Ekstrè selil Jasminum Sambac kòm ranfòse antioksidan kont aje po Pati 1
Jul 03, 2023
Résumé: Estrès oksidatif jwe yon gwo wòl nan pwosesis aje po a atravè pwodiksyon espès oksijèn reyaktif ak fòmasyon pwodwi fen glikasyon avanse (AGEs). Se poutèt sa, engredyan antioksidan yo bezwen nan mache swen pou po a ak itilizasyon molekil ki soti nan kilti selil plant bay yon opòtinite inik. Nan papye sa a, yo te eksplore karakteristik yon ekstrè idroetanolik ki te jwenn nan selil Jasminum sambac (JasHEx). Pwopriyete antioksidan ak anti-AGE yo te envestige pa yon apwòch miltidisiplinè konbine espektwometri mas ak byo-enfòmatik eksperyans nan vitro ak ansyen vivo. JasHEx gen dérivés asid fenolik, lignan, ak triterpenes epi li te jwenn diminye pwodiksyon espès oksijèn reyaktif cytosolic nan keratinosit ki ekspoze a estrès ekzojèn. Li te montre tou kapasite pou diminye fòmasyon AGE ak ogmante pwodiksyon kolagen an tip I nan matris ekstraselilè a. Done yo te demontre ke pwopriyete antioksidan JasHEx yo te gen rapò ak aktivite radikal gratis li yo ak chelating metal ak aktivasyon an nan chemen Nrf2/ARE. Sa a ka byen eksplike aktivite anti-enflamatwa JasHEx ki gen rapò ak diminisyon nan NO nivo nan macrophages LPS-stimile. Kidonk, JasHEx ka konsidere kòm yon rapèl antioksidan pwisan kont aje po estrès oksidatif.
Glycoside nan cistanche ka ogmante tou aktivite SOD nan kè ak tisi fwa, ak siyifikativman redwi kontni an nan lipofuscin ak MDA nan chak tisi, efektivman scavenging divès kalite radikal oksijèn reyaktif (OH-, H₂O₂, elatriye) ak pwoteje kont domaj ADN ki te koze. pa OH-radikal. Cistanche phenylethanoid glikozid gen yon kapasite gaya scavenging nan radikal gratis, yon pi wo kapasite diminye pase vitamin C, amelyore aktivite a nan SOD nan sispansyon espèm, redwi kontni an nan MDA, epi yo gen yon sèten efè pwoteksyon sou fonksyon manbràn espèm. Cistanche polisakarid ka amelyore aktivite SOD ak GSH-Px nan eritrosit ak tisi nan poumon nan sourit senesan eksperimantal ki te koze pa D-galaktoz, osi byen ke diminye kontni an nan MDA ak kolagen an nan poumon ak plasma, ak ogmante kontni an nan elastin, gen yon bon efè scavenging sou DPPH, pwolonje tan an nan ipoksi nan sourit senesan, amelyore aktivite a nan SOD nan serom, ak retade koripsyon fizyolojik nan poumon nan sourit senesan eksperimantal Avèk koripsyon selilè mòfolojik, eksperyans yo te montre ke Cistanche gen bon kapasite antioksidan. epi li gen potansyèl pou yo dwe yon dwòg pou anpeche ak trete maladi po aje. An menm tan an, echinacoside nan Cistanche gen yon kapasite siyifikatif pou elimine radikal gratis DPPH epi li ka retire espès oksijèn reyaktif, anpeche degradasyon kolagen an gratis radikal-induit, epi tou li gen yon efè reparasyon bon sou domaj anyon radikal gratis timin.
Klike sou Ki kote mwen ka achte Cistanche
【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】
Mo kle: aje po; espès oksijèn reyaktif (ROS); pwodwi fen glikasyon avanse (AGEs); Jasminum sambac ekstrè idroetanolik (JasHEx); espektometri mas; metabolomik; Rezo molekilè sosyal pwodwi natirèl mondyal (GNPS); faktè nikleyè erythroid 2-faktè ki gen rapò 2 (Nrf2)
1. Entwodiksyon
Faktè jenetik intrinsèques ak ajan ekstèn tankou iradyasyon iltravyolèt, iradyasyon enfrawouj, ksenobiotik, ak polyan nan anviwònman an lakòz pwodiksyon an nan espès oksijèn reyaktif (ROS). Yo pwodwi pa aktivasyon chèn respiratwa mitokondriyo, cytochrome p450, ak NADPH oksidaz [1]. ROS gen ladan radikal gratis (anion superoksid, radikal idroperoksid, radikal alkoxy, ak radikal idroksil) ak molekil ki pa radikal (oksijene idwojèn, ak oksijèn singlet) [2]. Lè sistèm antioksidan yo akable, ROS akimile nan selil yo epi jenere sa yo rele estrès oksidatif ki se yon kontribitè prensipal nan aje po [3].
Vreman vre, estrès oksidatif lakòz tou de domaj ADN ak oksidasyon lipid ak pwoteyin ansanm ak deklanche wout kinaz pwoteyin mitogen-aktive (MAPK) (AKT, JNK, ERK, ak p38) [4]. Sa a, nan vire, ankouraje ekspresyon nan pro-enflamatwa sitokin, faktè kwasans, ak molekil adezif atravè eksitasyon nan faktè transkripsyon AP-1 ak NF-κB. Anplis, activation chemen MAPK lakòz chanjman matris po pa diminye nivo kolagen an. Li akselere dekonpozisyon kolagen an pa modulation ekspresyon metaloproteinaz matris (MMPs) ak TIMPs inhibiteurs tisi yo epi li diminye sentèz nouvo kolagen an, pa bloke reseptè TGF-tip II/Smad siyal la. Anplis de sa, estrès oksidatif chanje kondisyon po yo deranje gradyan kalsyòm epidèm la, esansyèl pou entegrite ak fonksyon anvlòp cornified la, stimul fonksyon glann sebase yo ak pwovoke koripsyon melanosit [5].
An paralèl, fòmasyon nan biomolekil modifye ke yo rekonèt kòm pwodwi fen glikasyon avanse (AGEs) ankouraje estrès oksidatif nan selil ak tisi [6]. Devlopman biomake sa yo aje pwovoke pa divès faktè anviwònman tankou lafimen sigarèt, nivo segondè nan rejim idrat kabòn rafine ak senp, manje ki kwit nan tanperati ki wo, ak yon vi sedantèr; AGE yo se pwodwi ki estab ak irevokabl ki sòti nan reyaksyon ki pa anzimatik ant sik redui ak pwoteyin, asid nikleyik oswa lipid, ki te swiv pa plis reyajman [7]. Vreman vre, pwen an kòmanse nan fòmasyon AGE a se reyaksyon an Maillard nan ki gwoup karbonil nan sik redui reyaji revèsib ak gwoup amine gratis nan pwoteyin, asid nikleyik, oswa aminofosfolipid yo fòme baz Schiff. Sa yo imines espontaneman ordonne nan plis ki estab ketamina, yo rele pwodwi Amadori. Yo pwodui dikarbonyl reyaktif (tankou glyoxal oswa methylglyoxal) ki reyaji ak gwoup fonksyonèl lizin ak arjinin nan pwoteyin, ki bay yon gwo varyete AGEs [8,9]. Yo klase nan diferan gwoup ki baze sou kapasite yo nan emèt fliyoresans ak fòme lyen kwaze.
Aksyon AGE medyatè pa reseptè yo pou AGEs (RAGEs) ki se pwoteyin transmembrane ki fè pati superfami imunoglobulin nan molekil sifas selil tip I, ki eksprime nan diferan kalite selil ki gen ladan keratinosit, fibroblast, ak makrofaj. AGEs / RAGEs obligatwa yo ogmante pwodiksyon ROS sitou pa aktivasyon NADPH oksidaz (NOXes) ak chèn respiratwa mitokondriyo a, ki mennen nan estrès oksidatif ak tout efè konsekan ki dekri pi wo a [6,8].
Anplis, pwoteyin matris ekstraselilè (ECM), espesyalman kolagen an, yo trè sansib nan glikasyon. Vreman vre, nivo pentosidine estrikti AGE, ki sòti nan kolagen an, yo siyifikativman pi wo nan granmoun pase nan jèn matyè [10]. Glikasyon kolagen an chanje non sèlman pwopriyete mekanik kolagen an tèt li, ki vin pi rèd ak pi frajil [11], men tou sa ki nan matris ekstraselilè a, ki afekte konpòtman selil rezidan yo (kwasans, diferansyasyon, mobilite, ekspresyon jèn, ak repons a. cytokines) ak entèraksyon matris-selil [12].
Nan senaryo sa a, engredyan antioksidan yo nan gwo demann nan jaden an kosmetik diminye fòmasyon AGE ak kaskad oksidatif ki gen rapò yo: ekstrè ki sòti nan espès Jasminum sambac, ki fè pati fanmi Oleaceae, yo enteresan pou pwopriyete antioksidan yo ak itilizasyon ansanm yo nan popilè. medikaman pou trete maladi po [13]. Sepandan, ekstrè plant montre plizyè dezavantaj tankou pòv bio-dirab, kontaminasyon potansyèl ak pestisid, angrè, oswa patojèn, ak varyasyon nan konpozisyon kalitatif ak quantitative yo, ki afekte nan sezon ak kondisyon anviwònman an. Yon altènativ valab pou plant yo, kòm yon sous engredyan kosmetik bioaktif, reprezante pa kilti selil plant ki ofri plizyè avantaj: (i) gwo dirabilite nan pwosesis pwodiksyon an, paske pa gen okenn tè agrikòl ki nesesè; (ii) pwovizyon kontinyèl nan pwodwi natirèl san depandans jeyografik, sezon ak sik repwodiktif plant; (iii) pa gen risk pou kontaminasyon pa ajan patojèn, polyan anviwònman an, ak rezidi agrochimik; (iv) kondisyon kwasans estanda ki pèmèt jwenn pousantaj biomass ak pwodiksyon metabolit ki pi wo ak plis reproductible; (v) gwo adaptabilite, depi konsantrasyon konpoze yo ka optimize pa chanje kondisyon kiltivasyon ak (vi) pwotokòl ekstraksyon pi fasil ak mwens tan konsome, diminye bezwen an nan Solvang agresif [14,15].
Isit la, yo te etidye yon ekstrè idroetanolik ki sòti nan kilti selil Jasminum sambac (JasHEx). Objektif etid nou an se yon gwo karakterizasyon chimik ak byolojik nan JasHEx, patikilyèman eksplore pwopriyete anti-glycation li yo ak anti-aje. Premyèman, yo te itilize apwòch avanse ki baze sou espektwometri mas yo pou jwenn yon karakterizasyon estriktirèl detaye ekstrè a. Lè sa a, yo te fè eksperyans in vitro ak ansyen vivo pou pwouve aktivite byolojik JasHEx kòm yon antioksidan.
2. Materyèl ak Metòd
2.1. Kilti Tisi Plant ak Preparasyon Ekstrè
Sètifye Jasmine Arabi (Jasminum sambac) te jwenn nan yon pepinyè lokal ("Ladre di Piante", Pistoia, Rejyon Toscana, Itali). Jasminum sambac fèy yo te tranpe nan 70 pousan etanòl (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) pou 1 min ak sifas-sterilize ak 1 pousan (v/v) nan klowòks komèsyal complétée ak Tween 2{{ 9}} (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) pou 8 min, ki te swiv pa twa rense nan dlo distile esteril. Apre sa, yo te retire fèy yo an moso 0.5–1.0 cm epi yo te kiltive sou mwayen MS [16] plen fòs ki gen 3 pousan (w/v) sikwoz, 0 .2 mg/L 2,4D, ak 8 g/L phyto-agar. Eksplantasyon yo te subcultured chak mwa sou yon mwayen fre pou twa mwa. Yon fwa yo te jwenn yon callus jòn-vèt, friable, ak k ap grandi rapid, selil plant yo te transfere nan mwayen MS likid la, complétée ak 3 pousan (w/v) sikwoz ak 0.2 mg/L 2,4D. Sispansyon an te brase nan yon shaker jiratwa a 110 pm ak 27 ◦C nan yon chanm klima nwa. Selil ki grandi nan nwa yo te ogmante chak semèn soti nan ti-echèl nan gwo-echèl flakon jiskaske kilti sispansyon likid nan apeprè 177 g / L yo te rive. Preparasyon an nan Jasminum sambac selil kilti idro-etanolik ekstrè (JasHEx) te pote soti nan adisyon a nan 2000 mL nan yon solisyon nan etanòl / dlo (90/10, v / v) nan 500 g nan selil yo. Te melanj lan omojènize pou 3 min nan 1500 rpm ak 6 min nan 3800 rpm lè l sèvi avèk yon moulen kouto Grindomix GM300 (Retsch GmbH, Haan, Almay). Yo te brase sispansyon an jwenn nan 400 rpm pou 2 èdtan nan 25 ◦C, evite ekspoze limyè. Lè sa a, sispansyon an te santrifuje nan 6300 rpm pou 10 min nan 4 ◦C. Yo te retire supernatant la, filtre, epi konsantre anba yon vakyòm nan yon evaporateur rotary (IKA RV8, IKA-Werke GmbH & Co., Staufen, Almay) mete sou 25 ◦C. Finalman, pH la te pote nan 7.0 ak 10 N NaOH ak Lè sa a, friz-seche jiskaske pran yon poud amann.
2.2. UPLC-MS/MS analiz pou JasHEx chimik karakterizasyon
Yo te reyalize yon ekstraksyon bifaz butanol / dlo. Fraksyon butanol la te siye epi dekonjle nan metanol (10 mg/mL) anvan analiz UPLC-MS/MS te fèt sou yon Q-Exactive Classic Mass Spectrometer ekipe ak yon sistèm UltiMate™ 3000 UPLC (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). ). Tout kouri kwomatografik yo te pote soti jan deja dekri pa Ceccacci et al. [17].
2.3. Global Natirèl Products Sosyal Molekilè Rezo analiz
Pou idantifikasyon metabolit, Global Natural Products Social Molecular Networking te anplwaye [18]. Tout siyal MS ak MSMS sa yo pa GNPS yo te egzamine avèk sajès epi yo te plase kòmsadwa nan literati a. Fichye kri yo te konvèti nan fòma mzXML pa MS Converter General User Interface lojisyèl, anvan rechèch bibliyotèk espektral GNPS. Li te fèt lè l sèvi avèk tolerans mas ion precurseur 0.025 Da, tolerans mas ion fragment 0.02 Da, pik minimòm matche 2, ak papòt nòt 0.7. Rezilta yo te konfime manyèlman.
Mzmine (Vèsyon 2.53, Softpedia, Bucharest, Woumani) [19] te pote done pre-pwosesis ak yon travay rezo molekilè ki baze sou karakteristik (FBMN) [20] te fè jan Ceccacci et al te rapòte. [17]. Fichye rezo yo te jwenn yo te enpòte nan Cytoscape (Vèsyon 3.9.1, US National Institute of General Medical Sciences (NIGMS), Bethesda, MD, USA) [21].
2.4. Analiz Kantitatif nan Lignans ak Triterpenes
Menm paramèt UPLC yo te deklare pou eksperyans kalitatif yo te anplwaye pou analiz quantitative de lignans, pandan ke pou triterpenes yo, yo te amelyore pou separe de pè izomè, arjunolic/Asiatic sid, ak oleanolic/ursolic sid. Analiz la te fèt sou yon Q-Exactive Classic Mass Spectrometer jan yo defini deja. Separasyon an te fèt pa yon Phenomenex Kinetex (Torrance, CA, USA) EVO C18 300 Å (150 × 2.1 mm, gwosè patikil 5 µm). Faz mobil la konsiste de A (5 mM amonyòm asetat solisyon akeuz, pH 9.00 ajiste pa idroksid amonyòm) ak B (1{{40}}0 pousan acetonitrile) lè l sèvi avèk yon elisyon gradyan 13-28 pousan B nan 0-20 min, 28-65 pousan B nan 20-24 min, 65-75 pousan B nan 24-28min, 75-95 pousan nan 28-28.5 min, 95 pousan nan 28.5 -32 min, 95-13 pousan nan 32-32.1 min ak 13 pousan nan 32.1-44 min. Pousantaj koule a te 0.450 mL / min ak volim piki a te 5 µL. Pou tou de lignans ak triterpenes, done yo te akeri ak metòd la mas ki dekri pa Ceccacci et al. [17]. Nou te achte nortachelogenin (#LCA52174) nan Biosynth Carbosynth, matairesinol (#80497) ak maslinic asid (#83209) nan PhytoLab GmbH & Co.KG, secoisolariciresinol (#60372) ak arjunolic asid (#SMB001-Aldrich) nan Sigma-Aldrich. , MI, USA), asid Azyatik (#0027), asid oleanolik (#0041 S) ak asid ursolik (#0037 S) ki soti nan Extrasynthèse (Genay, Frans). Koub kalibrasyon yo te genyen pa enjekte estanda nan konsantrasyon nan 0.05 a 25 µM pou lignans ak 0.1 a 25/250 µM pou triterpenes. Limit deteksyon (LOD) ak limit quantification (LOQ) pou estanda yo te detèmine dapre rapò siyal-a-bri (S/N).
2.5. Kilti Selil Po ak Eksplantasyon
Imortalize Keratinocytes imen (HaCaT), te achte nan men Addexbio Technologies (San Diego, CA, USA), yo te konsève nan Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) ki te konplete ak 10 pousan serom fetis bovine. (FBS; Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) nan 95 pousan lè, 5 pousan CO2, ak atmosfè imidite a 37 ◦C. Fibroblasts po imen (HDF) yo te konsève nan Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Sigma–Aldrich, St. Louis, MO, USA) siplemantè ak 10 pousan nan serom fetis bovine (FBS; Sigma–Aldrich, St. Louis, MO, USA). ) nan 95 pousan lè, 5 pousan CO2, ak atmosfè imidite a 37 ◦C. Eksplantasyon po, yo te jwenn nan po donatè fi ki an sante (ki gen laj 31 ak 40 an) nan sant operasyon Villa Cinzia (Napèl, Itali), yo te kiltive nan 24-plak transwell nan DMEM/FBS plis antibyotik nan kondisyon lè-likid. nan 37 ◦C nan 5 pousan CO2 lè imidite. Tout donatè yo te bay konsantman enfòme ekri yo pou itilize tisi po yo, dapre Deklarasyon èlenki.
2.6. Cytosolic ROS Assay nan H2O2-Selil HaCaT ki ensiste yo
Pou pwosesis sa a, yo te simen 1.8 × 104 HaCaT nan 96-plak byen epi yo te grandi pou 20 h. Lè sa a, selil yo te trete pou 2 èdtan ak diferan konsantrasyon nan JasHEx (0.0006 pousan, 0.002 pousan, ak 0.006 pousan p/v) oswa ak 500 µM asid ascorbic, yo itilize kòm kontwòl pozitif. Apre sa, yo te lave yo nan PBS (Phosphate-buffered saline) epi yo te enkube a 37 ◦C ak 100 µL/pi yon solisyon ki genyen: 10 mM Hepes, 1.3 mM CaCl2, 1 mM MgSO4, 5 mM glikoz, ak 5 mM. µM CM-H2DCFDA (5-(ak-6)-kloromethyl-20, 70 -dichlorodihydrofluorescein diacetate, Invitrogen). Apre 45 min, yo te fè yon lave PBS epi yo te mezire entansite fluoresans debaz selil yo nan 535 nm (eksitasyon 485 nm), lè l sèvi avèk enstriman EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Lè sa a, estrès oksidatif la te pwovoke lè yo ajoute 450 µM H2O2, epi yo te mezire fliyoresans echantiyon yo apre 30 min.
2.7. Anzim-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) pou Deteksyon AGE nan Glyoxal Stressed Human Dermal Fibroblast (HDF) selil
Pou etap sa a, yo te simen 1.5 × 104 HDF nan 96-plak byen epi yo te grandi pou 2 jou. Apre yo fin lave ak PBS, selil yo te fikse pou 1{{10}} minit ak 100 µL 4 pousan fòmaldeyid nan PBS. Apre sa, yo te trete ak JasHEx (0.0006 pousan ak 0.002 pousan p/v) oswa kontwòl pozitif nan 1 µM Aminoguanidine nan prezans 0.5 pousan glyoxal nan 50 ◦C pou 1 semèn. Apre enkubasyon, yo te trete yo pou yon tès imunosorban ki lye ak anzim (ELISA) lè l sèvi avèk yon antikò espesifik kont AGE (Abcam ab23722).
2.8. Egzamen imunohistofluoresans sou eksplantasyon po methyl-glyoxal pou deteksyon fibrilin-1
Eksplantasyon po yo te sòti nan de pasyan, 31 ak 40 ane fin vye granmoun. Soti nan chak byopsi po, yo te pwodwi twa kout pwen pou chak tretman ki fèt nan koòdone lè-likid. Nan premye jou a, pwenson yo te trete ak JasHEx (0.002 pousan ak 0.006 pousan p/v) oswa kontwòl pozitif (1 mM Aminoguanidine) epi apre 24 èdtan, 500 µM methyl- glyoxal te ajoute. Tretman yo te rafrechi chak de jou pou yon total sèt jou. Nan fen peryòd la, pwenson yo te trete pou analiz istolojik, fiks nan 4 pousan PFA, enkubasyon nan 15 pousan sikwoz, Lè sa a, nan 30 pousan sikwoz, ak kriyo-estoke nan konpoze OCT (tanperati koupe Optimal) nan -80 ◦C. . Kriyoseksyon 5 µm te jwenn ak kriostat CM1520 Leica (Leica Biosystems, Buffalo, IL, USA). Slides ak cryosections yo te idrate pou 30 minit nan PBS epi yo mete yo nan yon solisyon "bloke" (6 pousan BSA, 5 pousan serom, 20 mM MgCl2, 0.2 pousan Tween) pou 1 h. Apre sa, yo te enkube ak antikò prensipal anti-Fibrilin 1 (MA5-12770, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). pou 16 h nan 4 ◦C. Glisad yo te lave ak PBS pou 30 minit epi answit enkube ak antikò segondè anti-lapen Alexa-Fluor 546 (A11035, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) pou 1 èdtan. Nwayo yo te tache ak DAPI (40, 6-5 diamidino{-2-phenylindole) 1 g/mL nan PBS pou 10 min. Imaj yo te akeri ak yon mikwoskòp fliyoresan epi analize ak lojisyèl ImageJ la (Vèsyon 1.53a, Enstiti Nasyonal Sante, USA).
2.9. Esè AlphaLISA pou Mezire kontni Procollagen Tip I C-Peptide (PIP).
Nan etap sa a, yo te simen 8 × 103 HDF nan yon plak 96-byen epi yo te trete pou 24 èdtan ak JasHEx (0.0006 pousan, 0.002 pousan, ak 0.006 pousan p/v) oswa ak TGF- (2.5 ng/mL). Apre tretman an, selil yo te trete dapre enstriksyon founisè twous kolagen alpha LISA hPIP (AL353HV, (PerkinElmer, Waltham, MA, USA)).
2.10. Nrf2 Lisiferase-Based Transcription Activation Assay
Isit la, 6 × 103 selil HaCaT nan yon 96-plak byen yo te simen epi grandi pou 16 èdtan. Apre sa, yo te sibi yon tès deklanchman transkripsyon ki baze sou Nrf2 lisiferaz, lè l sèvi avèk twous repòtè ARE BPS Bioscience (San Diego, CA, USA, #60514). Yon vektè repòtè ARE luciferase ki pare pou transfè (ki gen yon jèn luciferaz koukouy anba kontwòl eleman ki reponn ARE ki sitiye anlè yon pwomotè minimòm) ansanm ak yon kontwòl entèn (yon vektè lisiferaz Renilla ki eksprime yon fason konstititif) te transfè transfè nan selil HaCaT lè l sèvi avèk. X-TREME jèn HP ADN transfeksyon reyaktif (Roche, Basilea, Swis, #6366244001). Apre transdiksyon pou 24 èdtan, selil yo te trete pou 2 èdtan ak ekstrè a (0.0006 pousan, 0.002 pousan, ak 0.006 pousan p/v) oswa kontwòl pozitif Resveratrol (50 µM). Apre sa, yo te sibi tès la luciferase ak Doub-Glo Luciferase Assay System (Promega, Wòm, Itali #E2920). Yon ti tan, selil yo te enkube ak substra luciferase koukouy pou 10 minit anvan yo mezire luminesans nan yon lektè plak byen (Victor Nivo, Waltham, MA, USA). Yo te kalkile rapò luminesans nan koukouy ak Renilla pou nòmalize epi konpare aktivite transkripsyon Nrf2.
2.11. Analiz ekspresyon SOD-1(NM_000454.5) ak OH-1(NM_002133.3) jèn nan selil HaCaT
Pou pwosesis sa a, yo te grandi 1.5 × 105 selil HaCaT pou chak pi nan 6-plak byen pou 16 èdtan epi yo te enkube pou 6 èdtan ak ekstrè a (0.002 pousan ak 0.006 pousan). p/v) oswa 50 µM Resveratrol kòm kontwòl pozitif la. Nan fen enkubasyon, yo te ekstrè RNA total lè l sèvi avèk twous "GenElute™ Total RNA Purification" (ki soti nan Sigma-Aldrich (Saint Louis, MI, USA) ak trete ak DNase I (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) nan 37. ◦C pou 30 min, pou retire kontaminan ADN jenomik.Yo te transkri 500 ng total de RNA lè l sèvi avèk anzim Reverse transcriptase (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA).Semi-quantitative RT-PCR yo te fèt ak pè inivèsèl. primè 18S primè/konkiran (Invitrogen- Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) kòm estanda entèn yo.Pwodwi PCR yo te separe sou 1.5 pousan jèl agaroz, epi yo te wè ak enstriman iBright la (Invitrogen Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Sekans premye yo te itilize pou anplifikasyon yo se sa ki annapre yo: HsSOD1Fw: GAAAGTAATGGACCAGTGAAGG; HsSOD1Rv: ATTGGGCGATCCCAATTACACC; OH-1Fw GAACTTTCAGAAGGGTCAGG; OH-1Rv GCTCAGGCAATGTGAG.
2.12. Nitric Oxide Assay nan LPS-Stimulated RAW 264.7
Okenn konsantrasyon yo te detèmine nan makrofaj RAW 264.7 murin, simen nan yon konsantrasyon 1.5 × 105 selil/byen nan plak 96-byen pou 24 èdtan, epi pre-trete ak ekstrè a ({{1 0}}.0006 pousan, 0.002 pousan, ak 0.006 pousan p/v) oswa avèk 10 µM TPCK (kontwòl pozitif) pou 2 èdtan, anvan enkubasyon an ak 2 µg/mL LPS pou 18 èdtan. Kantite NO, ki te konvèti an nitrite, te kalkile lè w ajoute reyaktif Griess (solisyon N-(1-naphthyl)ethylenediamin ak asid sulfanilik, Invitrogen- Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) epi, apre 30 min, te mezire absorpsyon nan 540 nm pa lektè a multiwell-plate (EnVision, PerkinElmer, Waltham, MA, USA)
3. Rezilta yo
3.1. Kalitatif ak Kantitatif analiz de Jasminum sambac selil Kilti Hydro-Ethanolic ekstrè (JasHEx)
UPLC-MS/MS analiz de JasHEx te fèt ak done espektwometrik segondè-rezolisyon yo te analize lè l sèvi avèk Global Natural Products Social Molecular Networking (GNPS), yon sistèm spèktrometri mas ki baze sou entènèt ki ede nan anotasyon nan pwodwi natirèl (NPs) [18] . An patikilye, yo te fè yon bibliyotèk espèk GNPS pou reyalize dereplication sou entènèt. Espès chimik ki pa idantifye pa GNPS yo te asiyen kòmsadwa nan literati a. Jan yo montre nan Figi 1 ak 2 ak Tablo 1, yo te idantifye plis pase 50 konpoze ki fè pati plizyè klas metabolit segondè, sitou polifenol ak terpèn. Vreman vre, ekstrè JasHEx gen dérivés asid fenolik, lignan (secoisolariciresinol, nortrachelogenin, ak matairesinol), ak triterpenoids (asid arjunolik, asid aspartik, asid maslinik, asid oleanolik, ak asid ursolik).
【Pou plis enfòmasyon:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】
