Phenylethanoid Glycosides Soti nan Paraboea Martinii Pwoteje Rat Pheochromocytoma (PC12) Selil Soti nan Oksijene Idwojèn Pwovoke Selil Blesi
Mar 04, 2022
Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com
Xue Gong†a, Yan Xu†b, Kai Renc, Xiaorong Baid
Estrès oksidatif se li te ye pou jwe yon wòl esansyèl nan patojèn nan plizyè maladi. Li lye ak etyoloji maladi alzayme a (AD), maladi Parkinson a (PD), epilepsi, ak lòt maladi [1–3]. Kounye a, yo te fè pwogrè k ap kontinye nan etid patojèn nan AD, PD, ak lòt maladi. Sepandan, akòz konesans limite nan mekanis molekilè ki kache AD, PD, ak lòt maladi, estrateji efikas prevantif oswa gerizon pou maladi sa yo pa te reyalize [4]. H2O2 se yon eleman enpòtan nan espès oksijèn reyaktif (ROS). An konsekans, H2O2-pwovoke PC12 selil blesi se modèl ki pi souvan itilize nan estrès oksidatif epi li lajman ki itilize nan syans eksperimantal nan efè neuroprotective [5]. Heme oxygenase 1 (HO-1) ak glutamate-cysteine ligase-catalytic subunit (GCLC) se anzim antioksidan selilè enpòtan, epi tou de jèn yo reglemante en nan faktè nikleyè erythroid 2 (Nrf2), ki ap parèt kòm yon ka geri pwomèt. sib pou neropwoteksyon [6,7]. Glikozid feniletanoid, ki sòti nan inite C-6-C{{-3, gen anpil gwoup idroksil fenolik epi yo gen anpil aktivite antioksidan ak anti-aje. Pandan kèk ane ki sot pase yo, etid yo te endike ke anpil plant medsin gen glikozid phenylethanoid ki montre siyifikatif aktivite antioksidan. Pou egzanp, glikozid phenylethanoid sòti nanHerba cistancheyo konnen yo egzèse efè pwoteksyon sou defisi mantal nan AD. Etid sa a te envestige mekanis pwoteksyon ki asosye lè l sèvi avèk yon modèl AD 8 (SAMP8) ki gen tandans akselere senescence. Rezilta yo endike ke kapasite nan glikozid phenylethanoid pou amelyore defisi mantal nan sourit SAMP8 ta ka gen rapò ak pwomosyon nan plastisit sinaptik ki enplike pwosesis antioksidan [8]. Nan etid sa a, de glikozid fenilethanoid yo te separe ak pirifye nan ne bwa Tectona grandis (tèk); konpoze sa yo te montre efè antioksidan remakab ke yo te detèmine lè l sèvi avèk yon metòd amperometrik [9]. Pli lwen, kafeoyl phenylethanoid glycoside konpoze ki soti nan Lindernia ruellioides fè egzèsis efè antioksidan ki depann de dòz ak superoksid anyon gratis radikal-scavenging efè nan vitro [10]. Mekanis yo nan aksyon nan glikozid phenylethanoid yo gen rapò ak règleman an nan Nrf2/ARE siyal chemen an, ki enfliyanse sentèz la nan SOD, CAT, GSH-PX, ak lòt anzim antioksidan [11]. Fanmi Gesneriaceae, ki gen 150 jenera ak apeprè 3700 espès, distribye prensipalman nan rejyon twopikal ak tanpere nan lès ak sid Azi, Oceania, Amerik di Sid, Lafrik, Sid Ewòp, ak Meksik [12].
Gesneriaceae nan Lachin. Li te rapòte ke apeprè 100 espès gen efikasite medikal ak pi fò nan sa yo sitou distribiye nan pwovens Guangxi ak Guizhou [13]. Nan dènye ane yo, rechèch sou plant Gesneriaceae te ogmante piti piti nan diferan zòn nan mond lan, ak kèk nouvo elektè ak aktivite fizyolojik yo te jwenn [14]. Paraboea martinii (Levl.) Burtt fè pati Parabola (Gesneriaceae) e li se yon plant èrbeuz. Ki baze sou "Chinwa Tradisyonèl Medsin Resous Dosye yo", li te anrejistre ke plant la antye yo itilize kòm medikaman. Anplis, li ka egzèse anpil aktivite famasi sou kondisyon tankou ematemès, èdèm, disantri, blesi twomatik, ak ka zo kase [15]. Bai te pwouve ke glikozid phenylethanoid yo se youn nan prensipal eleman chimik nan plant Gesneriaceae [16]. Gen kèk chèchè yo te jwenn tou ke glikozid phenylethanoid gen aktivite antioksidan enpòtan [17]. Li demontre ke glikozid phenylethanoid nanCistanche deserticola have significant antioxidant activity [18]. In addition, Ju systematically studied the neuroprotective activities of phenylethanoid glycosides using PC12 cell models. The results indicated that phenylethanoid glycosides significantly attenuate the damage induced by Aβ1-42 [19]. In our studies, we isolated eight phenylpropanoid glycosides (paraboside A, paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, isonuomioside A) from P. martini [20]. All compounds were isolated from the genus Parabola for the first time, and the compounds paraboside A, paraboside B, p paraboside I, paraboside II, and paraboside III were new compounds [20]. In a continuing search for molecules with antioxidant properties, phenylpropanoid glycosides were examined. However, whether these phenylpropanoid glycosides from P. martini could protect against H2O2-induced PC12 cell injury was previously unclear. In this study, we examined the protective effects of phenylpropanoid glycosides on H2O2-induced damage to PC12 cells. We also examined the effects and preliminary mechanism underlying the activity of phenylpropanoid glycosides with respect to the activation of HO-1 and GCLC in vitro. Materials and methods Materials Paraboea martini (Level.) Burtt was collected from Daxin County, Guangxi Autonomous Region in August 2014 and verified by Dr. Minhui Li (Baotou Medical College). Voucher specimens were deposited at the Laboratory of Pharmacognosy and Phytochemistry. Eight phenylpropanoid glycosides (paraboside A, paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, isonuomioside A) were extracted and separated from P. martinii (Levl.) Burtt by prof. Xiaoqin Wang [20]. The purity (>98 pousan) nan uit glikozid phenylpropanoid te mezire pa metòd la nòmalizasyon zòn pik HPLC. Kòm yon egzanp, tablo kwomatografi paraboside B ak paraboside II yo montre nan Figi 1, epi yo te jwenn kontni relatif yo se 98.23 pousan ak 99.20 pousan, respektivman. Liy selilè feochromocytoma adrenal rat mal différenciés (PC12) te achte nan men Bank selilè nan Akademi Syans Lachin nan (Shanghai, Lachin). Dulbecco a modifye Eagle's medium (DMEM) ak serom chwal yo te achte nan men Gibco (Gaithersburg, MD, USA). Serum fetal bovine (FBS) te achte nan men Thermo Fisher Scientific (Hyclone, Waltham, MA, USA). H2O2 te jwenn nan Tianjin Fu Yu Reagent co, Ltd (Tianjin, Lachin). Trizol te achte nan men Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). PrimeScriptTM RT reaktif Twous (pafè tan reyèl) te jwenn nan TaKaRa Biotechnology Co. (Dalian, Lachin). Sangon Biotech (Shanghai, Lachin) te sentetize primè pou HO-1, GCLC, ak GAPDH. CellTiter 96® Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay Kit (MTS) te jwenn nan Promega Corp. (Madison, USA). Yo te achte inhibiteurs HO-1 zenk protoporphyrin (ZnPP) nan men Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Yon Thermo311 CO2 Incubator (Thermo, USA), StepOnePlusTM Real-Time PCR Instrument Thermal Cycling Block (Thermo), Thermo Scientific Multiskan FC (Thermo), ak xCELLigence RTCA DPlus Analyzer ak E-Plate 16 (ACEA Biosciences, USA) yo te itilize tou. .
Cistanche deserticola
Kilti selil ak tretman
Selil PC12 yo te grandi nan DMEM ki gen 5 pousan FBS ak 5 pousan serom chwal nan 37 degre nan yon atmosfè imidite 5 pousan CO2. Selil PC12 yo te divize an twa gwoup jan sa a: yon gwoup kontwòl, yon gwoup modèl, ak yon gwoup tretman. Uit glikozid fenilpropanoid yo te fonn nan DMSO (< 0.01%)="" and="" then="" diluted="" with="" a="" complete="" culture="" medium.="" to="" study="" the="" effects="" of="" the="" eight="" phenylpropanoid="" glycosides="" on="" h2="" o2-induced="" cell="" injury,="" pc12="" cells="" were="" cultured="" with="" the="" eight="" compounds="" at="" concentrations="" of="" 3.125,="" 6.25,="" 12.5,="" 25,="" and="" 50="" μm="" for="" 12="">
Detèminasyon H2O2
Nou detèmine konsantrasyon apwopriye nan H2 O2 lè l sèvi avèk analiz selilè an tan reyèl (RTCA). Selil PC12 yo te simen nan yon mikwoplak CIM-plak-16 nan yon volim 100 µL epi answit enkube pou 12 èdtan nan 37 degre nan yon atmosfè 5 pousan CO2. Selil PC12 yo te divize an gwoup kontwòl ak modèl. Apre sa, 10 μL H2O2 (50, 100, 200, ak 400 μM) te ajoute nan gwoup modèl yo, ak gwoup kontwòl yo te trete ak 10 μL DMEM konplè, mete kanpe nan twa pwi konplèks. Yo te plase E-Plate 16 nan xCELLigence RTCA a, yo te kontwole chak 15 minit, epi rezilta yo te anrejistre pou 32 èdtan. Efè H2O2 sou selil PC12 yo te analize lè l sèvi avèk lojisyèl analiz done xCELLigence RTCA. Valè endèks selilè (CI) yo te itilize pou detèmine pi bon konsantrasyon H2O2 ak dire aksyon an.
Ekstraksyon konpoze ak izolasyon
Fraksyon yo te separe dapre polarite yo lè l sèvi avèk metòd ki dekri deja. P. martini an poud (4 kg) seche ak lè a te siksesif ekstrè twa fwa ak yon solisyon etanòl akeuz 75 pousan [20]. Lè sa a, ekstrè yo jwenn yo te konsantre lè l sèvi avèk yon evaporator rotary yo retire etanòl, ak ekstrè brit yo te jwenn. Echantiyon yo te fonn nan dlo deyonize ak Lè sa a, ekstrè youn apre lòt ak etè petwòl, acetate etil, n-butanol, ak dlo. Ekstrè n-butanol la (400 g) yo te fraksyone lè l sèvi avèk yon kolòn résine makropore AB-8 ak yon solisyon etanòl-H2O2 (0, 1{{47} }, 30, 50, 70, ak 95 pousan). Yo te finalman jwenn sis fraksyon (fraksyon 1–6). Fraksyon 3 ak 4 yo te sibi separasyon lè l sèvi avèk yon kolòn MCI ak yon etap-gradyan MeOH-H2O2 (10-100 pousan). Apre sa, pwodwi yo te izole lè l sèvi avèk Sephadex LH-20 ak 50 pousan MeOH kòm eluyan an. Konpoze 1 (41.0 mg) ak 6 (15.6 mg) yo te izole nan fraksyon 3. Konpoze 2 (62.0 mg), 3 (34.7 mg), 7 (11.0 mg), ak 8 (26.0 mg) yo te jwenn nan fraksyon 4 lè l sèvi avèk Sephadex. Kwomatografi LH-20 ak 50 pousan MeOH kòm eluyan an. Izolasyon final yo te fèt pa semi-prep, ranvèse-faz HPLC (Merck LiChrosorb, RP-18, RP-18, 250 × 10 mm) ak 50 pousan MeOH ak UV deteksyon nan 280 nm bay konpoze 4. (39.0 mg) ak 5 (9.0 mg) [20].
Tès viabilite selilè
Selil PC12 yo te simen nan 96-plak byen nan yon dansite 2 × 1{{10}}4 selil/po nan yon volim final 100 µL . Selil PC12 yo te enkube a 37 degre ak 5 pousan CO2 pou 12 èdtan. Apre sa, selil yo te trete ak divès konsantrasyon ekstrè brit (0.025, 0.05, 0.1, 0.2, ak 0.4 mg/mL) ak konpoze 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ak 8 nan senk konsantrasyon (3.125, 6.25, 12.5, 25, ak 50 μM). Apre pretretman pou 24 èdtan, yo te detèmine viabilite selil yo pa tès MTS. Selil PC12 yo te preenkubasyon avèk oswa san inibitè HO-1 san ZnPP (15 μM) pou 30 min, Lè sa a, enkubasyon avèk oswa san caleolariosid B, paraboside B, ak paraboside II (3.125 μM) pou 12 èdtan, epi finalman enkubasyon. ak 400 μM H2O2 pou yon lòt 6 h. Apre tretman an, kantite selil ki siviv yo te detèmine pa yon tès MTS [6].
Efè pwoteksyon ekstrè brit ak konpoze monomerik sou selil PC12 trete H2O2-
Selil yo te kiltive nan yon plak {{0}}byen nan yon volim final 100 µL. Serial dilution nan ekstrè brut (0.025, 0.05, 0.1, 0.2, ak 0.4 mg/mL) yo te ajoute nan gwoup la trete. Apre pretreatman pou 12 èdtan, 400 μM nan solisyon H2O2 (konsantrasyon optimal) te ajoute nan gwoup la trete ak gwoup la H2O2 nan chak pi pou 6 èdtan. Lè sa a, solisyon MTS yo te ajoute nan chak pi, epi plak yo te enkube pou 3 èdtan nan 37 degre C. Plak yo te osile nan yon vitès ki ba pou 5 min nan tanperati chanm jiskaske tout kristal yo te konplètman fonn. Pwoteksyon selilè yo te detèmine baze sou rezilta tès MTS dapre 2204 X. GONG ET AL manifakti a. Enstriksyon yo te telechaje nan https://academic.oup.com/bbb/article/83/12/2202/6044145 pa envite sou 27 out 2021. Te dansite optik la detèmine nan yon longèdonn absòbe 490 nm. Nou swiv plis aktivite konpoze 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ak 8 izole nan fraksyon 3 ak 4. Dilusyon seri konpoze 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ak 8. (3.125, 6.25, 12.5, 25, ak 50 μM) yo te ajoute nan gwoup trete a pou detèmine efè pwoteksyon respektif yo sou selil PC12 H2O 2-pwovoke.
glikozid fenilethanoid ki soti nan Cistanche deserticola: Pwoteje newòn ak anti-aje
Quantitative PCR an tan reyèl (qRT-PCR)
Selil PC12 yo te rekòlte nan 12 èdtan apre tretman ak 3.125 μM caleolarioside B, paraboside B, ak paraboside II. RNA total yo te ekstrè lè l sèvi avèk TRIzol-reyaktif, ak alikòt nan RNA total yo te ranvèse transkripsyon lè l sèvi avèk yon Twous Mèt Primescript RT dapre enstriksyon manifakti a. Jadendanfan sa yo te anplwaye pou eksperyans yo an akò ak yon rapò anvan [21]. HO-1: Avant 5′ -GC CTGCTAGCCTGGTTCAAG-3′, Ranvèse 5′ -AGC GGGTCTGGGATGAACTA-3′; GCLC: Avant 5′ - GTCCTCAGGTGACATTCCAAGC-3′, Ranvèse 5′ -TG TTCTTCAGGGGCTCCAGTC-3′; GAPDH: Avant 5′-AAGCTGGTCATCAACGGGAAAC-3′, Ranvèse 5′- GAAGACGCCAGTAGACTCCACG-3′. Lè sa a, aliquot nan cDNA yo jwenn yo te anplifye pa PCR. Kondisyon reyaksyon yo te jan sa a: premye denaturasyon nan 95 degre (30 s), ki te swiv pa 40 sik nan 95 degre (5 s), 60 degre (34 s), ak 72 degre (35 s). Tout primè yo te teste epi yo te detekte siyal fliyoresan FL a; Lè sa a, yo te kalkile △Ct valè a epi yo te konpare valè relatif yo ak sa yo nan gwoup kontwòl la lè l sèvi avèk ekwasyon sa a: △Ct=Ct (echantiyon) − Ct (kontwòl andojèn), △△Ct {{36} } △Ct (echantiyon) −△Ct (ki pa trete), epi chanjman pliye=2−△△Ct. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) te itilize kòm yon kontwòl entèn.
Pwoteyin ekstraksyon
Selil PC12 yo te simen sou asyèt 100-mm nan 1 × 107 selil/plat. Apre atachman, selil yo te respektivman trete ak caleolariosid B, paraboside B, ak paraboside II (3.125 µM) pou 12 èdtan. Lè sa a, glikozid yo te retire, epi selil yo te enkube ak H2O2 pou yon lòt 6 èdtan. Apre enkubasyon, selil yo te lave de fwa ak PBS frèt epi yo te grate nan asyèt yo ak 1 mL PBS. Omojene selil yo te santrifuje nan 1500 rpm pou 10 min. Apre tretman an, pwoteyin selilè yo te ekstrè lè l sèvi avèk yon tanpon liz selil Beyotime RIPA ak 1 mM PMSF dapre enstriksyon manifakti a. Anplis de sa, yo te izole pwoteyin sitoplasmik ak nikleyè jan sa dekri nan pwotokòl twous ekstraksyon nikleyè ak sitoplasmik Beyotime. Konsantrasyon pwoteyin echantiyon yo te detekte lè l sèvi avèk yon twous tès pwoteyin Beyotime BCA, epi tout echantiyon yo te estoke nan -80 degre pou analiz Western blotting [6].
Analiz Western blot
Elektwoforèz SDS-PAGE te fèt apre ekstraksyon ak denaturasyon ki vin apre nan pwoteyin total ki soti nan diferan gwoup. Apre elektwoforèz, pwoteyin nan te transfere nan manbràn PVDF, ki te Lè sa a, bloke ak 5 pousan ekreme lèt poud pou 4 èdtan. Apre lave, antikò prensipal (antikò poliklonal lapen GAPDH (1:10, 000 dilution), antikò poliklonal lapen HO-1 (dilusyon 1:1000), oswa antikò poliklonal lapen GCLC (dilusyon 1:1000) te ajoute nan manbràn yo, ki te enkube lannwit lan nan 4 degre. Nan demen, manbràn PVDF yo te lave twa fwa nan TTBS. Apre sa, yon antikò segondè (konjige afinite pi bon kalite kabrit anti-lapen IgG (1:1000 dilution) ki make ak peroksidaz refor te ajoute nan manbràn yo, ki te Lè sa a, enkube nan tanperati chanm pou 2 h. Manbràn PVDF yo te lave ak sibi ECL reyaktif deteksyon chemiluminescence pou siyal ekspoze sou fim X-ray, ki te Lè sa a, fiks ak tcheke [22].
Analiz estatistik
Done yo te analize lè l sèvi avèk SPSS 19.0, epi rezilta yo prezante kòm mwayen ak devyasyon estanda (SD) nan twa eksperyans endepandan. Yo te konsidere valè p < 0.05="" pou="" endike="" diferans="" estatistik="" enpòtan="">
Rezilta Etablisman modèl H2O2
Jan yo montre nan Figi 2, H2O2 nan 50, 100, ak 200 μM pa t lakòz nivo apwopriye nan lanmò selil. Sepandan, 400 μM H2O2 aji sou selil PC12 nan 2-6 èdtan, ak domaj oksidatif nan selil yo te gen tandans yo dwe ki estab. Se poutèt sa, nou konsidere ke endiksyon ak H2O2 nan yon konsantrasyon nan 400 μM pou 6 h te apwopriye pou imite aksidan oksidatif estrès pwovoke nan selil PC12.
Efè pwoteksyon nan ekstrè brit sou selil PC12 trete ak H2O2
Konpare ak sa ki nan gwoup modèl H2O2 (Figi 3), ekstrè n-butanol nan konsantrasyon 0.05, 0.1, {{10} }.2, ak 0.4 mg/mL siyifikativman amelyore domaj oksidatif nan selil PC12 pwovoke pa H2O2 (p <0.05) nan="" yon="" fason="" ki="" depann="" de="" konsantrasyon.="" done="" sa="" yo="" sigjere="" ke="" fraksyon="" n-butanol="" la="" gen="" plis="" aktivite="" pwoteksyon="" ki="" pisan.="" sepandan,="" etè="" petwòl="" ak="" ekstrè="" acetate="" etil="" te="" montre="" aktivite="" pwoteksyon="" sèlman="" nan="" gwo="" konsantrasyon="" (etè="" petwòl:="" 0.1="" ak="" 0.2="" mg/ml,="" p=""><0.{{31} }5;="" acetate="" etil:="" 0.2="" ak="" 0.4="" mg/ml,="" p=""><0.05). anplis,="" konsantrasyon="" diferan="" nan="" ekstrè="" faz="" akeuz="" pa="" te="" montre="" okenn="" efè="" pwoteksyon="" (p=""> 0.05). Anplis de sa, nou te ajoute done ki sòti nan yon etid validation lè l sèvi avèk SH-SY5Y liy selil neuroblastom imen (SH-SY5Y) nan dosye siplemantè a. Tretman ak 250 μM H2O2 te lakòz diminye viabilite selil; sepandan, caleolarioside B, paraboside B, ak paraboside II (3.125, 6.25, 12.5, 25, ak 50 μM) tretman siyifikativman atenue lanmò selil SH-SY5Y. Rezilta eksperyans yo te pwouve ke caleolarioside B, paraboside B, ak paraboside II pwoteje selil SHSY5Y kont blesi selil H2O2-pwovoke.
Estrikti nan konpoze izole nan fraksyon nan n-butanol
Pou konfime ke ekstrè n-butanol la te genyen konpozan aktif, nou plis fraksyone uit konpoze ki soti nan ekstraksyon an. Estrikti konpoze 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, ak 8 yo te idantifye pa diferan done espèk (1 H-NMR, 13C-NMR, ak ESI-MS) ki baze sou konparezon ak done pibliye pou paraboside A. , paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, ak isonuomioside A, respektivman [20]. Pou egzanp, done yo pou paraboside B yo te jan sa a: jansiv mawon; ½ 20 D −55.7 (c 0.05, CH3OH) [20]; UVMeOH max nm (logε): 220 (3.61), 291 (3.54), 330 (3.66) [20]; IRKBr max cm−1 : 3392, 2943, 2885, 1699, 1683, 1606, 1521, 1361, 1282, 1163, 1114, 1039, 995, 817 cm−1 [20]; pou 1 H ak 13C NMR espektroskopik done detaye yo montre nan referans 20; HR-ESI-MS (negatif) m/z 741.2231 [MH] - (kalki pou C33H41O19, 741.2242) [20]. Done yo pou paraboside II yo te jan sa a: poud blan amor phous; ½ 20 D −80.5 (c 0.05, CH3OH) [20]; UVMeOH max nm (logε): 229 (3.74), 322 (3.73) [20]; IRKBr max cm−1 : 3419, 1699, 1625, 1596, 1515, 1456, 1419, 1263, 1159, 1139, 1068, 1022, 808 cm−1 [20]; pou 1 H ak 13C NMR espektroskopik done detaye yo montre nan referans 20; ESI-MS (negatif) m/z 637
Efè pwoteksyon konpoze izole kont H2 O2-pwovoke toksisite nan selil PC12
Yo te itilize tès MTS pou mennen ankèt sou efè konpoze izole yo sou rantabilite selil PC12 ki ekspoze a toksisite H2O2-pwovoke. Jan yo montre nan Figi 5, konpare ak sa ki nan gwoup kontwòl la, selil PC12 pretrete ak senk konsantrasyon diferan nan caleolariosid B, paraboside B, paraboside II, oswa paraboside A (3.125, 6.25, 12.5, 25, ak 5 0 μM) pou 24 èdtan pa montre okenn diferans enpòtan nan viabilite selil (p> 0.05). Kidonk, pretretman nan selil PC12 ak caleolarioside B, paraboside B, ak paraboside II pa te lakòz okenn sitotoksisite. Jan yo montre nan Figi 6, 400 µM H2O2 siyifikativman diminye viabilite selil yo konpare ak sa ki nan gwoup kontwòl la. Anplis, viabilite selil H2O2- selil PC12 trete yo te ogmante ansibleman apre yo te pretretman selil PC12 yo ak diferan konsantrasyon caleolarioside B, paraboside B, ak paraboside II; nplis de sa, viabilite selil yo te pi wo a apre tretman ak 50 µM caleolariosid B, 50 µM paraboside B, ak 12.5 µM paraboside II. Lòt senk konpoze yo pa montre okenn efè pwoteksyon enpòtan sou selil PC12 trete H2O2-. Pou ilistre rezilta sa a, nou diskite youn nan sa yo kòm yon egzanp, tandiske lòt yo pa dekri nan maniskri a.
Nivo transkripsyon HO-1 ak GCLC
Apre sa, nou teste nivo transkripsyon HO{{0}} ak GCLC nan selil PC12 yo trete ak caleolarioside B, paraboside B, ak paraboside II. Total mRNA te kolekte nan trete ak trete selil PC12 pou 12 èdtan ak Lè sa a, sibi analiz ekspresyon pa qRT-PCR. Jan yo montre nan Figi 7(a,c,e), nivo transkripsyon HO-1 ogmante siyifikativman apre selil PC12 yo te pretrete ak konsantrasyon ki endike nan caleolarioside B, paraboside B, ak paraboside II pou 12 èdtan (p < 0.05).="" jan="" yo="" montre="" nan="" figi="" 7="" (b),="" nivo="" transkripsyon="" gclc="" yo="" ogmante="" tou="" siyifikativman="" nan="" selil="" pc12="" pretrete="" ak="" konsantrasyon="" ki="" endike="" nan="" caleolarioside="" b="" pou="" 12="" èdtan.="" sepandan,="" nivo="" gclc="" nan="" selil="" pc12="" pre-trete="" ak="" paraboside="" b="" pou="" 12="" èdtan="" diminye="" anpil="" konpare="" ak="" sa="" yo="" ki="" nan="" gwoup="" modèl="" la="" (p=""><0.05; figi="" 7="" (d)).="" anplis="" de="" sa,="" ak="" tretman="" paraboside="" ii,="" nivo="" gclc="" nan="" selil="" pc12="" yo="" pa="" t="" 'siyifikativman="" diferan="" konpare="" ak="" sa="" yo="" ki="" nan="" gwoup="" modèl="" la="" (p=""> 0.05; Figi 7 (f)).
Ekspresyon HO-1 ak GCLC
HO{{0}} ak GCLC se anzim antioksidan selilè enpòtan, epi tou de se Nrf2-regleman jèn en. Ekspresyon pwoteyin HO-1 ak GCLC te obsève tou apre tretman [6]. Figi 8 montre nivo pwoteyin HO -1 ak GCLC nan selil PC12 apre tretman ak 400 μM H2O2; rezilta yo te endike entansite FL fliyoresan HO-1 nan gwoup caleolarioside B ak paraboside B yo te pi gran pase sa yo ki nan gwoup H2O2-trete yo (Figi 8 (a, c)). Sepandan, ekspresyon GCLC pa te chanje anpil pa konpoze yo, eksepte pou caleolarioside B (Figi 8 (b)). Apre sa, yo te itilize inibitè chimik HO-1 pou plis evalye wòl anzim antioksidan yo nan reglemante efè pwoteksyon caleolarioside B, paraboside B, oswa paraboside II kont H2O2-sitotoksisite pwovoke. Caleolarioside B, paraboside B, ak paraboside II (3.125 µM) anpeche sitotoksisite H2O2-pwovoke, men efè pwoteksyon sa yo te ranvèse pa inibitè HO-1 ZnPP (p <0.01) nan="" 15="" µm="" (figi="" 8).="">
Benefis Cistanche: Ogmante repwodiksyon gason
Diskisyon
Aje popilasyon an se yon gwo pwoblèm mondyal. Anpil maladi gen rapò ak senilite, tankou AD ak PD, ki se menas grav pou sante piblik. AD ak PD te parèt kòm twazyèm maladi ki pi letal globalman, apre maladi kadyovaskilè ak kansè. Se poutèt sa, neurodegeneration te vin tounen yon sijè rechèch ijan atravè lemond. Sepandan, patojèn nan AD ak PD, maladi neurodegenerative nan sistèm nève santral la, te rete klè jiska dat. Anplis de sa, gen sèlman kèk dwòg ki ka efektivman trete AD oswa PD akòz mekanis patojèn konplèks yo [23]. Etid anvan yo te montre ke ROS, tankou anyon superoksid (O2−) ak H2O2, se faktè prensipal ki kontribye nan maladi neurodegenerative. Chanjman patolojik pandan PD gen ladan koripsyon newòn ak lanmò nan substantia nigra a ak dopamine striatal [24,25]. An konsekans, li enpòtan pou devlope dwòg antioksidan efikas pou trete PD, ak dekouvèt dwòg sa yo vin tounen yon direksyon rechèch enpòtan [26]. Kounye a, chemen siyal Nrf2 / ARE parèt kòm chemen estrès antioksidan andojèn ki pi enpòtan [27]. Ares sitiye nan 5′- ranpli rejyon yo nan jèn yo, tankou HO-1 ak GCLC [28,29]. HO-1 ak GCLC se jèn ki gen rapò ak Nrf2-ki reglemante en nan pwoteyin sa a [6]. Answit, ARE yo ka afekte nivo antioksidan yo epi aktive ekspresyon an nan HO-1 ak lòt jèn pwoteksyon, ki ka amelyore aktivite pwoteksyon selil [30,31]. Anplis de sa, konklizyon yo sijere ke efè pwoteksyon resveratrol kont A {{2{{50}}}} pwovoke toksisite nan selil PC12 rive nan regilasyon ekspresyon HO-1 atravè aktivasyon Nrf2 entraselilè. siyal chemen [32]. Selil PC12 yo se yon modèl aksepte nan selil neral epi yo itilize anpil nan etid efè neropwotèksyon [33]. H2O2 ka fasilman pase nan manbràn selilè a epi konbine avèk fè pou fòme radikal gratis ki trè aktif, ki pwovoke estrès oksidatif ak blesi selil [34]. H2O2 se yon ROS enpòtan, ak radikal gratis yo fasil pwodwi ak relativman ki estab, kidonk, yo anjeneral yo itilize etabli yon modèl estrès oksidatif lè l sèvi avèk selil PC12 [5]. Nan etid sa a, pretreatment nan selil PC12 ak konsantrasyon ki pa toksik nan ekstrè plant la pwoteje selil ki soti nan H2O2-pwovoke sitotoksisite lè yo diminye jenerasyon ROS la. Glikozid phenylethanoid gen anpil gwoup idroksil fenolik ki gen aktivite antioksidan ak antiaging. Nan etid sa a, nou te jwenn ke ekstraksyon n-butanol pwodui pi bon pwoteksyon pase lòt fraksyon polarite (Figi 3). Kidonk, nou analize plis aktivite pwoteksyon uit konpoze izole nan fraksyon n-butanol la. Rezilta yo te montre pou premye fwa ke Figi 8. Analiz de HO-1 ak nivo pwoteyin GCLC sou selil PC12. (a) Yo te itilize analiz Western blotting ekspresyon HO -1 ak GCLC ak GAPDH kòm yon kontwòl chaj. (b) Western blot analiz GCLC ekspresyon pwoteyin. (c) Western blot analiz HO-1 ekspresyon pwoteyin. (d) HO-1 inibitè ZnPP redwi efè neuroprotective a. Done yo prezante kòm mwayen ± SD, n=3. ***p < 0.001="" kont="" gwoup="" kontwòl;="" #p=""><0.05 kont="" gwoup="" h2o2="" (san="" znpp="" trete),="" ##p=""><0.01 kont="" gwoup="" h2o2="" (san="" znpp="" trete),="" ###p=""><0.001 kont="" gwoup="" h2o2="" (san="" znpp="" trete);="" ak="" p=""><0.01, kont="" gwoup="" h2o2="" (ak="" znpp="" trete),="" ak="" &="" p=""><0.001, kont="" gwoup="" h2o2="" (ak="" znpp="" trete).="" (gwoup="" kontwòl;="" gwoup="" modèl:="" h2o2;="" znpp="" negatif="" gwoup:="" caleolarioside="" b="" plis="" h2o2,="" paraboside="" b="" plis="" h2o2,="" paraboside="" ii="" plis="" h2o2;="" znpp="" gwoup="" pozitif:="" znpp="" plis="" caleolarioside="" b="" plis="" h2o2,="" znpp="" plis="" paraboside="" b="" plis="" h2o2,="" znpp="" plis="" paraboside="" ii="" plis="" h2o2).="" 2210="" x.="" gong="" et="" al.="" telechaje="" soti="" nan="" https://academic.oup.com/bbb/article/83/12/2202/6044145="" pa="" envite="" sou="" 27="" out="" 2021,="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b,="" ak="" paraboside="" ii="" gen="" gwo="" efè="" pwoteksyon="" kont="" h2o2-="" oksidatif="" pwovoke.="" domaj="" nan="" selil="" pc12="" yo.="" rezilta="" yo="" tou="" endike="" ke="" tretman="" h2o2="" pwovoke="" siyifikatif="" pc12="" blesi="" selil="" ak="" diminye="" viabilite="" selil,="" tandiske="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b,="" ak="" tretman="" paraboside="" ii="" siyifikativman="" bese="" efè="" sa="" yo="" (figi="" 6).="" yon="" etid="" anvan="" te="" rapòte="" ke="" chemen="" nrf2/are="" a="" se="" youn="" nan="" wout="" antioksidan="" andojèn="" ki="" pi="" enpòtan="" yo,="" epi="" li="" ka="" ogmante="" ekspresyon="" makè="" en,="" tankou="" ho-1,="" pou="" pwoteje="" selil="" yo="" [7].="" rezilta="" qrt-pcr="" ak="" analiz="" western="" blotting="" yo="" te="" montre="" ke="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b,="" ak="" paraboside="" ii="" ogmante="" siyifikativman="" nivo="" ho-1.="" sepandan,="" nivo="" transkripsyon="" gclc="" yo="" te="" ogmante="" siyifikativman="" nan="" selil="" pc12="" ki="" te="" pretrete="" ak="" caleolarioside="" b="" men="" diminye="" nan="" sa="" yo="" ki="" te="" deja="" trete="" ak="" parabozid="" b="" konpare="" ak="" sa="" yo="" ki="" nan="" gwoup="" modèl="" la.="" pli="" lwen,="" paraboside="" ii="" pa="" t="" 'chanje="" ekspresyon="" makè="" sa="" a,="" konpare="" ak="" sa="" ki="" nan="" gwoup="" modèl="" la="" (figi="" 7="" ak="" 8="" (a–c)).="" anplis="" de="" sa,="" efè="" pwoteksyon="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b,="" ak="" paraboside="" ii="" kont="" h2o2-pwovoke="" blesi="" selil="" pc12="" yo="" te="" ranvèse="" pa="" znpp="" inhibiteur="" ho-1="" (figi="" 8="" (d)).="" an="" konklizyon,="" glikozid="" phenylethanoid="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b,="" ak="" paraboside="" ii="" efektivman="" pwoteje="" selil="" pc12="" kont="" h2o2-pwovoke="" domaj="" oksidatif.="" an="" konsekans,="" konpoze="" sa="" yo,="" izole="" nan="" p.="" martini,="" ta="" ka="" reprezante="" kandida="" potansyèl="" dwòg="" pou="" tretman="" maladi="">
Benefis Cistanche:trete maladi neurodegenerative
Referans
[1] Butterfield DA. Pèspektiv sou estrès oksidatif nan maladi alzayme a ak prediksyon nan rechèch nan lavni anfaz. J alzayme Dis. 2018;64:1–11.
[2] Chignon C, Tomas M, Bonnefontrousselot D, et al. Estrès oksidatif ak peptide amyloid-beta nan maladi alzayme a. Redox Biol. 2018;14:450–464.
[3] Guo JD, Zhao X, Li Y, et al. Domaj nan newòn dopaminergic pa estrès oksidatif nan maladi Parkinson la (revizyon). Int J Mol Med. 2018;41:1817–1825.
[4] Bai Y, Dong LH, Huang XH, et al. Asosyasyon rs823128, rs1572931, ak rs823156 polimorfism ak risk redwi maladi Parkinson la. Neurorapò. 2017;27:936–941.
[5] Han XH, Zhu SL, Wang BX, et al. Aksyon antioksidan nan 7,8-dihydroxyflflavone pwoteje selil PC12 kont sitotoksisite 6-hydroxydopamine-induit. Neurochem Int. 2014;64:18–23.
[6] Li MQ, Xu T, Zhou F, et al. Efè neropwotektif kat glikozid feniletanoid sou H2O2-pwovoke apoptoz sou selil PC12 atravè chemen Nrf2/ARE. Int J Mol Sci. 2018;19:1135.
[7] Buendia I, Michalska P, Navarro E, et al. Nrf2-ARE chemen: yon sib émergentes kont estrès oksidatif ak neroenflamasyon nan maladi neurodegenerative. Pharmacol Therapeut. 2016;157:84–104.
[8] Jia XJ, Yan XS, Cai ZP, et al. Efè glikozid phenylethanoid, sòti nanHerba cistanche, sou defisi mantal ak aktivite antioksidan nan sourit gason SAMP8. J Toxicol Env Heal A. 2017;80:1180–1186.
[9] Tsvetkov DE, Dmitrenok AS, Tsvetkov YE, et al. Phenylethanoid glikozid soti nan ne bwa tèk ak aktivite antioksidan yo. J Biol Active Prod Nat. 2016;6:272–281.
[10] Zhang YQ, Gao EY, Liang CQ, et al. Aktivite antioksidan nan konpoze glikozid caffeoyl phenylethanoid soti nan Lindernia ruellioides nan vitro. Cent South Pharm. 2017;15:1687–1690.
[11] Wu ZH, Ma YF, Zhao L, et al. Wòl chemen Nrf2-ARE nan blesi estrès oksidatif ak relasyon li ak lòt chemen siyal yo. Anim Husbandry Feed Sci. 2016;37:42–48.
[12] Zheng XK, Li J, Feng WS, et al. Avansman nan etid Gesneriaceae. Chin J Nouvo Dwòg. 2003;12:261–263.
[13] Wen F, Li ZD. Rechèch avanse sou plant Gesneriaceae. Manton Plant Sovaj Resour. 2006;25:1–6.
[14] Yan WY, Chen L, Wang JM, et al. Pwogrè rechèch nan triterpenoid nan plant Gesneriaceae. Nat Prod Res Dev. 2012;24:698–701.
[15] Chinwa konpayi medikaman èrbal. Dosye resous medikaman tradisyonèl Chinwa yo. Lachin: Syans Press; 1994.
[16] Bai ZF, Wang XQ, Xiao PG, et al. Distribisyon glikozid phenylethanoid nan plant medsin nan Gesneriaceae. Chin J Chin Mater Med. 2013;38:4267–4270.
[17] Li ZD, Lau KM, Xu HX, et al. Aktivite antioksidan nan glikozid phenylethanoid soti nan Brandisia hancei. J Etnopharmacol. 2000;71:483–486.
[18] Li L, Shi DF, Gui YG, et al. Etid sou aktivite antioksidan yophenylethanoid glikozid soti nan Cistanche deserticola. J Anhui Agri Sci. 2009;32:15835–15836.
[19] Ju BW, Yang JH, Yan Y, et al. Efè pwoteksyon nanglikozid nan cistanchesou domaj selil PC12 PARABOLA MARTINI PWOTEJE SELIL PC12 KONT H2O2-BLESI 2211
