Pwopriyete ki gen rapò ak po ak konstitiyan ki soti nan ekstrè nan pati ayeryen nan Persicaria Senticosa
Mar 19, 2022
Kontakte: ali.ma@wecistanche.com
Yun-Hyeok Choi,1 Jae Yeon Lee,2 Ji Eun Lee,1 Yeon Woo Jung,1 Wonsik Jeong,1Seong Su Hong,1 Young-Rak Cho,2 ak Chun Whan Choi 1
1. Entwodiksyon
Persicaria senticosase yon plant anyèl nan fanmi Polygonaceae, ki distribye nan tout Kore di. Depi byen bonè, plant sa a te itilize kòm medikaman popilè ak efè benefik pou tretman divès maladi tankou retire pati anfle nan blesi a oswa carbuncles ak selulit ak sikile san, ak retire stagnation san. Dènye etid yo te montre saPersicaria senticosate gen efè anti-enflamatwa [1]; sepandan, plant sa a pa te rapòte kòm engredyan kosmetik byoaktif. Ak syans fitochimik anvan yo sou flè, tij, ak rasin nan genus Polygonum te revele divès kalite flavonoid ak konpoze fenolik tankou asid idroksibenzoik, rutin, quercetin-3-O-glucuronide, quercetin-3-O-glucoside, ak luteolin-7-O-rutinoside yo te konsidere kòm eleman prensipal yo [2, 3]. Konpoze aktif sa yo montre divès efè famasi, tankou efè anti-enflamatwa, antiilsè, antiipèrtansif, ak efè antikansè [4]. Pandan tès depistaj engredyan kosmetik yo lè w mezire efè radikal scavenging sou 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), ABTS radikal scavenging, anpèchman elastase,tirozinazanpèchman, ak tès oksid nitrique, yo te jwenn plizyè Polygonumeextracts ki montre aktivite ki pisan.
Klike souCistanche itilize pou diminye aktivite tirozinaz la.
2. Materyèl ak Metòd
2.1. Materyèl Plant ak Pwosedi Jeneral nan NaturalProducts.
Persicaria senticosayo te ranmase nan Seo-myeon, Chuncheon-si, Gangwon-do, Kore di, nan 2{11}}16 (GPS: N 37 degre 55′30.1″, E 127 degre 37′ 57.0″, altitid: 434 m). Doktè Chun Whan Choi te otantifye espesimèn bon (G071).Persicaria senticosayo te depoze nan èrbyòm Biocenter, Gyeonggido Business & Science Accelerator, Suwon, Kore di Sid (Fig. S3). Ekstrè 99.9 pousan methanol nan trant-kat Polygonum te jwenn nan Kore di Plant Extrait Bankat Kore di rechèch Enstiti Biosyans ak Biotechnologie (Daejeon, Kore di). Yo te fè eksperyans 1H ak 13C NMR sou yon espektwomèt Bruker Ascend 700 MHz ak tetramethylsilane (TMS). LC-ESI-MS te jwenn sou yon enstriman Triple TOF 5600 plis (AB SCIX, USA) ak HRÉSI-MSon yon enstriman LTQ Orbitrap XL (Thermo, USA). Chromatografi kouch mens (TLC) te fèt sou jèl silica 60F254 (Merck, Almay) ak jèl silica 60 RP -18 F254S (Merck, Almay). Kwomatografi kolòn (CC) te fèt lè l sèvi avèk silica jèl 60 (70 ~ 230 may, Merck, Almay), ODS-A (12 nm S-7 μm, YMC GEL, Japon), ak preparativeHPLC te fèt sou LC{{ 23}}A (Shimadzu, Japon).
2.2. NON Egzamen.
Selil RAW 264.7 yo te simen nan 96-plak byen (5 × 104 selil/pi) epi yo te trete ak yon echantiyon pou 1 èdtan anvan eksitasyon LPS (1 ug/mL) pou 24 èdtan. Kontwòl negatif la te trete ak medya san serom. Kantite nitrite, metabolit astab NO, te mezire lè w itilize Griessreagent (1 pousan sulfanilamid ak 0.1 pousan naphthyl ethylenediamine dihydrochloride nan 2.5 pousan asid fosfò). Apre sa, absorpsyon te mezire nan 540 nm lè l sèvi avèk yon ELISAreader. Kantite nitrat yo te detèmine nan yon koub estanda pou nitrit sodyòm [5-7].
2.3. Selil Cytotoxicity Essay.
Selil RAW 264.7 yo te plake nan adensite 5 × 104 selil/byen nan 96-plak byen yo. Selil yo te trete ak echantiyon pou 1 èdtan anvan eksitasyon LPS (1ug/mL) pou 24 èdtan. MTT (5 mg/mL nan PBS) te ajoute nan chak byen ak enkubasyon pou 2 èdtan. Yo te retire mwayen an nan pwi yo pa aspirasyon, yo te ajoute DMSO nan chak pi, epi yo te souke plak la. Yo te mezire absorbans chak pi nan yon longèdonn 540 nm lè l sèvi avèk yon lektè ELISA. Done yo prezante kòm mwayèn ± devyasyon estanda twa kopi.
2.4. DPPH Radical Scavenging Aktivite Assay.
Aktivite radikalscavenging DPPH te mezire lè l sèvi avèk metòd Blois [8] ak Ozgen et al. [9]. Solisyon DPPH ki fonn nan methanol te ajoute nan echantiyon an, ki te dilye nan konsantrasyon ki nesesè yo, epi reyaksyon an te fèt nan tanperati chanm pou 30 min. Yo te mezire absorpsyon nan 517 nm lè l sèvi avèk yon lektè ELISA. Yo te itilize antioksidan butylated hydroxyanisole (BHA) kòm yon kontwòl pozitif, epi yo te detèmine valè IC50 echantiyon an.
2.5. ABTS Radical Scavenging Aktivite.
Yo te mezire aktivite radikal ABTS lè l sèvi avèk yon metòd ki te deja dekri [10, 11]. ABTS plis te fòme pa melanje 7 mM ABTSsolution ak 2.45 mM persulfate potasyòm (K2S2O8) solisyon ak ABTS: K2S2O8 (2: 1 rapò) pou 12-16 èdtan yo fòme yon kation (ABTS plis). Absorbans la te mezire nan 734 nmusing yon lektè ELISA. BHA, yon antioksidan, te itilize kòm kontwòl pozitif.
2.6. Egzamen anpèchman tirozinaz.
Tirozinazaktivite inhibitory te mezire lè l sèvi avèk metòd ki dekri nan Yagiet al. [12]. Reyaksyon an te pote soti nan 0.1M tanpon potasyòm fosfat (pH 6.5) ki gen 1.5 mM L-tirozin ak 1250 inite / mL tirosinaz djondjon. Melanj reyaksyon an te enkube a 37 degre pou 20 minit. Echantiyon tès yo te teste pou anpèchman tirosinaz lè yo mezire efè li soutirozinazaktivite lè l sèvi avèk SpectraMax 190PC microplate ELISAreader nan 490 nm. Arbutin ak asid kojik yo te itilize kòm yon kontwòl pozitif, epi yo te detèmine valè IC50 echantiyon an.
2.7. Elastase anpèchman tès.
Reyaksyon an te fèt nan {{0}}.5 mM Tris tanpon (pH 8.5) ki gen 1 mg/mL N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide ak 0.6 inite/mL elastaz. . Te melanj reyaksyon an enkube a 25 degre pou 10 minit. Echantiyon tès yo te teste pou anpèchman elastaz lè yo mezire efè li sou aktivite elastaz lè l sèvi avèk yon lektè ELISA nan 405 nm. Ursolicacid te itilize kòm yon kontwòl pozitif, epi yo te detèmine valè IC50 echantiyon an [13].
2.8. Analiz estatistik.
Lojisyèl PRIZM5 (GraphPad, CA, USA) te fè analiz estatistik done yo ak done yo prezante kòm mwayen ± SD. Yo te itilize tès t Elèv yon sèl pou analize siyifikasyon diferans ant gwoup yo, epi yo te konsidere P < 0:05="" siyifikatif="">
3. Rezilta ak Diskisyon
3.1. Pwopriyete ki gen rapò ak po nan ekstrè plant nan FamilyPolygonaceae.
Efè scavenging radikal sou DPPH, ABTS scavenging radikal, anpèchman elastase,tirozinazanpèchman, tès oksid andnitrik sou plizyè ekstrè Polygonum yo te jwenn pou montre aktivite ki pisan. Rezilta yo te montre ke Persicariajaponica ak Rumex longifolius gen tès NO (IC{{0}}.3 ak anba 25.0ug/mL). Pou DPPH, IC50 nan methanolicextract nan Polygonum ciliinerve, Polygonum alpinum, ak Persicaria Chinensis te 36.9, 15.4, ak 19.2ug/mL, respektivman.Nan aktivite a scavenging radikal ABTS, IC50 a nan methanolicextract nan Polygonum cuspidate te ak Polygonum cuspidate. ak 5.3 ug/mL, respektivman. Nantirozinazaktivite inhibitory, IC5 0 nan ekstrè metanolik nan Polygonum sachalinensroot ak Polygonum cuspidata te 289.0 ak 483.9 ug/mL, respektivman. Nan tès anpèchman elastaz la, IC50 nan ekstrè methanolic nan Polygonum sachalinense, Polygonum cuspidatum, Persicaria hydropiper, Persicaria sieboldi, Polygonumorientale, Persicaria lapathifolia, Persicaria dissitiflora, Rumexacetosella, Rumex Crispus, Polygonum alpinise, Persicaria japonesa, Persicaria alpinise,, Persicaria japonesa Persicaria conspicua, Rheum palmatum, ak Persicaria lapathifolia te anba 100 ug/mL (Tablo 1).
3.2. Pwopriyete ki gen rapò ak po nan Fraksyon Persicaria senticosa.
Efè netwayaj radikal sou 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), ABTS radikal scavenging, anpèchman elastaz, ak tès oksid nitrique sou plizyèPersicaria senticosayo te jwenn fraksyon yo montre aktivite ki pisan. Rezilta yo te montre ke fraksyon yo CH2Cl2 ak EtOAc gen tès NO (anba 25 ak 44.64 ug/mL, respektivman). Aktivite radikal DPPH ak ABTS nan fraksyon EtOAc yo te 13.7 ak 5.0 ug/mL. Nan tès anpèchman elastaz la, IC50 nan n-hexane ak fraksyon CH2Cl2 te anba 100 ug/mL (Tablo 2).
3.3. Izolasyon ak Detèminasyon Konpoze ki soti nan Ekstrè Persicaria senticosa.
Persicaria senticosapati ayeryen (1.4kg), sèk nan lonbraj la ak an poud, yo te ajoute nan 4{{10}} Lof 70 pousan etanòl (klas HPLC) ak de fwa nan tanperati chanm (chak fwa). pou 2 jou) epi yo te konsantre nan vacuumat 4 0 degre yo bay 180.4 g nan ekstrè. Ekstrè yo te sispann nan dlo distile epi yo te separe ak n-hexane (4:0L × 3), CH2Cl2 (4:0L × 3), EtOAc (4:0L × 3), ak n-butanol (4:0L × 3). bay n-hexane (11.7 g), CH2Cl2 (7.4 g), EtOAc (21.7 g), butanol (22.5 g), ak fraksyon dlo-idrosolubl (110.1 g), (Scheme 1). Fraksyon EtOAc (21.7 g) te separe pa MPLC ki te itilize melanj gradyan kòm eluyan (F001-003). Konpoze 1 (3.2mg) ak 5 (3.9mg) yo te izole nan F002 ki te itilize pa prep-HPLC. Fraksyon F001 la te separe pa MPLC ki te itilize melanj gradyan kòm eluyan (F{011-F018).Konpoze 6 (1.5mg) te izole nan F016 ki te itilize pa preparasyon HPLC. Konpoze 7 (2.7mg) te izole nan F017 ki te itilize pa HPLC preparasyon. F012 te separe lè l sèvi avèk MPLC ki te itilize melanj gradyan kòm eluyan (F121-F124). Konpoze 4 (10.8mg) te izole nan F124 ki te itilize pa HPLC preparasyon. Anplis de sa, F014 te separe pa preparasyon HPLC lè l sèvi avèk melanj gradyan kòm eluyan (F141-F143). Konpoze 3 (2.3mg) te izole nan F141 lè l sèvi avèk HPLC preparasyon. Konpoze 2 (4.8mg) te izole nan F142 itilize semipreparative HPLC. Pirifikasyon kouch idrosolubl EtOAc la te fèt pa separasyon kwomatografi kolòn ak analiz MPLC pou Konpoze 1-7. Li te idantifye kòm loliolide (1) [14], quercetin -3-O-glikozid (2) [15], querce tin-3-O-glucuronide (3) [16], 4-methoxy asid kaftrarik (4) [17], kaempferol -3-(6-methylglucuronide) (5) [18], quercetin -3-({6-methylglucuronide) (6) [19, 20], ak quercetin (7) [21]. Estrikti a te elisid pa yon konbinezon de 1D ak 2D NMR ak MS spèktrometri osi byen ke yon konparezon ak literati rapòte (Figi 1).
3.4. Pwopriyete ki gen rapò ak po nan konpoze soti nan Persicariasenticosa.
Efè netwayaj radikal sou DPPH,tirozinazanpèchman, ak tès oksid nitrique sou plizyè konpoze soti nanPersicaria senticosayo te jwenn yo montre aktivite ki pisan (Fig.S4-7). Rezilta yo te montre ke Konpoze 7 gen NOassay la (IC50 29.7 ug/mL). Pou DPPH, IC50 Konpoze 2, 3, 5, ak 7 te 39.6, 31.2, 37.0, ak 22.7 ug/mL, respektivman. Nan aktivite inhibition tirozinaz, IC50 nan Compound 7 te 14.3 ug/mL (Tablo 3).
4. Konklizyon
Persicaria senticosase yon plant anyèl nan fanmi Polygonaceae ki distribye nan tout Kore di. Depi byen bonè, plant sa a te itilize kòm medikaman popilè ak efè benefisye pou tretman divès maladi. Etid sa a evalye pwopriyete ki gen rapò ak po ak elektè ki soti nan ekstrè nan pati ayeryen nan Persicaria senticosa ak trant-kat plant Polygonaseae. Nan kou a nan tès depistaj pou engredyan kosmetik pa mezire efè a radikal scavenging sou DPPH, ABTS radikal scavenging, antiwrinkle te evalye itilize anpèchman elastase, blanchi te etidye patirozinazanpèchman, ak anti-enflamatwa yo te teste sou nitrik oxideassay. Plizyè Ekstrè Polygonum yo te jwenn yo montre potentactivity. Rezilta yo te montre ke ekstrè senticosamethanolic Persicaria a gen aktivite radikal DPPH ak ABTS (IC50 61.0 ak 17.5 ug/mL). Nan tès anpèchman elastase ak tès oksid nitrique, IC50 nan methanolicextract nan Persicaria senticosa te 241.5 ug / mL ak 71.8 ug / mL, respektivman. Persicaria senticosa 70 pousan ekstrè etanolik la te divize ak n-hexane, CH2Cl2,EtOAc, n-BuOH, ak fraksyon akeuz.
Fraksyon idrosolubl EtOAc te montre yon pisan aktivite ki gen rapò ak po (Figi 2 ak Tablo 3). Rezilta sa yo sijere ke konpozan aktif nanPersicaria senticosaresponsab pou aktivite ki gen rapò ak po yo te konsantre nan EtOAc solublefraction nan Persicaria senticosa (Scheme 1). Nan lòt men an, n-hexane, fraksyon dichloromethane idrosolubl, ak fraksyon BuOH idrosolubl ki sòti nan ekstrè Persicaria senticosa te montre aktivite ekipotan sou analiz oksid nitrique, DPPH, ak ABTS radikal aktivite scavenging, tandiske fraksyon dlo ki rete a te demontre move efè inhibitory (Tablo 2). ).
Kidonk, pirifikasyon byoassay-gide nan twa fraksyon aktif, sa vle di, fraksyon EtOAc idrosolubl nanPersicaria senticosate fèt pou pirifye prensip aktif responsab aktivite ki gen rapò ak po ki te swiv pa pwosesis ki dekri nan Scheme 1, respektivman.
Pirifikasyon EtOAc i ka fonn wèbsayt] dePersicaria senticosa70 pousan ekstrè etanolik te fèt pa separasyon kwomatografi kolòn ak analiz MPLC toCompounds 1-7. Li te idantifye kòm loliolide (1), quercetin 3-O-glucoside (2), quercetin-3-O-glucuronide (3), 4-methoxy caftraric asid (4), kaempferol{{ 11}}(6-methylglucuronide) (5), quercetin-3-({6-methylglucuronide) (6), ak quercetin (7). Estrikti te elucide pa yon konbinezon de 1Dand 2D NMR ak MS spèktrometri kòm byen ke konparezon ak literati rapòte (Fig. S2). Efè dechaj radikal 1,1-difenil-2-picrylhydrazil (DPPH),tirozinazanpèchman, ak tès oksid nitrique sou plizyè konpoze soti nan Persicaria senticosa te jwenn yo montre aktivite ki pisan. Rezilta yo te montre ke Konpoze 7 gen tès NO a (IC5029.7 μM). Pou DPPH, IC50 nan konpoze 2, 3, 5, ak 7 te 39.4, 32.1, 37.0, ak 22.7 μM, respektivman. Nantirozinazaktivite inhibitory, IC50 nan konpoze 7 te 14.3 μM.Kòm yo montre nan figi 3, konpoze 2 ak 5 yo se konpoze prensipal yo nan fraksyon EtOAc idrosolubl nan Persicaria senticosa (-Fig. S1). Ak Konpoze 2 ak 5 te montre ekselan aktivite antioksidan (Figi 4), ki konsistan avèk etid anvan yo [18, 22].
Etid sa a te demontre saPersicaria senticosaak Polygonaseae genyen konpoze chimik ak aktivite ki gen rapò ak goodskin epi yo ta ka enteresan kòm yon nouvo sous ajan bioaktif pou endistri kosmetik.
