Etid preliminè sou echantiyon pasta ki karakterize nan konpoze antioksidan ak aktivite byolojik yo sou selil ren yo.

Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com

Federico Di Marco et al

Résumé:Pasta se youn nan manje de baz yoMediteranerejim alimantè ak pou rezon sa a, li te chwazi pou etid sa a evalye pwopriyete antioksidan li yo. Twa kalite pasta yo te chwazi: Buckwheat, RYE, ak ze pasta. Kalitatif-kantitatif analiz karakterizasyon te pote soti nanHPLC-DADidantifye konpoze antioksidan. Done yo te montre prezans karotenoid tankou lutein ak polifenol tankou asid indoleacetic, (karotenoid soti nan {{0}}.08 a 0.16 mg/100 g,polifenolsoti nan 3.7 a 7.4 mg/100 g). Pou evalye efè metabolit yo detekte, yo te fè eksperyans nan vitrorenmodèl selil yo: HEK-293 ak MDCK. Nòm -karotèn, asid indoleacetic, asid kafeyik, idroalcoolik ak karotenoid-anrichi ekstrè soti nan echantiyon pasta yo te teste nan prezans yon ajan antioksidan pou detèmine varyasyon viabilite. -karotèn ak estanda asid indoleacetic te egzèse yon efè pwoteksyon sou selil HEK-293 pandan ke yo pa detekte okenn efè sou MDCK. Konsantrasyon yo teste yo gen anpil chans nan seri sa yo ki rive nan kò a apre konsomasyon nan manje pasta estanda. Karotenoid-anrichi ekstrè ak ekstrè idroalkolik te montre efè diferan, obsève sekou pou RYE pasta idroalkolik ekstrè ak Buckwheat pasta karotenoid-anrichi ekstrè, pandan y ap ze pasta te montre pi modere dòz depann efè asepte konpòtman pro-oksidan nan gwo konsantrasyon. Rezilta preliminè yo sijere konpòtman yo dwe trase tounen nan fitokonplèks yo antye ki gen rapò ak molekil sèl epi yo bezwen plis envestigasyon.

Mo kle:pasta;Mediteranerejim alimantè; polifenol; karotenoid; konpoze antioksidan;rensante;HPLC/DADanaliz

Cistanche tubulosa anpeche maladi ren, klike la a pou jwenn echantiyon an

1. Entwodiksyon

Malgre sa pa gen okenn definisyon inik nanMediteranerejim alimantè—akòz varyasyon yo ak adaptasyon nan tradisyon gastronomik pa sèlman nan zòn Mediterane a, men tou atravè mond lan [1]—rejim alimantè Mediterane a ka konsidere kòm li gen plizyè eleman ki satisfè kritè enpòtan pou yon rejim alimantè ki an sante: kontni ki ba nan satire. asid gra, kontni segondè nan idrat kabòn konpoze, fib dyetetik ak molekil antioksidan, ak abondans nan legim.

Li difisil pou etabli ki manje, oubyen ingrédients aktif ladan l, nanMediteranerejim alimantè yo pi responsab pou benefis sante yo; akimile done sijere ke benefis prensipal li yo kouche nan konbinezon an nan konplèks ak gran varyete eleman nitritif diferan kominike sinèrjetik ak aditif [2].

Nan dènye ane yo, literati a k ​​ap grandi (syans obsèvasyon ak esè kontwòl owaza) te demontre benefis sante ki asosye ak rejim alimantè Mediterane a, diminye risk pou yo devlope plizyè maladi kwonik tankou maladi kadyovaskilè [3-5], dyabèt [6-10], kansè [11,12], obezite [13-15] oswa sante mantal [16-19] ak ogmante esperans lavi [20].

Amelyorasyon nan san presyon [21], pwofil lipid [22,23], rezistans ensilin [24], ak pwoteksyon kont estrès oksidatif, enflamasyon, agregasyon plakèt, ak malfonksyònman andotelyal [25-28] sanble yo se mekanis aksyon ki responsab pou efè benefik sou sante jeneral la. Tout efè byolojik sa yo ankouraje pa aderans nan fòm Mediterane a ta ka enpòtan pa sèlman pou maladi kwonik yo mansyone anwo a, men tou pou prevansyon nan pouri ren nan popilasyon jeneral la. Maladi ren kwonik (CKD) reprezante yon pwoblèm sante piblik mondyal, ki afekte plis pase 750 milyon moun atravè lemond e li aji souvan an silans ak san antrave grasa prezantasyon klinik li asymptomatik. Diferan liy prèv yo te souliye relasyon solid ant rejim Mediterane a ak prezèvasyon ren [29].

Lè nou konsidere tout efè ki mansyone anwo yo kòm faktè risk pou n bès nan fonksyon ren, ren an ka konsidere kòm youn nan objektif prensipal yo. Yon dènye meta-analiz nan etid kòwòt te montre ke rejim ki baze sou plant tankou rejim alimantè Mediterane a oswa apwòch dyetetik pou sispann rejim tansyon wo (DASH) te asosye ak yon pi ba risk pou ensidan.CKDak albuminuria nan popilasyon jeneral la [30]. Yon eksplikasyon ta ka ke fwi ak legim gen konpoze byoaktif pwoteje kont enflamasyon ak malfonksyònman endothelial ki ankouraje chanjman dinamik nan fraksyon filtraj, sa ki lakòz yon rediksyon pwogresif nan to filtraj glomerulè a, ekspansyon volim likid ekstraselilè, balans ion nòmal, ak ipoksi ren, finalman. ki mennen nan pèt fonksyon ren [31-33]. Anplis, ogmantasyon nan konsomasyon nan legim, fwi, sereyal ak legum ka mennen nan yon diminisyon nan konsomasyon pwoteyin bèt pozitivman enfliyanse balans asid-baz ak emodinamik glomerular nan la.ren, pwoteje li kont esklewoz glomerulèr ak pèt fonksyon [34-37].

Malgre sa, gen plizyè etid ki gen anpil done ki montre enpak yon rejim alimantè ki gen anpil pwoteyin sou n bès fonksyon ren nan popilasyon jeneral la [38-41] prèv k ap grandi sijere ke sous pwoteyin yo jwe yon wòl enpòtan nan prezèvasyon fonksyon ren yo. yon chanjman soti nan bèt nan sous pwoteyin plant ta ka benefisye [42,43].

Pasta se youn nan manje ki pi konsome nan mond lan e li se youn nan manje prensipal rejim alimantè Mediterane a. Tradisyonèlman, Itali se pwodiktè prensipal ak lidè nan konsomasyon pasta, menm si pasta yo konsome atravè lemond pou pri ki ba, gou, ak lavi etajè ki pi long pase lòt pwodwi boulanjri [44]. Pasta se yon bon sous idrat kabòn ak enèji (100 g pasta kwit gen apeprè 31 g idrat kabòn ak apeprè 158 kcal), men li tipikman ba nan lipid, pwoteyin, fosfò, ak potasyòm ki se eleman nitritif ki genyen restriksyon nan pifò rejim ren. maladi ren (disponib sou entènèt nan https://fdc.nal.usda.gov, jwenn aksè nan 1 Desanm 2020). Pasta ble natirèlman rich, ki reprezante majorite pasta ki disponib nan komès, ofri tou bon nivo thiamin, riboflavin, niacin, folat, fè, ak selenyòm, osi byen ke polifenol. Anplis de sa, pasta se toujou boule nan konbinezon ak lòt atik manje ki ta ka konsidere kòm yon sous pi fò nan polifenol, tankou lwil oliv ak legim. Pasta anjeneral pwodui ak smoul ble durum, akòz ekselan pwopriyete reolojik li yo, koulè siperyè pasta a, bon jan kalite a nan kwit manje, ak akseptasyon pa konsomatè a, men dènyèman pasta ka pwodwi tou apati lòt sereyal tankou diri, Buckwheat, RYE, eple.

Nan dènye ane yo, konsomatè yo te vin pi plis konsyan ke yon rejim balanse, tankou yon sèl Mediterane a, ka pozitivman afekte sante, ki se poukisa endistri a manje eseye satisfè demand sa yo pa pwodwi bon jan kalite ak fonksyonèl manje ak engredyan manje.

Malgre yo te pwodwi manje fòtifye pou rezon ki an sante, moun ta ka pwovoke yo asime yo olye pou yo yon rejim balanse. Sa a se yon sijè enpòtan anpil pou ankouraje FDA a pibliye yon dokiman ad hoc ki rele "FDA's fortification policy" pou bay yon repons sou yon bò nan endistri a manje ak sou lòt la nan mond akademik la [44].

Yon rejim balanse, adekwat, ak varye se yon etap enpòtan nan direksyon pou yon vi kontan ak an sante san risk pou yo twò chaje ak kèk eleman ajoute ki genyen nan manje fòtifye. Jis pou rezon sa a sereyal ki pa tradisyonèl yo ak pseudo-sereyal yo te redekouvwi ki te pave wout la pou itilize yo kòm engredyan manje fonksyonèl paske yo posede kèk kalite nitrisyonèl ak fonksyonèl ki absan oswa ki manke nan sereyal tradisyonèl yo. Buckwheat ak RYE se sous rich nan fitochimik tankou polifenol, konpoze ki gen anpil rapò ak aktivite antioksidan [45,46].

Te lanse nan mwa mas 2005, Pwojè MOLI-SANI te enplike anviwon 25,000 sitwayen ki abite nan Molise (Itali), pou evalye faktè anviwònman ak jenetik ki kache maladi kadyovaskilè, timè, ak maladi neurodegenerative. Dapre yon etid ki soti nan pwojè MOLI-SANI, konsomasyon pasta asosye ak yon BMI pi ba ak nivo pi ba nan obezite santral. Anpil etid te konfime ke rejim ki gen anpil kalori mennen nan pran pwa epi yo pa yon rejim ki gen ladan idrat kabòn. An reyalite, si pòsyon pasta a kòrèk epi sòs la pa twò kalorik, yon plak pasta ka gen yon kontni kalorik ki respekte egzijans enèji chak jou [47]. Pasta yo kenbe anpil konsiderasyon paske karakteristik li yo te asosye pa sèlman ak kontwòl pwa kò men tou ak plizyè pwopriyete sante pozitif [48]. Yon etid owaza, kontwole ki fèt sou matyè ki an sante te montre ke pwodwi ki baze sou RYE amelyore règleman glisemi, ogmante òmòn entesten ki enplike nan règleman apeti ak metabolis. Rye diminye nivo apeti apre pran manje lè li diminye dezi pou manje nan repa ki vin apre yo, ogmante sasyete, epi redwi grangou nan ogmante òmòn sasyete GLP-1 (peptide ki sanble ak glukagòn-1) ak peptide YY (PYY). Yon repons glikoz apre pran pi ba yo te obsève nan yon gwoup moun ki konsome manje ki baze sou RYE konpare ak yon gwoup sijè ki konsome ble rafine. Sa rive paske RYE se yon sereyal ki ba endèks glisemi ki ka itilize tou nan pasyan dyabetik [49]. Rye ka amelyore pwofil lipid plasma a, an reyalite, konsomasyon nan RYE antye se envers ki asosye ak konsantrasyon nan kolestewòl LDL, rapò a LDL / HDL, ak konsantrasyon nan trigliserid. Efè sa a se akòz prezans nan fib ak -glucans [50].

Pasta se byen li te ye kòm yon sous idrat kabòn, men li ka gen ladan tou konpoze minè, tankou karotenoid [51], espesyalman lutein, ak lòt espès antioksidan tankou polifenol. Molekil bioaktif sa yo ka anrichi nan diferan kalite pasta, tou depann de matyè premyè yo. Pou egzanp, kontni karotenoid nan ble dur pi wo pase ble pen [52] epi nivo antioksidan ka ogmante lè yo enkòpore fraksyon bran ak tout nwayo ble dur nan pwodwi pasta [53]. Buckwheat se yon sous sibstansyèl nan konpoze fenolik, vitamin, ak asid amine esansyèl [54], pandan y ap adisyon nan ze nan preparasyon an nan pasta a transmèt karotenoid ak lutein. Karotenoid patisipe nan aktivite prevansyon, espesyalman nan sendwòm enflamasyon ak wòl yo se akòz pwopriyete antioksidan yo [55] kont radikal gratis ak oksijèn singlet [56]. Pasta gen diferan kalite molekil antioksidan ak pou konsomatè souvan, gwo konsomasyon ka konsidere kòm yon sous enpòtan nan konpoze sa yo an sante.

Isit la nou montre ke diferan kalite pasta sètadi Buckwheat, RYE, ak ze pasta, gen plizyè kantite konpoze antioksidan, ki gen yon wòl amelyore rantabilite selil ren yo nan yon eta estab oswa sou endiksyon an nan estrès oksidatif.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Echantiyon yo

Twa echantiyon pasta kwit yo te analize ak teste: yon echantiyon pasta integral Buckwheat (1), yon echantiyon pasta RYE konplè (2), ak yon echantiyon pasta ze ble durum dl farin (3).

2.2. Preparasyon Echantiyon Pasta

Total de 50 g nan pasta integral Buckwheat oswa pasta RYE konplè yo te kwit nan 500 mL dlo pou 7 min; Yo te kwit 50 g pasta ze nan farin ble durum nan 500 mL dlo pou 1 minit, jan manifakti a endike.

Pou jwenn ekstrè ki rich nan karotenoid, yo te fonn 10 g nan pasta kwit nan 100 mL asetòn, frèt sonike pou 30 min. Echantiyon an te santrifuje pou 5 min at5000 rpm, supernatant la te sèk evapore ak yon evaporator rotary epi rezidi a te fonn nan asetòn oswa DMSO depann sou analiz la en. Pou jwenn ekstrè ki rich nan polifenol, 10 g nan chak echantiyon nan pasta kwit yo te fonn nan 50 mL nan 70:30 EtOH / H2O nan pH 3.2. Echantiyon yo te souke pou 24 èdtan, santrifuje pou 5 min nan 1400 rpm. Echantiyon an te santrifuje pou 5 min nan 5000 rpm epi yo te kolekte supernatant la epi analize nan HPLC-DAD, pandan y ap yon aliquot te sèk evapore, ak rezidi a fonn nan DMSO pou tretman selil.

2.3. HPLC-DA-MS analiz

Analiz karotenoid ak polifenol yo te fèt lè l sèvi avèk yon kwomatografi likid HP 1100 ki te ekipe ak yon detektè DAD epi ki te jere pa yon estasyon travay HP 9000 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) ak lye ak espektwomèt akimile. ak yon koòdone API/electrospray (Agilent Technologies). Kondisyon fonksyònman mas-spectrometer yo te jan sa a: tanperati gaz, 350 ◦C; debit nitwojèn, 11.0 L / min; presyon nebilizè, 40 psi; tanperati quadrupole, 100 ◦C; ak vòltaj kapilè, 4000 V. Espektwomèt mas la te opere nan mòd pozitif ak negatif nan 80–180 eV.

Konpoze yo te separe lè l sèvi avèk yon 25 0 × 4.6 mm id, 5 µm kolòn LUNA C18 (Phenomenex, Torrance, CA, USA). Spectre UV/Vis yo te anrejistre nan ranje 190-600 nm ak chromatogram yo te akeri nan 250, 280, 330, 350, ak 450 nm. Echantiyon yo te analize pa elisyon gradyan nan yon pousantaj parèy nan 0.8 mL / min. Faz mobil pou karotenoid se te yon sistèm gradyan sòlvan lineyè multistep (sòlvan A: asetòn, sòlvan B: H2O, pH 3.2 pa asid fòmik), kòmanse soti nan 80 pousan asetòn jiska 100 pousan nan 30 min. polifenol yo te eliye lè l sèvi avèk gradyan sa a: soti nan 90 pousan H2O (ajiste a pH 3.2 pa asid fòmik) a 100 pousan CH3CN nan 40 min. Tout solvang yo te itilize yo te nan pite klas HPLC (BDHLaborator Supplies, Poole, UK).

2.4. Kantite analiz

Kantifikasyon konpoze polifenolik endividyèl yo te fè dirèkteman pa HPLC-DAD lè l sèvi avèk yon koub regresyon senk pwen (R2 ki pi gran pase oswa egal a 0.998) nan seri 0-30 µg sou baz la. estanda natif natal. An patikilye, flavonol yo te detèmine nan 350 amizan quercetin 3-O-glucoside kòm yon konpoze referans pandan y ap dérivés asid kafeyik yo te detèmine nan 330 nm lè l sèvi avèk asid klorojenik kòm yon konpoze referans ak endol asid asid derive nan 280 nm lè l sèvi avèk 3 asid endoleacetic. (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Yo te detèmine karotenoid nan 450 nm lè l sèvi avèk beta-karotèn kòm yon konpoze referans (Extrasynthese, Lione, Francia). Nan tout ka yo, yo te kalkile konsantrasyon aktyèl la nan dérivés apre yo fin aplike koreksyon pou diferans ki genyen nan pwa molekilè.

2.5. Total kontni fenolik

Kontni total fenolik la te detèmine lè l sèvi avèk metòd Folin-Ciocalteu, ki dekri pa Singleton et al. [57] ak yon ti kras modifye dapre Dewanto et al. [58]. Nan 125 µL ekstrè echantiyon ki byen dilye, yo te ajoute 0.5 mL dlo deyonize ak 125 µL reyaktif Folin-Ciocalteu. Yo te kenbe melanj lan pou 6 min ak Lè sa a, 1.25 mL nan yon solisyon 7 pousan akeuz Na2CO3 te ajoute. Volim final la te ajiste a 3 ml ak dlo. Apre 90 min, yo te mezire absòpsyon nan 760 nm kont dlo kòm yon vid. Kantite total fenolik yo eksprime kòm ekivalan asid galik (GAE, mg asid galik/100 g echantiyon) atravè koub kalibrasyon asid galik la. Koub kalibrasyon an te varye ant 20 ak 500 µg/mL (R2=0.9969) [57,58].

2.6. Kilti Selil

Selil ren anbriyon imen 293 (HEK-293) ak selil Madin-Darby kanin (MDCK) yo te kiltive nan DMEM ak GlutaMAX, 10 pousan (v/v), serom fetis bovin, 100 U/mL penisilin ak 100 µg. /mL streptomycin nan 37 ◦C ak 5 pousan CO2.

2.7. Esè MTT

5{{10}}00 selil/byen MDCK ak HEK-293 selil yo te simen nan 96 plak pi epi yo te pèmèt yo respekte pou 24 èdtan. Pou etid viabilite, selil yo te enkube pou 24 èdtan jiska 72 èdtan ak beta karotèn, endol-3-asid acetic, asid kafeyik (nan DMSO), ak ekstrè pasta poukont yo oswa an prezans mayezyòm monoperoxy phthalate (MMPP, Sigma-Aldrich). , St. Louis, MO, USA). DMSO nan mwayen an nan konsantrasyon egal ak sa yo itilize pou konpoze yo teste yo te itilize pou echantiyon ki pa trete. Konsantrasyon tès la pou estanda yo te sòti nan 2 pM a 10 µM, pandan y ap pou MMPP soti nan 0.001 a 0.05 mg/mL. Vitabilite selil yo te mezire 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromur (MTT, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Plak yo te enkube nan 37 ◦C pou 1 èdtan epi Lè sa a, Formazan ki te pwodwi pa rediksyon MTT la te solubilize nan DMSO. Yo te detèmine absorpsyon sou yon lektè microplate (Mithras LB 940-Berthold) nan 570 nm. Pousantaj nan viabilite selil yo te kalkile lè l sèvi avèk rapò a AbsTEST / AbsCTRL.

2.8. Analiz estatistik

Chak eksperyans te fèt an kat fwa epi repete omwen twa fwa. Diferans nan pousantaj viabilite yo te evalye lè l sèvi avèk pè elèv t-tès ak de-fason ANOVA ki te swiv pa yon tès posthoc ak koreksyon Holm a pou konparezon miltip sou konsantrasyon metabolit (p <0.05). rezilta="" yo="" te="" eksprime="" kòm="" mwayen="" ±="" erè="" estanda="" ak="" analiz="" la="" te="" fèt="" pa="" anviwònman="" r-studio="" [59]="" pou="" r="" vèsyon="" 3.6.3="" [60]="" lè="" l="" sèvi="" avèk="" pake="" "tidyverse"="">

3. Rezilta ak Diskisyon

3.1. Detèminasyon Kalite Chimik echantiyon Pasta

Enfòmasyon nitrisyonèl nan manje pèmèt fè manje enfòme ak chwa dyetetik. Tradisyonèlman, pasta yo prepare nan semolin men menm ak lòt sereyal, tout gen lanmidon kòm yon eleman prensipal ki te swiv pa pwoteyin, grès, vitamin, mineral, ak konpoze byoaktif [62]. Tablo S1 rapòte done nitrisyonèl yo.

Pou konpare valè nitrisyonèl plizyè kalite pasta ki anrichi nan konpoze byoaktif akòz diferan sous sereyal oswa sipleman espesifik engredyan, nou analize pasta Buckwheat, pasta RYE, ak pasta ze. Yo nan lòd yo jwenn ekstrè rich nan divès kalite subklas nan konpoze ki prezan nan echantiyon yo pasta, tou de ekstraksyon idroalkolik ak asetòn yo te pote soti ak analize. Polifenol endividyèl yo te pwovizwaman idantifye lè l sèvi avèk done ki soti nan analiz HPLC-DAD-MS pa konparezon ak konbinezon nan tan retansyon yo ak espektrometri mas ak spectre UV (gade Figi S1-S5 pou menm egzanp MS spectre) ak konpare rezilta ak estanda (kaempferol, quercetin, rutin, ak asid ferulic) ak travay bibliyografik anvan yo. An patikilye, nan ekstrè idroalkolik, flavonoid, kafeik, ak dérivés asid indoleacetic yo te idantifye (Tablo 1): derive asid indoleacetic se konpoze prensipal la jan sa dekri anvan menm pou semolina. [63]. Lè ou konsidere konpozisyon relatif, pasta Buckwheat te montre pi wo nivo flavonoid, an patikilye, dérivés quercetin yo se flavonol prensipal yo jan yo te deja rapòte nan Buckwheat [64,65], ak prezans neglijab nan dérivés asid kafeyik; pasta RYE te montre nivo ki pi wo nan dérivés asid kafeyik, an patikilye, asid ferulic [66] ak kontni ki ba nan flavonoid; pasta ze prezante sèlman ba konsantrasyon flavonoid (derive apigenin [67]) epi pa gen okenn prezans dérivés asid kafeyik.

Kòm yon egzanp, pwofil kwomatografik echantiyon pasta kwit, ki anrejistre nan 350 nm, yo prezante nan Figi 1. Figi a revele konpozisyon kalitatif echantiyon yo analize.

Lutein te karotenoid prensipal yo idantifye nan ekstrè asetòn yo, ak kontni relatif menm jan an ki gen rapò ak espès yo karotenoid an jeneral, jan yo montre nan Tablo 2, an liy ak etid anvan yo [68]. Karotenoid yo pa te detekte nan pasta RYE.

Prezans metabolit segondè antioksidan yo te evalye nan echantiyon pasta yo tou (Tablo 3). Kapasite total antioksidan konpozan biyo, gen anpil chans akòz aktivite fenol / polifenol yo te evalye ak kantite molekil sa yo te dedwi.

3.2. Efè Indol-3-Asid Acetic,8-Karotèn, ak Asid Kafeik sou Selil Viabilite

Rejim Mediterane a te rekonèt kòm yon sous molekil anti-oksidan, ki pwoteje òganis lan kont estrès oksidatif ak sipòte estati an sante [2]. Se poutèt sa, nou te mande si biomolekil yo detekte nan echantiyon pasta nou yo ka afekte viabilite selil yo ak nan ki nivo. Nou te itilize HEK-293 ak MDCK selil ren ki an sante pou detèmine aktivite asid endoleacetic, -karotèn, ak asid kafeyik konpoze estanda. Ren an se sitou sansib a estrès oksidatif ak akimilasyon nan radikal gratis mennen nan fonksyon ren pwoblèm [69]. Selil yo te enkube ak yon konsantrasyon eskalar nan konpoze estanda yo epi yo te mezire viabilite selil la nan diferan pwen tan (Figi 3 ak Figi S6).

Yo te jwenn yo pa egzèse okenn efè toksik sou HEK{{0}} selil yo pou tout konsantrasyon yo teste nan moman enkubasyon. Sèlman -karotèn redwi viabilite selil yo nan yon fason ki gen fòm U sou selil HEK-293 ak nan yon fason ki depann de dòz nan selil MDCK (Figi 3). Remakabman, konsantrasyon yo gen anpil chans rive nan kò a apre konsomasyon nan yon repa pasta estanda (anjeneral 80 gr) yo nan seri a nan pi ba tès la (2 × 10_5 -2 × 10_4 uM, [70 ,71]), ki te bay yon amelyorasyon fèb nan viabilite sou tou de liy selil yo. Nan lòt men an, nan pi wo konsantrasyon ki pi wo a 0.2 uM, ki ka jwenn sèlman famasi, asid kafeyik te montre yon amelyorasyon siyifikatif nan viabilite selil la, pandan y ap asid endoleacetic ak -karotèn te montre efè konparab ansanm ak ogmantasyon nan konsantrasyon (2-20 uM). ) nan selil HEK-293 pandan tan an.

3.3. Efè Indol-3-Asid Acetic, -Karotèn, ak Asid Kafeik sou Selil Trete MMPP yo

Apre sa, nou te mande si asid indoleacetic, -karotèn, ak asid kafeyik ka kontrekare estrès pwovoke pa ajan oksidan MMPP la. Premyèman, nou teste efè MMPP lè nou ekspoze selil HEK-293 ak MDCK nan dilusyon seri (0.{005-0.05 mg/mL) nan dwòg la epi yo te detèmine viabilite selil la. Yon diminisyon ki depann de dòz apre tretman MMPP yo te remake epi IC50 la te konparab nan de liy selil yo teste. Apre enkubasyon ak 20-25 µg/mL MMPP, viabilite selil la te siyifikativman diminye nan anviwon 50-60 pousan (Figi 4) epi konsantrasyon an demi-maksimòm inhibitor (IC50) te kalkile yo dwe 26 µg/mL pou HEK {{16} } ak 22 µg/mL pou MDCK.

Apre sa, nou teste aktivite pwoteksyon molekil antioksidan nou yo sou selil trete MMPP yo, lè nou konplete medya selil yo ak 2 × 10_5 nM endoleacetic, -karotèn, oswa asid kafeyik. Yon efè yon ti kras pozitif sou rantabilite selil tou de HEK -293 ak MDCK te konfime pa anplwaye estanda yo kòm sa yo nan dòz la ki gen anpil chans sòti nan yon pòsyon pasta (Figi 5).

Kòm espere, MMPP redwi viabilite selil la a 60-65 pousan; tretman an ak asid indoleacetic oswa -karotèn kontrekare efè a MMPP ak sove andabilite selil la pa 30 pousan (p <0.001) ak="" 27="" pousan="" (p=""> 0.01) respektivman sou HEK-293 selil yo, pandan ke asid kafeyik pa te fè okenn efè enpòtan. Nan prezans yon ajan oksidan, beta-karotèn ak asid endoleacetic te montre yon efè pwoteksyon sou selil yo nan yon konsantrasyon ki ba, tandiske asid kafeyik pa t 'kontrekare estrès oksidatif nan konsantrasyon ki nesesè pou amelyore viabilite selil yo. Efè pozitif sa yo gen anpil chans akòz pwopriyete antioksidan asid indoleacetic ak karotenoid ki ka siyifikativman kontrekile cytotoxicity medyatè MMPP nan dòz yo itilize nan kondisyon eksperimantal sa a. Men, pa gen okenn sovtaj enpòtan yo te obsève sou selil MDCK trete MMPP, ki sijere ke, menm si estanda pou kont yo montre yon efè siyifikativman pozitif sou viabilite selil yo, yo pa ase pou atake estrès oksidatif MMPP-induit. Selil anbriyon HEK 293 yo sanble pi rapid pou fè aranjman pou yon liy defans kont estrès pase MDCK adilt, sipozeman akòz sistèm omeyostaz redox selilè adisyonèl yo.

3.4. Efè Fraksyon ki anrichi karotenoid ki sòti nan pasta sou sitotoksisite MMPP-induit

Pou evalye efè fraksyon yo karotenoid ki anrichi ki sòti nan ekstraksyon asetòn nan pasta Buckwheat ak ze pasta sou selil ren yo nan prezans estrès oksidatif, selil HEK-293 yo te enkube ak diferan konsantrasyon nan ekstrè klasman soti nan 2 × { {3}} uM a 2 × 10_3 uM nan prezans MMPP pou 72 èdtan (Figi 6, ak Tablo S2). Konsantrasyon an itilize refere a konsantrasyon -karotèn yo detekte nan ekstrè a (Tablo2). Kontni lutein te varye ant 1.5 × 10_6 uM rive 1.5 × 10_3 uM nan pasta Buckwheat ak soti nan 1.34 × 10_6 uM rive 1.34 × 10_3 uM nan pasta ze.

Nan tou de ekstrè asetòn, prezans nan phytocomplexes natirèl, te montre efè diferan ki gen rapò ak estanda a sèl, sa ki lakòz plis aktivite nan pi ba konsantrasyon. Kòm konsantrasyon nan ekstrè soti nan pasta ze ogmante, yon rediksyon nan viabilite selil yo te obsève. Konsantrasyon ki pi ba nan ekstrè karotenoid (2 × 10-6 µM) pwovoke yon modès efè pozitif pou kont li oswa nan prezans MMPP sou selil HEK-293. Ekstrè pasta Buckwheat te pwodwi yon amelyorasyon nan viabilite selil kòm ekstrè a pou kont li, men tou nan prezans MPP sòti nan 32 ± 5 pousan nan konsantrasyon ki pi ba a 21 ± 9 pousan pou 2 × 10−4 µM.

Aktivite ekstrè asetòn yo te evalye tou sou selil MDCK nan prezans oswa absans MMPP epi konpare ak sa yo jwenn nan selil HEK -293 (Figi 7 ak Tablo S2).

Ekstrè ki rich nan karotenoid te bay yon efè pro-viabilite jeneral nan tout konsantrasyon yo teste pou tou de kalite pasta. Konsènan HEK-293 Buckwheat, ekstrè pasta te bay yon pi bon sekou sou tretman MMPP pou tout dòz ki sòti nan 50 ± 7 pousan a 82 ± 5 pousan konpare ak selil HEK-239; Ekstrè soti nan pasta ze egzèse yon ti sekou sèlman nan konsantrasyon ki pi ba nan karotenoid 2 × 10_6 uM nan prezans MMPP, sijere ke konpozisyon an espesifik nan ekstrè jwe yon wòl kle nan repons lan. Kidonk, pasta Buckwheat te montre yon pi gwo kapasite sekou sou viabilite selil la ki gen rapò ak pasta ze epi depi eksperyans yo te fèt lè l sèvi avèk menm kantite -karotèn, diferans lan ta ka akòz prezans nan konpoze minè, tankou konpoze flavonoid, ki pi wo. nan ansyen an.

Espès karotenoid yo patisipe nan diferan reyaksyon chimik ki egzèse yon nati doub nan oksidan ak anti-oksidan depann sou kontèks byolojik la ak konsantrasyon yo: gwo reyaksyon sa a se akòz prezans nan lyezon doub konjige [72]. Wòl antioksidan yo te asosye ak kapasite nan delokalize elektwon yo bay espès oksidatif ak radikal [73,74]. Nan prezans gwo kondisyon oksidatif, aktivite yo ka konvèti nan pro-oksidan [75]. Nan ka nou yo, yo te obsève rezilta sa a nan pasta ze pou HEK-293 (tou de pou kont li ak nan prezans MMPP) ak selil MDCK nan prezans MMPP, kote diferan dòz ekstrè asetòn pwodui efè opoze.

3.5. Efè èkstre idwoalkolik sou sitotoksisite MMPP-induit

Apre sa, nou evalye efè ekstrè idroalkolik ki soti nan pasta Buckwheat, pasta RYE, ak pasta ze sou selil ren yo lè nou teste diferan konsantrasyon ki sòti nan 5 × 10_5 uM rive nan 5 × 10_1 uM avèk oswa san MMPP. (Figi8 ak Tablo S3). Konsantrasyon an itilize refere a konsantrasyon nan kontni total fenolik detekte nan ekstrè a (Table3). Dapre kontni echantiyon pasta yo rapòte nan Tablo 1, pou pasta Buckwheat te klase konsantrasyon asid indoleacetic soti nan 1.85 × 10_5 uM rive 1.85 × 10_1 uM, pou dérivés asid kafeyik te klase soti nan 3.5. × 10_6 uM a 3.5 × 10_2 uM epi pou kontni flavonoid yo te klase soti nan 2.8 × 10_5 uM rive 2.8 × 10_1 uM; pou pasta RYE, konsantrasyon nan asid indoleacetic te klase soti nan 2.2 × 10_5 uM a 2.2 × 10_1 uM, pou dérivés asid kafeyik soti nan 1.95 × 10_5 uM a 1.95 × {{37} } uM ak pou espès flavonoid soti nan 8.5 × 10_6 uM jiska 8.5 × 10_2 uM; pou pasta ze, konsantrasyon asid indoleacetic te klase soti nan 4.25 × 10_5 uM rive 4.25 × 10_1 uM, pou espès flavonoid soti nan 7.5 × 10_6 uM rive 1.85 × 10_2 uM pandan ke pa gen okenn dérivés asid kafeyik te prezan.

Ekstrè idwoalkolik ki soti nan pasta ze pa te fè okenn efè enpòtan sou rantabilite HEK- 293 poukont prezans estrès oksidatif. Ekstrè nan pasta Buckwheat te montre yon amelyorasyon nan viabilite selil sou tretman MMPP sèlman nan konsantrasyon ki pi wo a (28 ± 6 pousan). Rye pasta ekstrè pou kont li te montre yon amelyorasyon jeneral nan viabilite selil la pou tout dòz yo sòti nan 14 ± 7 pousan a 18 ± 1 pousan osi byen ke nan prezans MMPP soti nan 27 ± 3 pousan a 13 ± 3 pousan. Konplèks Phyto prezante nan ekstrè yo te vin pi aktif pase estanda sèl, fè egzèsis yon efè sou viabilite selil nan pi ba konsantrasyon konpare ak lèt ​​la. Rezilta sa yo sijere ke nan ekstrè yo idroalkolik, wòl nan pi gwo nan sekou a ta ka atribiye nan prezans nan dérivés asid kafeyik, obsève pi wo sekou pou pasta RYE ak pi ba / efè neglijab pou ze sot pase yo, nan ki yo pa detekte.

Lè sa a, ekstrè idroalkolik la te teste sou selil MDCK nan menm kondisyon yo kòm anvan epi yo te evalye viabilite selil la (Figi 9 ak Tablo S4).

Ekstrè idroalkolik ki soti nan Buckwheat ak ze pasta te montre efè diferan sou viabilite selil yo: premye a ogmante li, pandan y ap dènye a diminye li; pa te detekte okenn efè sou tretman MMPP pou tou de. Ekstrè nan pasta RYE pou kont li pa t 'montre okenn efè remakab sou viabilite selil yo, men li revele yon efè pwoteksyon fò kont estrès oksidatif MMPP-medyatè nan tout konsantrasyon sòti nan 50 ± 7 pousan a 61 ± 21 pousan. Nan kondisyon estanda.

Nan absans MMPP, kontni an wo nan asid indoleacetic nan ekstrè a soti nan pasta ze sanble fè egzèsis yon efè toksik sou viabilite selil. Konpare de modèl selil yo, nou te obsève konpòtman diferan ki gen rapò ak pasta a Buckwheat ak RYE nan absans MMPP. An patikilye, HEK-293 te montre yon ogmantasyon nan viabilite ak lèt ​​la, pandan y ap MDCK ak ansyen an. Diferans yo gen rapò ak aksyon an nan konplèks foto yo ki karakterize pa yon kontni ki pi wo nan flavonoid pou pasta Buckwheat la. Sekou sou viabilite selil nan mitan echantiyon yo, jan yo obsève pou tou de liy selil yo, koresponn ak kontni an ogmante nan dérivés asid kafeyik nan pasta RYE.

Etid la nan entèraksyon ki genyen ant polifenol ki gen fitokonplèks ak selil ren ta ka ede mennen ankèt sou efè enpòtan li te ye sou fizyoloji ren egzèse pa konpoze sa yo [76], konsantre sou youn nan machin yo posib, pasta, tipikman ki asosye ak yon rejim alimantè ki an sante ren. Kòm yon règ jeneral, metabolit yo nan polifenol gen yon mwatye lavi plasma nan kèk èdtan epi yo rapidman elimine nan ren an ak nan fwa a: wout la urin ak eskresyon bilyèr. Kantite total metabolit polifenol ki elimine nan pipi a gen rapò pa sèlman ak konsantrasyon maksimòm plasma yo, men tou ak kapasite yo pou yo elimine pa bilyè a olye ke aparèy urin yo. Pou egzanp, eskresyon urin nan quercetin ak glikozid li yo reprezante 0.3-1.4 pousan nan dòz la vale [77]; asid kafeyik ak asid ferulik kont pou 5.9 pousan ak 27 pousan respektivman. Se poutèt sa, polifenol ki sòti nan pasta ka gen yon enpak pozitif sou selil ren depann sou yo

kantite lajan ak metabolis. Plis etid yo bezwen pou pi byen defini kontribisyon yo nan sante ren yo.

Materyèl siplemantè:Sa ki anba la yo disponib sou entènèt nan https://www.mdpi.com/article/ 10.3390/nu13041131/s1, Tablo S1: Tablo Nitrisyonèl. Tablo S2—Deteksyon varyasyon nan rantabilite selil HEK-293 ak MDCK enkubasyon ak yon kantite lajan ogmante nan fraksyon karotenoid anrichi soti nan pasta Buckwheat ak pasta ze sou mwayen ak MMPP pou 72 (HEK-293) ak 24 ( MDCK) èdtan. * p < {{20}}.5,="" **="" p="">< 0.01,="" ***="" p="">< {{30}}.001="" .="" tablo="" s3—deteksyon="" varyasyon="" viabilite="" selil="" hek-293="" enkubate="" ak="" ogmantasyon="" kantite="" ekstrè="" idroalkolik="" ki="" soti="" nan="" pasta="" buckwheat,="" pasta="" rye,="" ak="" pasta="" ze="" sou="" mwayen="" ak="" mmpp="" pou="" 72="" èdtan.="" *="" p="">< 0.5,="" **="" p="">< 0.01,="" ***="" p="">< 0.001.="" tablo="" s4—deteksyon="" varyasyon="" viabilite="" selil="" mdck="" enkubate="" ak="" yon="" ogmantasyon="" kantite="" ekstrè="" idroalkolik="" ki="" soti="" nan="" pasta="" buckwheat,="" pasta="" rye,="" ak="" pasta="" ze="" sou="" mwayen="" ak="" mmpp="" pou="" 24="" èdtan.="" *="" p="">< 0.5,="" **="" p="">< 0.01,="" ***="" p="">< 0.001.="" figi="" s1:="" ms="" spectre="" nan="" kaempferol="" nan="" buckwheat="" kwit="" pasta="" ekstrè="" idroalkolik.="" figi="" s2:="" ms="" spectre="" nan="" quercetin="" nan="" buckwheat="" kwit="" pasta="" idroalcoolik="" ekstrè.="" figi="" s3:="" ms="" spectre="" nan="" rutin="" nan="" ekstrè="" idwoalkolik="" pasta="" kwit.="" figi="" s4:="" ms="" spectre="" nan="" asid="" ferulic="" youn="" nan="" rye="" kwit="" pasta="" ekstrè="" idroalcoolik.="" figi="" s5:="" ms="" spectre="" nan="" glikozid="" apigenin="" nan="" ze-kwit="" pasta="" idroalkolik="" ekstrè.="" figi="" s6:="" vitabilite="" selil="" deteksyon="" hek-293="" enkubate="" ak="" yon="" ogmantasyon="" kantite="" asid="" indoleacetic,="" -karotèn="" ak="" asid="" kafeyik="" pou="" 24="" (a)="" ak="" 48="" (b)="" èdtan="" valè="" rapòte="" yo="" koresponn="" ak="" mwayen="" viabilite="" selil="" ak="" erè="" estanda="" plis="" pase="" twa="" replike="" byolojik.="" pousantaj="" nan="" viabilite="" selil="" yo="" te="" kalkile="" lè="" l="" sèvi="" avèk="" rapò="" a="" abstest="">

Referens

1. Lacatus,u, CM; Grigorescu, ED; Floria, M.; Onofriescu, A.; Mihai, BM Rejim Mediterane a: Soti nan yon kilti manje ki baze sou anviwònman an rive nan yon preskripsyon medikal k ap parèt. Ent. J. Environ. Res. Sante Piblik 2019, 16, 942.

2. Jacobs, DR; Gross, MD; Tapsell, LC Sinèrji manje: Yon konsèp operasyonèl pou konprann nitrisyon. Am. J. Clin. Noutr.2009, 89, 1543S.

3. De Lorgeril, M.; Salen, P.; Martin, J.-L.; Monjaud, I.; Delaye, J.; Mamelle, N. Rejim Mediterane, Faktè risk tradisyonèl yo, ak pousantaj konplikasyon kadyovaskilè apre enfaktis myokad. Sikilasyon 1999, 99, 779–785.

4. Psaltopoulou, T.; Naska, A.; Orfanos, P.; Trichopoulos, D.; Mountokalakis, T.; Trichopoulou, A. Lwil oliv, rejim alimantè Mediterane a, ak tansyon atè: grèk Ewopeyen an Prospective Envestigasyon nan Kansè ak Nitrisyon (EPIC) etid. Am. J. Clin. Noutr. 2004, 80, 1012–1018.

5. Estruch, R.; Woz.; Salas-Salvad6, J.; Covas, M.-I.; Corella, D.; Ar6s, F.; G6mez-Gracia, E.; Ruiz-Gutierrez, V.; Fiol, M.; Lapetra, J.; et al. Prevansyon prensipal maladi kadyovaskilè ak yon rejim alimantè Mediterane. Z. Gefassmedizin 2013, 10, 28.

6. Uusitupa, M.; Khan, TA; Viguiliouk, E.; Kahleova, H.; Rivellese, AA; Hermansen, K.; Pfeiffer, A.; Thanopoulou, A.; Salas- Salvad6, J.; Schwab, U.; et al. Prevansyon dyabèt tip 2 pa chanjman fòm: yon revizyon sistematik ak meta-analiz. Eleman nitritif 2019, 11, 2611.

7. Jannasch, F.; Kröger, J.; Schulze, MB Modèl dyetetik ak dyabèt tip 2: Yon revizyon literati sistematik ak meta-analiz nan syans potentiels. J. Nutr. 2017, 147, 1174–1182.

8. Esposito, K.; Chiodini, P.; Maiorino, MI; Bellastella, G.; Panagiotakos, D.; Giugliano, D. Ki rejim pou prevansyon dyabèt tip 2? Yon meta-analiz nan etid potentiels. Andokrin 2014, 47, 107–116.

9. Huo, R.; Du, T.; Xu, Y.; Xu, W.; Chen, X.; Solèy, K.; Yu, X. Efè rejim alimantè Mediterane-style sou kontwòl glisemi, pèdi pwa ak faktè risk kadyovaskilè nan mitan moun dyabèt tip 2: Yon meta-analiz. Lajan ewo. J. Clin. Noutr. 2015, 69, 1200–1208.

10. Martin-Peldez, S.; Fito, M.; Castaner, O. Efè rejim alimantè Mediterane a sou prevansyon dyabèt tip 2, pwogresyon maladi, ak mekanis ki gen rapò. Yon revizyon. Eleman nitritif 2020, 12, 2236.

11. Milajerdi, A.; Namazi, N.; Larijani, B.; Azadbakht, L. Asosyasyon an nan endis kalite dyetetik ak mòtalite kansè: yon revizyon sistematik ak meta-analiz nan etid kòwòt. Noutr. Kansè 2018, 70, 1091–1105.

12. Schwingshackl, L.; Schwedhelm, C.; Gilbert, C.; Hoffmann, G. Aderans a rejim alimantè Mediterane ak risk kansè: Yon revizyon sistematik ak meta-analiz mete ajou. Eleman nitritif 2017, 9, 1063.

13. Say6n-Orea, C.; Razquin, C.; Bull6, M.; Corella, D.; Fit6, M.; Romaguera, D.; Vioque, J.; Alonso-G6mez, AM; Wärnberg, J.; Martinez, JA; et al. Efè yon entèvansyon nitrisyonèl ak konpòtman sou enèji redwi aderans rejim Mediterane a nan mitan pasyan ki gen sendwòm metabolik: analiz pwovizwa nan esè klinik PREDIMED-Plus randomized. JAMA J. Am. Med. Asoc. 2019, 322, 1486–1499.

14. Bajerska, J.; Chmurzynska, A.; Muzsik, A.; Krzyz˙ anowska, P.; Ma˛dry, E.; Malinowska, AM; Walkowiak, J. Pèt pwa ak efè sante metabolik soti nan rejim alimantè Mediterane ak Santral-Ewopeyen ki gen restriksyon sou enèji nan fanm postmenopausal: Yon jijman owaza kontwole. Sci. Rep. 2018, 8, 11170.

15. Estruch, R.; Martinez-Gonzalez, MA; Corella, D.; Salas-Salvad6, J.; Fit6, M.; Chiva-Blanch, G.; Fiol, M.; G6mez-Gracia, E.; Ar6s, F.; Lapetra, J.; et al. Efè yon rejim alimantè Mediterane ki gen anpil grès sou pwa kò ak sikonferans ren: Yon analiz rezilta segondè prespesifye nan esè PREDIMED owaza kontwole. Lancet Dyabèt Endocrinol. 2019, 7, e6–e17.

16. Molendijk, M.; Molero, P.; Ortuño Sdnchez-Pedreño, F.; Van der Does, W.; Angel Martinez-Gonzalez, M. Kalite rejim alimantè, ak risk depresyon: Yon revizyon sistematik ak meta-analiz dòz-repons nan syans potentiels. J. Afekte. Dezòd. 2018, 226, 346–354.

17. Wu, L.; Solèy, D. Aderans ak rejim alimantè Mediterane ak risk pou yo devlope maladi mantal: Yon revizyon sistematik mete ajou ak meta-analiz nan etid kowòt potentiels. Sci. Rep. 2017, 7, 1–9.

18. Loughrey, DG; Lavecchia, S.; Brennan, S.; Lawlor, BA; Kelly, ME Enpak rejim alimantè Mediterane a sou fonksyonman mantal granmoun aje ki an sante: Yon revizyon sistematik ak meta-analiz. Adv. Noutr. 2017, 8, 571–586.

19. Arnold, SE; Arvanitakis, Z.; Macauley-Rambach, SL; Koenig, AM; Wang, HY; Ahima, RS; Atizana, S.; Gandy, S.; Buettner, C.; Stoeckel, LE; et a Rezistans ensilin nan sèvo nan dyabèt tip 2 ak maladi alzayme: Konsèp ak enigm. Nat. Rev Neurol. 2018, 14, 168–181.

20. Trichopoulou, A.; Vasilopoulou, E. rejim alimantè Mediterane, ak lonjevite. Br. J. Nutr. 2020, 84, S205–S209.