Theaflavin-reglemante Imd Condensates Kontwòl Drosophila Omeyostaz Entestinal ak Aging Pati 2

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

Background:Fibwoz se youn nan karakteristik ki pi komen patolojik nan pwosesis la aje nan ren an, ak fibwoz nan ren ki aje tou agrave pwosesis la nan maladi ren kwonik (CKD). Corallodiscus flabellata BLBurtt (C.flabellata, CF) se yon dwòg botanik souvan itilize nan Fòlklò Chinwa. Sepandan, kèk etid te rapòte efè famasi li yo. Etid sa a te vize eksplore efè ekstrè etanòl CF sou fibwoz ren nan sourit SAMP8 epi idantifye konpoze potansyèlman aktif.

Metòd:Senescence-akselere sourit ki gen tandans 8 (SAMP8) yo te itilize kòm modèl bèt, ak diferan dòz CF yo te bay pa gavage pou yon mwa. Pou obsève degre nan aje ren nan sourit lè l sèvi avèk -galactosidase tach. Tach Masson ak nivo ekspresyon Col-lI, a-SMA, ak FN yo te itilize pou evalye fibwoz ren nan sourit yo. Yo te mezire nivo ekspresyon pwoteyin chemen Nrf2 ak chemen Wnt/-catenin/RAS nan ren an. Ak -galactosidase (-gal) pwovoke selil NRK-52E yo kòm yon modèl in vitro pou tèste eleman aktif CF yo.

Tanpri klike la a pou w konnen plis

Rezilta:Ekstrè etanòl CF la siyifikativman anpeche aktivite ren -galactosidase ak nivo ekspresyon sourit Coll, a-SMA, ak FNin SAMP8, ak amelyore tach Masson nan sourit SAMP8. CF konsiderableman redwi pwoteyin urin, kreyatinin, nitwojèn ure, ak nivo serik TNF-a ak IL-1 nan sourit SAMP8, ak ogmante siyifikativman nivo SOD ak GSH-Px. Anplis, CF aktive chemen Nrf2 a epi bloke chemen Wnt/-catenin/RAS nan ren sourit yo. Anplis, 3,4-dihydroxy phenyl etanol (SDC{-0-14,16) ak (3,{4-dihydroxy phenyl etanol-8-O-[{4-O-trans -kafeoyl- -D-apiofuranosy-(1→3){- -D-glucopyranosyl (1→6)]- -D-glucopyranoside (SDC{-1-8) yo te izole nan CF , ki redwi senesans selil NRK-52E, e petèt engredyan aktif CF jwe wòl anti-aje.

Konklizyon:Eksperyans nou yo te eklere ke ekstrè etanòl CF ka amelyore fibwoz ren nan sourit SAMP8 atravè chemen Wnt/-catenin/RAS. Epi SDC-0-14,16 ak SDC-1-8 kapab baz materyèl pou CF egzèse efè ki gen rapò ak senesans anti-ren.

Mo kle:Aje, Corallodiscus flabellata, ren, fibwoz ren, SAMP8, Senesans, Wnt/-catenin/RAS

Entwodiksyon

Prévalence mondyal maladi ren kwonik (CKD) ap ogmante ak aje popilasyon an e li reprezante yon gwo fado pou sosyete a [1-3]. Manifestasyon patolojik ki pi komen nan CKD se kèk fòm fibwoz ren [4]. Menm jan an tou, fibwoz ren se tou youn nan siy aje ren [2]. Etid yo montre ke estrès oksidatif, enflamasyon, Wnt/-catenin, sistèm renin-angiotensin-aldosterone (RAS), ak rapamicin (mTOR) siyal yo tout ki gen rapò ak CKD pwovoke pa senesans [5]. Fibwoz ren nan ren ki aje gen rapò ak deklanchman Wnt/-catenin ak chemen siyal RAS [6]. Lè w aktive Wnts, -catenin nan sitoplasm la transloke nan nwayo a, kote li mare ak faktè lenfoyid enhancer-binding factor (LEF)/faktè T-selil faktè (TCF) transcription faktè a epi kòmanse transkripsyon jèn sib en. Enteresan, rejyon pwomotè jèn RAS la genyen tou sit obligatwa LEF/TCF, ki pèmèt -catenin ankouraje lyezon LEF-1 nan sit sa yo[7].kolestewòl cistanche,Se poutèt sa, vize Wnt/-catenin/RAS siyal chemen an ta ka yon potansyèl estrateji terapetik pou fibwoz ren [8,9].Nan dènye ane yo, terapi ranplasman fibwoz ren ak pwodwi natirèl te atire atansyon a nan anpil entelektyèl [10] . Xiaoyan Shen et al. te jwenn ke ginsenoside Rgl amelyore fibwoz glomerulè pandan aje ren pa anpeche aktivasyon NLRP3 inflammasome nan sourit SAMP8 [11]. Etid sa a te eksplore efè C. flabellate (CF) ekstrè sou fibwoz ren nan sourit SAMP8 ki soti nan chemen Wnt/-catenin/RAS.

Cistanche ka anti-aje

CF kòm yon plant medsin nan Lachin te premye anrejistre nan "Dian Nan Ben Cao la. Se plant la antye souvan itilize pou trete disantri, ejakulasyon twò bonè, maladi vesik seminal, ak maladi ren nan zòn minorite etnik nan Lachin [12]. Kounye a. , gen kèk rapò sou CF nan rechèch modèn.Etid famasi yo nan laboratwa nou an te jwenn ke ekstrè CF te gen efè dyurèz ak amelyore lipopolysaccharide / D-galactosamine-induit ensifizans fwa ak domaj nan sèvo nan rat [13, 14].Ak etid fitochimik sou li te revele ke glikozid fenilethanoid ak flavonoid yo te eleman chimik prensipal yo nan CF [15, 16].Objektif etid sa a se te mennen ankèt sou efè ekstrè CF sou fibwoz ren nan sourit SAMP8 ak elicide mekanis posib li yo, konsa tankou bay. prèv eksperimantal pou tretman maladi ren ak CF ki dekri nan liv ansyen yo.

Materyèl ak metòd

Koleksyon ak ekstraksyon materyèl plant la

"Yunnan Chinese Herbal Medicine" anrejistre ke CF ka rekòlte pandan tout ane a. Plant CF yo itilize nan eksperyans sa a te rekòlte nan Konte Xixia, pwovens Henan, Lachin nan mwa septanm nan. Li te idantifye pa Pwofesè Suiqing Chen nan Henan University of Chinese Medicine, epi espesimèn yo te estoke nan bibliyotèk echantiyon laboratwa a.efè segondè cistanche deserticolaPlant yo (1 kg) yo te refluxed ak 50 pousan etanòl (3 × 12 L, chak 1 h), epi yo te melanj lan filtre ak 16 kouch twal gaz. Filtrate konbine yo te cheche pa evaporasyon rotary lè l sèvi avèk yon seche friz. Finalman, pousantaj pwodiksyon an nan 50 pousan etanòl ekstrè brit nan CF te 15.5 pousan. Ekstrè sèk la te kenbe nan yon frijidè jiskaske plis itilize. Materyèl siplemantè yo bay lis done ki enpòtan sou deziyasyon engredyan nan ekstrè CF.

Yo te itilize yon lòt pwosesis separasyon deja rapòte nan etid sa a pou jwenn fraksyon elisyon dlo a, 20 pousan fraksyon etanòl elisyon, 30 pousan etanòl elisyon fraksyon, ak 40 pousan etanòl elisyon fraksyon nan CF [13]. Fraksyon etanòl 40 pousan te separe lè l sèvi avèk Sephadex LH -20 ak kolòn jèl silica epi pirifye pa semi-preparatif segondè-pèfòmans likid kromatografi (HPLC) pou finalman jwenn konpoze tankou SDC-0-14,16, SDC{ {10}}, SDC-0-60(p-hydroxy benzyl alkòl).

Bèt ak administrasyon

Sis mwa SAMP8 gason ak senesans akselere sourit rezistan 1 (SAMR1) sourit ki soti nan Premye Lopital Afilye nan Tianjin University of Traditional Chinese Medicine (Tianjin, Lachin) yo te itilize nan etid sa a. Bèt yo te loje anba limyè kontwole (12-h sik limyè/fè nwa), tanperati (23-25 degre C), ak imidite (45-55 pousan ) kondisyon epi yo te resevwa yon rejim alimantè ak dlo estanda. libitum. Yon total de 48 sourit SAMP8 yo te divize an kat gwoup eksperimantal (n=12/gwoup): sourit modèl SAMP8 (M), ki ba-dòz CF etanòl ekstrè-trete sourit SAMP8 (CF-L, 387.5 mg / kg, entragastrically), mwayen-dòz CF etanòl ekstrè-trete SAMP8 sourit (CF-M, 775 mg / kg, intragastrik), ak gwo dòz CF etanòl ekstrè-trete SAMP8 sourit (CF-H, 155 0 mg / kg, intragastrik). Sourit yo nan kontwòl SAMRI (Con, n=10) ak gwoup modèl SAMP8 (M) yo te trete ak saline fizyolojik (0.9 pousan). Tout sourit yo te trete oralman pou 1 mwa. Tout eksperyans bèt yo te apwouve pa komite etik nan Henan University of Chinese Medicine ak fè dapre direktiv enstitisyonèl yo (Henan, Nimewo Apwobasyon Lachin: HACTCM-2018009060-19). Pandan eksperyans lan, te gen yon sèl lanmò sourit nan chak gwoup Con ak M, e de sourit te mouri nan gwoup CF-H.

Koleksyon echantiyon

Nan fen eksperyans la, sourit yo te loje endividyèlman nan kalòj metabolik pou 12-h koleksyon urin. Lè sa a, sourit yo te anestezi ak isoflurane, epi yo te kolekte echantiyon san nan retro-orbital senyen. Lè sa a, ren yo nan chak sourit yo te retire chirijikal epi kenbe nan 80 degre Cuntil analiz yo.

Kilti selil ak etid in vitro

Selil NRK-52E yo te achte nan Bank selilè Akademi Syans Chinwa a (Shanghai, Lachin) yo te kiltive pou mennen ankèt sou efè ekstrè CF sou aje selil ki te koze pa D-galaktoz (D-gal, S11050, Yuanye, Shanghai, Lachin). Selil NRK-52E yo te grandi nan modifikasyon Dulbecco nan mwayen Eagle's Dulbecco (DMEM,12,100,046, Thermo Fisher, Massachusetts, USA) apwovizyone ak 10 pousan serom fetis bovin nan yon enkibatè nan 37 degre C ak nan prezans 5. pousan , CO.Cells yo te grandi nan 96-plak byen oswa 6-plak byen nan 80-85 pousan konfluans epi yo te trete yo ak medya kwasans ki gen diferan konbinezon dwòg: Media plis D-gal ( 20 mg/mL）, Media plis D-gal plis CF（10, 25,50, 100 ug/mL）oswa Media plis D-gal plis konpoze monomerik（10 μM） respektivman pou 48 h. Imedyatman, methyl thiazolyl tetrazolium la ( MTT) te itilize pou detekte viabilite selilè, epi yo te itilize tach -galactosidase pou obsève senesans selil.

Senesans ki asosye -galactosidase tach

Yo te tache ren jele ki soti nan sourit ki te koupe nan seksyon 10-μm ki epè ak selil NRK-52E yo ak -galactosidase ki asosye ak senesans (SA- -gal, C0602, Beyotime Biotechnology, Shanghai, Lachin) swiv pwotokòl manifakti a.

Analiz histolojik

Seksyon ren yo te fikse ak 4 pousan paraformaldehyde tanpon, ak 10-μm-epè seksyon parafin ki entegre yo te tache ak trichrome Masson a (G1006, Sèvis, Wuhan, Lachin) epi yo te obsève mikwoskopik. Zòn ki gen koulè ble nan seksyon trichrome Masson yo te mezire quantitativeman nan sis jaden chwazi owaza epi analize pa lojisyèl Image-Pro Plus 6.0.

Mezi byochimik

Echantiyon omojèn nan serik ak ren yo te dekonjle nan tanperati chanm, ak nivo superoksid dismutase (SOD, CSB-E08556m, Wuhan Huamei, Wuhan, Lachin), glutatyon peroksidaz (GSH-Px, A005-1-2, Nanjing Jiancheng, Nankin, Lachin), interleukin-1 (IL-1, RK00006, ABclonal, Wuhan, Lachin), faktè necrosis timè- (TNF-, RK00027, ABclonal, Wuhan, Lachin), nitwojèn urey (C{ {10}}, Nanjing Jiancheng, Nanjing, Lachin), kreyatinin (Cr, C011-2-1, Nanjing Jiancheng, Nanjing, Lachin) nan serom sourit, total pwoteyin urin (C035-2-1, Nanjing Jiancheng, Nanjing). , Lachin) nan pipi sourit ak nivo ekspresyon nan kolagen an tip I (Col-I, MU30364, Bio-Swamp, Wuhan, Lachin), -smooth muscle actin (-SMA, MU30359, Bio-Swamp, Wuhan, Lachin), fibronectin (FN, MU30179, Bio-Swamp, Wuhan, Lachin) nan tisi ren sourit yo te mezire sekans dapre pwotokòl manifakti twous tès la.

Analiz imunohistochimik

Yo te fè analiz imunohistochimik la lè l sèvi avèk metòd woutin [17]. Antikò yo itilize yo enkli sa ki annapre yo: Wnt4 (14371-1-AP, Proteintech, Chicago, USA), -catenin ({17565-1-AP, Proteintech, Chicago, USA), tip 1 anjyotansin II reseptè (AGTR1,{{ 7}}AP, Proteintech, Chicago, USA), p-nikleyè erythroid 2-faktè ki gen rapò ak 2 (p-Nrf2, ab76026, Abcam, Cambridge, UK), pc-Fos (ab27793, Abcam, Cambridge, UK). ), Faktè kwasans tisi konjonktif (CTGF, GB11078, Sèvis, Wuhan, Lachin). Seksyon yo te obsève anba yon mikwoskòp (Olympus, Tokyo, Japon).cistanche dosage redditMezire zòn ak dansite optik entegre (IOD) nan zòn nan ak ekspresyon tan lè l sèvi avèk Image-Pro Plus 6.0 lojisyèl epi kalkile dansite optik mwayen (MOD, MOD=IOD/zòn) pou semi - analiz quantitative.

Analiz Western blot

Western blot te fèt jan sa dekri nan yon etid anvan [18]. Yon ti tan, tisi ren yo te omojeneize nan tanpon lysis ak quantifye lè l sèvi avèk yon Twous Test Pwoteyin Bradford (AR0197, Boster Biological Technology, Wuhan, Lachin). Lè sa a, homogenates yo te sibi sodyòm dodecyl silfat-polyacrylamid jèl elektwoforèz, transfere nan manbràn fliyò polyvinylidene, ak bloke nan tanpon bloke (4 pousan lèt sèk san grès) pou 90 min. Lè sa a, yo te enkube ak antikò prensipal (Wnt4; renin; AGTR1; p-Nrf2; pc-Fos; Kelch-like ECH asosye pwoteyin 1 (Keapl, GB11847, Service-bio, Wuhan, Lachin); -aktin (AC026, Abclonal, Wuhan, Lachin); ak glyceraldehyde -3-fosfat dehydrogenase (GAPDH, AC033, Abclonal, Wuhan, Lachin)) lannwit lan nan 4 degre, ki te swiv pa enkubasyon ak yon antikò segondè ki apwopriye pou prezans fluo pou 1 èdtan nan tanperati chanm. . Pwoteyin ki enterese yo te tcheke avèk yon eskanè Odyssey IR (LI-COR Biosciences, Nebraska, USA), epi yo te mezire entansite siyal yo lè l sèvi avèk lojisyèl Image Studio. Nivo pwoteyin yo te nòmalize kont -actin la oswa GAPDH.

UPLC-Q-TOF-MS analiz pou echantiyon ren

Tisi ren yo te peze ak omojeneize nan salin fizyolojik frèt (w/v=1:1). Lè sa a, 1 mL asetonitrile te ajoute nan 200 μL echantiyon omojèn tisi, ki te swiv pa ekstraksyon ultrasons pou 30 min. Ekstrè a te santrifuje nan 12, 000 g ak 4 degre pou 10 min. Yo te pran supernatant la nan flakon an pou analiz. Separasyon chromatografik te fèt sou ultraperformance likid chromatography (UPLC) (Dionex UltiMate 3000 System, Thermo Scientific, Massachusetts, USA), ak sistèm LC ki gen yon kolòn Acclaim RSLC 120 C18 (2.2 μm, 2.1 × 100 mm); Thermo Syantifik).benefis extrait cistancheFaz mobil la se sòlvan A (asetonitrile) ak dlo ak {{0}}.1 pousan asid fòmik (B). Separasyon an te fèt pa elisyon gradyan jan sa a: 10-70 pousan A soti nan 0 a 3 min, 70-78 pousan A soti nan 4 a 13 min, 78-90 pousan A soti nan 14 a. 15 min,90 pousan -10 pousan A soti nan 15 a 16 min, ak 10 pousan A soti nan 16 a 20 min. Volim piki echantiyon tès la te 2μL. Espektrometri mas (MS) analiz te fè lè l sèvi avèk yon sous ESI anba kondisyon sa yo: vòltaj kapilè nan mòd pozitif la te 3.5 kV, ak vòltaj kapilè nan mòd negatif la te 3.2 kV. Presyon nebilizè a te 2.0 bar, tanperati gaz sèk la te 230 degre, ak to koule a te 8 L/min.

Analiz estatistik

The acquired raw data from ultra-performance liquid chromatography coupled to quadrupole time-of-flight mass spectrometry (UPLC-Q/TOF-MS) analysis were first preprocessed using profile analysis(version 2.1, Bruker, Germany). The"bucket table" was obtained and imported into the SIMCA-P software(version13.0 Umetrics AB, Sweden)for principal component analysis (PCA). Other results were presented as mean±stand-ard deviation(SD). The data were processed using IBM SPSS Statistics 26.0. The normal distribution of the data used the Levene test, which required the average value, P>{{0}}.05; yo te itilize analiz yon sèl-fason nan divèjans pou konparezon ant gwoup yo. Valè AP mwens pase 0.05 te konsidere kòm estatistik enpòtan.

Rezilta yo

CF amelyore aje ak fibwoz ren yo nan sourit SAMP8

Pou envestige efè CF sou ren sourit SAMP8 yo, yo te mezire aktivite SA- -gal nan ren yo. Nan Fig. la, Aktivite SA - -gal nan tisi ren yo ogmante siyifikativman nan gwoup M (amelyorasyon ble). Administrasyon CF-L ak CF-M siyifikativman inibit -galactosidase aktivite nan ren yo nan sourit SAMP8 pandan amelyorasyon nan pa CF-H pa t 'siyifikatif. Epitou, endèks ren gwoup modèl la te siyifikativman pi ba pase gwoup kontwòl la (Fig. 1b, P<0.05). after="" treatment="" with="" cf-m,="" the="" kidney="" index="" of="" samp8="" mice="" was=""><0.01). next,="" the="" results="" of="" masson's="" trichrome="" staining="" (fig.="" lc,=""><0.01)and the="" expression="" of="" fibrosis="" indicators="" col-i,="" α-sma,="" and="" fn="" revealed="" that="" m-group="" mice="" had="" more="" severe="" renal="" fibrosis="" than="" con-group="" mice,="" and="" cf-l="" and="" cf-m="" significantly="" attenuated="" renal="" fibrosis="" in="" samp8="" mice(fig.leg,=""><>

CF amelyore fonksyon ren, estrès oksidatif, ak nivo enflamasyon nan sourit SAMP8

Anplis de sa, yo te teste endikatè fonksyon ren chak gwoup sourit, ki enkli volim pipi nan sourit pou 12 èdtan, Cr ak nivo nitwojèn ure nan serik la, ak nivo pwoteyin pipi. Jan yo montre nan Fig. 2a-d, pwoteyin nan pipi, serik Cr ak nivo nitwojèn serik ure nan gwoup modèl la te siyifikativman pi wo pase sa yo ki nan gwoup kontwòl la (Fig.2a, P.<0.01), while="" the="" urine="" volume="" of="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group(fig.2b-d,=""><0.01). cf="" supplementation="" down-regulated="" the="" levels="" of="" urine="" protein,="" serum="" cr="" and="" urea="" nitrogen="" in="" the="" model="" group(fig.2b-d,=""><0.05 or=""><0.01) while="" increasing="" the="" urine="" output="" of="" model="" mice.="" collectively,="" the="" results="" indicated="" that="" samp8="" mice="" had="" kidney="" damage="" associated="" with="" aging,="" and="" treatment="" with="" cf="" effectively="" ameliorated="" this="" injury.="">cistanche genghis khanApre sa, si CF byenfè modulation estrès oksidatif ak enflamasyon nan ren yo nan sourit rapidman aje yo te eksplore. Jan yo montre nan Fig.2e-h, nivo SOD ak GSH-Pxin nan ren gwoup M yo te siyifikativman pi ba pase sa yo nan gwoup Con, ak nivo IL-1 yo te siyifikativman pi wo pase sa yo. gwoup la Con. Apre tretman CF, endikatè ki anwo yo te amelyore, espesyalman efè amelyorasyon CF-L ak CF-M se pi bon.

CF aktive chemen Nrf2 nan ren sourit SAMP8 yo

Nivo ekspresyon p-Nrf2 te mezire nan tisi ren pou envestige si chemen Nrf2 te enplike nan efè pwoteksyon CF(Fig.3a-c) nan etid prezan an. Nivo ekspresyon p-Nrf2 siyifikativman diminye nan gwoup SAMP8 pou kont li (P<0.01, fig.="" 3c),="" and="" the="" downregulation="" was="" reversed="" to="" some="" extent="" by="" the="" treatment="" of="" cf="" crude="" extract.="" there="" was="" no="" significant="" change="" in="" the="" expression="" level="" of="" keapl="" among="" the="" groups(fig.="" 3b="" and="" d).="" further,="" the="" expression="" level="" of="" p-c-fos="" was="" detected="" and="" analyzed="" by="" immunohistochemical="" and="" western="" blot="" analyses.="" it="" was="" found="" that="" the="" expression="" level="" of="" p-c-fos="" in="" the="" kidneys="" of="" mice="" in="" the="" m="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" con="" group;="" while="" cf="" treatment="" significantly="" reduced="" the="" expression="" levels="" of="" p-c-fos="" in="" the="" kidneys="" of="" the="" mice="" (fig.3a-b="" and="">

CF atenye deklanchman siyal Wnt/-catenin/RAS nan ren sourit SAMP8 yo

Yo nan lòd yo plis eksplore mekanis nan potansyèl nan CF egzèse efè a anti-fibwoz. Te lokalizasyon an nan pwoteyin fèt lè l sèvi avèk imunohistochimi. Jan yo montre nan Fig. 4a, nivo ekspresyon Wnt4 ak

-catenin te pwovoke sitou nan selil tubulaires ren yo. Rezilta menm jan an te obsève lè AGTR1, sib yo chemen en nan siyal Wnt, yo te evalye (Fig. 4a). Apre sa, nivo ekspresyon pwoteyin yo te quantifye, ak rezilta yo te montre ke Wnt4, -catenin, renin, ak AGTR1 pwoteyin yo te akimile nan tisi ren sourit nan gwoup modèl la, tandiske CF siyifikativman anpeche chanjman sa yo (Fig. 4b-f). ). Anplis de sa, nivo ekspresyon CTGF te lokalize ak analiz quantitative. Konfòm ak rezilta yo mansyone pi wo a, CTGF te eksprime sitou nan tubul ren yo, ak CF ansibleman anpeche aktivite a nan CTGF (Fig.4d g).

CF ak konpoze li yo anpeche senesans selil NRK-52E yo pwovoke pa D-gal

D-gal-induit NRK-52E selil yo te itilize pou ekran sèten engredyan aktif nan CF, pou detèmine baz materyèl pou tretman ren senil pa ekstrè nan CF. Rezilta yo te montre ke CF a amelyore viabilite selil nan yon fason ki depann de dòz ak konpoze yo

SDC-0-14,16 ak SDC-1-8 izole nan CF te gen pi bon efè sou pwopagasyon selil yo. Anplis, 25 ug/mL CF ak konpoze yo SDC-0-14,16 ak SDC-1-8 tout parèt efè a nan anpeche aktivite -galactosidase (Fig.5).

CF amelyore analiz PCA nan tisi ren nan sourit SAMP8 yo te fè analiz prensipal eleman (PCA) pou eksplore efè CF sou sourit SAMP8. Jan yo montre nan Fig.6a, te gen yon gwoupman evidan ant gwoup kontwòl ak modèl (R2X =0.542; Q2=0.38), sijere ke metabolit yo andojèn nan sourit SAMP8 yo te diferan de SAMR1. sourit, ki lakòz yo devye de gwoup SAMR1 la. Jan yo montre nan Fig.6b, diferan gwoup CF yo tou gwoupe nan diferan klas soti nan gwoup kontwòl ak modèl, ak gwoup CF yo te deplase pi pre gwoup kontwòl la, ki endike ke la

metabolit andojèn nan sourit SAMP8 CF-entèvni yo te menm jan ak sourit SAMR1 yo.

Diskisyon

Aje jwe yon wòl enpòtan nan pwogresyon CKD [19]. Kòm fibwoz CKD ap pwogrese, selil senesan eksprime ak sekrete faktè pro-fibrotik (TGF-, CTGF, ak lòt moun) ak faktè pro-enflamatwa (IL-1, IL{-6, TNF-, ak sou sa). ), ki se faktè fenotip sekretè ki asosye ak senesans, kidonk akselere fibwoz ren [20, 21]. Kounye a, medikaman tradisyonèl Chinwa te reyalize bon rezilta nan trete fibwoz ren ak mwens efè segondè [22]. Etid sa a te eksplore efè entèvansyon CF ekstrè sou fibwoz ren nan sourit SAMP8. Souch sourit yo te chwazi pou etid sa a se te SAMP8, ki te devlope baze sou lavi, senesans, ak nòt fenotip patolojik AKR/ sourit e li te yon modèl aje akselere sèlman ki gen orijin jenetik [23,24]. Etid yo montre ke chanjman ki fèt nan patoloji ren sourit SAMP8 (9 mwa) gen ladan fibwoz tubulointerstitial ak glomerulosclerosis segmantal fokal [25]. Epi li te jwenn ke fibwoz ren nan sourit SAMP8 te gen rapò ak laj [6]. Se poutèt sa, nou teste aktivite a nan -galactosidase ak

nivo fibwoz ren nan sourit SAMP8 epi li te jwenn ke CF-L ak CF-M amelyore fibwoz ren ak aktivite -galactosidase nan sourit SAMP8 (Fig.1). Epi nou menm tou nou teste pwodiksyon pipi sourit yo. Konfòm ak etid deja pibliye ki endike ke CF jwenn pa de pwosesis diferan te gen efè dyurèz [13], ekstrè a siyifikativman ogmante volim nan pipi nan sourit SAMP8. Epitou, etid la te montre ke sipleman ak CF amelyore fonksyon ren, aktivite anzim antioksidan, ak nivo faktè enflamatwa nan sourit SAMP8 (Fig.2).

Sistèm Keap1-Nrf2 te genyen atansyon anpil entelektyèl nan dènye ane yo akòz pwopriyete antioksidan ak anti-enflamatwa li yo. Potansyèl famasi li nan trete maladi ren yo te etidye anpil nan etid ki pa klinik ak klinik [26]. Nrf2 se yon regilatè transkripsyon mèt pou jèn ki gen rapò ak estati redox ak efè antioksidan [27]. Etid yo montre ke fosforilasyon obligatwa pou deklanchman Nrf2 ak endiksyon jèn sib [28]. Aktive Nrf2 amelyore pwogresyon CKD pa anpeche estrès oksidatif ak kenbe omeyostazi redox selilè [29]. Kòm yon faktè transcription kle, Nrf2 jwe yon wòl enpòtan nan defans kont estrès oksidatif pa reglemante antioksidan en li yo ak anzim dezentoksikasyon [30]. Kim et al. rapòte ke resveratrol, kòm yon activator Nrf2 ki pisan, amelyore aksidan ren pwogresif ki gen rapò ak aje [31]. Nan etid la prezan, CF amelyore diminisyon Nrf2 nan ren sourit SAMP8 san yo pa afekte nivo ekspresyon Keapl, sigjere ke ekstrè CF CF ta ka amelyore domaj oksidatif nan ren yo pa aktive chemen Nrf2 (Fig. 3).

Fibwoz ren karakterize pa twòp depo matris ekstraselilè (ECM) ki mennen nan fòmasyon sikatris nan parenchyma ren [32]. Transfòmasyon faktè kwasans- (TGF-) yo panse yo dwe yon sitokin kle nan overactivation fibro-eksplozyon [33, 34]. Natirèlman, vize sèlman chemen siyal TGF a pa ase pou diminye fibwoz ren. Gen kèk etid ki endike ke CTGF, Wnt/-catenin, sistèm renin-angiotensin, estrès oksidatif, ak lòt, yo te enplike nan fibwoz ren [35-37]. Wnt/-catenin se yon chemen siyal evolisyonèman konsève ki enplike nan règleman omeyostazi tisi, devlopman ògàn, ak reparasyon aksidan [38]. Cisternas et al. diskite efè pro-fibrotic nan siyal Wnt nan tou de misk skelèt ak ren [39]. Prèv k ap monte yo te montre ke chemen siyal Wnt/-catenin la jwe yon wòl enpòtan nan reglemante devlopman ak pwogresyon blesi fibroz ren apre aksidan [40-42]. Siyal Wnt/-catenin relativman an silans nan ren granmoun ki an sante epi li aktive yon fwa ren yo sibi divès kalite domaj [43].

Nan mamifè, fanmi Wnt gen omwen 19 manm fanmi ki enpòtan pou devlopman ren. Ak omwen 15 nan manm fanmi sa yo gen diferans nan ren aje, ki gen ladan Wnt4 [6]. Rezilta etid prezan yo te montre ke nivo ekspresyon pwoteyin Wnt4 nan ren sourit SAMP8 yo te siyifikativman pi wo pase sa ki nan sourit SAMR1, ki te verifye pa analiz Western blot ak imunohistochimik (figi 4a, d, ak f). Azar, nivo ekspresyon de -catenin pwoteyin te tou upregulated. Epitou, tou de Wnt4 ak -catenin yo te eksprime nan selil epitelyal ren tubulaires, jan yo revele pa analiz la imunohistochimik (Fig.4a ak f). Wnt/-catenin te pwovoke fibwoz ren nan pwovoke plizyè jèn fibrojenik tankou konpozan RAS, matris metaloproteinase -7 (MMP{-7), plasminogen activator inhibitor 1 (PAI{-1), ak Kalmason [37 ]. Zhou et al. dekri Wnt/-catenin kòm pi gwo regilatè en, ki kontwole ekspresyon tout eleman RAS teste nan ren yo [44]. Zhou et al. te itilize yon modèl rat 5/6 nephrectomy (5/6 NX) pou montre nivo ekspresyon pi gwo konpozan RAS nan sèvo ak ren yo, tankou angiotensinogen, anzim konvèti anjyotansin, ak angiotensin II AT{25. }}reseptè te siyifikativman upregulated. Nivo ekspresyon regilasyon an te anpeche pa yon bloke santral Wnt, ki te yon vektè viris adeno-asosye ki te eksprime jèn DKK1 [45]. Menm jan an tou, etid prezan an te jwenn ke AGTR1 te toujou eksprime nan epithelium nan tubulaires ren, ak nivo ekspresyon renin ak AGTRl nan tisi ren yo nan sourit SAMP8 yo te siyifikativman pi gran pase sa yo ki nan sourit SAMR1 (Fig. 4a ak dg). Rezilta sa yo te endike ke Wnt/-catenin/RAS siyal chemen an te aktive nan ren sourit SAMP8 yo, ak CF la efektivman inibit aktivasyon an nan chemen sa a.

CTGF egzèse plizyè fonksyon byolojik, ki gen ladan pwomouvwa mitoz selil chimyotaktik, pwovoke adezyon, ak pwomosyon pwopagasyon selil ak sentèz ECM [35,46]. CCN2 (CTGF) modulation Wnt siyal pa obligatwa nan ba-dansite lipoprotein reseptè ki gen rapò ak pwoteyin 5/6 (LRP5/6) pou plis medyatè fibwoz [39, 47]. Lòt etid yo te itilize silans jèn yo dekouvri ak konfime ke Nrf2 reglemante chemen Wnt la pa reglemante nivo ekspresyon CTGF, ki afekte maladi entèstisyal ren. Epitou, Nrf2 reglemante nivo transkripsyon CTGF sitou atravè regilatè transkripsyon CTGF c-Fos [48]. Analiz imunohistochimik la te revele ke CTGF ak pc-Fos yo te eksprime sitou nan selil epitelyal ren tubulaires, epi yo te distribye pc-Fos tou nan glomeruli. Analiz la quantitative te montre ke nivo ekspresyon tou de pwoteyin yo te inibit pa CF (Figs.3b ak e ak 4a ak c). Finalman, yo te itilize analiz PCA pou plis verifye ke CF amelyore domaj ren nan sourit SAMP8 (Fig.6). Etid la te bay prèv ke CF la pa sèlman aktive siyal Nrf2, men tou te konte sou Nrf2 pou balanse estrès oksidatif ak enflamasyon, anpeche siyal Wnt/-catenin/RAS, ak amelyore aje ren ak fibrogenesis ren. Sepandan, nou te jwenn tou amelyorasyon enkonsistan nan efè CF sou tach Masson ak SA- -gal nan eksperyans sa a. Yo espekile ke sa a ka akòz pwogresyon enkonsistan nan aje ren ak fibwoz ren nan sourit SAMP8. Degre nan aje ren nan sourit yo nan eksperyans sa a ka pi grav pase fibwoz. Se poutèt sa, efè a amelyore CF-H sou aje ren nan sourit SAMP8 pa t 'tan evidan ke sa yo ki nan fibwoz ren.

Kòm yon monosakarid diminye, D-galaktoz se lajman ki itilize nan divès maladi ki gen rapò ak laj nan vivo ak nan vitro. Yo te jwenn D-gal ki lakòz senesans ak blesi nan selil NRK-52E [49], pwovoke senesans nan selil epitelyal proximal tubulaires nan ren imen (selil HKC{-8), epi ogmante nivo ekspresyon de de ren. pwoteyin makè fibwoz FN ak a-SMA [6].Nan etid sa a, yo te itilize D-gal pou pwovoke selil NRK -52E nan vitro. Sèvi ak tès MTT ak tach -galactosidase pou detekte konpoze yo izole nan CF, li te jwenn ke SDC-0-14,16 ak SDC-1-8 amelyore viabilite selil ki pwovoke pa D-gal ak inibit D-gal-induit. senesans selil(Fig.5). Sa yo sigjere ke SDC-0-14,16 ak SDC-1-8 ka baz materyèl pou CF retade aje ren. SDC-1-8 se youn nan glikozid feniletanoid yo. phenylethanoid glikozid yo te jwenn pwolonje lavi Caenorhabditis Elegans [50], ak anti-aje, [51] ak efè neuroprotective [52-54]. Sa yo bay yon direksyon pou etid swivi nou an sou efè famasi CF.

Konklizyon

An konklizyon, etid nan vivo te montre ke CF redwi fibwoz ren nan sourit granmoun aje. Gen kèk engredyan potansyèl aktif yo te jwenn nan eksperyans vitro. Konklizyon sa yo te bay sipò famasi pou trete maladi ren lè l sèvi avèk CF ak yon direksyon pou plis rechèch sou engredyan aktif nan CF.

Atik sa a soti nan Cao et al. BMC Medsin Konplemantè ak Terapi (2022) 22:52