Analiz pwoteòm ak kapasite antiviral, antikansè ak antioksidan nan ekstrè akeuz Lentinula Edodes ak dyondyon manjab Pleurotus Ostreatus.

Pou plis detay, tanpri kontaktetina.xiang@wecistanche.com

Résumé: Nan etid sa a, nou egzamine ekstrè akeuz nan dyondyon manjab Pleurotus ostreatus (djondjon zuit) ak Lentinula edodes (djondjon chiitake). Analiz Proteome te fèt lè l sèvi avèk LC-Triple TOF-MS epi li te montre ekspresyon 753 pwoteyin pa Pleurotus ostreatus ak 432 pwoteyin pa Lentinula edodes. Peptid byoaktif: Inibitè disosyasyon Rab GDP, superoksid dismutase, thioredoxin reduktaz, serine proteinase, ak lectin, yo te idantifye nan tou de dyondyon. Ekstrè yo gen ladan tou konpoze bioaktif pwomèt ki gen ladan fenolik,flavonoid, vitamin, ak asid amine. Ekstrè yo te montre pwomètaktivite antiviral, ak yon endèks selektivite (SI) nan 4.5 pou Pleurotus ostreatus kont adenovirus (Ad7), ak yon ti aktivite pou Lentinula edodes kont èpès senp-II (HSV -2). Ekstrè yo pa t 'sitotoksik nan selil nòmal moun periferik mononukleè (PBMCs). Okontrè, yo te montre sitotoksisite modere kont plizyè liy selil kansè yo. Anplis de sa, yo te evalye aktivite antioksidan lè l sèvi avèk DPPHdechaj radikal, ABTS radikal cation scavenging, ak tès ORAC. De ekstrè yo te montre potansyèlaktivite antioksidan, ak aktivite maksimòm yo wè pou Pleurotus ostreatus (IC50 ug/mL) =39.46 ± 1.27 pou DPPH; 11.22±1.81 pou ABTS; ak 21.40±2.20 pou tès ORAC. Etid sa a ankouraje itilizasyon dyondyon sa yo nan medikaman an nan limyè sitotoksisite ki ba yo sou PBMC nòmal yo menm jan ak kapasite antiviral, antitumoral ak antioksidan yo.

Mo kle: chanpiyon blan-pouri; Pleurotus ostreatus; Lentinula edodes; chiitake; antioksidan; antitumoral; antiviral

1. Entwodiksyon

Chanpiyon yo gen gwo kandida nan medikaman ak pwodiksyon nutraceutical. Anplis de sa yo gen bon pwopriyete organolèptik ak gwo valè nitrisyonèl, anpil dyondyon yo te rapòte yo gen yon myriad nan aktivite famasi [1-3]. Pami dyondyon ki pi kiltive yo se Lentinula edodes (djondjon shiitake) ak Pleurotus ostreatus (djondjon zuit). Shiitake vini an dezyèm apre Agaricus bisporus kòm djondjon manjab ki pi konsome atravè lemond [4]. Chanpiyon sa a gen yon efè pwomèt anti-bakteri, antifonjik, antiviral, epatopwotektif, anti-ipèglisemi, ak efè imunomodulatwa [5-7]. Li se moun rich nan molekil byoaktif, ki pi etidye a se "lentinan", yon polisakarid ki gen yon efè kont bakteri, viris, ak timè, anplis "lentinan", ki te montre èd nan kontwole dislipidemi ak ipèglisemi [8]. Pleurotus ostreatus, espès ki pi komen nan genus Pleurotus [9], ke yo rele tou djondjon zuit, se yon dekonpozisyon bwa e li gen yon pakèt aktivite byolojik [10]. An konparezon ak lòt dyondyon ki ka geri, dyondyon zuit yo ap vin pi popilè kòm pwomotè sante [11]. Prezans nan yon gwo kantite konpozan nourisan tankou lektin, polisakarid, vitamin, ak mineral nan dyondyon zuit fè yo kapab posede potansyèl antikansè,antioksidan, pwopriyete antidyabetik, antimikwòb, ak anti-ipèkolesterolemi [12,13]. An konparezon ak lòt dyondyon manjab, witr ak dyondyon chiitake gen yon peryòd kwasans kout epi yo ka rekòlte pandan tout ane a 14. Kòm yon rezilta nan fasilite yo nan kiltivasyon ak tès, gwo valè nitrisyonèl, ak pwomèt benefis medsin, dyondyon sa yo gen yon potansyèl fòmidab. nan endistri manje ak pharmaceutique [4,15]. Vreman vre, pi wo Basidiomycetes ka pwomèt sous manje multifonksyonèl.

Anpil konpoze byoaktif, ki gen ladan sik, pwoteyin fizyolojik aktif, asid gra enstore, fenolik (asid fenolik ak polifenol), flavonoid, terpenoid, glikoprotein, poliketid, estewoyid, ak alkaloid, yo te jwenn nan de dyondyon sa yo [16,17]. Konpoze sa yo aji sèlman oswa sinèrjetik pou pote gwo aksyon famasi fongis sa yo. Yo rapòte chiitake ak dyondyon zuit yo gen aktivite anti-bakteri, antiviral, antiipèrtansif, imunomodulateur, ak antioksidan [1,18,19]. Seo et al. [20] te rezime mekanis aktivite antiviral biomolekil djondjon yo, sa ki endike ke rediksyon nan enfeksyon viral se sitou nan entèfere ak absòpsyon viris la nan selil lame yo, replikasyon li yo, ak pwoteyin li yo ak sentèz anzim yo, anplis de estimile a. lame repons iminitè [21]. Antioksidan yo se molekil enpòtan nan fè fas a espès oksijèn reyaktif ki dèyè anpil pwoblèm sante. Depi anpil drapo wouj te leve kont itilizasyon antioksidan sentetik, etid natirèl yo te vin obligatwa [22]. Efè anti-tumeur pwodui djondjon sa yo te gen rapò ak biomolekil ki gen ladan glukan, ergosterol, proteoglikan, ak asid amine (arginin ak glutamin) [23]. Mekanis postulate ki kache efè sa a ka gen ladan eksitasyon nan lenfosit T, repwesyon neovaskularizasyon, ak endiksyon lanmò selil kansè yo, anplis deklanche repons iminitè kont selil kansè yo [24,25].

Pwoteomik te pwouve tèt li kòm youn nan zouti ki gen anpil valè nan rechèch byo, patikilyèman rechèch agrikòl [26]. Lindequist et al. [27] se te premye gwoup ki te fè limyè sou enpòtans ki genyen nan anplwaye proteomik nan rechèch djondjon manjab. Yo te mete aksan sou nesesite pou itilize "omics" pou etid la nan molekil bioaktif chanpiyon. Pwoteomik yo te itilize raman nan rechèch djondjon manjab vis à vis fongis patojèn [28]. An konsekans, objektif etid sa a se te analize pwoteòm de dyondyon manjab yo, Pleurotus ostreatus ak Lentinula edodes, epi envestige potansyèl yo.antiviral, antitumoral, ak aktivite antioksidan.

2. Rezilta yo

2.1.Proteom1e analiz

Analiz Proteome te fèt lè l sèvi avèk analiz LC-Triple TOF-MS ak yon to dekouvèt fo (FDR) nan<5% and="" a"95%="" confidence="" of="" identification".="" for="" p.ostreatus,="" a="" total="" of="" 753="" proteins="" were="" identified,34="" of="" which="" were="" reversed="" hits.="" a="" total="" of="" 432="" proteins="" were="" detected="" in="" ledodes,="" 48="" of="" which="" were="" reversed="" hits.="" the="" recorded="" accession="" numbers="" of="" the="" proteins="" are="" included="" in="" tables="" s1="" and="" s2="" for="" p.="" ostreatus="" and="" l.edodes,="" respectively.="" in="" tables="" s1="" and="" s2,="" the="" ms-triple="" tof="" data="" were="" analyzed="" by="" proteinpilot="" with="" the="" paragon="" algorithm.="" proteins="" were="" identified="" with="" peptides="" that="" gave="" more="" than="" a="" 95%="" confidence="" of="" identification.="" bioactive="" proteins:="" rab="" gdp="" dissociation="" inhibitor,="" superoxide="" dismutase,="" thioredoxin="" reductase,="" serine="" proteinase,="" and="" lectin,="" were="" expressed="" in="" both="" p.ostreatus="" and="" l.edodes="" extracts="" [29-35].="" p.="" ostreatus="" also="" expressed="" osteolysis="" and="" pleurotolysin,="" whereas="" latch="" pin="" and="" valosin-containing="" protein="" were="" expressed="" by="" l.edodes.="" lc-triple="" tof-ms="" spectra="" of="" the="" mushroom="" extracts="" analyzed="" by="" analyst="" tf1.7.1="" (sciex="" software)="" are="" shown="" in="">

2.2. Total Konpoze Bioaktif Kontni Total

Nan evalye kontni total la, sa enkli evalyasyon total idrat kabòn, pwoteyin, fenolik, ak flavonoid. Ekstrè P. ostreatus la te genyen prèske twa kantite idrat kabòn ak doub kantite pwoteyin ki prezan nan ekstrè L.edodes; kanmenm, yo te detekte plis flavonoid nan ekstrè L.edodes pase ekstrè P. ostreatus (Tablo 1).

2.3. Molekil fenolik ak flavonoid

Tou de ekstrè djondjon yo te genyen catechin (detekte nan yon tan retansyon nan 26.48min). P.ostreatus enkli kaempferol ak apigenin (detekte nan tan retansyon nan 59.13 min ak 59.56 min, respektivman), tandiske L.edodes te genyen tou quercetin (tan retansyon=56.86 min; Tablo 2; Figi). S1).

2.4.Vitamin

Yo te detèmine kontni vitamin nan dlo-idrosolubl ak grès-idrosolubl atravè HPLC (Tablo 3 ak Figi S2 ak S3). Tou de dyondyon yo rich nan vitamin C, ak kantite detekte nan vitamin B3, B6, ak D. Pa te gen okenn diferans enpòtan ant tou de dyondyon nan kantite vitamin yo posede. Nan lòt men an, vitamin B1, B2, B9, A, ak E yo pa detekte nan tou de dyondyon.

2.5. Analiz asid amine

Yo te itilize yon Sykam Amino Asid Analyzer pou analiz asid amine. Kontni asid amine total yo te 5.14 ak 4.35 nan P.ostreatus ak L.edodes, respektivman, jan yo montre nan tablo 4, ak de dyondyon yo rich nan asid glutamik. Pandan ke yo te detekte prolin nan yon konsantrasyon konsiderab (0.57 g/100g pwoteyin) nan ekstrè P. ostreatus, li pa te detekte nan ekstrè L.edodes. Histidine ak asid aspartik yo pa detekte nan youn nan de dyondyon yo.

2.6. Aktivite byolojik

2.6.1.Aktif Antiviral

Yo te evalye aktivite antiviral kont de viris: adenovirus ak èpès senp-II. Jan yo montre nan tablo 5, ekstrè P.ostreatus la te montre yon aktivite antiviral efikas kont adenovirus, ak yon endèks selektivite ki wo 4.5. Pwomèt efè antiviral yo te anrejistre tou pou ekstrè P. ostreatus kont èpès senp-II ak pou ekstrè L.edodes kont tou de viris. Figi S4 ak S5 reprezante koub dòz-repons yo.

2.6.2. Aktivite Sitotoksik Kont Nòmal Moun PBMCs

Sitotoksisite minimòm (IC50 ug/mL; 66.41±3.7 ak 82.81± 2.72, pou P.ostreatus ak L. edodes, respektivman) te anrejistre kont nòmal PBMC imen.

Kont liy selil kansè yo

Yo te itilize plizyè liy selil kansè nan tès sa a ki gen ladan kansè pwostat (DU-145 ak PC3); karsinom epatoselilè (HepG2); kansinòm kolorektal (Colo-205); kansòm sis (LS-513); kansè nan matris (HeLa); ak adenokarcinom tete (MDA-MB-231 ak MCF-7). Doxorubicin te itilize kòm yon kontwòl pozitif (ki te koze yon diminisyon nan viabilite a 53 pousan nan HepG2; 44 pousan nan MDA-MB-231; 39 pousan nan PC3; 35 pousan nan DU-145; 29 pousan nan MCF -7:25 pousan nan LS-513;23 pousan nan HeLa; ak 19 pousan nan selil Colo-205). Rezilta yo nan Figi 2 montre ke ekstrè Ledodes ak P. ostreatus diminye viabilite liy selil kansè yo teste nan LS-513, HepG2, DU-145, ak PC-3 pa apeprè 20. pousan.

Kont lesemi ak liy selil lenfom

Ekstrè djondjon nan P.ostreatus ak L.edodes yo te teste pou sitotoksisite kont lesemi (CCR-CEM, NB-4, THP-1) ak selil lenfom (U937). Doxorubicin te estanda pozitif la, sa ki lakòz yon diminisyon nan viabilite selil a 29 pousan, 25.5 pousan, 20.3 pousan, ak 19.1 pousan nan U937, NB4, CCRF-CEM, ak selil THIP1, respektivman. Ekstrè L.edodes diminye viabilite selil THP1 a 66.02 pousan, tandiske ekstrè P.ostreatus redwi viabilite selil CCRF-CEM a 70.64 pousan (Figi 3).

2.6.3. Aktivite antioksidan

Rezilta yo nan efè a antioksidan yo te etidye pa twa metòd evalyasyon yo, sètadi, DPPHdechaj radikal, ABTS radikal cation scavenging, ak tès ORAC, an konparezon ak estanda antioksidan, Trolox, yo montre nan Tablo 6 ak Figi S6a,b. Rezilta yo montre ke ekstrè P. ostreatus la te gen yon kapasite antioksidan ki pi pisan pase ekstrè L.edodes, jan sa endike nan twa tès antioksidan yo itilize. Figi 4 montre pouri siyal fluorescein pwovoke pa ekstrè yo nan tès ORAC la.

3. Diskisyon

Champignons pouri blanch te brase enterè kominote syantifik la akòz pwopriyete medsin yo, ki gen ladan modulation sistèm iminitè, aktivite ipoglisemi ak antitronbotik, ak pwopriyete anti-ipèrtansif, anti-enflamatwa, antimikwòb, ak antitumoral, osi byen ke kapasite nan bese nivo kolestewòl nan san. 24,36-38]. De fongis blan-pouri P. ostreatus ak L.edodes se de nan dyondyon manjab ki pi konsome nan anpil peyi [39]. De dyondyon sa yo pwodui yon pakèt pwoteyin bioaktif, e kounye a, analiz pwoteòm se zouti ki pi efikas pou pwofil pwoteyin [40]. Nan etid aktyèl la, analiz proteome te montre ekspresyon de pwoteyin bioaktif ki gen ladan inibitè disosyasyon Rab GDP, thioredoxin reduktaz, serine proteinase, superoxide dismutase, ak lektin nan de dyondyon tès yo. Inibitè disosyasyon Rab GDP (Rab GDI) kontwole fonksyon Rab GTPases ki jwe yon wòl esansyèl nan trafik manbràn nan selil timè yo. An konsekans, lè l sèvi avèk Rab GDI se yon estrateji antikansè pwomèt [29].

Serine proteinase kontribye nanantiviralaktivite dyondyon manjab [30,31]. Anplis, Yap et al. (2018) rapòte fò sitotoksisite selektif nan serin proteinase nan fè fas a yon liy selil adenokarcinom nan tete imen (MCF7) e li sijere ke mekanis la enplike efè kolaborasyon tou de mekanis lanmò selil extrinsèques ak intrinsèques, anplis eksitasyon kaspase {{ 4}} ak -9 ak anpèchman Bcl-2 [41].

Konsomasyon nanantioksidanse yon estrateji pwofilaktik favorab kont espès oksijèn reyaktif (ROS)-medyatè fizyoloji [22]. Rezilta nou yo montre ekspresyon de anzim nan sistèm defans antioksidan pa Pleurotus ostreatus ak Lentinula edodes. Anzim sa yo gen ladan superoksid dismutase, katalaz, ak glutatyon peroksidaz, ki kontrebalans pwodiksyon ROS [32]. Superoxide dismutase kòmanse pa konvèti superoksid nan oksijene idwojèn, ki se, nan vire, konvèti pa katalaz ak glutatyon peroksidaz nan dlo [33].

Ekspresyon lectin te detekte tou nan de dyondyon yo. Anpil chèchè rapòte pwofil yo konsiderableman divès byolojik nan lectin ak yon seri vas nan aktivite ki kouvri anti-enflamatwa, depresè, anti-konsepsyon ak vazodilatory aktivite-lyen [34,35,42]. Lektin yo se pwoteyin ki mare idrat kabòn ak yon varyete fonksyon selilè ki gen ladan in vitro ak in vivo repwesyon nan kwasans timè atravè lyezon selektif nan manbràn selil timè yo oswa reseptè yo, sa ki lakòz aktivasyon an nan pwoteyin kinas, oswa modulasyon nan repons iminitè atravè pwodiksyon interleukin. [43]. Anplis de sa, lektin djondjon tou gen yon wòl nan deklanche diferan chemen lanmò selil, ki gen ladan apoptoz, nekwoz, ak / oswa otofaji [42].

Done nou yo montre ekspresyon tou de osteoliz ak pleurotolysin nan Pleurotus ostreatus. Sa yo se pwoteyin ki fòme pò ak aktivite antikansè trè selektif [44,45]. Ostreolysin se yon pwoteyin cytolytic 15 kDa ak kapasite nan pèmeabilize eritrosit ak lòt selil nan konsantrasyon sub-mikromolar. Li aji atravè yon mekanis osmotik koloyid ak pwovoke fòmasyon nan porositë manbràn lajè |46,47I. Nimri et al. te pwodwi pleurotolysin recombinant ak aktivite antitumoral ki pisan kont selil timè nan kolon imen ak sourit [48].

Nan L.edodes, yo te eksprime pwoteyin ki gen valozin ak peny latch. Valosin ki gen pwoteyin te deja rapòte ke yo genyenantioksidanpwopriyete ki ta ka ede nan sendwòm newòn tankou maladi alzayme a, esklewoz lateral, ak demans [49-51]. Latcripin se yon potansyèl ajan antikansè [50]. Riaz Ud Din et al.(2020) te envestige mekanis antikansè nan latch pin kont liy selil kansè nan tete. Yo rapòte kapasite li pou pwovoke lanmò selil ak otofaji, anplis efè inhibition li sou migrasyon ak envazyon [52].

Yon seri de konpoze bioaktif te quantifier nan P.ostreatus ak L.edodes ekstrè. TPN nan 19.37 ± 0.39 ak 24.14 ± 1.01 mg / g nan ekstrè pou P.ostreatus ak L.edodes, respektivman, yo te detekte nan etid aktyèl la. Valè sa yo pi wo pase sa yo anrejistre pa Rahimah et al., ki te itilize tès amonyòm ak Shinoda pou quantifier kontni total flavonoid P. ostreatus kòm 6.67 mg/g ekstrè a [53]. Anplis de sa, rezilta nou yo pi wo pase sa yo jwenn pa Montibus et al., ki te teste TPC a nan L edodes ekstrè lè l sèvi avèk metòd Folin-Ciocalteu epi yo te jwenn 0.8-1.5 pousan pwa sèk (DW) nan bouchon yo ak 0.8-1.1 pousan dw nan stipes yo [54].

Catechin te detekte nan tou de P. ostreatus ak L.edodes ekstrè. Catechin se yon metabolit fenolik segondè nan plant, ak pwopriyete ki pisan radikal gratis [55]. Ekstrè L.edodes yo te jwenn ki genyen quercetin flavonoid la. Efè antioksidan quercetin se medyatè atravè règleman an nan nivo glutatyon ak yon ogmantasyon nan pwodiksyon an nan anzim antioksidan ki gen ladan glutatyon transferaz ak Aldo-keto reduktaz [56]. Anplis de sa, yo rapòte kercetin gen aktivite antitumoral nan entèwonp sik selilè a ak ankouraje apoptoz [57,58]. Lee et al. rapòte ke quercetin lakòz arestasyon selilè nan liy selil kansè PC3, Du145, ak U937 [59]. Rezilta nou yo tou revele ke kaempferol ak apigenin yo te jwenn nan P.ostreatus. Kaempferol ak apigenin yo te pwouve yo gen aktivite antioksidan ak anti-proliferasyon [60-62]. Asid glutamik yo te jwenn asid amine ki pi abondan nan tou de ekstrè djondjon. Nan menm sans lan, Chirinang et al.analize kontni asid amine P. ostreatus ak P. major-caju epi li te jwenn ke kontni asid glutamik te pi wo a, ki te swiv pa asid aspartik ak Lè sa a, arjinin [63].

P.ostreatus ak L. edodes te montre aktivite antiviral pwomèt kont adenoviris ak èpès senp viris-II, ak SI a rive nan 4.5 pou ekstrè P. ostreatus kont adenovirus. Yo te itilize SI a pou evalye efikasite ak sekirite ekstrè yo jan li estime fenèt ant aktivite sitotoksik ak antiviral yo. Plis SI a pi wo, se pi an sekirite ak pi efikas konpoze an [64,65]. Done ki gen rapò yo te fèk montre pa Urbancikova et al., kote pleuran (ensolubl -1,3/1,6-D-glucan izole nan P. ostreatus) ki baze sou sipleman te siyifikativman vin pi kout dire viris èpès senp. -I sentòm, ak pi ba severite nan sentòm respiratwa, nan èpès senp viris-I-pozitif pasyan pase gwoup la plasebo, san yo pa efè segondè enpòtan, pwopoze pleural pou posib itilizasyon nan lavni nan tretman an nan viris egi èpès senp-I [66].

Efè antiviral dyondyon yo se sitou akòz entèfere ak absòpsyon viral, replikasyon, aktivite anzim, ak fonksyone peptides osi byen ke potansyèl sistèm iminitè lame a [67]. Seo and Choi (2021) pwopoze ke -glucan nan fraksyon nan polisakarid P.ostreatus ak L.edodes ka responsab pou efè antièpètik li yo atravè efè pre-ak apre-tretman [20]. Efè anti-VIH nan ekstrè akeuz P. ostreatus ak L.edodes ka koze pa anpèchman anzim transkriptaz ranvèse pa pwoteyin ubiquitin ak leptin, respektivman [68,69].

Ekstrè akeuz nan dyondyon nou yo te montre yo anpeche viabilite nan liy selil kansè yo teste nan apeprè 20 pousan. Nou te wè tou efè menm jan an kont liy selil lesemi ak lenfom, ak yon diminisyon nan viabilite a 66 pousan ak ekstrè L.edodes kont selil THP1leukemia, ak 70.6 pousan ak ekstrè P.ostreatus kont selil lesemi CCRF-CEM. Yo te deja rapòte ekstrè akeuz misyèl ak kò fwi nan L.edodes yo fè aksyon anti-proliferatif ak apoptotik sou MCF-7 selil kansè nan tete[70]. Fraksyon acetate etil la ak -glucan nan L.edodes te sitou responsab pou aksyon sa yo [71,72]. Nan menm kontèks la, ekstrè P. ostreatus la te kapab montre aktivite anti-proliferatif nan direksyon MCF-7 ak MDA-MB{-231 selil adenokarcinom tete [73], ak 6-glucans ki lye yo. nan ekstrè a potansye cytotoxisite asasen natirèl la kont selil kansè nan tete ak nan poumon [74]. Dènyèman, Jakopovic et al. te jwenn ke preparasyon medsin djondjon ki gen ladan 6 ak 10 dyondyon ki gen ladan L.edodes ak P. ostreatus ekspoze siyifikatif efè anti-proliferatif ak pro-apoptotik sou liy selil timè (HCT-116, SW620) [75]. Okontrè, otè yo remake ke efè a sou yon liy selil fibroblast imen (WI-38) te proliferatif, ki montre espesifik nan preparasyon djondjon sa yo nan direksyon liy selil timè. Menm jan an tou, nou te detekte sitotoksisite minim dyondyon nou yo elimine kont nòmal PBMC imen. Konklizyon sa a tou sijere itilizasyon an sekirite nan dyondyon nou yo.

Sitotoksisite dyondyon yo te atribiye nan yon pakèt molekil ki gen ladan x- ak -glucans, pwoteyin, glikoprotein, asid gra, antagonist nukleozid, terpenoid, ak konpoze fenolik [76]. Abdalla et al. (2012) pwopoze ke ekstrè djondjon siprime pwopagasyon selil kansè nan tete pa anpeche aktivite aromatase [77]. Imam et al. (2021) izole yon asid endol-3-laktik nan Ledodes ki anpeche divizyon selil adenokarcinom nan poumon [78]. Yukawa et al. (2012) sigjere ke efè apoptotik dirèk L edodes mycelia sou selil HepG2 se atravè aktivasyon caspase-3 ak -8 chemen reseptè lanmò [79]. Wu et al.(2011) te etidye efè cytotoxik ekstrè pwoteyin P. ostreatus sou selil adenokarcinom kolorektal imen (SW480) ak yon lesemi monositik imen, THP -1 (selil), e li te rapòte jenerasyon ROS, fatig. nan glutatyon, chanjman nan potansyèl manbràn mitokondriyo ak dezentegrasyon nan ADN oligonucleosomal, sa ki lakòz apoptoz nan selil SW480 [80].

Kòm antioksidan pa aji atravè yon sèl mekanis, evalyasyon kapasite antioksidan anjeneral fèt atravè plis pase yon metòd [81]. Nan etid sa a, yo te itilize twa metòd evalyasyon, sètadi, tès DPPH, ABTS, ak ORAC. Mekanis antioksidan SET (single electron transfer) te evalye atravè tès DPPH, pandan y ap analiz ABTS ak ORAC yo te itilize pou reyaksyon HAT (transfè atòm idwojèn) [81]. Egzamen ORAC la bay estimasyon ki pi egzak paske li konbine tan anpèchman ak degre anpèchman nan yon sèl tèm [82]. Pandan ke tès fosfomolybdate la souvan itilize pou eksprime kapasite total antioksidan (TAC), tout twa metòd yo itilize

nan maniskri sa a yo te rapòte evalye TAC la. Munteanu ak Apetrei (2021), nan revizyon yo sou metòd yo itilize nan detèmine aktivite antioksidan, te dekri ABTS radikal scavenging tès la kòm yon "metòd senp ak pratik yo itilize pou mezire total kapasite antioksidan (TAC)" [83]. Nan etid konparatif yo, Csepregi et al. (2016) te konpare kat metòd yo itilize pou evalyasyon TAC a, ki te Trolox ekivalan kapasite antioksidan (TEAC), potansyèl antioksidan rediksyon ferrik (FRAP), 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) tès scavenging radikal, ak reyaktif Folin-Ciocalteu (FCR)[84].Nan 2013, Ou et al.entwodwi ORAC kòm yon metòd roman pou evalyasyon TAC a [85].Nan menm venn lan, Rubio et al.(2016). )klasifye tès ORAC la kòm pami metòd dirèk pou detèmine TAC a, ansanm ak TEAC [86]. Rezilta tès ABTSand ORAC yo montre ke ekstrè P. ostreatus ak L.edode gen kapasite antioksidan ki pi wo pase antioksidan estanda Trolox.

Efè antioksidan de dyondyon yo ka atribiye a prezans nan anpil konpozan byoaktif ki gen ladanflavonoid, fenolik, peptides byoaktif, ak vitamin C [87]. Gaber et al. te konpare ABTS, DPPH, ferrik diminye pouvwa antioksidan (FRAP), ak ORAC analiz pou evalye kapasite antioksidan nan ekstrè gwayav epi rapòte yon korelasyon pozitif ant pouvwa antioksidan, jan yo detèmine pa kat metòd yo, ak kontni an vitamin C ak TPN. Nan lòt men an, yo anrejistre yon korelasyon negatif ak kontni an karotenoid [88]. DPPH(1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazil) se yon radikal lib ki estab ki gen yon elèktron valens ki pa pè nan yon atòm pon nitwojèn; konsa, scavenging nan radikal DPPH la se baz popilè DPPH antioksidan tès la [89]. Kasyon radikal 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate) (ABTS) pèdi koulè ble li lè yo redwi pa yon antioksidan, epi chanjman koulè a ​​ka mezire espektwofotometrik [90]. Esè ORAC la mezire degradasyon oksidatif pwofonde fliyoresan an pa radikal gratis ki entèwonp pa sibstans antioksidan an. An konsekans, pi fò kapasite antioksidan an, se pi kout tan ki nesesè pou etenn fliyoresans la [91]. Anplis de sa, depi ekstrè yo teste yo te montre efè antioksidan pwomèt lè yo teste atravè metòd yo mansyone anwo a, li ka konkli ke yo aji nanscavenging radikal gratis. Sepandan, dyondyon yo teste yo te genyen kontni konsiderab flavonoid total, epi kòm flavonoid yo te lye nan aktivasyon an nan faktè a transcription Nrf2 (2017), sa a ka ajoute kòm yon mekanis putatif [92].

4. Materyèl ak Metòd

4.1.Preparasyon nan espès djondjon ak Sou-Kilti

Yo te jwenn dyondyon P. ostreatus ak L.edodes idantifye deja, kòm anjandre ak/oswa kò fruktifikasyon, nan koleksyon kilti Sant Rechèch Agrikilti a, Cairo, peyi Lejip [93,94]. Lam chirijikal yo te itilize pou koupe fwi a aseptik pou sub-kilti nan kò fruktifikasyon djondjon. Miseli enteryè yo te rekòlte lè l sèvi avèk zegwi esteril ak sub-kilti nan plak esteril Potato Dextrose Agar (PDA) (Merck, Darmstadt, Almay)95]. Pou sub-kiltive anjandre chanpiyon, yo te itilize forceps esteril pou chwazi grenn yo epi transfere yo nan yon plak esteril PDA, ki te enkube a 28 degre pou 7 jou, epi yo te lave kò fruktifikasyon chak souch separeman. Yo te kite chak izole (500 g) pou 48 èdtan nan tanperati chanm nan lè sèk, tè manyèlman nan yon moulen kwizin, epi estoke nan tanperati chanm nan yon zòn ki byen aere pou itilize nan lavni.

4.2. Ekstraksyon akeuz nan Pleurotus Ostreatus ak Lentinus Edodes

Fwi sèk chak izole yo te mouye nan yon poud 500 g lè l sèvi avèk yon blenndè domestik, Lè sa a, masere twa fwa nan 7Lof dlo distile nan tanperati chanm pou twa jou, ultra-sonished (ultrason cleaner, Angletè, UK), ak Lè sa a, filtre. Pwosesis la nan maserasyon ak filtraj te repete jiskaske likid la fin itilize. Etanòl yo te itilize pou estoke pwodiksyon an. Apre etanòl evaporasyon nan 45 degre, yon total de 500 mL nan chak izole te friz-seche bay apeprè 20 g nan rezidi sèk nan chak ekstrè [96].

4.3. Analiz pwoteomik

Pwoteomik analiz te fèt nan inite pwoteomik ak metabolomik nan Children's Cancer Hospital peyi Lejip 57,357(CCHE), Cairo, peyi Lejip. Apeprè 600 uL nan 8 M ure nan 500 mM Tris (pH8.5) ak 60 uL konplè ultra-proteaz (Roche). , Mannheim, Almay) yo te ajoute nan chak echantiyon, epi answit echantiyon yo te souke kouray epi santrifuje nan 10,000 RPM pou 30 min. Supernatant yo te kolekte, epi fraksyon (1 ug/10 μL) yo te enjekte lè l sèvi avèk sistèm NanoLC la. Sistèm mas spectrometri trip TOF (Sciex TripleTOF 5600 plus, AB SCIEX, Concord) te makonnen ak likid chromatografi (LC) (3 um, ChromXP C18 CL, 120 A, 150 × 0.3 mm), ki fòme ak yon Eksigent nanoLC400 autosampler atache. yon ponp Ekspert nanoLC425, ak yon pousantaj koule 10 μL/min pou 55 min, pou chak echantiyon [97]. Analiz done te fèt pa ProteinPilot (vèsyon 5.0.1.0,4895) ak Algorithm Paragon (vèsyon 5.0.1.0,4874). Sekans pwoteyin yo te aliyen kont sekans nan Swis-Prot ak baz done a TrEMBL (Pleurotus sp. ki gen 14,792 antre pou P. ostreatus, ak Lentinula sp. ki gen 12603 antre pou L.edodes) [98]. Pwoteyin souvan idantifye ant espès djondjon yo te ilistre lè l sèvi avèk Venny2.1.0.BioinfoGP lojisyèl [99] (Kingston upon Hull, Angletè, UK).

4.4. Karakterizasyon Konpoze Bioaktif

Kòm te rapòte deja, yo te detèmine kontni total idrat kabòn soluble lè l sèvi avèk teknik fenol asid silfirik [100]. Done yo prezante kòm mwayen ± devyasyon estanda (SD), ak eksperyans yo te fèt an triple.

Kontni total fenolik (TPC) ak kontni total flavonoid (TFC) te detèmine jan Ryan et al te rapòte. [101]. Echantiyon yo te prepare nan yon konsantrasyon nan 20 mg / mL nan dlo. Asid galik (solisyon stock 1 mg/mL) te prepare nan metanol. Rutin (1 mg/mL solisyon stock) te prepare nan metanol. Estanda asid galik ak echantiyon yo te pipette nan pwi plak la an sis replike epi mezire nan 630 nm. Chak nan 10 estanda rutin yo ak echantiyon yo nan sis replike yo te mezire nan 420 nm.

Analiz HPLC nan fenolik total ak flavonoid yo te fèt dapre metòd Singh et al. [102]. Chak nan echantiyon yo ak 10 solisyon estanda diferan yo te fonn nan metanol epi filtre lè l sèvi avèk 0.22 um filtè sereng, ak Lè sa a, 100 μL nan chak echantiyon ak 10 uL nan chak estanda yo te sou fòm piki lè l sèvi avèk yon kolòn HPLC, Waters 2690 Alliance HPLC. sistèm ekipe ak yon detektè etalaj fotodyod Waters 996. Kolòn C18 Inertsil ODS3: 4.6 × 250 mm, 5 um; faz mobil: tanpon (0.1 pousan asid fosfò nan dlo); mòd methanol nan elisyon te gradyan ak yon pousantaj koule nan 1 mL / min nan yon longèdonn nan 280 nm.

Pou analiz vitamin idrosolubl, ekstrè djondjon teste yo (50 mg/mL), estanda referans (10 mg nan 10 mL0.05 M idroksid sodyòm) nan chak nan. sèt vitamin idrosolubl yo (tyamin HCl, asid ascorbic, riboflavin, asid nikotinik, nikotinamid, piridoksin HCl ak asid folik) [103] ak vitamin yo idrosolubl, solisyon (50 mg/mL) nan twa ekstrè djondjon yo ak yon solisyon estanda nan metanol nan twa vitamin grès: E, D3, ak A, nan 806.2, 114 ak 400 IU / mL, respektivman, yo te prepare. Lè sa a, solisyon yo te dilye nan 100 ug/mL, filtre lè l sèvi avèk yon filtè sereng 0.22 um, epi yo te enjekte 100 μL sou yon kolòn HPLC, Waters 2690 Alliance HPLC sistèm (Milford, CT, USA) ekipe ak yon Waters 996 fotodiode etalaj detektè. Kolòn Inertsil ODS 3∶4.6×250 mm,5 μm; faz mobil: tanpon (0.85 g hexane sulphonic asid sodyòm sèl nan 1000 mL dlo ak pH te ajiste a 3 ak asid orthophosphoric); methanol elisyon te gradyan nan yon vitès koule nan 1 mL / min nan yon longèdonn 210 nm [104].

4.5. Pwoteyin ak analiz asid amine

Konpozisyon asid amine nan ekstrè djondjon yo te evalye lè l sèvi avèk yon Sykam Amino Asid Analyzer (Sykam GmbH, Almay) ekipe ak yon sistèm livrezon sòlvan, S 2100 (ponp kwatènè ak ranje koule {{ 24}}.01 a 10.00 mL/min ak presyon maksimòm jiska 400 bar), yon echantiyon otomatik, S5200, yon modil reyaksyon asid amine, S4300 (avèk filtè doub entegre fotomètr nan 570 nm), ak yon òganizatè reyaktif nan frijidè, S4130. Yon gram nan chak ekstrè djondjon melanje ak 5 mL hexane epi yo te pèmèt yo masere pou 24 èdtan, ak Lè sa a, melanj lan te filtre lè l sèvi avèk Whatman no. 1 papye filtre. Yo te mete rezidi a nan yon tib tès ki gen 10mL6N HCl epi enkube nan yon fou a 110 degre pou 24 èdtan. Apre enkubasyon an, filtraj te fèt lè l sèvi avèk Whatman no. 1 papye filtre, ki te swiv pa evaporasyon nan yon evaporator rotary. Yo te fonn rezidi a konplètman nan 2 mL tanpon dilution (tri-sodyòm sitrat dezidrate 0.06 M, asid asid 0.03 M, fenol 0.02 M, thiodiglycol 1.4 pousan, HCL 32 pousan), dilye 1000-pliye nan menm tanpon an. ak Lè sa a, chaje sou yon kolòn filtre amonyak (LCA, K04/Na, 4.6 × 100 mm, Sykam GmbH, Erasing, Almay) ekipe ak yon analizè otomatik asid amine (Sykam) [105].

4.6. Kilti selil yo

Kansè nan matris (HeLa), lesemi monositik egi (Thpl), kansè kolorektal (Colo-205), ak selil kansòm sis (LS{-513) yo te konsève nan mwayen Roswell Park Memorial Institute (RPMI) (Lonza, Kolòy, Almay) complétée ak 100 mg / mL nan strèptomisin, 100 inite / mL nan penisilin ak 10 pousan nan chalè-inaktive fetis serom bovine. Lòt liy selilè: lesemi imen (CCRF-CEM); lesemi promyelocytic egi (NB-4); lenfom imen (U937); kansè pwostat (DU-145 ak PC3); karsinom epatoselilè (HepG2); adenokarcinom tete (MCF-7 ak MDA-MB-231); Vero; ak selil Hep-2 yo, yo te kiltive sou Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Invitrogen, Kalifòni, USA), epi yo te fè enkubasyon a 37 degre nan yon atmosfè imidite ak 5 pousan CO2. Liy selilè yo te jwenn nan Nawah Scientific Inc.(Mokatam, Cairo, peyi Lejip), alòske selil prensipal mononikleyè san periferik (PBMC) ak selil nòmal moun (ATCC PCS-800-011TM) yo te achte nan men Viscera, Cairo, peyi Lejip. Travay sa a te apwouve pa Komite Rechèch Etik nan Fakilte Famasi, Ain Shams University (Apwobasyon No.294).

4.7.Antioiral Aktivite

Aktivite antiviralte teste kont adenoviris tip 7(Ad7) ak viris èpès senp tip II (HSV-2)(Nawah Scientific, Mokattam, peyi Lejip). Aktivite antiviral yo te evalye jan sa te dekri anvan [106]. Selil Vero ak Hep-2 yo te simen nan yon plak kilti 96-byen nan yon dansite 2 × 10* selil/byen yon jou anvan enfeksyon. Yo te retire mwayen kilti selil la (Seksyon 4.6) jou kap vini an, epi yo te itilize saline ki gen tanpon fosfat (PBS) pou lave selil yo. Yo te detèmine enfeksyon adenoviris imen ak èpès senp viris tip II lè l sèvi avèk sulforhodamine B (SRB) metòd, ki te kontwole efè cytopathic (CPE) ak kalkile pousantaj nan viabilite selil [107]. Aktivite antiviral la te kalkile baze sou kapasite ekstrè djondjon yo pou anpeche CPE viral yo, kote konsantrasyon 50 pousan cytotoxik (CC5o) ak konsantrasyon 50 pousan inhibitory (IC50) yo te detèmine lè l sèvi avèk lojisyèl GraphPad PRISM (Graph-Pad Software, San Diego). , CA, USA). Endèks selektivite (SD) te kalkile jan Dogan et al di sa. [108] daprè ekwasyon (1)Endèks Selektif (SI)=CC50/IC50

4.8.Sitotoksisite kont PBMC yo lè l sèvi avèk MTT Assay

Yo te evalye sitotoksisite lè l sèvi avèk tès MTT【109】. Alikòt (100 μL) nan sispansyon selil (dansite selil 1.2-1.8 × 10 * selil/byen) yo te plake nan plak 96-byen, yo te ajoute mwayen konplè epi selil yo te enkube pou 24 èdtan. Lè sa a, selil yo te trete ak dilusyon seri nan ekstrè djondjon pou 48 èdtan. Solisyon MTT (5 mg/mL) nan PBS te ajoute nan pwi yo ak enkubasyon pou 4 èdtan, epi absòbe nan 570 nm te li lè l sèvi avèk yon lektè microplate. Selil ki pa trete yo te itilize kòm kontwòl negatif, ak selil trete ak doxorubicin (Sigma-Aldrich, Darmstadt, Almay) te sèvi kòm yon kontwòl pozitif.

4.9.Eoaluation Aktivite Sitotoksik UIsing SRB kont liy selil kansè yo

Sitotoksisite kont kansè pwostat (DU{{0}} ak PC3); karsinom epatoselilè (HepG2); kansinòm kolorektal (Kolo-205); kansòm sis (LS-513); kansè nan matris (HeLa); ak tete adenokarcinom (MDA-MB-231 ak MCF-7) liy selil yo te evalye lè l sèvi avèk sulforhodamine B (SRB) tès kolorimetrik [110]. Sispansyon selil yo nan medya konplè (4.6) yo te enkube nan 96-plak byen pandan 24 èdtan. Lè sa a, divès kalite konsantrasyon (0 a 100 ug/mL nan medya konplè) nan ekstrè djondjon yo te ajoute ak enkubasyon pou 72 èdtan. Selil ki pa trete yo te itilize kòm kontwòl negatif, ak selil trete ak doxorubicin sèvi kòm yon kontwòl pozitif.

4.10.Vitabilite liy selil lesemi ak lenfom yo lè w itilize tès WST-1

Sitotoksisite kont lesemi imen (CCRF-CEM), lesemi egi promyelocytic (NB4), lesemi monositik egi (THP1), ak lenfom imen (U937) te detèmine pa tès sèl tetrazolyom idrosolubl (WST-1) lè l sèvi avèk Abcamkit ( ab155902 WST-1 Reyaktif Pwoliferasyon Selil, Wayòm Ini). Sispansyon selil yo te enkube pou 24 èdtan ak Lè sa a, trete ak konsantrasyon diferan (0 a 100 ug / mL nan medya konplè) nan ekstrè djondjon pou 48 èdtan. Lè sa a, selil yo te trete ak 10 μL WST-1 reyaktif pou 1 èdtan, epi yo te li A450 lè l sèvi avèk yon lektè microplate [111]. Selil ki pa trete yo te itilize kòm kontwòl negatif ak selil trete ak doxorubicin (Sigma-Aldrich, Almay) te sèvi kòm yon kontwòl pozitif.

4.11.Antioksidan Aktivite

4.11.1.DPPH Aktivite Radikal Scavenging

DPPH radikal scavenging tès te pote soti dapre metòd la nan Lu et al. [112]. Rediksyon ki kapab lakòz nan koulè DPPH te mezire nan 540 nm.Aktivite antioksidante eksprime kòm pousantaj anpèchman an ak referans a koub kalibrasyon an (R 2=0.9903). Done yo reprezante kòm mwayen± SD dapre Ekwasyon (2):(Antioksidan pousan aktivite=[(abs-blank-abs-sample)/abs-blank]×100)

(2) kote abs-blank ak abs-echantiyon refere a absorbans nan vid la ak echantiyon, respektivman. Konsantrasyon echantiyon ki nesesè pou anpeche mwatye radikal gratis (IC50) te estime.

4.11.2.ABTS (2,2'-Azinobis-(3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonic Acid)) Aktivite pou netwaye kation radikal

Yo te fè tès la jan yo dekri deja 【113】. Ekstrè djondjon（10 μL nan solisyon 0 a 100 ug/mL) yo te melanje ak 190μL ABTS ki fèk prepare (Sigma-Aldrich Almay) nan 96-plak byen epi yo enkube nan fè nwa a nan tanperati chanm pou 2h. Chak echantiyon yo te teste nan kat replike, epi yo te mezire absorpsyon nan 734 nm. Aktivite antioksidan te eksprime kòm yon pousantaj nan anpèchman (Ekwasyon (1)) ak referans a koub kalibrasyon an (R2=0.9948).

4.11.3. Essay Kapasite Radikal Absòbsyon Oksijèn (ORAC).

Te analiz la te pote jan yo te detèmine anvan [62], ak modifikasyon minè. Yon ti tan, 12.5 μL nan ekstrè djondjon yo, an triple, yo te enkube ak 75 μL nan fluorescein (10 nm) pou 30 min nan 37 degre. Mezi fluoresans (485 EX, 520 EM, nm) te fèt pou twa sik (tan sik =90 s). Apre sa, 12.5 μL solisyon 240 mm ki fèk prepare nan 2,2'-Azobis 2- amidinopropane dihydrochloride(AAPH)(Ab-cam, Cambridge, UK) te ajoute nan chak pi imedyatman epi yo te kontinye mezire fliyoresan pou 2.5 èdtan (85 sik, chak 90 s). Esè a mezire pèt fluoresans fliyorescein sou tan kòm yon rezilta. nan fòmasyon peroksil-radikal pa dekonpozisyon AAPH. Trolox(6-idwoksi-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-asid karboksilik), yon vitamin E idrosolubl. analòg, te sèvi kòm yon kontwòl pozitif anpeche fluorescein pouri anba yon fason ki depann de dòz.Aktivite antioksidan te eksprime kòm yon pousantaj nan anpèchman (Ekwasyon (1) ak referans a koub kalibrasyon an (R2= 0.9957).

4.12.Estatistik analiz

Yo te fè tès chimik triple, epi rezilta yo te eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda. Analiz estatistik yo te fèt pa yon sèl-fason ANOVA.

Yo te evalye siyifikasyon diferans ki genyen ant mwayen ak tès konparezon miltip Tukey-Kramer. Yo te konsidere yon valè p mwens pase oswa egal a 0.05 estatistik. Evalyasyon estatistik la te detèmine lè l sèvi avèk lojisyèl GraphPad PRISM (Graph-Pad Software, San Diego, CA, USA).

5. Konklizyon

Dyondyon yo P. ostreatus ak L.edodes gen yon pakèt konpoze bioaktif. Analiz Proteome te montre ekspresyon de molekil byoaktif miltip ak anpil aktivite byolojik. Ekstrè akeuz nan dyondyon yo gen pwomètantiviralaktivite kont adenoviris tip7 ak viris èpès senp tip II.CPE yo te detekte kont liy selil kansè yo men se pa kont PBMC imen nòmal yo. Etid aktyèl la ankouraje itilizasyon dyondyon sa yo pou rezon famasi nan limyè cytotoxisite ki ba yo sou PBMC nòmal yo, anplis kapasite antiviral, antitumoral ak antioksidan yo.

Referans

1. Bertéli, MBD ; Oliveira Filho, OBQ; Freitas, JDS; Bertolucci, WC; Silva, GR; Gazim, ZC; Lívero, FAR; Lovato, ECW; Valle, JS; Linde, GA; et al. Lentinus crinitus basidiocarp stipe ak pileus: Konpozisyon chimik, sitotoksisite ak aktivite antioksidan. Lajan ewo. Manje Res. Teknoloji. 2021, 247, 1355–1366. [CrossRef]

2. Ragupathi, V.; Stephen, A.; Arivoli, D.; Kumaresan, S. Aktivite anti-bakteri, nan vitro potansyèl antioksidan ak karakterizasyon GC-MS nan ekstrè metanolik nan Gymnopilus Junius, yon djondjon sovaj ki soti nan Sid Western Ghats, peyi Zend. Lajan ewo. J. Biomed. 2018, 5, 650–657.

3. Atila, F.; Owaid, MN; Shariati, MA Benefis nitrisyonèl ak medikal Agaricus bisporus: Yon revizyon. J. Microbiol. Biotechnol. Manje Sci. 2017, 7, 281–286. [CrossRef]

4. Gaitán-Hernández, R.; Cortés, GMN Amelyorasyon pwodiksyon an nan djondjon manjab ak medsin Lentinula edodes sou pay ble lè l sèvi avèk spawn siplemantè. Braz. J. Microbiol. 2014, 45, 467–474. [CrossRef] [PubMed]

5. Smânia, A.; Delle Monache, F.; Smânia, E.; Gil, M.; Benchetrit, L.; Cruz, F. Aktivite anti-bakteri yon sibstans ki pwodui pa chanpiyon Pycnoporus sanguineus (Fr.) Murr. J. Ethnopharmacol. 1995, 45, 177–181. [CrossRef]

6. Ishikawa, NK; Kasuya, MCM; Vanetti, MCD Aktivite anti-bakteri nan Lentinula edodes grandi nan mwayen likid. Braz. J. Microbiol. 2001, 32, 206–210. [CrossRef]

7. Hwang, H.-J.; Kim, SW; Lim, J.-M.; Joo, J.-H.; Kim, H.-O.; Kim, H.-M.; Yun, J.-W. Efè ipoglisemi exopolysaccharides brut ki te pwodwi pa yon djondjon medsin Phellinus baumii nan rat dyabetik strèptozotocin-induit. Lavi Sci. 2005, 76, 3069–3080. [CrossRef] [PubMed]

8. Hearst, R.; Nelson, D.; McCollum, G.; Millar, BC; Maeda, Y.; Goldsmith, CE; Rooney, PJ; Loughrey, A.; Rao, J.; Moore, JE Yon egzamen sou pwopriyete anti-bakteri ak antifonjik nan elektè nan Shiitake (Lentinula edodes) ak Oyster (Pleurotus ostreatus) dyondyon. Konpleman. La. Clin. Pratike. 2009, 15, 5–7. [CrossRef]

9. Zervakis, G.; Philippoussis, A.; Ioannidou, S.; Diamantopoulou, P. Sinetik kwasans miselyòm ak kondisyon tanperati optimal pou kiltivasyon espès djondjon manjab sou substrats lignocellulosic. Folia Microbiol. 2001, 46, 231–234. [CrossRef]

10. Sánchez, C. Kiltivasyon Pleurotus ostreatus ak lòt dyondyon manjab. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2009, 85, 1321–1337. [CrossRef]