Etid sou anzim yo microbes pwodwi pandan konbine fèmantasyon bakteri ak aktivite byolojik yo ⅲ
Oct 28, 2024
Chapit 3 etid sou aktivite a antioksidan nan anzim
Anpil maladi moun yo te pwouve yo dwe ki gen rapò akOksijèn aktif ak radikal gratis, tankouenflamasyon, arteriosclerosis,granmoun, dyabèt, kansè, elatriye.Twòp radikal gratisNan kò a ka lakòz denaturasyon pwoteyin, domaj selil ak lanmò, e menm chanjman pathologie nan kò a. Se poutèt sa, anpil etid nan kay ak aletranje ap chèche pou manje moun rich nan engredyan natirèl antioksidan yo anpeche ak kontwole maladi ki te koze pa radikal gratis nan rejim alimantè. Jodi a, ak estanda yo k ap viv ogmante, moun ki piti piti chanje konsantre yo nan pwòp kò yo, se konsa pi plis ak plis pwodwi sante sòti nan yon kouran kontinuèl. Sepandan, li pa fasil yo dwe vrèman itil. Anzim yo se yon kalite manje ki ka fèt nan tèt ou nan lavi moun. Pri a se pa trè wo epi gen anpil benefis.
Anzim mikwòb gen yon varyete de fonksyon sante tankou anti-bakteri ak anti-enflamatwa, pwomosyon metabolis, amelyore iminite, blanchiman ak anti-aje, dezentoksikasyon ak anti-kansè. Kounye a, gen relativman kèk etid sou pwopriyete yo antioksidan nan anzim microbes nan kay ak aletranje, se konsa nou planifye fè rechèch an pwofondè sou yo. Papye sa a pran Apple anzim kòm objè rechèch la, epi li sèvi ak total kontni fenol, diminye pouvwa a, DPPH · gratis radikal, · OH radikal gratis, superoksid gratis radikal ak ABTS gratis kapasite netwayaj radikal kòm endis yo detèminasyon yo ka fè yon envestigasyon konplè ak sistematik nan anzim Apple apre fèmantasyon pou 3 mwa. Konpozisyon an ak kontni nan antioksidan engredyan aktif yo te etidye, ak aktivite antioksidan li yo te konprann.
New Remèd fèy Cistanche ak anpil plis anti-oksidasyon pouvwa pase fèmantasyon bakteri
Sèvis ki bay sipò nan Wecistanche-pi gwo ekspòtatè nan Cistanche nan Lachin nan:
Imèl: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950
3.1 Materyèl ak Metòd
3.1.1 Materyèl
(1) Materyèl eksperimantal
Lave pòm fre ak dlo esteril anba kondisyon esteril, seche yo natirèlman nan yon tab opere esteril, kale yo, ak tranch yo pou itilize pita. Add sik blan ak pòm nan yon bokal vè esterilize nan yon rapò mas nan 1: 1. Aktive bakteri ki nesesè pou eksperyans lan ak inokule yo nan anzim la dapre konplo a pi bon (se etap operasyon sa a omisyon nan gwoup la kontwòl), sele li epi mete li nan yon kote ki fre epi sèk. Apre 3 mwa nan fèmantasyon tanperati chanm, pran yon echantiyon yo jwenn tout likid la anzim ki gen kaka a, ak filtre li. Pran supernatant la kòm echantiyon eksperimantal la, ak santrifujeur echantiyon an nan 10000rpm pou 15 minit nan yon santrifije gwo vitès anvan detèmine done yo ki enpòtan. Li se vo anyen ki nan pwosesis la nan fè anzim, yo nan lòd pou fè pou evite kontaminasyon nesesè, tout operasyon nou yo te pote soti nan kondisyon esteril.
(2) Enstriman prensipal yo
Spectrophotometer: V -1100, Shanghai Anting Syantifik Faktori Enstriman;
Konstan tanperati dlo beny: HH -2, Wuhan Litian Teknoloji Enstriman co, Ltd. Lòt enstriman yo se menm jan ak 2.1.3.
3.1.2 Metòd
(1) Detèminasyon kontni fenol total [53]
① Preparasyon nan koub estanda:
Peze avèk presizyon {{0}. Take 8 clean 1{{10}} mL volumetric flasks, add 0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, and 1.4 mL of gallic acid standard solution, respectively, dilute to the mark with distilled water, add 1 mL of Folin reagent and 2 mL of 20% NaCO3 to each, heat in a boiling water bath Pou 1 min, fre ak delye a 20 mL, epi mete yo nan tanperati chanm pou 30 min. Sèvi ak yon spektrofotomèt ki mezire absorption A nan yon longèdonn nan 650 nm, epi trase yon koub estanda ak absorption A kòm aks orizontal la ak konsantrasyon echantiyon kòm aks vètikal la. ② Deteksyon
Add distilled water to 100μL, 200μL, 300μL, 400μL, and 500μL sample solutions to 46mL, then add 1mL of Folin-phenol reagent, mix evenly, react for 3min, then add 3mL of 20% NaCO3, shake in a 25 degree constant temperature water bath for 2h, use distilled water as blank control, and measure its absorbance A at a wavelength of 760Nm ak yon spektrofotomètr. Se kontni an fenol total eksprime kòm ekivalan asid galik, epi li se kontni an fenol total kalkile dapre ekwasyon an koub estanda.
(2) tès rediksyon [54]
Add 100μL, 200μL, 300μL, 400μL, and 500μL of sample to 2.5mL of phosphate buffer with a concentration of 0.2mol/L and a pH value of 6.6, then add 2.5mL of potassium ferricyanide (w/v) with a mass concentration of 1%, and react at 50 degre pou 30 minit. Lè sa a, ajoute 2.5ml nan asid trichloroacetic (w/v) ak yon konsantrasyon mas nan 10%, ak santrifijez nan 3000rpm pou 10 minit nan yon santrifijeur gwo vitès. Touswit apre yo fin pran soti, pran 2.5ml nan supènant nan yon flakon joje, ajoute 2.5ml nan dlo distile ak 0.5ml nan klori ferrik (w/v) ak yon konsantrasyon mas nan 0.1%. Sèvi ak dlo distile kòm yon kontwòl vid, ak mezire absorption A nan yon longèdonn nan 700nm lè l sèvi avèk yon spektrofotomètr. Ka fòs la nan diminye pouvwa dwe jije pa valè a absorption. Pi wo valè a absorption, pi fò pouvwa a diminye.
(3) Detèminasyon anyon superoksid gratis efè netwayaj radikal [55]
Pran 4.5 ml nan 0. Add 1 mL nan solisyon echantiyon anzim ak konsantrasyon nan 10%, 20%, 30%, 40%, ak 50%ak 0.4 mL nan 25 mmol/L solisyon pirogalol respektivman. Melanje byen epi reyaji nan yon beny dlo 25 degre pou 5 min. Add 1.0 mL nan 8 mol/L HCl mete fen nan reyaksyon an. Sèvi ak Tris-HCl tanpon kòm yon referans epi sèvi ak yon spektrofotomètr ki mezire absorption A nan yon longèdonn nan 299 nm kalkile pousantaj la netwayaj. Pou gwoup kontwòl vid la, yo te itilize 1 ml sòlvan olye de echantiyon. O 2- to netwayaj la te kalkile dapre fòmil 3.1: o 2- to scavenging (%)=(yon 1- a2)/a1 × 100 (3.1) kote: a1 se absorbans nan tib la vid; A2 se absorption nan echantiyon an.
(4) Detèminasyon nan efè netwayaj sou radikal idroksil [56]
100μL, 200μL, 300μL, 400μL, 500μL sample solution was added with water to 2mL, then added to 1.4mL of hydrogen peroxide with a molar mass concentration of 6mmol/L, then added with 0.6mL of sodium salicylate with a molar mass concentration of 20mmol/L and 2mL of ferrous sulfate with a molar Konsantrasyon mas nan 1.5mmol/L, ak chofe nan yon beny dlo konstan tanperati nan 37 degre pou 1h. Ajiste a zewo ak dlo distile, ak mezire absorption A nan yon longèdonn nan 562nm lè l sèvi avèk yon spektrofotomètr. Fè 3 repwodiksyon pou chak tretman. Kalkile pousantaj idroksil radikal la dapre fòmil 3.2: idroksil radikal to netwayaj (%) {{21} A2 se absorption an mwayèn nan solisyon an echantiyon. (5) Detèminasyon DPPH gratis efè netwayaj radikal [57]
New Remèd fèy Cistanche ak anpil plis anti-oksidasyon pouvwa pase fèmantasyon bakteri
Pipèt avèk presizyon 2 ml nan solisyon echantiyon anzim ak konsantrasyon nan 1 0%, 20%, 30%, 40%, ak 50%nan yon flakon 10 ml volim, Lè sa a, ajoute 2 ml nan 80%DPPH etanòl solisyon akeuz nan flakon an volim. Konsantrasyon an mas molè se 2 × 10-4 mol/L. Apre melanje, kite l kanpe nan tanperati chanm pou 30 min. Sèvi ak 80% solisyon etanòl kòm yon referans, mezire absorption nan echantiyon an nan yon longèdonn nan 517 nm, ki se anrejistre kòm A1. Melanje 2 mL nan solisyon DPPH ak 2 mL solisyon etanòl ak yon konsantrasyon mas nan 80% ak mezire absorption yo nan menm longèdonn lan, ki se anrejistre kòm A0. Melanje 2 ml solisyon anzim ak 2 mL solisyon etanòl ak yon konsantrasyon mas nan 80% ak mezire absorption yo nan menm longèdonn lan, ki se anrejistre kòm A2. Kalkile DPPH gratis pousantaj la netwayaj radikal dapre Fòmil 3.3:
DPPH gratis radikal netwayaj to (%) {{0}} [1- (A 1- A2)/A {{16}] × 100 (3.3) kote: A1 se absorbans nan 2 ml dpH 80% ethan; A2 se absorption nan yon solisyon melanje nan 2 mL solisyon anzim ak 2 mL 80% etanòl pa konsantrasyon mas; A0 se absorption nan yon solisyon melanje nan 2 mL solisyon DPPH ak 2 mL 80% etanòl pa konsantrasyon mas.
(6) ABTS gratis kapasite netwayaj radikal [58]
Ajoute yon sèten kantite silfat potasyòm a 7 mmol/L solisyon ABTS jiskaske konsantrasyon final la nan solisyon an melanje se 2.45 mmol/L. Mete solisyon an melanje nan yon kote ki fre ak sèk nan tanperati chanm pou 12 a 16 èdtan. 1μL, 3μL, 5μL, 7μL, ak 9μL nan solisyon echantiyon yo te complétée a 10μL ak 5mmol/L Ph7.4 tanpon fosfat, ak Lè sa a, melanje respire ak 10ml nan pi wo a potasyòm silfat ak ABTs solisyon melanje, ak pèmèt yo reyaji nan yon tanperati reyaksyon nan 30 degre ak yon reyaksyon tan nan 5Min. Zewo ak dlo distile, ak mezire absorption A a nan yon longèdonn nan 734nm lè l sèvi avèk yon spektrofotomètr. Kalkile ABTS gratis pousantaj la netwayaj radikal dapre Fòmil 3.4:
ABTS gratis radikal netwayaj pousantaj (%)=[(A 1- A2)/a1] × 100 (3.4) kote: A1 se absorption nan gwoup la kontwòl vid; A2 se absorption nan gwoup eksperimantal la
3.2 Rezilta ak analiz
3.2.1 Total kontni fenol
(1) Creole koub
Te koub la estanda nan kontni fenol total trase ak konsantrasyon an nan asid galik kòm aks orizontal la ak valè a absorption A kòm aks la vètikal, jan yo montre nan Figi 3.1.
Fig.3.1 Koub la estanda nan kontni fenol total
Soti nan Fig.3.1, nou ka wè ke ekwasyon an koub estanda se y =11. 375x +0.
(2) Detèminasyon echantiyon yo
Rezilta yo nan detèminasyon an total kontni fenol nan anzim pòm nan gwoup la kontwòl ak gwoup la eksperimantal nan konsantrasyon diferan yo montre nan Fig.3.2.
Fig.3.2 koub la nan kontni fenol total
Jan yo montre nan Fig.3.2, anzim yo pòm nan tou de gwoup la kontwòl ak gwoup la eksperimantal gen segondè total fenol kontni, ak tou de ogmante ak ogmantasyon nan kantite lajan an nan solisyon echantiyon te ajoute. Nan menm konsantrasyon gradyan an, kontni total fenolik nan anzim pòm nan gwoup kontwòl la te ogmante de 0. Kontni total fenolik nan gwoup eksperimantal la se pi wo pase sa yo ki an gwoup la kontwòl, ak tandans nan anwo a se pi evidan. Selon kontni total fenolik la, aktivite antioksidan an jeneral nan gwoup eksperimantal la pi gran pase gwoup kontwòl la.
3.2.2 Redwi pouvwa
Rezilta yo nan diminye detèminasyon pouvwa nan anzim pòm nan gwoup la kontwòl ak gwoup eksperimantal nan konsantrasyon diferan yo montre nan Figi 3.3.
Jan yo montre nan Figi 3.3, tandans nan chanje nan diminye pouvwa nan anzim pòm se menm jan ak tandans nan chanje nan kontni fenol total. Pouvwa a diminye nan gwoup la eksperimantal se pi wo pase sa yo ki an gwoup la kontwòl, epi si li se gwoup la eksperimantal oswa gwoup la kontwòl, nan seri a konsantrasyon prezante nan eksperyans lan, pouvwa a diminye montre yon tandans ogmante ak ogmantasyon nan kantite lajan an nan solisyon echantiyon te ajoute. Done eksperimantal yo te konfime tou ke an tèm de diminye pouvwa, aktivite a antioksidan nan gwoup la eksperimantal se pi gran pase sa yo ki an gwoup la kontwòl.
3.2.3 Superoksid anyon gratis kapasite netwayaj radikal
Rezilta yo nan superoksid anyon gratis kapasite netwayaj radikal nan anzim pòm nan gwoup la kontwòl ak gwoup la eksperimantal nan konsantrasyon diferan yo montre nan Figi 3.4.
Jan yo montre nan Figi 3.4, gen yon gwo diferans nan anyon superoksid la gratis kapasite netwayaj radikal ant gwoup la eksperimantal ak gwoup la kontwòl. Nan seri a konsantrasyon prezante nan eksperyans lan, superoksid anyon gratis kapasite radikal netwayaj nan gwoup la eksperimantal chanje pi siyifikativman lè konsantrasyon nan echantiyon se 10%a 20%, ak chanjman an se pa evidan apre konsantrasyon an se pi gran pase 20%; Lè konsantrasyon an se 50%, anyon superoksid la gratis kapasite netwayaj radikal se kòm yon wo 85.4%. Kapasite nan superoksid gratis netwayaj radikal yo montre nan gwoup la kontwòl ka wè klè nan tablo a tandans. Kòm konsantrasyon an anzim ogmante, sa a gratis kapasite netwayaj radikal tou ogmante, chanjman tou dousman, epi piti piti gen tandans nan yon eta ki estab. Kapasite nan netwayaj rive nan yon maksimòm de 42.6%. Gwoup eksperimantal la se prèske de fwa pi wo ke gwoup kontwòl la.
3.2.4 Hydroxyl gratis kapasite netwayaj radikal
Chanjman yo nan idroksil gratis kapasite nan netwayaj radikal nan anzim yo pòm nan gwoup la kontwòl ak gwoup la eksperimantal nan konsantrasyon diferan yo montre nan Fig. 3.5.
Fig.3.5 koub la nan netwayaj idroksil radikal gratis
Li ka wè nan Fig. 3.5 ki nan seri a konsantrasyon prezante nan eksperyans lan, idroksil gratis kapasite nan netwayaj radikal nan anzim yo nan gwoup la eksperimantal ak gwoup la kontwòl ogmante ak ogmantasyon nan kantite lajan an te ajoute. Kapasite idroksil gratis radikal nan gwoup eksperimantal la te pi ba pase sa ki nan gwoup kontwòl la, epi li te fè trè mal nan konsantrasyon ki ba. Nan konsantrasyon segondè, idroksi gratis kapasite nan netwayaj radikal ogmante siyifikativman. Rezon ki fè la ka ke pandan pwosesis la fèmantasyon, kalite yo ak sa ki nan mikwo -òganis nan anzim yo pòm nan gwoup la eksperimantal ak gwoup la kontwòl yo te diferan, ak sa ki nan metabolites segondè yo ak eleman nan chak pwodwi ki te pwodwi pa fèmantasyon an te diferan, se konsa kapasite a antioksidan yo montre te diferan.
3.2.5 DPPH · GRATIS Radikal kapasite kapasite
Konpare ak lòt metòd deteksyon, DPPH · gratis kapasite netwayaj radikal se lajman itilize yo evalye aktivite antioksidan nan yon kout peryòd de tan [59]. DPPH · gratis kapasite radikal netwayaj nan konsantrasyon diferan te trase dapre rezilta yo nan gwoup la kontwòl ak eksperimantal gwoup anzim Apple, jan yo montre nan Figi 3.6.
Jan yo montre nan Figi 3.6, lè konsantrasyon an nan gwoup la kontwòl Apple anzim te pi ba pase 30%, DPPH · gratis kapasite nan netwayaj radikal te mwens pase 50%, men gwoup la eksperimantal Apple anzim tou te montre yon pi wo DPPH · gratis kapasite netwayaj radikal nan konsantrasyon ki ba. Rezilta eksperimantal yo montre ke adisyon nan aspergillus oryzae, ledven, streptococcus tèmofil ak laktobasil Bulgarian se benefisye nan DPPH · gratis kapasite netwayaj radikal nan anzim la. Lè konsantrasyon anzim la se 50%, kapasite sa a se kòm yon wo 91.4%, ki se pi wo pase 69.8%nan gwoup la kontwòl nan konsantrasyon an menm.
3.2.6 ABTS kapasite netwayaj radikal
Rezilta yo nan ABTS kapasite nan netwayaj radikal nan anzim yo pòm nan gwoup la kontwòl ak gwoup la eksperimantal nan konsantrasyon diferan yo montre nan Fig. 3.7.
Fig.3.7 Koub la nan ABTS kapasite netwayaj radikal
Li ka wè nan Fig. 3.7 ki to a netwayaj nan anzim yo pòm nan gwoup la eksperimantal se pi wo lè kantite lajan an adisyon anzim ki pi gran pase 5μL. Etid la pa Erel et al. te montre ke kapasite nan netwayaj nan ABTS radikal depann lajman sou konsantrasyon ki pi wo nan sibstans ki sou fenol [60]. Rezilta yo nan detèminasyon an total kontni fenol te montre ke kontni an fenol total nan gwoup la eksperimantal te pi wo pase sa yo ki an gwoup la kontwòl. Rezilta eksperimantal yo nan Fig. 3.7 jis verifye ke kapasite nan netwayaj nan ABTS radikal se pi gran pase sa yo ki an gwoup la kontwòl.
3.3 Rezime chapit sa a
Chapit sa a etidye relasyon ki genyen ant aktivite antioksidan an nan anzim pòm ki te pwodwi pa fèmantasyon ak kat tansyon chwazi nan pòm, konsantrasyon an nan echantiyon anzim, ak konparezon an nan konpozan antioksidan aktif ak gratis kapasite netwayaj radikal ant gwoup la eksperimantal ak gwoup la kontwòl. Rezilta eksperimantal yo montre ke kontni total fenol nan anzim pòm lan nan gwoup kontwòl la pi ba pase sa ki nan gwoup eksperimantal la, ak pouvwa diminye li yo, anyon superoksid anyon radikal, DPPH gratis radikal ak ABTS gratis kapasite netwayaj radikal yo pi bon pase sa yo ki nan gwoup la kontwòl; Anzim nan gwoup kontwòl la gen yon kapasite patikilyèman bon netwayaj pou idroksil radikal gratis.
An jeneral, gwoup eksperimantal la te montre pi wo aktivite antioksidan, ki konfime plis posibilite a nan atifisyèlman ajoute tansyon fè anzim microbes. Nan fason sa a, manje anzim microbes gen plis sibstans ki sou benefisye nan sante moun sou baz fèmantasyon orijinal la natirèl, epi yo ka pi byen devlope nan yon direksyon ki espere pa moun.
