante ak laj (Tesauro et al. 2017). Lòt rechèch te demontre tou prezans ogmante kalsifikasyon ak aje nan rejyon atè karotid la (Wendorff et al. 2015). Menm jan an tou, rezilta nou yo te endike ke sourit ki aje yo te devlope pi grav kalsifikasyon vaskilè medyal pase jèn sourit yo. Entèvansyon Rb1 anpil anpeche chanjman sa yo. Rezilta sa a sijere ke administrasyon Rb1 soulaje degre nan kalsifikasyon vaskilè ki gen rapò ak laj nan vivo. Prèv ase yo montre ke kalsifikasyon vaskilè enplike nan yon varyete de pwosesis patobyolojik olye ke senp depozisyon kalsyòm, pami ki VSMC chanje nan selil osteoblast ki tankou jwe yon wòl kritik (Zhou et al. 2019b). Yon limit nan etid nou an se ke, malgre revele ke entèvansyon Rb1 siyifikativman inibit kalsifikasyon vaskilè nan sourit ki aje aorta torac, makè VSMC kontraktil (tankou aktin nan misk A-lis ak calponin) ak makè VSMC osteogenic (tankou faktè transcription ki gen rapò ak runt 2). ) mande plis eksplorasyon.

Anplis de sa, nan etid prezan an, nou te obsève tou diminye nivo kolagen an entèrstisyèl ak diminye ekspresyon pwoteyin ki gen rapò ak Rb1-trete sourit ki gen laj konpare ak sourit ki gen laj trete ak machin, ki sijere ke Rb1 ta ka gen yon efè benefik sou fonksyon vaskilè. nan aje aorta thoracic pa amelyore fibwoz vaskilè laj-induit. Harvey et al. (2016) rapòte ke rèd atè ki te koze pa fibwoz twòp ak ogmante depozisyon kolagen an ka lakòz ogmante ton vazomotè ak chanje perfusion tisi. Ajan ki diminye fibwoz yo konsidere kòm pwoteje kont maladi vaskilè ki gen rapò ak laj (Kim et al. 2018).

Li ka dedwi keandikap vaskilè ki gen rapò ak lajse yon pwosesis konplèks ki enplike divès chanjman nòmal, tankou enflamasyon, kalsifikasyon, ak fibwoz. Sa ki pi enpòtan, nou te jwenn ke Rb1 te kapab anpéché sa yo konnen chanjman nòmal nan aorta thoracic nan sourit ki gen laj. Sepandan, mekanis ki kache a toujou enkoni. Gas6 te idantifye kòm lig la ak pou fanmi an reseptè TAM, espesyalman Axl reseptè kinaz tirozin (Rothlin et al. 2015). Yon etid anvan te demontre wòl Gas6/Axl nan reglemante plizyè fonksyon selilè (Chen et al. 2019). Yon etid resan sigjere ke Gas6/Axl te jwe yon wòl enpòtan nan kalsifikasyon vaskilè (Son et al. 2010; Kaesler et al. 2016; Nanao-Hamai et al. 2019) epi li ka patisipe tou nan tretman-induit downregulation nan sentèz kolagen an nan VSMCs ak tisi kè aje (Chen et al. 2016; 2019). Anplis, etid anvan yo te revele ke Rb1 aktive Gas6 transkripsyon nan sit espesifik ARE nan rejyon pwomotè a (Son et al. 2010; Nanao-Hamai et al. 2019). Isit la, nou te demontre ke ekspresyon pwoteyin Gas6 te desann nan sourit ki aje men yo te ranvèse pa tretman Rb1, ki endike ke Gas6 ka patisipe nan Rb1-regleman medyatè nan andikap atè nan sourit ki gen laj. Sepandan, rezilta nou yo montre ke pa te gen okenn chanjman nan pwoteyin Axl ak ekspresyon mRNA, ki te konsistan avèk yon etid anvan (Chen et al. 2019). Fanmi reseptè TAM a gen ladan Tyro3, ​​Axl ak MerTK. Malgre ke Gas6 montre afinite ki pi fò pou Axl nan mitan twa manm yo (Rothlin et al. 2015), Sun et al. (2019) te jwenn ke aktivasyon Gas6 atenue blesi enflamatwa ak apoptoz nan sourit, men pa gen okenn chanjman nan aktivasyon Axl ki te fèt nan mitan gwoup eksperimantal yo. Lòt rechèch sijere ke ekspresyon Axl, ki inibit apoptoz ak konsa kalsifikasyon vaskilè, te tou pa chanje nan sourit Gas6–/– (Kaesler et al. 2016). Rezilta nou yo klèman endike ke Rb1 espesyalman atténue downregulation Gas6 ki gen rapò ak laj men li pa te gen okenn enfliyans sou ekspresyon Axl, ki te rapòte ke se evènman prensipal ki responsab pou kalsifikasyon vaskilè ak fibwoz, pou amelyore enflamasyon vaskilè ki gen rapò ak laj ak vazodilatasyon endothelium-depandan. . Ekspresyon ki estab nan Axl ka soti nan yon kantite ase anvan deklanchman Gas6 oswa endike ke Gas6 fonksyone atravè lòt reseptè. Plis envestigasyon eksplore efè Rb1 sou lòt TAM ki ta ka aktive tou pa Gas6, tankou Tyro3 ak MerTK.

Konklizyon

Nan etid la prezan, nou konfime ke Rb1 inibit kalsifikasyon vaskilè ak fibwoz ak diminye ekspresyon de molekil adezyon selilè, tout nan yo ki imedyatman amelyore vazodilatasyon vaskilè endothelium-depandan ki gen rapò ak laj omwen an pati pa reglemante ekspresyon Gas6 men pa ekspresyon Axl. Avèk aje san kontwòl, jwenn ajan ki ka anpeche oswa trete andikap selil vaskilè ki gen rapò ak laj se yon gwo enpòtans. Etid nou an bay prèv ki valide efè Rb1 sou blesi vaskilè amelio-rating nan sourit ki aje.

Deklarasyon divilgasyon

Pa gen okenn konfli potansyèl de enterè ki te rapòte pa otè a (yo).

Finansman Travay sa a te sipòte pa sibvansyon ki soti nan Fondasyon Nasyonal Syans Natirèl Lachin nan [81370447], Pwojè Planifikasyon Syans ak Teknoloji nan pwovens Guangdong nan Lachin [2016A050502014], Shenzhen Key Medical Discipline Construction Fund [SZXK002], ak rechèch syantifik medikal la. Fondasyon pwovens Guangdong Lachin [A2019079].

Deklarasyon disponiblite done yo

Done ak materyèl yo disponib sou demann bay otè ki koresponn lan.

Kontribisyon otè

SYK, DHL ak XXQ kontribye nan konsepsyon ak konsepsyon travay sa a. LW, GYS ak MW kontribye nan analiz done yo. SYK, LW ak JMZ te ekri maniskri a. Tout otè li ak apwouve vèsyon final la.

Referans

Acosta JC, O'Loghlen A, Banito A, Guijarro MV, Augert A, Raguz S, Fumagalli M, Da Costa M, Brown C, Popov N, et al. 2008. Chemokine siyal atravè reseptè a CXCR2 ranfòse senesans. Selil. 133(6): 1006–1018.

Brandes RP, Fleming I, Busse R. 2005. Endothelial aje. Cardiovasc Res. 66(2):286–294.

Chen FF, Song FQ, Chen YQ, Wang ZH, Li YH, Liu MH, Li Y, Song M, Zhang W, Zhao J, et al. 2019. Testostewòn ekzojèn soulaje fibwoz kadyak ak apoptoz atravè chemen Gas6 / Axl nan sourit senesan. Exp Gerontol. 119:128–137.

Chen YQ, Zhao J, Jin CW, Li YH, Tang MX, Wang ZH, Zhang W, Zhang Y, Li L, Zhong M. 2016. Testostewòn reta vaskilè lis misk selil senesans ak inibit sentèz kolagen an atravè chemen siyal Gas6 / Axl. . Laj. 38(3):60.

Fridell YW, Villa J, Attar EC, Liu ET. 1998. GAS6 pwovoke Axl-medyatè chemotaxis nan vaskilè selil misk lis. J Biol Chem. 273(12): 7123–7126.

Gong X, Ma Y, Ruan Y, Fu G, Wu S. 2014. Atorvastatin alontèm amelyore malfonksyònman endothelial ki gen rapò ak laj pa amelyore estrès oksidatif ak nòmalize eNOS / iNOS move balans nan aorta rat. Exp Gerontol. 52:9–17.

Harvey A, Montezano AC, Lopes RA, Rios F, Touyz RM. 2016. Fibwoz vaskilè nan aje ak tansyon wo: mekanis molekilè ak enplikasyon klinik. Èske J Cardiol. 32(5):659–668.

Herrera MD, Mingorance C, Rodriguez-Rodriguez R, Alvarez de Sotomayor M. 2010. Endothelial malfonksyònman ak aje: yon aktyalizasyon. Aging Res Rev. 9(2):142–152.

Hsu JJ, Lu J, Umar S, Lee JT, Kulkarni RP, Ding Y, Chang CC, Hsiai TK, Hokugo A, Gkouveris I, Tetradis S, et al. 2018. Efè teriparatide sou mòfoloji kalsifikasyon aortik nan sourit hyperlipidemic ki gen laj. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 314(6):H1203–H1213.

Hurtado B, Abasolo N, Munoz X, Garcia N, Benavente Y, Rubio F, Garcia de Frutos P, Krupinski J, Sala N. 2010. Etid asosyasyon ant polimorfim nan jèn GAS 6-TAM ak ateroskleroz carotid. Twòn Haemost. 104(3):592–598.

Intengan HD, Thibault G, Li JS, Schiffrin EL. 1999. Mekanik atè rezistans, estrikti, ak konpozan ekstraselilè nan rat espontaneman ipètansif: efè antagonism reseptè anjyotansin ak konvèti anpèchman anzim. Sikilasyon. 100(22):2267–2275.

Iyemere VP, Proudfoot D, Weissberg PL, Shanahan CM. 2006. Plastisite fenotip selil misk vaskilè lis ak règleman kalsifikasyon vaskilè. J Entèn Med. 260(3):192–210.

Kaesler N, Immendorf S, Ouyang C, Herfs M, Drummen N, Carmeliet P, Vermeer C, Floege J, Kruger T, Schlieper G. 2016. Gas6 pwoteyin: wòl li nan kalsifikasyon kadyovaskilè. BMC Nephrol. 17(1):52. Kim EN, Kim MY, Lim JH, Kim Y, Shin SJ, Park CW, Kim YS, Chang YS, Yoon HE, Choi BS. 2018. Efè pwoteksyon resveratrol sou aje vaskilè pa modulasyon sistèm renin-angiotensin la. Ateroskleroz. 270: 123–131. Korshunov VA, Mohan AM, Georger MA, Berk BC. 2006. Axl, yon reseptè tirozin kinaz, medyatè koule-induit renovasyon vaskilè. Circ Res. 98(11):1446–1452.