Kurkumin soulaje senesans nan mwèl zo kanin selil souch mezenchymal pandan ekspansyon in vitro Pati 2

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

2.5.Autophagy Inovoloes nan Egzèsis efè pwoteksyon Cur nan senesans cBMSC

Pou eksplore efè otofaji ki pwovoke Cur sou senesans cBMSC, yo te modile nivo otofaji a atravè travay RAP (200 nM) oswa 3-MA (5 mM).3-MA egzèse yon aksyon inhibition enpòtan. sou aktivite otofajik, ki manifeste pa siyifikatif downregulation nan ekspresyon mRNA nan pwoteyin ki asosye ak mikrotubul 1 chèn limyè 3 (LC3), jèn ki gen rapò ak otofaji (ATG) 7, ATG12, ak unc51-tankou kinaz aktive otofaji{12} {14}}(ULK1); diminye rapò ekspresyon pwoteyin ki asosye ak mikrotubule 1 chèn limyè 3 kalite Ⅱ/I (LC3-I/I); ak ekspresyon an ogmante nan p62 konpare ak gwoup kontwòl la (Figi 5A, B). An konsekans, konpare ak gwoup Cur, yo te obsève yon diminisyon nan aktivite otofajik nan 3- MA plis gwoup Cur (Figi 5A, B). Kontrèman, yo te obsève yon ogmantasyon nan aktivite otofajik nan gwoup RAP la, jan sa pwouve pa ekspresyon mRNA upregulated nan LC3, ATG12, ak ATG7; ogmante konvèsyon LC3-I an LC3-II; ak degradasyon p62 (Figi 5A, B).

Premyèman, aktivite otofaj la te envestige sistematikman. Fòmasyon vakuol otofaj (yo rele tou otofagosome) te evalye pa obsèvasyon mòfolojik, ak rezilta yo te endike ke te gen plis vacuoles otofaj ak pwen LC3 nan gwoup Cur ak gwoup RAP konpare ak gwoup kontwòl la, pandan y ap yon kantite redui nan vakuol otofaj ak mwens pwen LC3 yo te obsève nan 3-MA ak 3-MA plis gwoup Cur (Figi 5C, E). Anplis de sa, tach LysoTracker te endike ke asidifikasyon lizozomal yo te amelyore pa RAP ak Cur nan cBMSCs ak diminye nan gwoup 3-MA ak 3-MA plis Cur (Figi 5D). Rezilta yo montre ke Cur ak RAP egzèse yon efè pozitif menm jan an sou deklanchman otofaji ak ke aktivite otofaji siprime pa 3-MA.gwosè penis cistanche,Sepandan, efè anpèchman 3-MA sou otofaji ka pasyèlman sove pa travay Cur.

Tanpri klike isit la pou konnen plis

Pou konfime si otofaji patisipe nan règleman an nan senesans CB MSc, nou plis egzamine fenotip senesans ki asosye apre pwomosyon oswa siprime otofaji atravè tretman farmakolojik. Rezilta yo te montre ke yon kantite redui selil SA- -gal-pozitif te prezan nan gwoup Cur ak RAP yo, alòske yo te obsève yon kantite plis selil SA- -gal-pozitif nan {{5} }Gwoup MA konpare ak gwoup kontwòl la. Li enpòtan pou remake ke kantite selil SA- -gal-pozitif yo te ogmante anpil nan gwoup 3-MA plis Cur konpare ak gwoup Cur (Figi). Rezilta yo nan yon analiz RT-qPCR te endike ke tretman ak RAP ak Cur ogmante nivo ekspresyon SOX-2 ak Nanog ak diminye nivo ekspresyon IL-6, TNF-a, p21, ak p16 konpare. ak gwoup kontwòl la. Sepandan, anpèchman otofaji pa 3-MA te kontwole ekspresyon p16, p21, TNF-, ak IL-6 (Figi 6C-E). Anplis de sa, konpare ak gwoup kontwòl la, efikasite koloni kBMSC yo te ogmante nan gwoup Cur ak RAP, pandan y ap kantite ak gwosè CFU-F yo te siyifikativman diminye nan 3-MA gwoup la. Anplis de sa, li te montre ke efè a amelyore nan Cur sou kantite koloni ki fòme nan cBMSC yo ta ka aboli atravè prekondisyone ak 3- MA (Figi 6B).poud cistanchePrèv sa a endike ke RAP ak Cur ka amelyore senesans cBMSC, pandan y ap 3-MA agrave senesans cBMSC epi diminye efè benefik Cur egzèse.

Ansanm, rezilta sa yo sijere ke anpèchman otofaji ak 3-MA akselere senesans cBMSC yo, pandan y ap aktivasyon otofaji ak Cur ak RAP soulaje senesans cBMSC (Figi 6F). Miyò, efè pwoteksyon Cur te egzèse pa pretreatman ak 3-MA (Figi 6F), sijere ke otofaji Cur-induit se yon mekanis molekilè potansyèl pou amelyore senesans cBMSC.

3. Diskisyon

Òganis kontinyèlman repare tisi ki blese yo ak retade pwosesis ki gen rapò ak senesans akòz karakteristik diferan fonksyonèl MSC yo ki abite anpil nan divès tisi ak ògàn [15]. Malerezman, laj ak maladi yo se faktè kle pou senesans MSC nan vivo, ak diferans entèn ak ekstèn nan anviwònman selilè akselere senesans MSC nan kilti vitro, tou de nan yo ki afekte negatif kapasite yo pou iminodepresyon, diferansyasyon, ak migrasyon, finalman diminye efikasite nan pwòp tèt ou. -reparasyon ak transplantasyon nan MSCs [7,14,49-51].extrait salsa cistancheOja ak kòlèg yo te endike ke BMSCs imen yo sispann pwopagasyon nan senkyèm rive nan nevyèm pasaj nan kilti klinik-klas ak ekspoze fenotip senesans tipik, tankou yon mòfoloji ipètrofik ak plat, aktivasyon an nan inibitè sik selil kinaz p16 ak p21, yon to pwopagasyon diminye. , ak aktivite amelyore nan SA- -gal [52]. Evidamman, ekspansyon vitro inevitableman engendr aparans twò bonè nan senesans nan MSCs, ki konsidere kòm yon sistèm modèl enpòtan pou rechèch in vitro aje selilè [42, A4, A5]. Etid nou an te jwenn ke cBMSC yo anvan 3yèm pasaj la te montre yon mòfoloji inifòm men yo te obsève yo sibi yon seri chanjman an tèm de mòfoloji selilè, fizyoloji, ak ekspresyon jèn apre 6yèm pasaj la (Figi 2 ak 7), ki konsistan avèk senesans twò bonè. .

Cistanche ka anti-aje

Yon kantite prèv ogmante endike ke eksitasyon famasi se yon apwòch pwomèt pou sove MSCs soti nan senesans [53,54]. Avèk sa a nan tèt ou, yon kantite konpoze natirèl ak sentetik yo te envestige anpil yo nan lòd yo detèmine anti-enflamatwa, antioksidatif, ak anti-senescence potansyèl yo nan vivo ak in vitro [15,55]. Kòm yon konpoze fenolik natirèlman, Cur te eksite anpil atansyon akòz efè benefik li yo sou byoloji MSC [36,37,56,57]. Sepandan, efè konplèks ekspoze Cur sou MSC yo ta dwe ak anpil atansyon konsidere anvan aplikasyon diferan rechèch byomedikal. Yang ak kòlèg yo rapòte ke gwo konsantrasyon Cur (50 ak 100 uM) ka pwovoke efè toksik egi nan BMSC imen an vitro, pandan y ap ekspoze kontinyèl (7 d) a 10uM nan Cur inibit pwopagasyon BMSC imen ak pwovoke apoptoz selil [58]. Enteresan, yon lòt etid endike ke tretman ak Cur(<20 um)for="" 5="" days="" ameliorates="" h,="" o,-induced="" oxidative="" stress="" in="" human="" adscs[56].="" additionally,="" cur="" preconditioning="" （1="" μm="" and5um）="" for="" 24="" or="" 48h="" can="" help="" to="" maintain="" cellular="" viability="" and="" improve="" the="" lifespan="" of="" rat="" adscs[36,57.="" our="" results="" demonstrated="" that="" cur(1="" um="" and="" 10="" μm）="" was="" able="" to="" maintain="" the="" viability="" of="" cbmscs="" and="" alleviate="" cbmsc="" senescence="" after="" exposure="" for="" 24="" h,="" while="" the="" colony-forming="" efficiency="" of="" cbmscs="" was="" significantly="" decreased="" at="" a="" dose="" of="" 10="" μm（figure="" 3）.="" therefore,="" the="" beneficial="" effects="" of="" cur="" （10="" umd="" may="" be="" attributed="" to="" short-term="" stimulation,="" and="" it="" can="" impair="" the="" proliferation="" potential="" of="" cbmscs="" in="" the="" long="">

Dènyèman, aktivite byolojik Cur yo te rapòte anpil sou divès modèl in vitro oswa in vivo, patikilyèman konsènan modulasyon karakteristik byolojik MSC yo. Aktivite anti-aje Cur yo te diskite souvan, e yo te jwenn Cur pou montre efè benefik sou aje ak maladi ki gen rapò ak laj nan nivo òganis ak selilè. Sepandan, mekanis ki kache règleman li yo konplike akòz diferan dòz ak fòm Cur, osi byen ke mekanis aje [19]. Kòm yon gwo mekanis intraselilè nan degradasyon molekil ak woulman òganèl, otofaji jwe yon gwo wòl nan pwoteje MSC yo kont kondisyon estrès ak kenbe omeyostazi selilè. Modilasyon otofaji a konsidere kòm yon nouvo estrateji pou amelyore fonksyon MSC [59]. Dapre done ki te rasanble nan etid sibstansyèl, pwomosyon oswa repwesyon otofaji pa Cur nan divès modèl selil egzèse efè cytoprotective satisfezan [38-40].cistanche stemDone nou yo te montre ke ogmante aktivite otofajik yo te obsève apre yo fin ekspoze a Cur, jan yo idantifye l pa regilasyon nan jèn ki gen rapò ak otofaji (LC3, ULK1, Atg7, ak Atg12), jenerasyon LC3-II, ogmantasyon nan kantite. vakuol otofajik ak òganèl vesikulèr asid, ak yon diminisyon enpòtan nan nivo pwoteyin p62 (Figi 4). Anplis de sa, lizozom nan konsidere kòm yon òganèl endispansab pou otofaji, pandan y ap dysregulation nan pH lizozomal ak chanjman nan aktivite vacuolar H plis -ATPase (v-ATPase) yo te obsève nan pwosesis la nan senesans MSC, kidonk ankouraje asidifikasyon lizozomal ak otofaji ak kontribye. pou retade senesans MSC [60]. Yan ak kòlèg yo endike ke Cur ka aktive fonksyon lizozom fibroblasts anbriyon sourit (MEFs) ak pwovoke otofaji, ki sèvi kòm yon siyal siviv enpòtan [38]. Menm jan an tou, nou te obsève ke tretman Cur amelyore asidifikasyon lizozomal nan cBMSCs (Figi 4), sijere ke Cur ka patisipe nan aktive fonksyon lizozom, ki se endispansab pou amelyore aktivite otofajik.

Autophagy se sitou yon mekanis cytoprotective, ak yon kantite prèv ogmante te endike ke pwopriyete yo anti-aje nan konpoze natirèl ak sentetik yo korelasyon ak modulasyon otofaji [29,54,61,62]. Sepandan, efè modulation otofaji sou senesans MSC ak mekanis korespondan yo poko evalye ak eksplore nèt. Premye rapò yo te endike ke otofaji se yon mekanis prensipalman cytoprotective e ke yon nivo ogmante nan otofaji ka retade senesans selilè pa diminye akimilasyon nan metabolit toksik ak restore fonksyon an nan òganèl [63]. Enteresan, dènye envestigasyon yo te montre tou ke ogmante kantite vakuol otofaji ak pwoteyin ki gen rapò ak otofaji (LC3-II, ATG7, ak ATG12) yo te obsève pandan senesans MSC, pandan y ap anpèchman otofaji ak bafilomicin A1 ak {{11 }}MA yo te montre yo diminye pousantaj selil SA- -gal-pozitif ak ekspresyon p16 ak p21 [35]. Pou plis elicide relasyon ki genyen ant otofaji Cur-induit ak efè li sou cBMSCsenescence, otofaji te modulation pa pretreatment ak rapamicin oswa 3-MA. Li evidan, yo te jwenn aktivite otofajik yo te atenye pa 3-MA, tandiske RAP ak Cur (1 uM) yo te montre siyifikativman amelyore otofaji (Figi 5). Konfòm ak rapò anvan yo [5], rezilta nou yo tou demontre ke anpèchman nan otofaji pa 3-MA akselere senesans selilè nan cBMSCs. Efè prèske konsistan sou aktivasyon nan otofaji yo te egzèse pa Cur (1uMand RAP pandan y ap analogue efè cytoprotective nan Yo te montre cBMSC yo. An konsekans, lè otofaji te anpeche pa 3-MA, efè pwoteksyon Cur egzèse yo te diminye (Figi ), ki sijere ke otofaji Cur-induced se yon mekanis molekilè potansyèl pou amelyore senesans cBMSC (Figi 7).

Anba kondisyon fizyolojik, otofaji rive nan yon nivo fondamantal nan tout selil ekaryotik pou kenbe omeyostazi selilè. Sepandan, divès kondisyon estrès ka mennen nan otofaji nòmal, ki gen yon enfliyans sou sò selil sof si otofaji retabli nan yon nivo optimal [41,44,64]. Prèv nou yo konfime ke otofaji ki pwovoke Cur montre efè benefik sou règleman senesans cBMSC. Nan senaryo sa a, divès estimilis ki pwodui estrès ak anviwònman ekstraselilè yo ta dwe konsidere ak anpil atansyon anvan tretman Cur, e li ta enteresan pou mennen ankèt sou si otofaji Cur-induced ka oaza amelyore fonksyon MSC yo nan yon dòz predetèmine ak dire. Anplis de sa, yon sistèm livrezon kurkumin ki baze sou nanoteknoloji te montre pi bon solubilite akeuz-faz ak nivo byodisponibilite [65,66]; li ta ka yon zouti pwomèt pou retade ak kontrekare senesans MSC. Repons kesyon an pou konnen si otofaji se mekanis prensipal ki kache nan retade senesans MSC toujou mande pou plis detay ki pral bay nan rechèch nan lavni.

4. Materyèl ak Metòd

4.1.Bèt

Yo te ranmase echantiyon mwèl zo nan 6 chen granmoun ki an sante nan zòn riral Chinwa yo (12-ki gen yon mwa). Tout etid yo te apwouve pa Komite Fakilte Swen ak Itilizasyon bèt nan Sichuan Agricultural University (apwobasyon nimewo 2020-0608) epi yo te fèt an akò ak estanda etik yo nan lwa pwoteksyon bèt yo nan Repiblik Pèp la nan Lachin.

4.2. Preparasyon nan solisyon kurkumin

Cur (HPLC pi gran pase oswa egal a 98 pousan, nimewo CAS:458-37-7; Solar Science & Technology Co., Ltd., Beijing, Lachin) te fonn nan DMSO nan yon konsantrasyon stock de 20 mmol/ L. filtre nan yon manbràn filtre òganik mikropore 0.22 μm epi estoke nan -80 degre. Diferan solisyon Cur yo te prepare nan yon mwayen pou etid vitro.

4.3. Kilti selil ak ekspansyon

cBMSC yo te jwenn nan mwèl zo. Selil yo te kiltive nan yon mwayen konplè ki gen ladann Dulbecco's Modified Eagle Medium ki ba-glikoz (LG-DMEM, Gibco Grand Island, NY, USA), 10 pousan serom fetal bovine (FBS, TransGen Biotech Co., Ltd., Beijing, Lachin). ), ak 1 pousan penisilin/streptomycin. Nan yon 80-90 pousan konfluans, selil aderan yo te lage ak Trypsin Dijesyon Solution (Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, Lachin) ak plis elaji nan yon rapò 1:2-1:3 [67 ].

4.4. Kwasans selil Curie

Pou detèmine kapasite proliferasyon cBMSCs nan pasaj (P) 3,6, ak 9, selil yo te simen nan twa 48-plak byen (2500 selil / pi). Apre 48 èdtan enkubasyon, selil yo te lage ak Trypsin Dijesyon Solisyon ak konte ak yon emocytometer. Pwosedi konte selil la te repete chak 48 èdtan epi li te kenbe pou 14 d.

4.5.Deteksyon Imunofenotip nan cBMSCs pa Flow Cytometry

Nan 3yèm pasaj la, cBMSC yo te lave ak PBS ak tripsinize. Selil yo (3 × 105 selil/mL) yo te re-sispann nan tanpon tach la, epi sispansyon selil yo （100 μL) yo te enkube ak FITC, PE, oswa APC antikò monoklonal ki gen etikèt fluorescent kont antijèn sifas CD45, CD34, ak ITGB1 (eBioscience, San Diego, CA, USA) ak CD31, CD90, ak CD105 ki pa fluorescent (Biosynthesis biotechnology Co.Ltd. Beijing, Lachin) pou 15 min nan 4 degre. Selil yo te lave ak PBS ak enkubasyon ak FITC-konjige kabrit anti-lapen IgG pou 15 min nan 4 degre. Antijèn sifas yo te detekte pa flow cytometry (FACS Calibur, Becton Dickinson, San Jose, CA, USA). Analiz done yo te fèt ak lojisyèl CytExpert.

4.6. Esè diferansyasyon in vitro

cBMSC yo te plake nan yon dansite 5 × 104 selil/mL nan plak 6-byen yo. Nan 70-80 pousan konfluans, mwayen konplè a te ranplase ak yon mwayen endiksyon osteogenic oswa adipogenic diferansyasyon epi chanje chak 3 jou (Cvagen, Suzhou, Lachin). Depozisyon kalsyòm te detekte pa Alizarin Red S tach (Solarbio, Beijing, Lachin) apre 3 semèn nan endiksyon osteogenic ak akimilasyon gout lipid yo te obsève lè l sèvi avèk tach lwil oliv wouj O (Solarbio, Beijing, Lachin) apre 2 semèn nan endiksyon adipogenic.

4.7.Efè Cur sou rantabilite selilè

Yo te detèmine viabilite selilè cBMSC yo lè l sèvi avèk twous CCK-8(Vazyme Biotech Co., Ltd., Nanjing, Lachin).benefis cistanche tubulosa ak efè segondècBMSC yo te pre-kilti nan yon plak 96-byen pou 24 èdtan. Yo te trete cBMSCs ak Cur nan diferan konsantrasyon (0.1, 0.5, 1, 5, ak 1{ {14}} umol/L) pou 12h, 24h,48h, ak 72h. Selil yo te trete ak 0.1 pousan nan DMSO, ki te itilize kòm yon kontwòl Apre enkubasyon ak 10 μL nan solisyon CCK-8 pou chak pi pou 2 èdtan, dansite optik la te mezire pa yon lektè microplate nan 450 nm (Thermo Scientific, Waltham, MA, Etazini). Vitabilite selil relatif la te kalkile an akò ak enstriksyon manifakti a.

4.8. Esè fòmasyon koloni

Efikasite renouvèlman pwòp tèt ou nan cBMSC yo te detekte lè l sèvi avèk yon tès inite-fibroblast ki fòme koloni （CFU-F）. cBMSC yo te simen （3× 10² selil/byen） nan 6-plak byen yo. Apre de semèn nan kilti, selil yo te fikse ak 4 pousan paraformaldehyde pou 30 minit epi yo obsève anba yon mikwoskòp Envèse (LX73, Olympus Corporation, Tokyo, Japon) apre yo fin tache ak 1 pousan kristal vyolèt pou 10 min. Pou CFU-F a, plis pase 50 selil yo te konte. Efikasite CFU-F te kalkile jan sa a:

Efikasite CFU-F=kantite CFU-F/kantite grenn (300 selil)[68].

4.9. Beta-Galactosidase Essay tach

Aktivite senesans ki asosye -galactosidase (SA- -gal) nan cBMSC yo te estime lè l sèvi avèk twous tach SA- -gal (Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, Lachin) dapre enstriksyon manifakti a. . Apre tach, selil yo te egzamine anba yon mikwoskòp Envèse. Selil ki tache pozitivman yo te konte pou evalye senesans selilè a.

4.10.Reverse transcription an tan reyèl PCR quantitative (RT-qPCR)

RNA total la te ekstrè nan granules selil yo lè l sèvi avèk metòd reyaktif Trizol la. cDNA te sentèz lè l sèvi avèk twous reyaktif PrimeScriptTM RT ak gDNA Eraser la (Takara, Shiga, Japon). Jadendanfan PCR (Tablo 2) san konte GAPDH an referans ak etid anvan yo [67] yo te fèt lè l sèvi avèk lojisyèl Primer Express la (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) ki baze sou sekans cDNA. qPCR la te fèt lè l sèvi avèk TB Green PCR Mix (Takara, Shiga, Japon) sou CFX96 Touch an tan reyèl PCR Deteksyon Sistèm (Bio-Rad, Richmond, CA, USA). Kondisyon reyaksyon yo te jan sa a: 95 degre pou 30 s epi answit 39 sik 95 degre pou 5s ak 60 degre pou 30 s. Yo te fè yon analiz koub k ap fonn kòmanse nan 95 degre pou 10s, Lè sa a, sòti nan 65 to 95 degre, ogmante pa 0.5 degre chak sik. GAPDH te itilize kòm yon kontwòl entèn pou nòmalize tout done yo epi yo te kalkile ekspresyon relatif la atravè metòd konparatif Cycle Threshold (Ct).

4.11. Suivi de lusozomal UIsing LysoTracker

Lyso-Tracker Wouj (Beyotime Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, Lachin) te itilize pou swiv lizozom, ki ka montre yon entansite fliyoresan ogmante sou asidifikasyon lizozomal. Nou simen cBMSCs nan 12-plak byen epi trete yo ak Cur pou 24 èdtan, Lè sa a, selil yo te trete ak Lyso-Tracker (60 nM) ak Hoechst 33,342 (2 ug / mL) pou 20 min. Yo te obsève fluoresans lan lè l sèvi avèk yon mikwoskòp fliyoresan Envèse apre yo fin lave ak PBS.

4.12. Iminofluoresans

CBMSC yo (2 × 104 selil / glisad) yo te simen sou glisad epi yo te fikse ak 4 pousan paraformaldehyde pou 30 min. Apre ko-enkubasyon ak 0.5 pousan Triton X-100 pou 5 min (Solarbio, Beijing, Lachin), seksyon yo te benyen nan solisyon an bloke pou 30 min. Yo te retire likid ki anvlòp la, epi selil yo te enkube ak antikò anti-LC3B (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, USA) lannwit lan nan 4 degre, Lè sa a, enkubasyon ak antikò segondè fluorochrome-konjige (Abcam, Cambridge, MA, USA) pou 50 min nan 37 degre C. Finalman, selil yo te counterstained ak DAPI (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Lachin) ak kontwole anba yon mikwoskòp konfokal.

4.13.Western Blotting analiz

Echantiyon selil yo te lysed ak tisi a ak lysate selil (Solarbio, Beijing, Lachin) ki gen inibitè proteaz apre yo fin lave ak PBS glas frèt. Lysates selil yo ki gen 15 ugs nan pwoteyin pou chak echantiyon yo te chaje nan sodyòm-dodecyl silfat-polyacrylamide (SDS-PA) (Solarbio, Beijing, Lachin) jèl ak separe pa elektwoforèz. Apre transfere pwoteyin yo sou manbràn polyvinylidene fluoride (PVDF), lèt la te bloke nonspecifically ak 5 pousan lèt sèk san grès (Solarbio, Beijing, Lachin) pou 1 èdtan nan tanperati chanm. Manbràn yo te enkube lannwit lan ak antikò prensipal anti-LC3B (1:2000, Abcam, Cambridge, MA, USA), anti-p62/SQSTM1 (1:4000, Novus Biologicals, Littleton, NH, USA). ), ak anti- -aktin (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, USA) nan 4 degre, epi yo te lave tach yo ak TBST (Solarbio, Beijing, Lachin) anvan yo enkubasyon yo ak antikò segondè (1). :2000, Abcam, Cambridge, MA, USA) nan 37 degre pou 1 h. Imedyatman, manbràn yo te devlope pa ekspoze a reyaktif chemiluminescence (Millipore, Billerica, MA, USA) ak visualized ak ChemiDocTM Imaging Systems (Tanon-5200, Shanghai, Lachin). Dansite gwoup la te quantifye lè l sèvi avèk Image-Pro Plus 6.0 lojisyèl (Media Cybernetics, Silver Spring, MD, USA) pou chak gwoup ak nòmalize ak -actin.

4.14. Mikwoskopi elektwonik transmisyon (TEM)

Te grenn selil la dijere epi kolekte nan yon tib santrifujeur 1.5mL, Lè sa a, fiks ak 2.5 pousan glutaraldehyde (Solarbio, Beijing, Lachin) pou 2 èdtan nan tanperati chanm. Echantiyon yo te post-fiks ak 1 pousan tetoksid osmyòm pou 1 èdtan apre yo fin lave ak PBS, Lè sa a, nou ogmante dezidratasyon an nan yon fason pa etap nan solisyon nan asetòn ak entegre yo nan 812 résine epoksidik (Beijing Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd., Bejing, Lachin). Imedyatman, seksyon 50 nm yo te jwenn nan ultra-mikwotom la (EM UC7, Leica Microsystems Co., Ltd., Heidelberg, Almay). Seksyon yo te tache ak acetate uranyl (Zhongjingkevi, Bejing, Lachin) pou 10-15 min ak sitrat plon (Zhongjingkei, Beijing, Lachin) pou 2 min. Yo te wè tout espesimèn sou yon TEM (EM-1400PLUS, JEOL, Akishima, Tokyo, Japon).

4.15. Analiz estatistik

Rezilta yo te jwenn nan twa eksperyans endepandan ak tout done yo te montre kòm vle di ± devyasyon estanda (SD). Yo te analize valè estatistik yo lè l sèvi avèk IBM SPSs Statistics 25 epi yo te ilistre lè l sèvi avèk GraphPad Prism 9.0(GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Diferans estatistik siyifikatif yo te detèmine lè l sèvi avèk yon analiz yon sèl-fason nan divèjans (ANOVA) ak tès t Elèv la. valè p<0.05 were="" considered="" to="" be="" significant="">

5. Konklizyon

Konklizyon nou yo fè limyè sou relasyon ki genyen ant Cur, senesans cBMSC, ak otofaji. Done ki soti nan etid nou an sijere ke Cur ka soulaje eta senesans nan cBMSCs pandan y ap aktive otofaji ak ankouraje asidifikasyon lizozomal. Anplis de sa, plis prèv demontre ke otofaji ki pwovoke Cur se yon mekanis potansyèl pou amelyore senesans cBMSC. Cur ta ka yon activator pwomèt ak konsèvatè pou amelyore fonksyon MSC yo. Nan opinyon nou an, efè pozitif Cur sou aje pa ka neglije. Etid nan lavni yo ta dwe konsantre sou efè règleman Cur sou sò MSC pou amelyore potansyèl terapetik MSC nan divès maladi, tankou domaj tisi ak maladi dejeneratif ak enflamatwa.

Atik sa a extrait de Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 11356. https://doi.org/10.3390/ijms222111356 https://www.mdpi.com/journal/ijms