ABSTＲACT

Objektif: Pou klarifye si jeneralcistanozid(GCs) amelyoremalfonksyònman mantalsourit ki aje rapidman (SAMP8) pa medyatè reseptè androjèn espesifik (AＲ) nanregilasyon ekspresyon nan pwoteyin sinaptik． 

Metòd: Yo te divize yon total de 76 7-mwa sourit gason SAMP8 owaza nan gwoup modèl, gwoup GCs, GCs + flutamid (F), gwoup GCs + fulvestrant (ICI), gwoup F, ak ICIgroup. Yo te teste fonksyon aprantisaj ak memwa sourit nan chak gwoup ak labirent dlo Morris la. Western blotting ak RT-PCR yo te itilize pou teste lanivo ekspresyon synaptophysin(SYN), dansite postsinaptik － 95 (PSD － 95), ak faktè nerotwofik ki sòti nan sèvo (BDNF) sourit nan chak gwoup.

Rezilta: GC yo te amelyore anpil aprantisaj ak fonksyon mantal sourit SAMP8 yo.

Konpare ak GCsgroup la, fonksyon aprantisaj ak memwa sourit nan gwoup GCs + F ak gwoup GCs + ICI yo te siyifikativman bese. Rezilta Western blotting ak RT-PCR te montre ke nivo ekspresyon BDNF, SYN, ak PSD－ 95 te ogmante siyifikativman nan nivo pwoteyin ak nivo jèn nan gwoup GCs konpare ak gwoup Modèl la (P ＜ 0． {{ 11}}5) ． Nivo ekspresyon SYN te ogmante nan gwoup GCs + F ak GCs + ICI, ak nivo ekspresyon BDNF ak PSD － 95 te siyifikativman diminye nan gwoup GCs + F ak GCs + ICI konpare ak gwoup GCs (P ＜ 0． 05) ．

Konklizyon: GC yo ka espesyalman medyatè AＲ pou amelyore plastisite sinaptik nan sourit SAMP8, ki an vire amelyore aprantisaj ak fonksyon mantal.

MO KLE:Cistanozid jeneral; Reseptè androjèn; Plastisite sinaptik; SAMP8 sourit

Cistanche sipleman Amelyorasyon fonksyon kognitif sipleman dyetetik PhGs75% Ech 30% Lwa 12%

Maladi alzayme a(AD) se yon komenmaladi dejeneratif newolojik, klinik karakterize pa pwogresif fonksyon mantal n bès ak chanjman nan estati mantal ak sikolojik [1]. Etid yo te jwenn ke nivo testostewòn nan pasyan AD gason yo siyifikativman pi ba pase nan gason nòmal.

Lafonksyon mantal pasyan yote amelyore nan diferan degre apreterapi ranplasman ketonn[2], ki endike ke diminisyon ki gen rapò ak laj nan nivo androjèn yo ka yon faktè risk pou AD nan pi gran gason.

Cistanche deserticola total glikozid (cistanozid jeneral, GCs) se youn nan ekstrè prensipal yo nan Cistanche deserticola, ki ka amelyore aprantisaj ki gen rapò ak AD akmalfonksyònman mantal[3]. Anplis de sa, administrasyon GC pa gavage siyifikativman ogmante nivo testostewòn nan bèt [4]. GC yo tou gen fonksyon pou fè pwomosyon yang epi yo ka fè egzèsis

Efè androjèn ki sanble ak farmakodinamik. Etid anvan yo te rapòte ke testostewòn ka amelyore aprantisaj ak fonksyon mantal nan bèt modèl AD, ak pwosesis sa a depann sou reseptè androjèn espesifik (reseptè androjèn, AR)-medyatè [5].

Li se byen li te ye ke malfonksyònman mantal nan pasyan AD yo gen rapò ak plastisit sinaptik. Sepandan, mekanis espesifik nan ki GC yo kontwole plastisit sinaptik ak kidonk amelyore aprantisaj ak fonksyon mantal yo toujou klè. Etid sa a te vize eksplore si wi ou non GCs medyatè espesifik ARＲ afekte plastisit sinaptik ak kidonk amelyore aprantisaj ak fonksyon mantal nan AD.

1 Materyèl ak metòd

1. 1 Bèt eksperimantal ak ekipman

Sourit SAMP8 gason 3-ki gen yon mwa te achte nan men Peking University School of Medicine (SCXK [Beijing] 2016-0010) epi yo te elve jiskaske yo te gen 7 mwa. Bèt yo te kenbe nan yon anviwònman pwòp nan (24 ± 1) degre ak

Yo te bay bèt yo limyè natirèl, ak aksè gratis nan manje ak dlo, epi yo te bay swen imanitè an akò ak prensip 3R yo pou itilize bèt eksperimantal yo. Etid eksperimantal sa a te apwouve pa Komite Etik Animal Experimental nan Baotou Medical College (Baotou Medical College No 20201102).

Reyaktif prensipal yo nan eksperyans la se:Cistanche deserticola total glikozid(GCs, Xi'an Ciyuan Byolojik co, Ltd.); androjèn reseptè antagonist-flutamid (Sigma Company, USA); antagonist-fulvestrant reseptè estwojèn (ICI 182780, USA) Med Chem Express); Antikò BDNF anti-sourit lapen,

PSD-95 antikò, SYN antibody, -actin antibody (Konpayi Proteintech nan Etazini); solisyon elektwoforèz pwoteyin, solisyon transfè pwoteyin, TEMED, tanpon akrilamid, persulfate amonyòm, Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); cDNA sentèz twous, Talent fluoresans deteksyon quantitative

Twous reyaktif (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.), elatriye ekipman eksperimantal prensipal la gen ladan yon tank elektwoforèz plak vètikal, aparèy elektwoforèz, tank transfè, destaining shaker (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), sistèm analiz jèl pwoteyin. (Shanghai Tanon Teknoloji co, Ltd), an tan reyèl fluoresans quantitative PCR enstriman (USA Roche) elatriye.

1. 2 Gwoupman ak administrasyon

De sourit te mouri natirèlman pandan pwosesis manje a, epi 78 sourit ki rete yo te owaza divize an gwoup modèl, gwoup GCs, GCs + flutamide (F), gwoup GCs + fulvestrant (ICI), gwoup F, ICI.

Gwoup 13 bèt chak. Eksepte pou gwoup modèl la, gwoup F, ak gwoup ICI, lòt gwoup yo te kontinyèlman administre GC nan yon dòz 50 mg / (kg · d) pou 30 jou.

Soti nan 24yèm jou apre administrasyon GCs, gwoup GCs + flutamid (F) ak gwoup GCs + fulvestrant (ICI) yo te bay piki intraperitoneal F (5 mg/kg/d) 30 minit apre yo te administre GCs. pa gavage. ), ICI (1 mg/kg/d), piki kontinyèl pou 7 jou. Ajiste konsantrasyon dòz la pou asire ke maksimòm volim gastric sourit yo se 0. 5 mL, 1 fwa/d.

1. 3 Tès labirent dlo Morris

Sourit yo adapte ak anviwònman dlo a yon jou davans. Labirent dlo Morris la te dire 6 jou. Premye 5 jou yo te pwezante ak navigasyon tès la. Sourit yo te antrene yon fwa pa jou nan chak nan kat kadran yo pou 1 minit chak fwa. Chak entèval fòmasyon te 15 minit, ak dosye yo te anrejistre an menm tan an. Sove latansi nan pozisyon an bèt ak tès navigasyon; sou 6yèm jou a, retire platfòm la nan dlo a epi fè yon tès eksplorasyon espas. Ekri kantite travèse platfòm ak pousantaj tan ki pase nan kadran sib sourit la. kadran sib la) ak espasyal eksplorasyon trajectoire naje (Trajectoire naje nan tès spatialprobe) ak lòt endikatè.

1. 4 Western blot deteksyon

Ekspresyon SYN, PSD-95, ak BDNF pwoteyin ki gen rapò ak sinaps. Apre tès labirent dlo Morris, tout sourit yo te anestezi regilyèman, yo te dekapite tèt yo, yo te retire sèvo yo epi yo te retire ipokanpi yo. Tisi ipokanp lan te lysed pwoteyin, deranje pa ultrason nan 4 degre, kite sou glas pou 30 min, epi santrifuje nan 12,000 r/min pou 15 min nan 4 degre. Yo te pran supernatant la, epi yo te mezire konsantrasyon pwoteyin nan lè l sèvi avèk metòd BCA. Apre w fin chaje pwoteyin nan, fè elektwoforèz jèl anpile nan yon vòltaj konstan 80 V, elektwoforèz jèl separasyon nan yon vòltaj konstan nan 120 V, ak transfè mouye nan yon koule konstan nan 300 mA; retire manbràn PVDF la, bloke li ak 5% lèt ekreme pou 80 minit nan tanperati chanm, epi lave manbràn an twa fwa ak TBST. 15 min/tan, antikò prensipal yo te enkube lannwit lan sou yon tab souke nan 4 degre; jou kap vini an, yo te lave manbràn nan 3 fwa ak TBST.

15 min / tan, yo te enkube antikò segondè a nan tanperati chanm pou 2 èdtan, Lè sa a, devlopman koulè ECL yo te fèt, epi yo te fè D ak yon sistèm D 'chimiluminesans. -aktin te itilize kòm referans entèn la, epi yo te analize valè optik dansite gwoup la lè l sèvi avèk imaj J lojisyèl.

1. 5ＲRT－PCRＲDeteksyon

Ekspresyon mRNA SYN, PSD-95, ak BDNF te ekstrè nan RNA total tisi ipokanp yo dapre metòd ekstraksyon Trizol la, epi cDNA yo te pwodwi apre transkripsyon ranvèse. Yo te itilize twous deteksyon quantitative fluoresans Talent pou deteksyon quantitative fluoresans relatif. Eksperyans lan te repete twa fwa, epi rezilta yo te konvèti nan 2 - ΔΔCT te analize. Sourit -actin, SYN, PSD-95, ak BDNF se Shanghai Sangon Company ki fèt, epi sekans primè yo montre nan Tablo 1.

1. 6 Analiz estatistik

Atravè SPSS 25. 0 lojisyèl estatistik pou trete, yo te itilize lojisyèl Graphpad Prism 8 pou trase graf estatistik, epi yo te itilize ANOVA yon sèl pou konpare mwayen pa par nan plizyè echantiyon. P < 0. 05 vle di diferans lan se estatistik enpòtan.