Detèminan iminite pwoteksyon malarya nan sourit iminize ak sporozoit vivan pandan pwofilaktik trimetoprim-sulfamethoxazole

Résumé.

VIH ak malarya jeyografikman sipèpoze. Trimethoprim-sulfamethoxazole (TMP-SMX) se yon dwòg lajman ki itilize nan timoun ki pa enfekte ak VIH ki ekspoze nan zòn malarya-endemic, epi li konnen yo gen efè antimalarya. Pli lwen etid an tèm de enpak antimalarya ak efè sou devlopman nan iminite espesifik malarya Se poutèt sa esansyèl. Sèvi ak modèl malarya wonjè yo, nou te deja montre ke ekspoze repete Plasmodium pandan administrasyon TMP-SMX, oswa vaksen chimyoprofilaktik (CVac), pwovoke CD8 T-selil-depandan iminite pre-eritrositik.

Sepandan, repons iminitè umoral yo enpòtan nan modèl iminite pre-eritrositik. Nan la a, nou demontre ke repons antikò medyatè kontribye nan iminite pwoteksyon pwovoke pa sera iminitè CVac lè l sèvi avèk TMPSMX nan modèl espès parazit omològ, men se pa eterològ. Etid klinik yo dwe konte pou potansyèl antikò anti-Plasmodium pwovoke pandan profilaksi TMP-SMX.

Repons iminitè umoral la gen rapò ak iminite imen an. Mekanis iminitè umoral la sitou itilize antikò nan likid kò pou defann kont enfeksyon, ki gen ladan patojèn ekstraselilè tankou bakteri, viris, ak fongis. Sistèm iminitè imen an gen ladan de mekanis iminite umoral ak iminite selilè, ki ka rekonèt epi elimine patojèn etranje anvayi yo. Malgre ke iminite umoral ak iminite selilè yo diferan, yo ansanm konstitye sistèm iminitè imen konplè. Se sèlman anba aksyon an nan yon sistèm iminitè imen konplè ka kò nou pi byen reponn a envazyon an nan divès kalite patojèn. Soti nan pwen de vi sa a, nou bezwen peye atansyon sou iminite nou an. Nan rechèch nou an, nou te jwenn ke gen yon plant Cistanche deserticola ki ka amelyore iminite. Kapasite estrès, amelyore efè bakterisid selil iminitè yo.

Klike sou sipleman cistanche deserticola

ENTWODIKSYON

VIH ak malarya gen anpil moun ansanm nan anpil rejyon atravè lemond, e anpil timoun ki ekspoze ak VIH oswa ki enfekte ap viv nan zòn kote malarya endemi. Trimethoprim-sulfamethoxazole (TMPSMX) se yon dwòg lajman ki itilize pou redwi ensidans enfeksyon opòtinis nan timoun ki ekspoze ak VIH ki enfekte, epi, an paralèl, dwòg sa a gen yon efè antimalarya kòm yon antifolat.1

Sepandan, malgre itilizasyon toupatou ak efè antimalarya, enpak li sou enfeksyon malarya ak devlopman iminite espesifik malarya nan yon kontèks rezistans antifolat gaye toupatou, ak nan timoun ki pa enfekte ak VIH ki ekspoze a VIH, mande plis etid. Vreman vre, etid klinik yo te sèlman dènyèman te kòmanse gade enpak la nan TMP-SMX dire pwofilaksi sou malarya kòm yon refleksyon sou iminite.2,3.

Enfeksyon malarya ak Plasmodium nan lame mamifè a kòmanse ak sporozoit (SPZs) nan moustik anopheline fi pandan yon repa san. Lè sa a, sporozoit vwayaje nan fwa a ak enfekte epatosit, kote yo devlope nan fwa-etap oswa fòm exoerythrocytic (EEFs). Fòm exoerythrocytic pwodui dè dizèn de milye merozoit ki anvayi eritrosit yo pou kòmanse etap san an.

Iminite natirèlman akeri kont malarya devlope sèlman apre epizòd malarya repete epi li pa anpeche re-enfeksyon. Sepandan, esterilize iminite anti-enfeksyon ka pwovoke ak SPZs atenue ki arete pandan devlopman fwa-etap.4 Yo obsève iminite anti-enfeksyon tou nan sourit ak moun ki te enfekte ak SPZs ak an menm tan bay dwòg ki touye fwa oswa san. etap parazit,5,6, ak pwosesis sa a rele vaksen chimyoprofilaktik (CVac). Ansanm, done sa yo endike ke ekspoze a parazit pre-eritrositik ka pwovoke iminite pwoteksyon trè efikas.

Vreman vre, nan sourit, nou te montre ke TMP-SMX nan dòz prophylactiques ka arete devlopman nan etap fwa nan Plasmodium e ke rejim sa yo pandan ekspoze repete malarya, ki rele CVac / TMP-SMX, pwovoke iminite pwoteksyon vize parazit pre-eritrositik-etap. 7 Iminite sa a mande pou selil CD8 T yo, alòske kontribisyon antikò yo rete enkonplètman envestige.7 Isit la, nou te deside detèmine kontribisyon nan antikò nan iminite pwoteksyon CVac/TMP-SMX-induit lè l sèvi avèk serom soti nan sourit nan modèl nou etabli nan CVac ak Plasmodium yoelii-enfekte sourit, k ap resevwa TMP-SMX nan nivo ki apwoksimatif sa yo reyalize nan timoun yo sou estanda TMP-SMX dòz prophylaxis.7,8.

METÒD

Sourit.

Sourit fi BALB/c, ki gen laj 4-6 semèn ak peze 20-25 g (Taconic oswa NIH), yo te itilize nan eksperyans ak apwobasyon nan NIAID / NIH Enstitisyonèl Swen Animal ak Komite Itilizasyon. Sourit yo te matche ak laj ak sèks pou tout eksperyans.

Parazit ak moustik.

Moustik Anopheles stephensi yo te manje sou sourit ki enfekte ak P. yoelii (17XNL) oswa Plasmodium berghei (ANKA), ak SPZ yo te rekòlte nan glann saliv nan jou 14-18 (P. yoelii) oswa jou 21-26 (P. berghei) apre. diseksyon moustik. Tout eksperyans yo te fèt ak P. yoelii 17XNL ak P. berghei ANKA, eksepte tès imunofluoresans (IFA) kote liy parazit transjenik eksprime pwoteyin vèt fliyoresan (GFP) (P. yoelii GFP [17XNL] ak P. berghei GFP [ANKA]) yo te itilize.9,10 Tout moustik yo te manje sourit ki enfekte, ak parazit pa t 'sibi pasaj san seri kòm sa a te demontre yo modile virilans enfeksyon.11.

Rejim trimethoprim-sulfamethoxazole, inokulasyon SPZ, ak evalyasyon efikasite.

Yo te itilize trimethoprim-sulfamethoxazole nan fòm sispansyon jenerik ki disponib nan komèsyal li yo ak nan yon rejim ki anpeche devlopman parazit nan etap fwa nan vitro epi anpeche parazitemi patant nan sourit pandan vaksinasyon CVac/TMP-SMX. 7 Modèl nou an nan CVac, ki dekri nan tèks sa a, yo te eksplore anpil iminolojikman ak famakokinetik ak P. yoelii ak rejim vaksinasyon an te itilize. kèk tansyon P. berghei posede rezistans antifolat.1.

An brèf, sourit yo te enjekte twa fwa ak 10,000 P. yoelii 17XNL SPZ nan 14- a 21-entèval jou. Kòmanse menm jou ak vaksen SPZ, bèt vaksinen ak kontwòl yo te bay 60 μL nan TMP-SMX pa gavaj oral nan 18, 24, ak 36 èdtan apre inokulasyon SPZ. Pandan rejim vaksinasyon an, yo te konfime absans parazitemi nan sourit vaksen yo pa egzamen Giemsa-tache san mens nan san ke a chak lòt jou (jiska jou 15). Sourit ki te resevwa CVac/TMP-SMX yo te repoze pou yon minimòm de 4–6 semèn apre dènye SPZ ak administrasyon dwòg la anvan koleksyon serom. kòm CVac sera. Sero kontwòl yo te kolekte nan sourit malarya-nayif ki pa te resevwa okenn lòt entèvansyon ("nayif") oswa ki te resevwa dwòg sèlman men pa gen okenn inokulasyon SPZ ("kontwòl dwòg [DC]"). Separeman, sourit kontwòl enfeksyon malarya-nayif te resevwa SPZs (nan saline tampon fosfat [PBS] sèlman) pandan chak etid pou konfime enfeksyon parazit.

Nan vitro ak in vivo SPZ netralizasyon esè ak CVac sera.

Nan vitro, tès netralizasyon sporozoit (SNA), ki itilize yon serom pou evalye efè antikò serik yo sou enfeksyon parazit, yo te fè jan sa te dekri anvan an.12 An brèf, 20, 000 P. berghei oswa P. yoelii SPZ yo te preenkube sou glas (P. berghei) oswa nan tanperati chanm (P. yoelii) pou 40-45 minit nan sera pisin nan gwoup 5-10 CVac/TMP-SMX- sourit iminize,7 oswa soti nan DC oswa sourit nayif. Lè sa a, yo te ajoute sporozoit nan selil HepG2:CD81 konfluan (yon kado Dr Eric Rubinstein, Inserm U935, Villejuif, Frans). Yo te enkube esporozoit yo nan 10-15 μL mwayen diseksyon ak 6 μL sera nan yon volim total de 30 μL (dilusyon 1:5) nan chak pi nan yon glise 8-pou chanm (Lab-Tek, Thermofisher). Syantifik, Waltham, MA)) ak selil kiltive yo, epi apre sa yo te enkube nan 37C pou 60-72 èdtan ak chanjman nan medya kilti (Dulbecco's Modified Eagle Medium [DMEM] plis 10 pousan serom fetis bovin [FBS] plis 100 U/mL penisilin -streptomisin) chak 24 èdtan. Esay yo te kouri nan kat fwa pou chak kondisyon.

Nan 60-72 èdtan, selil yo te trypsinized (trypsin-ethylenediaminetetraacetic asid [EDTA]) epi lave de fwa ak RNAse-gratis PBS, ak RNA total yo te ekstrè, ak fado parazit te estime pa qPCR. Yo te izole RNA total la lè l sèvi avèk TRI reyaktif (Molecular Research Center, Cincinnati, OH), dapre enstriksyon manifakti a. Transkripsyon ranvèse te fèt lè l sèvi avèk 1 ug nan RNA total ak hexamers o aza. Yo te fè PCR an tan reyèl lè l sèvi avèk primè ki rekonèt P. yoelii- oswa P. berghei-espesifik sekans nan 18S rRNA a ak pwodwi anplifye a te quantifye lè l sèvi avèk QuantiTect SYBR Green PCR Kit la (Qiagen, Hilden, Almay).13 Dilusyon nan { {7}}pli nan yon plasmid konstwi ki gen P. yoelii ak P. berghei 18S jèn rRNA yo te itilize pou kreye yon koub estanda. Pou PCR, eksperyans yo te kouri an triple, ak twa a kat eksperyans endepandan yo te kouri.

Pou eksperyans in vivo, SNA yo te fèt ak etap enkubasyon yo kòm pi bonè eksepte ke 40,000 SPZ nan yon volim 100-μL PBS yo te preenkube nan sera tès nan yon dilution final 1:5 pou 45. minit nan tanperati chanm.14 Lè sa a, sa a te dilye plis nan PBS pou jwenn yon konsantrasyon final 40,000 SPZs/mL. Sourit nayif yo te defye ak 100 μL nan solisyon sa a, ki koresponn ak 4, 000 SPZs.14 patesans san-etap yo te kontwole pou jiska 15 jou apre defi. Yo te fè de eksperyans ak 5-10 sourit pou chak kondisyon pou chak espès parazit.

Imunofluoresans nan SPZs ak EEFs.

Yo te fè tès imunofluoresans sou SPZ glann saliv jan sa dekri yon lòt kote.15 Liy parazit transjenik ki eksprime GFP (P. yoelii GFP [17XNL] ak P. berghei GFP [ANKA]) yo te itilize pou eksperyans IFA. An brèf, 5 × 104 SPZ nan 200 μL yo te jwenn nan glann saliv moustik nan medya disseksyon yo te preenkube pou 45 minit nan yon glise chanm uit-pi ki kouvwi polilizin (Lab-Tek) kouvwi ak HepG2: CD81 konfluyan. selil yo. Lè sa a, yo te fikse sporozoit ak PBS-4 pousan PFA pou 10 minit nan tanperati chanm. Lè sa a, yo te itilize SPZ sa yo pou imunostaining avèk oswa san pèmeabilizasyon ak 0.1 pousan Triton X100 nan PBS pou 5 minit nan tanperati chanm pou SPZs, lave de fwa ak PBS, ak Lè sa a, bloke ak PBS 3 pousan albumin serom bovin (BSA) pou 30 minit nan chanm. tanperati.

Lè sa a, yo te enkube SPZ sa yo ak sera (1:400 nan PBS-3 pousan BSA) lannwit lan nan 8 C. Apre yo fin lave kat fwa ak PBS, yo te enkube SPZ yo nan RT ak AlexaFluor 594-konjige anti-sourit. IgG (Thermofisher Scientific) pou 2 èdtan nan yon dilution 1:1, 000 nan PBS3 pousan BSA. Lè sa a, glisad yo te lave twa fwa ak PBS yo retire antikò ki pa mare epi finalman ak PBS ak DAPI (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) 300 nM. Imaj fliyoresan yo te akeri ak yon mikwoskòp konfokal (Leica SP5, Buffalo Grove, IL).

Imaj imunofluoresans EEF yo te akeri, jan yo te rapòte deja.14 An brèf, 50,000 P. yoelii/P. berghei GFP SPZ / byen yo te ajoute sou selil HepG2: CD81 / HepG2 konfluyan nan glisad chanm uit-byen (Lab-Tek). Apre santrifujasyon pou 5 minit nan 310 g nan 20C, glisad yo te enkube nan 37C ak mwayen kilti jan sa dekri pi bonè epi chanje de fwa chak jou apre enfeksyon. Devlopman EEF yo te fikse nan 48 èdtan, bloke ak 3 pousan BSA nan PBS (avèk oswa san pèmeabilizasyon ak 0.1 pousan Triton X-100 nan PBS pou 10 minit), epi yo tache ak sera sourit jan sa dekri pi bonè pou SPZ IFA. Fòm exoerythrocytic yo te make ak antikò poul anti-EXP1 pou idantifye epatosit ki enfekte. Imaj yo te akeri lè l sèvi avèk yon mikwoskòp konfokal (Leica SP5).

Analiz estatistik.

Yo te fè tès Mann-Whitney sou eksperyans konbine pou tès in vitro. Yo te pwodwi koub siviv, epi yo te itilize tès log-rank (Mantel-Cox) pou konpare gwoup yo. Done yo te nòmalize nan kontwòl nayif atravè eksperyans ak konpare ak DC pou tout analiz estatistik. Analiz estatistik yo te fèt lè l sèvi avèk lojisyèl GraphPad Prism (vèsyon 7, San Diego, CA).

REZILTA

Vaksen chimyopwofilaksi/trimetoprim–sulfamethoxazole sera preenkubasyon ak SPZ P. yoelii, men se pa SPZ P. berghei, diminye fado parazit fwa-etap nan vitro.

Nan SNAs, P. yoeliiSPZs enkubasyon ak kouvri sou HepG2: CD81 selil ak CVac sera bay siyifikativman redwi fado parazit fwa etap nan vitro (Figi 1A, P <{3}}.03). Sepandan, enkubasyon menm jan an nan P. berghei SPZs ak CVac sera echwe pou pou diminye fado parazit fwa-etap (done yo pa montre).

Vaksinasyon chimyoprofilaktik sera preenkubasyon ak P. yoelii men pa P. berghei SPZs ogmante tan nan patant nan vivo.

Preincubation nan P. yoelii SPZs ak CVac sera te lakòz yon reta enpòtan nan P. yoelii patency (jou nan deteksyon parazit nan san) konpare ak DC sera preenkubasyon (Figi 1B, P=0.03). Kontrèman, patant de parazit heterologous P. berghei pa te siyifikativman reta (done yo pa montre). Preincubation ak sera ki soti nan sourit nayif oswa DC ak swa espès parazit pa t 'afèkte jou vle di nan patant konpare ak kontwòl enfeksyon (Figi 1B pou P. yoelii, done yo pa montre pou P. berghei).

Sewo vaksen chimyoprofilaktik te reyaji ak. yoelii SPZs ak EEFs men sèlman EEFs nan P. berghei pa IFA.

Pou egzamine si CVac sera rekonèt antijèn espès omològ ak eterològ, nou te fè eksperyans IFA. Egzamen imunofluoresan te sigjere ke sera iminitè CVac rekonèt antijèn nan tou de P. yoelii SPZs ak EEFs (Figi 2A ak B). Antikò tach nan P. yoelii EEFs (2B) parèt yo dwe sevè limite andedan nan epatosit la, tandiske sa yo ki nan kontwòl (nayif oswa DC) pa t '. Vaksinasyon chimyoprofilaktik/sera iminitè TMP-SMX pa t 'rekonèt P. berghei SPZs, men te gen ankò prèv ke kèk rekonesans nan EEFs, byenke ak plis tach difize atravè EEF a (Figi 2C ak D).

KONKLIZYON/DISKIZYON

Yo te demontre diminisyon parazit malarya ki baze sou dwòg ak rezilta iminite pwoteksyon nan bèt ak imen, men mekanis yo rete klè. Sèvi ak P. yoelii CVac/TMP-SMX modèl la, nou montre ke sourit iminitè sera gen yon pati nan aktivite netralizasyon SPZ.

Malgre ke CVac sera pa t 'konfere iminite esterilize, li pasyèlman redwi devlopman nan EEF omològ nan vitro ak nan vivo. Sepandan, CVac sera echwe pou pou bay aktivite pwoteksyon kont enfeksyon espès eterològ nan vitro oswa nan vivo. Done sa yo ta ka sijere ke antikò ensifizan te prezan pou anpeche patant.

Mank pwoteksyon eterològ ta ka tou akòz eterojenite siyifikatif ant espès ant antijèn yo te dirije repons antikò yo.

Nan modèl vaksinasyon SPZ iradyasyon, sera iminitè sourit yo rekonèt sèlman SPZ omològ epi yo pa t medyatè pwoteksyon kont defi eterològ. pwoteyin espesifik nan EEF ak SPZ. Sepandan, ki jan sa tradwi nan repons iminitè fonksyonèl pa ka dirèkteman ekstrapolasyon, espesyalman paske IFA yo te fiks.

Travay anvan yo, ki gen ladan pwòp pa nou, sepandan, sijere tou repons eterològ pwoteksyon nan esè CVac Plasmodium falciparum imen ak sitou akòz repons iminitè ki pa gen selil ki pa umoral. modèl SPZ iradyasyon, selil T CD8 yo fè yon kontribisyon enpòtan nan iminite esteril.7 Enteresan, piblikasyon anvan nou yo ki te itilize modèl CVac sa a endike ke repons selil-medyatè yo jwe nan pwoteje kont defi eterològ ak omològ e ke yon repons antikò pa t ase pou pwovoke yon repons pwoteksyon.7

Miyò, tou de modèl CVac nou an ak modèl SPZ iradyasyon yo fè diferans ak lòt modèl sistèm CVac kote yo itilize klowokin antimalarya nan etap san an. Nan ka sa a, antikò a medyatè netralizasyon parazit nan vivo ak pwoteksyon kont defi eterològ. Modèl CVac/TMP-SMX.7,18 Se poutèt sa, an jeneral, kontribisyon potansyèl aktivite litik dirèk CD8 T- oswa CD4 T-selil, oswa èd CD4 T-medyatè, pou pwodiksyon antikò, jan yo montre nan modèl wonjè yo,19. pa ka eskli epi gen anpil chans depann sou modèl yo itilize a.

Nan jaden an, prophylaxis TMP-SMX bay pwoteksyon kont malarya nan diferan degre nan zòn nan entansite transmisyon diferan, menm kote prévalence de mitasyon rezistans antifolat yo wo.2,3 Sepandan, kontribisyon nan devlopman repons iminitè a nan pwoteksyon malarya rete klè. . Diseksyon repons iminitè a nan sourit k ap resevwa inokulasyon SPZ repete pandan y ap sou profilaksi TMP-SMX gen valè li yo; syans modèl bèt sa yo pi byen pare pou idantifye repons pwoteksyon.20 Sepandan, etid klinik yo esansyèl pou detèmine enpak ak limit efè TMP-SMX sou devlopman iminite antimalarya. Vreman vre, etid klinik nan lavni yo bezwen konprann si wi ou non ak ki jan prophylaxis TMP-SMX modifye devlopman nan yon repons iminitè antimalarya nan zòn malarya-endemic.

Resevwa 26 jen 2020. Aksepte pou piblikasyon 9 oktòb 2020.

Pibliye sou entènèt 21 desanm 2020.

Sipò finansye:

Etid sa a te finanse pa Pwogram Rechèch Entramural Enstiti Nasyonal pou Alèji ak Maladi Enfektye, Enstiti Nasyonal Sante. JL se yon envestigatè ansyen Wellcome Trust (104777/Z/14/Z) epi li jwenn sipò nan Francis Crick Institute, ki resevwa finansman debaz li nan men Wellcome Trust (FC001101), UK Medical Research Council (FC001101), ak Rechèch kansè. , Wayòm Ini a (FC001101). Travay sa a te finanse pa NIH, NIAID, Divizyon Rechèch Entramural.

Divilgasyon:

Etid la te resevwa sipò nan men Ekip bèt nan Laboratwa Imunoloji ak Vaksinoloji Malarya (Yvette Robbins ak Lynn Lambert), Ekip Jesyon Ensèk nan Laboratwa Rechèch Malarya ak Vektè (Kevin Spinno ak Andre Laughinghouse), ak Inite Elvaj bèt ( Jade Basil, Christopher Brown, April Cory, Melissa Krefski, Andrew Popadich, Megan Snyder, ak Lisa Torzewsku, Marsha Loll) nan NIH.

REFERANS

1. Gregson A, Plowe CV, 2005. Mekanis rezistans nan parazit malarya nan antifolat. Pharmacol Rev 57: 117–145.

2. Legliz JA, Fitzgerald F, Walker AS, Gibb DM, Prendergast AJ, 2015. Wòl agrandi ko-trimoxazole nan peyi devlope yo. Lancet Infect Dis 15: 327–339.

3. Homsy J, Dorsey G, Arinaitwe E, Wanzira H, Kakuru A, Bigira V, Muhindo M, Kamya MR, Sandison TG, Tappero JW, 2014. Efikasite pwoteksyon pwolonje ko-trimoxazole prophylaxis nan timoun ki ekspoze VIH jiska laj. 4 ane pou prevansyon malarya nan Uganda: yon jijman owaza kontwole ouvè. Lancet Glob Health 2: e727–e736.

4. Nussenzweig RS, Vanderberg JP, Most H, Orton C, 1969. Espesifik iminite pwoteksyon ki te pwodwi pa sporozoit Plasmodium berghei ki te irradie. Nature 222: 488–489.

5. Putrianti ED, Silvie O, Kordes M, Borrmann S, Matuschewski K, 2009. Iminite ki tankou vaksen kont malarya pa repete tretman kozatif-profilaktik nan parazit Plasmodium fwa-etap. J Infect Dis 199: 899–903.

6. Roestenberg M et al., 2009. Pwoteksyon kont yon defi malarya pa inokulasyon sporozoit. N Engl J Med 361: 468–477.

7. Hobbs CV, Anderson C, Neal J, Sahu T, Conteh S, Voza T, Langhorne J, Borkowsky W, Duffy PE, 2017. Trimethoprim-sulfamethoxazole prophylaxie pandan vaksinasyon sporozoit malarya vivan pwovoke pwoteksyon ki dire lontan, omològ, ak eterològ. iminite kont defi sporozoit. J Infect Dis 215: 122–130.

8. Hobbs CV et al., 2012. VIH nonnucleoside ranvèse inhibiteurs transcriptase ak trimethoprim-sulfamethoxazole inibit etap plasmodyòm fwa. J Infect Dis 206: 1706–1714.

9. Ono T, Tadakuma T, Rodriguez A, 2007. Plasmodium yoelii yoelii 17XNL konstititifman eksprime GFP pandan tout sik lavi a. Exp Parasitol 115: 310–313.

10. Voza T et al., 2005. Espès-espesifik anpèchman nan malarya serebral nan sourit ko-enfekte ak Plasmodium spp. Infect Immun 73: 4777–4786.

11. Spence PJ, Brugat T, Langhorne J, 2015. Moustik reset parazit malarya. PLoS Pathog 11: e1004987.

12. Kumar KA, Oliveira GA, Edelman R, Nardin E, Nussenzweig V, 2004. Quantitative Plasmodium sporozoite netralization assay (TSNA). J Immunol Methods 292: 157–164.

13. Pichugin A, Krzych U, 2015. Deteksyon ofPlasmodium berghei ak Plasmodium yoelii fado parazit fwa-etap pa PCR an tan reyèl. Metòd Mol Biol 1325: 81-89.

14. Belnoue E, Costa FT, Frankenberg T, Vig´ario AM, Voza T, Leroy N, Rodrigues MM, Landau I, Snounou G, R´enia L, 2004. Pwoteksyon selil T iminite kont etap malarya fwa apre vaksinasyon ak vivan. sporozoit anba tretman klowokin. J Immunol 172: 2487–2495.

15. Giovannini D et al., 2011. Wòl endepandan nan antijèn manbràn apical 1 ak pwoteyin kou rhoptry pandan envazyon selil lame pa apicomplexan. Cell Host Microbe 10: 591–602.

16. Sedegah M, Weiss WW, Hoffman SL, 2007. Kwa-pwoteksyon ant atténué Plasmodium berghei ak P. yoelii sporozoites. Parasite Immunol 29: 559–565.

17. Lyke KE et al., 2017. Attenuated PfSPZ Vaksen pwovoke souch-transandan selil T ak pwoteksyon dirab kont eterològ kontwole enfeksyon malarya imen. Proc Natl Acad Sci U SA 114: 2711–2716.

18. Belnoue E et al., 2008. Vaksen ak Plasmodium yoelii vivan parazit san-etap anba kouvèti chloroquine pwovoke kwa-etap iminite kont etap fwa malarya. J Immunol 181: 8552–8558.

19. Oliveira GA, Kumar KA, Calvo-Calle JM, Othoro C, Altszuler D, Nussenzweig V, Nardin EH, 2008. Klas II-restriksyon pwoteksyon iminite pwovoke pa sporozoit malarya. Enfekte Immun 76: 1200–1206.

20. Wykes MN, Good MF, 2009. Kisa nou aprann nan modèl sourit pou etid malarya? Eur J Immunol 39: 2004–2007.

For more information:1950477648nn@gmail.com