Efè polisakarid Cistanche sou konpòtman byolojik selil kansè nan poumon A549
Sep 23, 2022
Résumé: Objektif pou envestige efèCistanche polisakaridsou konpòtman byolojik selil kansè nan poumon A549. Metòd Selil kansè nan poumon A549 yo te divize an gwoup kontwòl,Cistanche polisakarid100, 200, 400 ng/mL gwoup, si-NC gwoup, si-LINC01410 gwoup,Cistanche polisakarid400 ng/mL plis pcDNA,Cistanche polisakarid400 ng/mL plis pcDNA- LINC01410 gwoup. Pousantaj pwopagasyon selil A549 yo te detekte pa metòd MTT, kapasite klonaj selil A549 yo te detekte pa tès fòmasyon koloni, e 549 selil yo te detekte pa sikometri koule.
Pousantaj apoptoz selil, yo te itilize metòd Transwell pou detekte kapasite migrasyon ak envazyon selil A549 yo, epi metòd RT-qPCR yo te itilize pou detekte ekspresyon mRNA LINC01410 nan selil A549 yo.
Rezilta:Cistanche polisakaridte kapab anpeche pwopagasyon selil A549, fòmasyon koloni, migrasyon, ak kapasite envazyon, ekspresyon mRNA LINC01410 (P<0.05), and="" promote="" cell="" apoptosis="" in="" a="" dose-dependent="" manner.="" after="" inhibiting="" the="" expression="" of="" linc01410,="" the="" growth,="" migration="" and="" invasion="" abilities="" of="" a549="" cells="" were="" inhibited=""><0.05). overexpression="" of="" linc01410="" could="" reverse="" the="" effects="" of="">Cistanche polisakaridsou pwopagasyon, apoptoz, migrasyon ak envazyon selil A549 yo. Konklizyon:Cistanche polisakaridka anpeche aktivite, fòmasyon klonaj, migrasyon, ak kapasite envazyon selil kansè nan poumon epi ankouraje apoptoz selil lè yo diminye ekspresyon LINC01410.
Mo kle:Cistanche polisakarid; selil kansè nan poumon A549; LINC01410; pwopagasyon; apoptoz
Klike la a pou jwenn yon echantiyon gratis nan Cistanche pou
Kansè nan poumon se timè malfezan ak premye morbidite ak mòtalite nan peyi mwen an. Metòd tretman kansè nan poumon gen ladan vaksinasyon, operasyon ak chimyoterapi [1].
Etid yo montre ke medikaman tradisyonèl Chinwa ak eleman li yo gen gwo avantaj nan tretman kansè nan poumon epi yo ka amelyore efikasite kansè nan poumon [2-3].Cistanchese yon materyèl presye medsin nan peyi mwen an, ak eleman prensipal li yo gen ladan glikozid phenethyl alkòl total, polisakarid, iridoid, alkaloid ak lignans. Etid yo te jwenn ke totalphenylethyl glikozid nan Cistanchekapabdiminye domaj nan fwa nan sourit H22 ki gen timè ak anpeche kwasans timè[4]. Ergosteroside, engredyan aktif nan Cistanche, ka anpeche kwasans timè ak pwopagasyon selil kansè kolorektal nan modèl xenograft sourit toutouni, ak pwovoke apoptoz [5].
Cistanche polisakaridka anpeche kansè nan poumon Lewis ak selil sarkòm S180 lè yo ogmante aktivite selil asasen natirèl yo ak interleukin 2 (IL-2).
Sepandan, fonksyon yo potansyèl, pwosesis byogenesis ak mekanis kache nanCistanche polisakaridnan kansè nan poumon rete klè. Etid yo montre ke lncRNA yo souvan deregleman nan kansè nan poumon epi yo jwe yon wòl enpòtan nan ensidan an, devlopman ak tretman kansè nan poumon [7]. LINC01410 trè eksprime nan kansè andomètr ak afekte pronostik pasyan kansè andometrial [8]; LINC01410 twòp ekspresyon ankouraje anjojenèz kansè nan gastric ak metastaz nan anpeche miR-532-5p [9]; Selil kansè papilè tiwoyid yo pwolije, imigre ak anvayi [10-11], pandan y ap wòl LINC01410 nan kansè nan poumon pa klè. Objektif eksperyans sa a se te etidye efè yoCistanche polisakaridak LINC01410 sou fenotip malfezan nan selil kansè nan poumon, epi si LINC01410 te patisipe nan règleman an nanCistanche polisakaridsou konpòtman an byolojik malfezan nan selil kansè nan poumon, yo nan lòd yo bay yon baz pou plis rechèch souCistanche polisakarid.
Cistanche polisakarid
Materyèl polisakarid Cistanche sou etid kansè trete
Selil kansè nan poumon A549 yo te achte nan American Type Culture Collection (ATCC).Cistanche polisakarid(pite ki pi gran pase oswa egal a 98 pousan, nimewo pwodwi D3281) te achte nan menWecistanche Bio-Tech Biotechnologie co, Ltd. Serom fetis bovin te achte nan Guangzhou Shuoheng Biotechnology co, Ltd.;
RPMI-1640 mwayen te achte nan Hangzhou Qiannuo Biotechnology co, Ltd.; MTT kit te achte nan men Shanghai Meixuan Biotechnology co, Ltd.; Chanm Transwell ak Matrigel te achte nan men Beijing Unicon Biotechnology co, Ltd.; Yo te achte twous apoptoz nan men PromoCell, Germany Company; Twous SYBRremix ExTaqTM te achte nan men Shanghai Shanran Biotechnology co, Ltd.
2 metòd pou polisakarid Cistanche sou etid kansè trete
2.1 Kilti selilè ak gwoupman
Selil A549 yo te kiltive nan mwayen RPMI-1640 ki gen 10 pousan serom fetis bovin nan yon enkibatè 37 degre, 5 pousan CO2. Selil yo nan faz kwasans logaritmik yo te trete avèk yoCistanche polisakaridnan konsantrasyon mas 100, 200, ak 400 ng/mL, respektivman, epi anrejistre kòmCistanche polisakarid100, 200, ak 400 ng/mL gwoup; selil A549 yo ki pa te trete ak polisakarid Cistanche yo te gwoup kontwòl la. Selil A549 yo te transfekte ak si-NC oswa si-LINC0141, respektivman, deziye kòm si-NC gwoup, si-LINC01410 gwoup; si-NC ak si-LINC01410 yo te transfekte nan selil A549 epi yo te trete ak 400 ng/mLCistanche polisakarid, ki endike kòmCistanche polisakarid400 ng/mL plis gwoup pcDNA,Cistanche polisakarid400 ng/mL plis gwoup pcDNA-LINC01410.
2.2 MTT metòd deteksyon
A549 selil pwopagasyon pousantaj selil A549 yo te trete akCistanche polisakaridnan konsantrasyon mas 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, ak 400 ng/mL, respektivman. Kolekte selil A549 nan chak gwoup epi mete yo nan yon plak 96-pou, ajoute 20 μL MTT nan chak pi, kontinye kiltive nan enkibatè a pou 4 èdtan, jete supernatant la, ajoute 150 μL DMSO nan chak pi. , epi detekte limyè chak gwoup selil nan yon longèdonn 490 nm. Valè dansite (OD) yo te itilize pou kalkile pousantaj pwopagasyon selil yo.
Kiltivasyon Cistanche
2.3 Esè fòmasyon koloni
A549 cell cloning ability Collect A549 cells in each group, adjust the density to 1 × 105 /mL, and inoculate 100 μL per well in a 6-well plate, incubate in an incubator until visible cell clones appear, wash 2 times with PBS, 4 % paraformaldehyde was fixed for 20 min, stained with 1% crystal violet solution for 15 min, observed under a light microscope, and the number of colonies (>50 selil) te anrejistre.
2.4 Deteksyon sikometri koule
Pousantaj apoptoz selil A549 selil A549 nan chak gwoup yo te kolekte epi resuspend nan 100 μL fosfat tanpon saline tanpon (1 × 106 / mL), ak 1 mL nan sispansyon selil, 10 μL Annexin V-FITC ak 5 μLPI yo te ajoute nan tib tès la. , pwoteje kont limyè. Apre enkubasyon pou 30 minit, selil yo te kolekte epi analize pa sikometri koule.
apoptoz.
2.5 Deteksyon pa metòd Transwell
Migrasyon selil A549 ak kapasite envazyon Sispansyon selil A549 yo (2 × 104/200 μL, mwayen san serom) nan chak gwoup yo te gaye respire nan chanm anwo chanm Transwell la, ak 500 μL RPMI{{ 7}} mwayen ki gen 10 pousan FBS te ajoute nan chanm ki pi ba a. Selil yo nan chanm anwo a yo te retire, ak selil yo nan chanm ki pi ba yo te fiks ak 4 pousan paraformaldehyde ak tache ak 0.1 pousan kristal vyolèt. Selil yo te obsève anba yon mikwoskòp limyè, ak 5 jaden yo te chwazi owaza pou konte. Nan eksperyans envazyon selil la, Matrigel te pre-kouvwi sou chanm anwo chanm Transwell la, ak rès etap yo te menm jan ak eksperyans migrasyon an.
2.6 RT-qPCR deteksyon
Ekspresyon mRNA LINC01410 nan selil A549 Yo te ekstrè RNA total nan selil yo lè l sèvi avèk reyaktif TRIzol, epi yo te sentetize cDNA dapre enstriksyon twous transkripsyon ranvèse yo. Sistèm reyaksyon an se te 2 μL pwodwi transkripsyon ranvèse, 10 μL SYBR Green Mix, 0.5 μL primè pou pi devan ak ranvèse, ak 7 μL dlo esteril. Kondisyon reyaksyon yo te 95 degre pou 30 s, 60 degre pou 30 s, ak 72 degre pou 30 s, pou yon total de 40 sik; ekspresyon relatif LINC01410mRNA te kalkile pa metòd 2-ΔΔCT ak GAPDH kòm referans entèn la. Sekans premye yo se LINC01410 devan 5'-TGACAAGAATGGCCCAAGC-3', ranvèse 5'-ACTGTGCACCTGTTACACCA-3'; referans entèn GAPDH pi devan 5'-TGTTGCCATCAATCACCCCTT-3', ranvèse 5'-CTCCACGACGTACTC AGCG-3'.
2.7 Analiz estatistik
Lojisyèl SPSS 20.0 te itilize pou pwosesis, done mezi yo te eksprime kòm (x±s), echantiyon endepandan t tès yo te itilize pou konparezon ant de gwoup, analiz yon sèl-fason nan divèjans yo te itilize pou konparezon ant miltip. gwoup yo, epi yo te itilize tès LSD-t pou konparezon par ant gwoup yo. P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">
Cistanche ekstrè poud
3 rezilta nan polisakarid Cistanche sou Etid Trete Kansè
3.1 Efè a nanCistanche polisakaridsou pwopagasyon ak apoptoz selil A549 Konpare ak gwoup kontwòl la, pousantaj pwopagasyon selil A549 nan chak gwoup dòz.Cistanche polisakaridogmante (P<0.05), ic50="" was="" 319.8="" ng/ml,="" see="" table="" 1="" .="" compared="" with="" the="" control="" group,="" the="" proliferation="" rate="" of="" a549="" cells="" in="" the="" polysaccharide="" 100,="" 200,="" and="" 400="" ng/ml="" groups="" of="" cistanche="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05="" )="" ,="" the="" number="" of="" clones="" was="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05)="" ,="" and="" the="" apoptosis="" rate="" was="" increased="" (="" p="" <="" 0="" ).="" .05)="" ,="" in="" a="" dose-dependent="">
3.2 Efè a nanCistanche polisakaridsou kapasite migrasyon ak envazyon selil A549 yo Konpare ak gwoup kontwòl la, kantite selil A549 nan chak gwoup dòz.Cistanche polisakariddiminye (P<0.05) in="" a="" dose-dependent="" manner,="" as="" shown="" in="" figure="" 2,="" table="">
3.3 Efè a nanCistanche polisakaridsou ekspresyon mRNA LINC01410 nan selil A549 Konpare ak gwoup kontwòl la, ekspresyon mRNA LINC01410 nan selil A549 nan chak gwoup dòz.Cistanche polisakaridte diminye (P＜0.05) nan yon fason ki depann de dòz la.
