Prekondisyone-aktive AKT kontwole tolerans newòn nan iskemi atravè chemen MDM2–p53Ⅱ

3. Diskisyon

Rezilta nou yo revele ke deklanchman IPC-medyatè nan chemen siyal PI3K/AKT deklanche IT newòn lè yo kontwole konplèks MDM2-p53 nan newòn kortik prensipal yo. Nou premye konfime efikasite nan prekondisyone an tèm de neropwoteksyon [33,39-41] lè l sèvi avèk yon modèl eksperimantal IPC valide.

Klike sou efè segondè cistanche tubulosa pou Neuron

Nou te jwenn ke IPC eksperimantal pwovoke pa yon kout (20 min) oksijèn ak privasyon glikoz (OGD) ki te swiv pa 2 èdtan nan reoksijenasyon te lakòz neropwoteksyon, jan yo montre nan prevansyon nan tou de apoptoz newòn ak kaspas -3 aktivasyon pwovoke pa pwolonje. OGD (90 min) ki te swiv pa 4 h de reoxygenation (OGD/R). Nou montre ke IPC diminye deklanchman kaspas-3 nan newòn kortikal, ki gen rapò ak mwens apoptoz apre yon joure ischemik ki vin apre ak pi grav.

Balans ki genyen ant siyal pro ak antiapoptotik se fondamantal pou asire siviv newòn apre iskemi [3,33,38,42-44]. Malgre ke yo te montre enpòtans evènman sa yo nan tou de modèl emorajik ak iskemik in vivo konjesyon serebral [43,45], mekanis yo ki kontwole chemen siyal sa yo poko konprann konplètman nan yon kontèks tolerans ischemik. Wòl antiapoptotic AKT ak chemen ki gen rapò ak li yo te etidye anpil nan selil kansè [46,47] ak tisi nan sèvo [38,48]; sepandan, byen lwen tèlman, wòl nan chemen siyal AKT/MDM2-p53 nan IPC-medyatè tolerans newòn kont aksidan ischemik rete flotant.

Isit la, nou te jwenn ke aktivasyon an nan chemen siyal PI3K/AKT ki te koze pa IPC ankouraje fosforilasyon MDM2 nan Ser166, ki deklanche translokasyon nikleyè li yo ak estabilizasyon pwoteyin, anpeche p53-pwovoke apoptoz atravè kaspas-3 aktivasyon. apre iskemi. Aktivasyon AKT atravè fosforilasyon ankouraje siviv newòn [24,49] epi li ka kontribye nan endiksyon IT [25,50]. Rezilta nou yo montre ke abondans relatif pwoteyin AKT pa chanje anba stimuli ischemik oswa prekondisyone. Enteresan, nou te jwenn ke fosforilasyon byen bonè PI3K-medyatè nan AKT nan Ser473 anpeche estabilizasyon p53 ischemi-induit nan newòn yo prekondisyone.

Efè a pa t akòz modifikasyon nan nivo p53 mRNA [33,34,44] men nan diminye nivo pwoteyin p53 akòz IPC anvan OGD/R. Depi MDM2 se regilatè prensipal la nan estabilizasyon p53 epi li se tou yon sib dirèk nan AKT, rezilta nou yo montre wòl nan chemen siyal AKT / MDM2-p53 nan tolerans newòn nan iskemi. MDM2 mRNA rapidman ogmante apre OGD [34], men aktivite MDM2 sitou kontwole pa modifikasyon apre-tradiksyon, patikilyèman fosforilasyon [51]. Nan bon akò ak sa a, nou te jwenn ke yon fwa aktive pa fosforilasyon apre IPC, AKT, nan vire, fosforil MDM2 nan rezidi Ser166, ki sitiye tou pre siyal la lokalizasyon nikleyè [52], ak efè sa a konsève apre OGD / R aksidan.

Rezilta nou yo montre ke fosforilasyon MDM2 nan Ser166 ase pou egzèse efè neuroprotective IPC-medyatè atravè destabilizasyon p53. Kidonk, isit la, nou idantifye yon aktivasyon ki depann de tan nan chemen AKT / MDM2-p53 apre aksidan iskemik epi, tout bon, nou demontre ke IPC-aktive AKT deklanche translokasyon nikleyè nan MDM2 ektopik, osi byen ke estabilizasyon pwoteyin andojèn.

Anplis, AKT rete aktif nan nwayo a, kote PI3K ta ka imigre tou an repons a estrès oksidatif ak Lè sa a, kont pou fosforilasyon AKT [53]. Anpèchman fosforilasyon PI3K-medyatè nan AKT oswa AKT knockdown fè pwomosyon retansyon nan pwoteyin MDM2 nan sitoplasm la, epi li anpeche fosforilasyon Ser166 nan MDM2, osi byen ke IPC-medyatè neropwoteksyon kont iskemi-induit apoptoz newòn. Okontrè, nou te montre ke AKT aktif mare nan pwoteyin nikleyè MDM2.

Kòm yon konsekans, AKT aktif ankouraje tou de fosforilasyon nan MDM2 ak estabilizasyon nikleyè li yo, ki kontribye nan IPC-medyatè neropwoteksyon. Rezilta nou yo revele ke IPC-pwomosyon neropwoteksyon te depann sou PI3K-medyatè aktivasyon AKT, ki fosforilate MDM2 nan Ser166, ankouraje akimilasyon nikleyè MDM2 apre yon joure ischemic.

An konsekans, anpèchman nan PI3K / AKT pa wortmannin oswa AKT rediksyon pa siRNA aboli IPC-pwomosyon neropwoteksyon, ki mennen nan estabilizasyon p53 ak apoptoz newòn ki vin apre apre iskemi. Pakonsekan, rezilta nou yo ede klarifye wòl esansyèl IPC-depandan deklanchman nan chemen AKT-MDM2 nan siviv newòn kont aksidan ischemik.

Pwoteyin p53 la patisipe nan kontwòl lanmò newòn / siviv pou detèmine pronostik nan pasyan konjesyon serebral [34,42,54], osi byen ke nan pasyan TIA [3]. Estabilizasyon P53 konpwomèt neropwoteksyon prekondisyone-medyatè nan aksidan ischemi/repèfizyon [33]. Se poutèt sa, entèraksyon MDM2-p53 a pral kritik pou siviv newòn nan kontèks sa a [34] ak pou tolerans IPC-medyatè kont aksidan ischemik [33].

Thus, the control of such interaction will also have an impact on stroke outcomes. In this context, we recently found that a single-nucleotide polymorphism (SNP) 309T>G nan pwomotè MDM2 la detèmine ekspresyon MDM2 epi, an vire, modil rekiperasyon pasyan ki soufri konjesyon serebral [34].

Anplis de sa, nou te obsève ke yon jèn Tp53 SNP (rs1042522) modil mitokondriyo p53 estabilizasyon ak tolerans newòn nan iskemi pandan y ap predi rekiperasyon an fonksyonèl nan pasyan ki soufri yon TIA anvan konjesyon serebral [3]. Se poutèt sa, kontwòl wout p53 apoptotik yo pral esansyèl pou asire efè neuroprotective IPC.

Rezilta sa yo bay yon apwòch translasyonèl nan etid la ki ta ka aplike nan tan kap vini an pou benefis pasyan yo, epi yo poze chemen siyal PI3K/AKT-MDM2-p53 kòm yon sib esansyèl pou estrateji IT prekondisyone-ankouraje nan konjesyon serebral ischemik. An rezime, nou demontre ke IPC-enhanced PI3K/AKT siyal chemen ankouraje fosforilasyon nan MDM2 nan Ser166, ki mennen nan MDM2 translokasyon nikleyè ak estabilizasyon li yo, ki deklannche IT newòn pa ankouraje p53 destabilizasyon ak inaktivasyon ki vin apre nan lanmò apoptotik pwovoke apre joure ischemik.

Rezilta nou yo mete aksan sou benefis potansyèl yo nan aktivasyon bonè nan AKT nan IPC-medyatè tolerans newòn, ki kontwole chemen an apoptotik MDM2-p53 anba aksidan ischemik. Konklizyon sa yo mete aksan sou yon opòtinite pou konprann mekanis ki kontwole newòn chemen siyal AKT-MDM2-p53 pou devlope nouvo estrateji neropwotektif pou maladi ki gen rapò ak IT.

4. Materyèl ak Metòd

4.1. Kilti Prensipal nan Newòn Cortical

Kilti newòn yo te prepare nan C57Bl/6J oswa p53-null (Tp53−/−, B6.129S2, The Jackson Laboratory) anbriyon sourit (14.5E) kortik. Newòn yo te simen nan 1.8 × 105 selil / cm2 nan yon mwayen Neurobasal complétée ak 2 pousan B27 ak 2 mM glutamin (Invitrogen, Madrid, Espay) ak enkubasyon nan 37 ◦C nan yon atmosfè imidite 5 pousan ki gen CO2-. 55].

4.2. Oksijèn glikoz privasyon ak modèl Prekondisyone

Apre 9-1{{10}} jou nan vitro (DIV), newòn yo te ekspoze a privasyon oksijèn ak glikoz (OGD) lè yo enkubate selil yo a 37 ◦C pou 90 minit nan yon enkibatè. ekipe ak yon airlock ak kontinyèlman gaze ak 95 pousan N2/5 pousan CO2. Mwayen enkubasyon an (tanpon Hanks 'solisyon san glikoz: 5.26 mM KCl, 0.43 mM KH2PO4, 132.4 mM NaCl, 4.09 mM NaHCO3, 0.33 mM Na2HPO4, 2 mM CaCl2, ak 20 mM HEP4 pousan, pH 7 HEP4) te deja 5% HEP4. /5 pousan CO2 pou 30 min. Nan kondisyon sa yo, konsantrasyon oksijèn nan mwayen enkubasyon an te 6.7 ± 0.5 µM jan yo mezire ak yon elektwòd oksijèn Clark-type [56,57].

Lè yo endike, newòn yo te ekspoze a ischemi prekondisyone (IPC; kout OGD pou 20 min ki te swiv pa 2 èdtan nan reoksijenasyon) anvan iskemi pwolonje ki vin apre (OGD, 90 min) ak 4 èdtan nan reoksijenasyon (IPC plis OGD/R) (Figi S1B). ). Nan paralèl, newòn yo te enkube nan normoxia (Nx) nan 37 ◦C nan yon atmosfè imidite nan 95 pousan lè / 5 pousan CO2 oswa ischemic preconditioning (IPC). Lè yo endike, newòn yo te enkube 30 minit anvan IPC nan solisyon tanpon Hanks '(pH 7.4), nan absans oswa prezans wortmannin (100 nmol / L), jan sa dekri deja [19].

4.3. Transfèksyon selilè

Newòn (8 DIV) oswa selil HEK-293T yo te transfekte ak yon vektè plasmid ki eksprime Mdm2 ki make YFP ki soti nan pwomotè imen MDM2. MDM2p/Mdm2-YFP se te yon kado Uri Alon & Galit Lahav (Addgene plasmid # 53962, Watertown, MA, USA) [58]. Lè sa nesesè, yo te itilize yon vektè vid (pYFP) kòm yon kontwòl nan menm kondisyon yo. Transfeksyon plasmid yo te fèt lè l sèvi avèk Lipofectamine® LTX (Invitrogen, Carlsbad, MA, USA), dapre enstriksyon manifakti a. Selil yo te transfekte ak 1.5 µg/µL vektè plasmid yo epi yo te itilize apre 24 èdtan.

AKT knockdown nan 6 newòn DIV te reyalize pa transfeksyon ak ti entèferans ribonukleotid doub-blon (siRNA). Sekans vize yo te jan sa a: 50–CUCAAGUACUCAUUCCAGAtt–30, antisense: 5 0–UCUGGAAUGAGUACUUGAGgg–30 (sourit, s62216, ki koresponn ak nukleotid 1006–1025, nimewo aksè GenBank NM{9}) [5{9}}. Kòm yon kontwòl negatif, nou te itilize Silencer™ Select Negative Control No. 1 siRNA (siControl). Tout siRNA yo te achte nan men Ambion®, Invitrogen®, ak Thermo Fischer Scientific (Offenbach, Almay). Dapre degre nan knockdown pwoteyin, efikasite nan transfèksyon nan siRNA te estime yo dwe 70-80 pousan nan 3 jou apre-transfeksyon. Pou eksperyans silans, newòn yo te transfekte ak siRNA (10 nM) lè l sèvi avèk Lipofectamine® RNAiMAX (Invitrogen), swiv enstriksyon manifakti a. Newòn yo te plis enkube nan yon mwayen Neurobasal pou 72 èdtan anvan yo itilize yo.

4.4. Flow Cytometric Deteksyon nan lanmò selil apoptotik

Newòn yo te ak anpil atansyon detache soti nan plak yo lè l sèvi avèk 1 mM EDTA tetrasodium sèl nan PBS (pH 7.4) epi yo te tache ak anexin V / APC ak 7- AAD, fè egzakteman jan sa deja dekri [55].

4.5. Caspase-3 Egzamen Aktivite

Yo te evalye aktivite kaspas-3 nan lisat selil [33] epi dapre enstriksyon manifakti a lè l sèvi avèk twous Fluorimetric Assay CASP3F ki soti nan SIGMA epi li nan emisyon nan yon longèdonn 405 nm. Metòd la baze sou liberasyon fliyoresan 7-amino4-methyl coumarin (AMC) mòtye a. Konsantrasyon AMC a kalkile lè l sèvi avèk yon estanda AMC.

4.6. Immunoblots ak Ko-Immunoprecipitation Assay

Newòn yo te lysed nan tanpon ki gen 1 pousan SDS, 2 mM EDTA, 150 mM NaCl, 12.5 mM Na2HPO4, ak 1 pousan Triton X-100 (NP40: 1 pousan NP40, EDTA diK plis 5 mM, Tris pH{{13} }} mM, NaCl 135 mM, ak 10 pousan gliserin) konplete avèk inibitè fosfataz (1 mM Na3VO4 ak 50 mM NaF) ak inibitè pwoteaz (100 mM fliyò fenilmetilsulfonil, 50 µg/mL anti-papain, 50 µg/mL 50 pepstatin, 50 µg/mL). µg/mL amastatin, 50 µg/mL leupeptin, 50 µg/mL bestatin, ak 50 µg/mL soya trypsin inhibitor), ki estoke sou glas pou 30 min epi bouyi pou 5 min. Aliquot nan ekstrè lysed yo te sibi jèl SDS poliakrilamid (MiniProtean®, Bio-Rad) ak efase ak antikò lannwit lan nan 4 ◦C. Antikò yo te itilize yo te anti-AKT (9272), anti-p (Ser473)AKT (9271), anti-cleaved caspase -3 (Asp175, 9661) (Siyal selilè, Danvers, MA, USA), anti-p53 ( 554157, BD Biosciences), anti-MDM2 (2A10, ab-16895), anti (Ser166)MDM2 (ab131355), anti-GFP (ab290; tou detekte YFP) (Abcam, Cambridge, UK), anti-LAMIN B (sc-374015, Santa Cruz Biotechnology, Heidelberg, Almay), ak antiGAPDH (Ambion, Cambridge, UK) lannwit lan nan 4 ◦C. Apre enkubasyon ak refor peroksidaz-konjige kabrit anti-lapen IgG (Pierce, Thermo Scientific) oswa kabrit anti-sourit IgG (Bio-Rad), manbràn yo te imedyatman enkubate ak amelyore chemiluminescence SuperSignal West Dura (Pierce) pou 5 minit anvan ekspoze a Kodak. Fim XAR-5 pou 1 a 5 minit epi yo te tcheke otoradyogram yo. Entansite Band yo te quantifye lè l sèvi avèk lojisyèl ImageJ 1.48v, jan sa dekri deja [60].

Pou tès ko-immunoprecipitation, newòn yo te lysed nan tanpon glas frèt ki gen 50 mM Tris (pH 7.5), 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 pousan NP -40) ​​complétée ak inibitè fosfataz ki dekri pi wo a. Apre yo fin netwaye debri pa santrifujasyon, lisat newòn yo (100 mg) yo te enkube ak 1 mg nan antikò a pou 24 èdtan nan 4 ◦C ki te swiv pa adisyon nan 10 mL nan pwoteyin A-agawoz (GE Healthcare Life Sciences) pou 2 èdtan nan 4. ◦C. Immunoprecipitates yo te lave anpil ak tanpon lysis ak rezoud pa SDS-PAGE ak imunoblotted ak antikò endike [61]. Abondans pwoteyin relatif yo montre nan Figi S1. Yo enkli tach konplè ak analiz jèl nan Figi S3.

4.7. Imunositochimi ak analiz imaj

Newòn yo te grandi sou kouvèti vè ak fikse ak 4 pousan (w / v, nan PBS) paraformaldehyde pou 30 min ak imunostained ak lapen anti-phosphoAKT (Ser473; 9271; Cell Signaling, MA, USA), sourit anti-MDM2 (2A10, ab-16895), sourit anti-MAP2 (1:500; M#1406, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) [55], sourit anti-p53 (1:200; 554157, BD Pharmingen , San Diego, CA, USA), ak anti-GFP (1:1000; ab290; valide tou pou detekte YFP). Immunolabeling te detekte lè l sèvi avèk antikò segondè anti-lapen IgG-Cy3 oswa anti-sourit IgG-Cy2 (1:500; Jackson ImmunoResearch. Cambridge, UK).

Nwayo yo te tache ak 40,6-diamidino-2 fenilindol (DAPI; D9542, Sigma-Aldrich). Coverslips yo te lave, monte nan reyaktif antifade limyè SlowFade (Invitrogen) sou glisad an vè, epi egzamine lè l sèvi avèk yon mikwoskòp (Nikon Inverted microscope Eclipse Ti-E, (NY, USA) ekipe ak 40 × objektif, yon eklere fib pre-santre Nikon Intensilight. C-HGFI, ak yon kamera dijital aparèy nwa-e-blan ki makonnen chaj Hamamatsu ORCAER oswa yon mikwoskòp konfokal lazè eskanè ("Spinning Disk" Roper Scientific Olympus IX81, Tokyo, Japon) ak twa lazè 405, 491, ak 561 nm, ekipe ak 40 ×, 63 ×, ak 100 × PL Apo objektif imèsyon lwil oliv pou D 'wo rezolisyon ak aparèy kamera dijital Evolve Photometrics.

Tout paramèt mikwoskòp yo te fikse pou kolekte imaj fliyoresan anba saturation epi yo te kenbe konstan pou tout imaj yo te pran nan eksperyans la. Imaj yo te analize ak lojisyèl ImageJ 1.48v (National Institutes of Health). Pousantaj p(Ser473)AKT plis ak p53 plis newòn ak quantification entansite fliyoresans maksimòm pwoteyin p(Ser473)AKT ak p53 yo montre nan Figi S2A. Nan newòn transfekte MDM2-GFP yo, distribisyon nukleositoplasmik MDM2-GFP yo te kalkile kòm rapò fluoresans nikleyè mwayen ak fluoresans mwayèn sitoplasmik MDM2 andojèn, mezire nan 24 newòn (sis newòn pou chak). kondisyon nan kat diferan kilti newòn) (Figi S2B) [62].

Pou quantifier maksimòm entansite fluoresans nikleyè nan tach MDM2 andojèn ak pSer473AKT, yo te mezire 40 newòn (10 newòn pou chak kondisyon nan kat kilti diferan) (Figi S2C), jan sa dekri deja [44]. Nan pwofil entansite reprezantan yo montre nan figi 5B, pousantaj p (Ser473) AKT ak MDM2 ki endike anba a chak kondisyon yo te quantifye kòm fluoresans nikleyè vle di. Nan tout ka yo, nwayo yo te idantifye pa DAPI tach. Entansite maksimòm nikleyè fliyoresan MDM2 nan newòn trete ak wortmannin oswa siAkt montre nan Figi S2D.

4.8. Analiz estatistik

Rezilta eksperimantal yo te evalye pa yon sèl-fason analiz de divèjans, ki te swiv pa tès la Bonferroni post hoc, yo itilize yo konpare valè ant plizyè gwoup. Rezilta yo eksprime kòm vle di ± SEM. Yo te itilize tès t Elèv la pou konparezon ant de gwoup valè. Nan tout ka yo, p < 0.05 te konsidere kòm enpòtan (* p < 0.05 kont Nx; # p<0.05 versus OGD). Statistical analyses were performed using SPSS Statistics 24.0 for Macintosh (IBM).

Ki jan Cistanche pwoteje newòn yo?

Gen kèk prèv ki sijere ke Cistanche ka pwoteje newòn nan diminye apoptoz (pwograme lanmò selil) ak ankouraje siviv newòn. Apoptoz se yon pwosesis natirèl ki fèt nan kò a pou retire selil ki domaje oswa ki pa vle, men li ka danjere lè li rive twòp oswa yon fason ki pa apwopriye. Yo te jwenn Cistanche anpéché apoptoz nan syans laboratwa, ak efè sa a ka ede pwoteje newòn kont domaj.

Anplis de sa, Cistanche gen plizyè konpoze byoaktif ki te montre yo gen efè neuroprotective. Pou egzanp, li gen echinacoside, ki te montre pwoteje newòn nan estrès oksidatif ak enflamasyon. Li gen ladan tou acteoside, ki te jwenn gen pwopriyete anti-enflamatwa ak antioksidan.

Referans

1. Emberson, J.; Lees, KR; Lyden, P.; Blackwell, L.; Albers, G.; Bluhmki, E.; Brott, T.; Cohen, G.; Davis, S.; Donnan, G.; et al. Efè reta tretman, laj, ak gravite konjesyon serebral sou efè tronboliz venn ak alteplase pou konjesyon serebral ischemik egi: Yon meta-analiz done pasyan endividyèl ki soti nan esè owaza. Lancet 2014, 384, 1929–1935. [CrossRef]

2. Wang, W.-W.; Chen, D.-Z.; Zhao, M.; Yang, X.-F.; Gong, D.-R. Atak ischemik pasajè anvan yo ka gen yon efè neuroprotective nan pasyan ki gen konjesyon serebral ischemik. Arch. Med. Sci. 2017, 5, 1057–1061. [CrossRef] [PubMed]

3. Ramos-Araque, ME; Rodriguez, C.; Vecino, R.; Garcia, EC; Alfonso, MDL; Barba, MS; Colàs-Campàs, L.; Purroy, F.; Arenillas, JF; Almeida, A.; et al. Tolerans iskemik newon an kondisyone pa polimòfis Tp53 Arg72Pro. Transl. Konjesyon serebral Res. 2019, 10, 204–215. [CrossRef] [PubMed]

4. Iadecola, C.; Anrather, J. Stroke rechèch nan yon kafou: mande sèvo a pou direksyon. Nat. Neurosci. 2011, 14, 1363–1368. [CrossRef] [PubMed]

5. Zhao, C.; Jiang, M.; Zhang, L.; Hu, Y.; Hu, Z.; Zhang, M.; Qi, J.; Su, A.; Lou, N.; Xian, X.; et al. Peroxisome proliferator-aktive reseptè gamma patisipe nan akizisyon nan tolerans ischemik nan sèvo pwovoke pa prekondisyone ischemik atravè glial glutamate transporteur 1 nan vivo ak nan vitro. J. Neurochem. 2019, 151, 608–625. [CrossRef]

6. Rodriguez, C.; Agulla, J.; Delgado-Esteban, M. Rekonsantre sèvo a: Nouvo apwòch nan neropwoteksyon kont aksidan iskemik. Neurochem. Res. 2021, 46, 51–63. [CrossRef] [PubMed] 7. Stenzel-Poore, MP; Stevens, SL; Xiong, Z.; Lessov, NS; Harrington, AC; Mori, M.; Meller, R.; Rosenzweig, HL; Tobar, E.; Shaw, ET; et al. Efè iskemi prekondisyone sou repons jenomik nan iskemi serebral: Resanblans ak estrateji neuroprotective nan ibènasyon ak eta toleran ipoksi. Lancet 2003, 362, 1028–1037. [CrossRef]

8. Gidday, JM Serebral prekondisyone ak tolerans ischemik. Nat. Rev Neurosci. 2006, 7, 437–448. [CrossRef] [PubMed]

9. Stetler, RA; Leak, R.; Gan, Y.; Li, P.; Zhang, F.; Hu, X.; Jing, Z.; Chen, J.; Zigmond, MJ; Gao, Y. Prekondisyone bay neuroprotection nan modèl maladi CNS: Paradigm ak siyifikasyon klinik. Pwog. Neurobiol. 2014, 114, 58–83. [CrossRef] [PubMed]

10. Koch, S.; Della Morte, D.; Dave, KR; Sacco, RL; Perez-Pinzon, AM Biomarkers pou Ischemic Preconditioning: Jwenn moun ki reponn yo. Br. J. Pharmacol. 2014, 34, 933–941. [CrossRef]

11. La Russa, D.; Frisina, M.; Secondo, A.; Bagetta, G.; Amantea, D. Modulation nan Faktè Serebral Serebral ki fonksyone Kalsyòm Entry-regulatory Factor (SARAF) ak Periferik Orai1 Apre Fokal Serebral Iskemi ak Prekondisyone nan Sourit. Nerosyans 2020, 441, 8–21. [CrossRef]

12. Sisalli, MJ; Annunziato, L.; Scorziello, A. Nouvo Mekanis Selilè pou Neuroprotection nan Ischemic Preconditioning: Yon View soti nan Anndan Organelles. Devan. Neurol. 2015, 6, 115. [CrossRef]

13. Durukan, A.; Tatlisumak, T. Preconditioning-induced ischemic tolerance: A window into endogenous gearing for cerebroprotection. Eksp. Transl. Konjesyon Serebral Med. 2010, 2, 2. [CrossRef]

14. Broughton, BR; Reutens, D.; Sobey, CG; Sims, K.; Politei, J.; Banikazemi, M.; Lee, P. Mekanis apoptotik apre iskemi serebral. Stroke 2009, 40, 788–794. [CrossRef]

15. Zhao, H.; Sapolsky, RM; Steinberg, GK Phosphoinositide-3-Kinase/Akt Survival Signal Chemen yo Enplike nan siviv newòn apre konjesyon serebral. Mol. Neurobiol. 2006, 34, 249–270. [CrossRef]

16. Uzdensky, AB Règleman Apoptoz nan panenbra a apre konjesyon serebral ischemik: Ekspresyon nan pwoteyin pro- ak antiapoptotik. Apoptosis 2019, 24, 687-702. [CrossRef] [PubMed]

17. Fukunaga, K.; Kawano, T. Akt se yon sib molekilè pou terapi transdiksyon siyal nan joure ischemik nan sèvo. J. Pharmacol. Sci. 2003, 92, 317–327. [CrossRef] [PubMed]

18. Zhao, EY; Efendizade, A.; Cai, L.; Ding, Y. Wòl Akt (pwoteyin kinaz B) ak pwoteyin kinaz C nan aksidan ischemi–reperfusion. Neurol. Res. 2016, 38, 301–308. [CrossRef] [PubMed]

19. Delgado-Esteban, M.; Martín-Zanca, D.; Andres-Martin, L.; Almeida, A.; Bolanos, JP Anpèchman PTEN pa peroxynitrite aktive fosfoinozitid-3-kinase/Akt neuroprotective siyal chemen an. J. Neurochem. 2007, 102, 194–205. [CrossRef]

20. Manning, BD; Toker, A. AKT/PKB Siyal: Navige rezo a. Cell 2017, 169, 381–405. [CrossRef] [PubMed]

21. Diez, H.; Garrido, JJ; Wandosell, F. Wòl espesifik nan Fòm akt iso nan Apoptoz ak Règleman kwasans Axon nan newòn. PLoS ONE 2012, 7, e32715. [CrossRef]

22. Santi, SA; Lee, H. Izoform Akt yo prezan nan kote subselilè diferan. Am. J. Physiol. Fizyol. 2010, 298, C580–C591. [CrossRef]

23. Yang, C.; Talukder, MH; Varadharaj, S.; Velayutham, M.; Zweier, JL Byen bonè ischemic prekondisyone mande Akt- ak PKA-medyatè aktivasyon nan eNOS atravè fosforilasyon serine1176. Cardiovasc. Res. 2012, 97, 33–43. [CrossRef] [PubMed]

24. Ouyang, Y.-B.; Tan, Y.; Peny, M.; Liu, C.-L.; Martone, MWEN; Siesjö, BK; Hu, B.-R. Evènman siviv ak lanmò-pwomosyon apre Iskemi serebral pasajè: Fosforilasyon Akt, Liberasyon Cytochrome C, ak Aktivasyon Proteaz ki sanble ak Caspase. Br. J. Pharmacol. 1999, 19, 1126–1135. [CrossRef] [PubMed]

25. Li, S.; Hafeez, A.; Noorulla, F.; Geng, X.; Shao, G.; Ren, C.; Lu, G.; Zhao, H.; Ding, Y.; Ji, X. Prekondisyone nan neropwoteksyon: Soti nan ipoksi nan ischemi. Pwog. Neurobiol. 2017, 157, 79–91. [CrossRef] [PubMed]

26. Mayo, LD; Donner, DB Yon chemen fosfatidilinositol 3-kinaz/Akt ankouraje translokasyon Mdm2 soti nan sitoplasm nan nwayo a. Pwosedi. Natl. Acad. Sci. USA 2001, 98, 11598–11603. [CrossRef]

27. Ashcroft, M.; Ludwig, RL; Woods, DB; Copeland, TD; Weber, HO; Macrae, EJ; Vousden, KH Fosforilasyon HDM2 pa Akt. Onkogene 2002, 21, 1955–1962. [CrossRef]

28. Zhou, BP; Liao, J.; Xia, W. HER-2/neu pwovoke p53 ubiquitination atravè fosforilasyon MDM2 akt-medyatè. Nat. Selil Biol. 2001, 3, 973–982. [CrossRef]

29. Grossman, SR; Perèz, M.; Kung, AL; Jozèf, M.; Mansur, C.; Xiao, Z.-X.; Kumar, S.; Howley, P.; Livingston, DM p300/MDM2 Complexes Patisipe nan MDM2-Medyate p53 Degradasyon. Mol. Cell 1998, 2, 405–415. [CrossRef]

30. Toth, A.; Nickson, P.; Qin, LL; Erhardt, P. Règleman Diferans nan siviv Cardiomyocyte ak Hypertrophy pa MDM2, yon E3 Ubiquitin Ligase. J. Biol. Chem. 2006, 281, 3679–3689. [CrossRef]

31. Hausenloy, DJ; Tsang, A.; Mocanu, MM; Yellon, DM Ischemic preconditioning pwoteje pa aktive prosurvival kinases nan reperfusion. Am. J. Physiol. Cirk. Fizyol. 2005, 288, H971–H976. [CrossRef] [PubMed]

32. Mocanu, MM; Yellon, DM p53 down-regulation: Yon nouvo mekanis molekilè ki enplike nan prekondisyone ischemik. FEBS Lett. 2003, 555, 302–306. [CrossRef]

33. Vecino, R.; Burguete, MC; Jover-Mengual, T.; Agulla, J.; Bobo-Jiménez, V.; Salom, JB; Almeida, A.; Delgado-Esteban, M. MDM 2-p53 chemen an enplike nan prekondisyone-induit tolerans newòn nan iskemi. Sci. Rep. 2018, 8, 1610. [CrossRef] [PubMed]

34. Rodriguez, C.; Ramos-Araque, M.E.; Domínguez-Martínez, M.; Sobrino, T.; Sánchez-Morán, I.; Agulla, J.; Delgado-Esteban, M.; Gómez-Sánchez, J.C.; Bolaños, J.P.; Castillo, J.; et al. Single-Nucleotide Polymorphism 309T>G nan pwomotè MDM2 la detèmine rezilta fonksyonèl apre konjesyon serebral. Stroke 2018, 49, 2437–2444. [CrossRef]

35. Feng, J.; Park, J.; Cron, P.; Hess, D.; Hemmings, BA Idantifikasyon yon PKB/Akt Hydrophobic Motif Ser-473 Kinase kòm Protein Kinase ki depann de ADN. J. Biol. Chem. 2004, 279, 41189–41196. [CrossRef]

36. Lai, TW; Zhang, S.; Wang, YT Excitotoxicity ak konjesyon serebral: Idantifye nouvo objektif pou neropwoteksyon. Pwog. Neurobiol. 2014, 115, 157–188. [CrossRef] [PubMed]

37. Constantino, LC; Binder, LB; Vandresen-Filho, S.; Viola, GG; Ludka, FK; Lopes, mw; Leal, RB; Tasca, CI Wòl Phosphatidylinositol -3 Kinase Pathway nan NMDA Prekondisyone: Mekanis diferan pou kriz malkadi ak koripsyon newòn ipokanp pwovoke pa asid kinolinik. Neurotox. Res. 2018, 34, 452–462. [CrossRef]

38. Xie, R.; Cheng, M.; Li, M.; Xiong, X.; Daadi, M.; Sapolsky, RM; Zhao, H. Akt Isoforms Diferans Pwoteje kont StrokeInduced Newòn Blesi nan reglemante Aktivite mTOR. Br. J. Pharmacol. 2013, 33, 1875–1885. [CrossRef]

39. Soriano, FX; Papadia, S.; Hofmann, F.; Hardingham, NR; Bading, H.; Hardingham, GE Dòz Prekondisyone nan NMDA ankouraje neropwoteksyon lè yo amelyore eksitabilite newòn. J. Neurosci. 2006, 26, 4509–4518. [CrossRef]

40. Grabb, MC; Choi, DW Tolerans iskemik nan Kilti Selil Cortical Murine: Wòl kritik pou reseptè NMDA. J. Neurosci. 1999, 19, 1657–1662. [CrossRef]

41. Chen, M.; Lu, T.-J.; Chen, X.-J.; Zhou, Y.; Chen, Q.; Feng, X.-Y.; Xu, L.; Duan, W.-H.; Xiong, Z.-Q. Wòl diferans nan subtip reseptè NMDA nan lanmò selil ischemik newòn ak tolerans iskemik. Stroke 2008, 39, 3042–3048. [CrossRef]

42. Gomez-Sanchez, JC; Esteban, MD; Rodriguez-Hernandez, I.; Sobrino, T.; De La Ossa, NP; Reverse, S.; Bolaños, JP; GonzalezSarmiento, R.; Castillo, J.; Almeida, A. Polymorphism Tp53 Arg72Pro imen an eksplike diferan pronostik fonksyonèl nan konjesyon serebral. J. Exp. Med. 2011, 208, 429–437. [CrossRef]

43. Xu, W.; Gao, L.; Li, T.; Zheng, J.; Shao, A.; Zhang, J. Mesencephalic Astrocyte-Derived Neurotrophic Factor (MANF) Pwoteje kont Apoptoz newòn atravè Aktivasyon nan Akt / MDM2 / p53 Siyal Pathway nan yon modèl rat nan emoraji entracerebral. Devan. Mol. Neurosci. 2018, 11, 176. [CrossRef] [PubMed]

44. Sánchez-Morán, I.; Rodríguez, C.; Lapresa, R.; Agulla, J.; Sobrino, T.; Castillo, J.; Bolaños, JP; Almeida, A. Nikleyè WRAP53 ankouraje siviv newòn ak rekiperasyon fonksyonèl apre konjesyon serebral. Sci. Adv. 2020, 6, eabc5702. [CrossRef]

45. Burmistrova, O.; Olias-Arjona, A.; Lapresa, R.; Jimenez-Blasco, D.; Eremeeva, T.; Shishov, D.; Romanov, S.; Zakurdaeva, K.; Almeida, A.; Fedichev, PO; et al. Vize PFKFB3 soulaje blesi serebral ischemi-reperfusion nan sourit. Sci. Rep. 2019, 9, 1–13. [CrossRef]

46. ​​Tu, Y.; Kim, E.; Gao, Y.; Rankin, GO; Li, B.; Chen, YC Theaflavin-3, 30 -galat pwovoke apoptoz ak arè sik selil G2 atravè chemen Akt/MDM2/p53 nan selil kansè nan ovè A2780/CP70 ki reziste sisplatin. Ent. J. Oncol. 2016, 48, 2657–2665. [CrossRef] [PubMed]

47. Wan, W.; Hou, Y.; Wang, K.; Cheng, Y.; Pu, X.; Wi, X. LXR-623-pwovoke RNA LINC01125 ki pa kode ki dire lontan anpeche pwopagasyon selil kansè nan tete atravè chemen siyal PTEN/AKT/p53. Lanmò selil Dis. 2019, 10, 248. [CrossRef] [PubMed]

48. Dao, J.; Cui, Y.; Duan, Y.; Zhang, N.; Wang, C.; Zhang, F. Puerarin atténue defisi locomotè ak kognitif ak blesi newòn ipokanp atravè chemen siyal PI3K/Akt1/GSK-3 nan yon modèl ischemi serebral in vivo. Oncotarget 2017, 8, 106283–106295. [CrossRef] [PubMed]

49. Janelidze, S.; Hu, B.-R.; Siesjö, P.; Siesjö, BK Chanjman Akt1 (PKB) ak p70S6K nan Iskemi Fokal Transient. Neurobiol. Dis. 2001, 8, 147–154. [CrossRef] [PubMed]

50. Pignataro, G.; Boscia, F.; Esposito, E.; Sirabella, R.; Cuomo, O.; Vinciguerra, A.; Di Renzo, G.; Annunziato, L. NCX1,, ak NCX3: De nouvo efèktè nan prekondisyone reta nan iskemi nan sèvo. Neurobiol. Dis. 2012, 45, 616–623. [CrossRef]

51. Li, J.; Kurokawa, M. Règleman estabilite MDM2 apre domaj ADN. J. Selil. Fizyol. 2015, 230, 2318–2327. [CrossRef]

52. Olson, DC; Marechal, V.; Momand, J.; Chen, J.; Romocki, C.; Levine, AJ Idantifikasyon ak karakterizasyon plizyè mdm-2 pwoteyin ak mdm-2-p53 pwoteyin konplèks. Onkogene 1993, 8, 2353–2360. [PubMed]

53. Uranga, RM; Katz, S.; Salvador, GA Enhanced Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt Signaling gen sib pleyotropik nan newòn ipokanp ki ekspoze a estrès oksidatif fè-induit. J. Biol. Chem. 2013, 288, 19773–19784. [CrossRef] [PubMed]

54. Almeida, A.; Sánchez-Morán, I.; Rodríguez, C. Mitokondrial–nikleyè p53 trafik kontwole emotivite newòn nan konjesyon serebral. IUBMB Life 2021, 73, 582–591. [CrossRef] [PubMed]

55. Delgado-Esteban, M.; Garcia-Higuera, I.; Mèt, C.; Moreno, S.; Almeida, A. APC/C-Cdh1 kowòdone nerojenèz ak gwosè kortik pandan devlopman. Nat. Komin. 2013, 4, 2879. [CrossRef] [PubMed]

56. Constantino, LC Wòl Reseptè NMDA nan Devlopman Rezistans nan sèvo atravè Pre- ak Post-kondisyone. Aje Dis. 2014, 5, 430–441. [CrossRef]

57. Almeida, A.; Esteban, MD; Bolaños, JP; Medina, JM Oksijèn ak privasyon glikoz pwovoke malfonksyònman mitokondriyo ak estrès oksidatif nan newòn men se pa nan astrosit nan kilti prensipal. J. Neurochem. 2002, 81, 207–217. [CrossRef]

58. Lahav, G.; Rosenfeld, N.; Sigal, A.; Geva-Zatorsky, N.; Levine, AJ; Elowitz, MB; Alon, U. Dinamik bouk fidbak p53-Mdm2 nan selil endividyèl yo. Nat. Genet. 2004, 36, 147–150. [CrossRef]

59. Li, J.; Karaplis, AC; Huang, DC; Siegel, PM; Camirand, A.; Yang, XF; Muller, WJ; Kremer, R. PTHrP kondwi inisyasyon timè tete, pwogresyon, ak metastaz nan sourit epi li se yon sib potansyèl terapetik. J. Clin. Investig. 2011, 121, 4655–4669. [CrossRef]

60. Maestre, C.; Esteban, MD; Gomez-Sanchez, JC; Bolaños, JP; Almeida, A. Cdk5 phosphorylates Cdh1 ak modules cyclin B1 estabilite nan excitotoxicity. EMBO J. 2008, 27, 2736–2745. [CrossRef]

61. De Tudela, MV-P.; Esteban, MD; Mèt, C.; Bobo-Jiménez, V.; Jiménez-Blasco, D.; Vecino, R.; Bolaños, JP; Almeida, A. Règleman nan entèraksyon Bcl-xL-ATP Synthase pa Mitokondriyo Siklin B1-Kinaz Depandan Siklin-1 Detèmine Siviv Newòn. J. Neurosci. 2015, 35, 9287–9301. [CrossRef] [PubMed]

62. Bobo-Jiménez, V.; Esteban, MD; Angibaud, J.; Sánchez-Morán, I.; de la Fuente, A.; Yajeya, J.; Nägerl, UV; Castillo, J.; Bolaños, JP; Almeida, A. APC/CCdh1-Rock2 chemen kontwole entegrite dendritik ak memwa. Pwosedi. Natl. Acad. Sci. USA 2017, 114, 4513–4518. [CrossRef] [PubMed]